Primerjalna študija lastnosti in mehanizma proti staranju: resveratrol in kalorična omejitev Ⅱ

Vpliv resveratrola in CR na izražanje mRNA SIRT1, p53 in Foxo3a v tkivih starajočih se podgan

Pogoji oksidativnega stresapogosto povzroči izražanje in aktivnost SIRT1. SIRT1 modulira funkcije ključnih dejavnikov preživetja, vključno s p53 in Foxo3a [9]. Za določitev učinka resveratrola in CR na ravni mRNA SIRT1, p53 in Foxo3a pri podganah, ki jih povzroča D-Gal, so izvedli kvantitativne teste RT-PCR. V primerjavi z ustrezno negativno kontrolno skupino so se ravni ekspresije mRNA SIRT1 in Foxo3a znatno zmanjšale, vendar je bila raven p53 znatno povečana v skupini D-Gal (P < 0.01; slika 9A in 9B). Poleg tega je sočasno zdravljenje z resveratrolom ali CR z D-gal pri podganah povzročilo povečanje ravni izražanja mRNA SIRT1 in Foxo3a, vendar je znižalo raven p53 v primerjavi s kontrolno skupino modela (P < 0.05). Vendar se je v primerjavi z zdravljenjem s CR stopnja izražanja mRNA SIRT1 znatno povečala v jetrih z visokim odmerkom resveratrola in skupine D-gal, stopnja izražanja mRNA p53 pa se je znatno zmanjšala v jetrih in možganih z visokim odmerkom resveratrola in D-gal. skupina gal (P <0,05).

Kliknite tukaj, če želite dobiti dodatke proti staranju Cistanche

Vpliv resveratrola in CR na izražanje glavne beljakovine, povezane s SIRT1-, v možganskih tkivih starajočih se podgan

FOXO3a in p53, ki ju regulira SIRT1, sta spodnji molekuli SIRT1. Hkrati aktivnost SIRT1 uravnavajo njegove navzgornje molekule, na primer DBC1 (znan tudi kot KIAA1967), AROS (znan tudi kot RPS19BP1) in tumorski supresor HuR (znan tudi kot ELAVL1) [9, 10] . Za določitev učinka resveratrola in CR na ravni beljakovin p53, FOXO3a, HuR, AROS in DBC1 pri starajočih se podganah, povzročenih z D-Gal, so izvedli teste Western blot. V primerjavi z ustrezno negativno kontrolno skupino so bile ravni ekspresije proteinov FOXO3a, AROS in HuR znatno zmanjšane, vendar pa sta bili ravni p53 in DBC1 znatno povečani v skupini D-gal (P < 0.01 ; Slika 10). Poleg tega je sočasno zdravljenje z resveratrolom ali CR z D-gal pri podganah povzročilo povečanje izražanja beljakovin FOXO3a, AROS in HuR, vendar je zmanjšalo ravni p53 in DBC1 v primerjavi z modelno kontrolno skupino (P <0,05). Vendar se je v primerjavi z zdravljenjem s CR stopnja izražanja proteina HuR znatno povečala, vendar se je raven DBC1 znatno zmanjšala v možganih skupine z visokim odmerkom resveratrola in D-gal (P <0,05). Med skupino resveratrol plus D-gal in skupino CR plus D-gal ni bilo razlik v nivojih ekspresije proteina p53, FOXO3a in AROS (P > 0,05).

Ekspresije FOXO3a in p53 v tkivih možganov in jeter

Stanje ekspresije FOXO3a in p53 je bilo določeno v tkivih možganov in jeter z imunohistokemijo. Imunohistokemična analiza FOXO3a in p53 je pokazala, da je bila ekspresija FOXO3a v možganskih in jetrnih tkivih bistveno zmanjšana, ekspresija p53 pa je bila znatno povečana v skupini D-Gal v primerjavi z negativno kontrolno skupino (P < 0.{{13} }5, slika 11). Poleg tega je sočasno zdravljenje z resveratrolom ali CR z D-gal pri podganah povzročilo povečanje izražanja FOXO3a, vendar je zmanjšalo izražanje p53 v primerjavi z modelno kontrolno skupino (P < 0.05). Vendar ni bilo razlik med skupino resveratrol plus D-gal in skupino CR plus D-gal v izrazih p53 in FOXO3a (P > 0,05).

DISKUSIJA

Osnovni kemični proces, na katerem temelji staranje, je prvi napredovalteorija staranja o prostih radikalih[11] inoksidativni stresverjamejo, da je glavni dejavnik v normalnem procesu staranja.Iniciator prostih radikalov AAPHje bil navajenpovzročajo oksidativni stresin vzpostaviti model oksidativnegazaradi stresa povzročeno celično staranjev človeških celicah IMR-90 [12, 13]. Prednosti te metode so, da se AAPH termično razgradi naustvarjajo radikalebrez biotransformacij ali encimov in hitrostradikalna generacijalahko enostavno nadzirate s prilagajanjem koncentracije iniciatorja [12]. Ugotovljeno je bilo, da AAPHzavirajo razmnoževanje človeškihIMR- 90 celic na način, ki je odvisen od koncentracije in časa. Rezultati so pokazali, da je 2-dnevna inkubacija z AAPH (1 mM) znatno povečala odstotek pozitivnega razmerja SA -Gal, populacijo apoptotičnih celic, zmanjšala izražanje mRNA SIRT1 in povzročila povečano in sploščeno morfologijo. Ti so pokazali, da je oksidativni stres, ki ga povzroča AAPH, vodil celice IMR-90 do staranja. Na podlagi tega modela celičnega staranja je zdravljenje z 10 μM resveratrolom učinkoviteje zaviralo staranje in apoptozo, povzročeno z AAPH, kot zdravljenje s CR.

Živalski model D-gal je mednarodno priznan model staranja živali in se pogosto uporablja na področjuzdravila proti staranju. D-gal je fiziološko hranilo, ki ga pri živalih običajno presnavljata D-galaktokinaza in galaktoza-1-fosfat. Vendar pa prevelika zaloga D-gal, ki se ne presnavlja z zgornjimi encimi, ampak se kopiči v celicah, vodi do oksidativnega stresa in celične poškodbe [14]. Tako dolgotrajno dajanje D-gal povzroči spremembe, ki spominjajo na naravno staranje pri živalih, kot so skrajšana življenjska doba, kognitivna disfunkcija, nevrodegeneracija, oksidativni stres, zmanjšani imunski odzivi in ​​napredna tvorba končnega produkta glikacije (AGE) [15]. Ta študija je pokazala uspešno vzpostavitev modela mimetičnega staranja, kar dokazujejo izjemna okvara učenja in spomina, proizvodnja MDA, kopičenje lipofuscina, upad T-AOC in SOD ter znižana regulacija aktivnosti telomeraze v možganih. Medtem je zdravljenje z resveratrolom ali CR zaščitilo podgane, ki jih povzroča D-gal, pred oksidativnim stresom s povečanjem aktivnosti antioksidativnih encimov, znižanjem ravni produktov peroksidacije lipidov in ohranjanjem ravnovesja oksidativnih in antioksidativnih sistemov. Pri vedenjskih testih in testih aktivnosti telomeraze bi zdravljenje z resveratrolom ali CR lahko odpravilo kognitivno okvaro, ki jo povzroča D-gal, in aktivnost telomeraze. Poleg tega so starajoče se modelne podgane, zdravljene z visokimi odmerki resveratrola, pokazale relativno večji učinek na vedenje kot tiste, zdravljene s CR.

Slika 11: Imunohistokemična analiza izražanja p53 (A, B) in FOXO3a (C, D) v tkivih jeter (A, C) in možganov (B, D) starajočih se podgan. Povečava je bila 20×. NG, negativna kontrolna skupina; MG, skupina za nadzor modela; RESL, skupina nizkih odmerkov resveratrola; RESH, skupina visokih odmerkov resveratrola; CR, kalorična restrikcijska skupina

Študije so pokazale, da bi CR, zmanjšanje vnosa hranljive hrane za 10–40 odstotkov, lahkoupočasni staranje in podaljša življenjsko dobo, zato je bila v tej študiji pri podganah iz skupine CR uporabljena ena pogosto uporabljena raven CR (40-odstotno zmanjšanje vnosa hrane). Kljub temu so nekatere raziskave pokazale, da ni koristnega učinka CR na dolgoživost pri naravno starih primatih [16]. Podobno, čeprav je bilo dokazano, da zdravljenje z resveratrolom povzroča CR podobne učinke naenergetski metabolizemin presnovni profil pri debelih ljudeh [17], ni izboljšal presnovne funkcije pri nedebelih ženskah z normalno toleranco za glukozo [18]. Razlog za razlike med temi študijami ni jasen, vendar je možno, da CR in resveratrol delujeta za obnovitev homeostaze pri presnovno ogroženih posameznikih in manj pri zdravih posameznikih, kar je možnost, ki je skladna z znanimi funkcijami SIRT1 v študijah na živalih [19]. Zato so bili za primerjavo delovanja resveratrola ali CR proti staranju uporabljeni modeli staranja, ki jih povzroča D-gal, namesto modela naravno starajoče se podgane.

SIRT1, (NAD plus)-odvisna deacetilaza, je pridobila veliko pozornosti zaradi svojih številnih vlog pri podaljšanju življenjske dobe, odpornosti na stres in zmanjšanju apoptoze [20, 21]. Številne študije so močno namigovale, da je bil SIRT1 ključna tarča resveratrola in CR [22]. Obstaja ogromno število spodnjih molekul SIRT1, vključno s p53, Foxo1, Foxo3, Foxo4 in E2F1, ki jih uravnava SIRT1. Hkrati aktivnost SIRT1 uravnavajo njegove molekule navzgor, na primer p53, HIC1, E2F1, DBC1, HuR in AROS. Akutni odvzem hranil aktivira transkripcijski program na promotorju SIRT1, ki ga usmerjata transkripcijska faktorja Foxo3a in p53. Ker p53 zavira ekspresijo gena SIRT1, njegova odstranitev s Foxo3a aktivira transkripcijo SIRT1 [23]. DBC1 in AROS sta bila nedavno opisana kot neposredna negativna in pozitivna regulatorja aktivnosti SIRT1, HuR pa kaže učinek zmanjšanja ravni izražanja SIRT1 v starih starajočih se celicah [9, 10].

CRzavira staranje in podaljšuje srednjo in maksimalno življenjsko dobov različnih vrstah, vključno s podganami, mišmi, ribami, muhami, črvi in ​​kvasovkami. Vendar so tako strogi prehranski programi pri prosto živečih ljudeh sprožili etična in metodološka vprašanja [24]. Trenutno je podaljšanje zdravja morda pomembnejše od preprostega podaljšanja življenjske dobe. Nedavne raziskave kažejo, da je resveratrol eden najmočnejših spodbujevalcev aktivnosti SIR2 med vsemi rastlinskimi polifenoli [25] in vpliva na dolgoživost prek podobnih mehanizmov, kot jih vidimo pri omejevanju kalorij. Ti rezultati so pokazali, da imata CR in resveratrol podobne dejavnosti obnavljanja ravni ekspresije mRNA SIRT1, povečanja ekspresije proteinov FOXO3a, AROS in HuR ter znižanja ravni p53 in DBC1. Medtem pa več vrst prepričljivih dokazov kaže na ugodne učinke resveratrola na nevrološki, jetrni in kardiovaskularni sistem.

MATERIALI IN METODE

Kultura celic, stres in zdravljenje

Človeški diploidni fibroblastni sev IMR-90 je bil pridobljen pri ATCC. Celice so bile gojene v minimalnem esencialnem mediju (MEM) (Gibco, Združeno kraljestvo), dopolnjenem z 10 odstotki fetalnega govejega seruma (FBS) (Gibco) pri 37 stopinjah v 5 odstotkih CO2. Ko je bila dosežena sotočja, so bile celice posejane v 6-plošče za kulture z vdolbinicami. En dan kasneje smo celice 48 ur obdelali z 1 mM 2,2'-azobis (2-amidinopropan) dihidrokloridom (AAPH) (Sigma, ZDA), razredčenim v MEM plus 10 odstotkov FBS. 48-urna inkubacija z iniciatorjem prostih radikalov AAPH vzpostavi model celičnega staranja, ki ga povzroča oksidativni stres [12, 13]. Kontrolne celice so bile inkubirane samo v gojišču. Po obdelavi z AAPH smo IMR-90 sprali s hladno fiziološko raztopino s fosfatnim pufrom (PBS) pH 7,4 in inkubirali s svežim gojiščem ali gojiščem, ki vsebuje resveratrol (resveratrolna skupina) ali MEM, dopolnjen s 3 odstotki FBS (CR skupina) za dodatnih 48 ur pred žetvijo.

Aktivnost barvanja SA -gal

Pojav biomarkerjev staranja je bil preverjen (zmanjšanje proliferativnega potenciala in povečanje SA-gal-obarvanja) [26] od dneva po zdravljenju. Nato smo celice obarvali po navodilih proizvajalca kompleta za barvanje SA-gal (CST, ZDA). Po obarvanju smo pregledali vsaj 300 celic v več poljih in prešteli SA-gal pozitivne celice. Ti poskusi so bili ponovljeni trikrat, rezultati pa so bili predstavljeni kot srednje vrednosti s standardnimi odkloni (SD). Da bi se izognili nespecifičnemu obarvanju, verjetno zaradi konfluence celic, je bilo izvedeno histokemično obarvanje SA-gal s subkonfluentnimi celicami.

Analiza z vrstično elektronsko mikroskopijo

Celice so bile gojene na krovnih stekelcih v 6-ploščih za kulture vdolbinic, kot je opisano zgoraj. Po obdelavi z resveratrolom in CR smo s plošč odstranili pokrovna stekelca, nato pa celice fiksirali v 2,5-odstotnem fosfatno pufranem glutaraldehidu in naknadno fiksirali v 1-odstotnem pufranem osmijevem tetroksidu. Fiksni vzorci so bili po dehidraciji skozi stopnjevano serijo etanola potopljeni v t-butilni alkohol. Vzorci so bili liofilizirani iz t-butil alkohola, nato z izhlapevanjem prevlečeni z zlatom z avtomatskim finim premazom (JFC-1600, JEOC, Japonska) in pregledani z uporabo vrstičnega elektronskega mikroskopa (JEOL, JSM{{11} }LV, Japonska).

Apoptotična analiza

Po inkubaciji z resveratrolom ali CR so bile vse celice pobrane s tripsinom in dvakrat sprane s PBS, čemur je sledilo resuspendiranje v 400 μL pufra za vezavo aneksina V. Nato so bile celice obarvane po navodilih proizvajalca kompleta za odkrivanje apoptoze celic Annexin V-FITC (BestBio, Kitajska). FACSCaliburjev pretočni citometer (Becton-Dickinson, San Jose, CA) je bil uporabljen za odkrivanje fluorescence, odstotek apoptotičnih celic pa je izračunal notranji programski sistem FACSCaliburja. Za vsako sled smo analizirali približno 104 celice.

Postopki na živalih

Samci albino podgan Wistar, težki približno 200 ± 10 g, so bili pridobljeni iz Eksperimentalnega živalskega centra medicinske fakultete Tongji, Univerze za znanost in tehnologijo Huazhong (SCXK 2010-0009). Živali so bile 2 tedna pred odmerjanjem aklimatizirane v Eksperimentalnem živalskem centru Hubejske univerze za kitajsko medicino, v tem času pa so imele prost dostop do hrane in vode ad libitum. Po aklimatizaciji so izbrali 50 podgan in jih razdelili v pet skupin po deset. Živali so bile vzdrževane v skladu z nacionalnimi smernicami in protokoli, ki jih je odobril Institucionalni odbor za etiko živali (IAEC).

Podgane skupine I (negativna kontrolna skupina) so 6 tednov prejemale samo vehikel (1 ml/kg telesne teže 0,9 odstotkov fiziološke raztopine). Podgane skupine II (kontrolna skupina modela) so 6 tednov prejemale D-gal (200 mg/kg telesne teže, Sigma Chemical, St. Louis, MO). Podgane v skupini III (skupina z nizkimi odmerki resveratrola) so 6 tednov prejemale D-gal in resveratrol (50 mg/kg telesne teže), raztopljen v 5-odstotnem dimetil sulfoksidu (DMSO). Podgane v skupini IV (skupina z visokim odmerkom resveratrola) so prejemale D-gal in resveratrol (100 mg/kg telesne teže). Podgane skupine V (skupina CR) so 6 tednov prejemale D-gal in CR (hranjene s hrano, ki je imela 40 odstotkov manj kalorij kot podgane, hranjene ad libitum [27]). D-gal so dajali intraperitonealno, resveratrol pa peroralno ves čas trajanja poskusa. Podgane so žrtvovali zadnji dan zdravljenja, nato pa so kri, serume in organe takoj zbrali za biološki test ali shranili pri –80 stopinjah za kasnejšo uporabo.

Vedenjski testi

Morrisov test vodnega labirinta je bil zasnovan za oceno sposobnosti prostorskega učenja in spomina podgan po 6 tednih po poškodbi [28]. Preskus Morrisovega vodnega labirinta je obsegal 4-dnevno učenje in urjenje spomina ter poskus s sondo 5. dan. Živali so trenirali v krožnem bazenu (premera 155 cm) z vizualnimi znaki. Reševalna ploščad (premera 9.0 cm) je bila potopljena 1.0 cm pod gladino bazenske vode, ki je bila vzdrževana pri 25 ± 2 stopinji. Lokacija ploščadi je ostala v središču severozahodnega kvadranta skozi celotno 4-dnevno obdobje usposabljanja. Vsak dan so bile podgane trenirane za en jutranji in en popoldanski blok. Podgana je prosto plavala, dokler ni našla ploščadi v 120 s. Če ni uspelo, je bil postavljen na ploščad za 10 s. Zabeležena je bila zakasnitev pobega (iskanje potopljene ploščadi za pobeg) in hitrost plavanja. Preizkus s sondo je bil izveden tako, da so odstranili ploščad in pustili vsaki podgani, da prosto plava 120 s v bazenu. Število prehodov ploščadi v treniranem kvadrantu (kjer je bila ploščad odstranjena) je bilo zabeleženo z računalniškim video sistemom. Različica vodnega labirinta z vidno ploščadjo ni bila izvedena, potem ko so opazili pomembno razliko v hitrosti plavanja med podganami, zdravljenimi z D-gal, in nosilcem.

Detekcija bioloških indikatorjev, povezanih z oksidativnim stresom

Ravni MDA, SOD in T-AOC v krvi in ​​tkivih so bile določene fotometrično v skladu s protokolom proizvajalca z uporabo komercialno dostopnih kompletov za encimsko testiranje (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing City, PR Kitajska). Vsi poskusi, opisani v tem razdelku, so bili izvedeni v treh izvodih, da bi dobili srednje vrednosti in SD.

Raven lipofuscina je bila določena z metodo Sohal [29]. Na kratko, stehtali smo 200 mg možganske skorje, dodali 2 ml ekstrakta kloroform-metanol (2:1), homogenizirali in filtrirali, nato sprali ostanek z ekstraktom, združili filtrate in dodali ekstrakt v 5 ml in izmerili intenziteto fluorescence na fluorescenčnem spektrometru. Valovna dolžina emisije je bila 435 nm, valovna dolžina vzbujanja pa 365 nm. Spektrofluorometer smo standardizirali, da je dal odklon 50 pri zgoraj navedenih valovnih dolžinah z 1 ug/ml raztopine kinin bisulfata v 0,1 M H2SO4. Rezultati so bili izraženi kot relativne fluorescenčne enote/ml kloroforma/g teže mokrega tkiva.

Zaznavanje aktivnosti TE

Za ekstrakcijo telomeraze smo približno 3 0 mg tkiva dvakrat sprali v ledeno mrzlem PBS in končno homogenizirali v približno 150 ml PBS. Aktivnost TE je bila izmerjena s kompleti TE ELISA v skladu z navodili proizvajalca (Nanjing Sen Beijia Biological Technology Co., Ltd., Nanjing, Kitajska). Meje občutljivosti testov so bile 0,8 ie/l za TE.

RT-PCR analiza

Nivo ekspresije mRNA SIRT1, Foxo3 in p53 v jetrih in možganskih tkivih smo analizirali z analizo RT PCR. Celotno RNK smo ekstrahirali s Trizolom, njihovo količino in čistost pa ocenili z ultra mikrospektrofotometrom (Thermo Fisher Scientific, ZDA) na podlagi meritve absorbance pri 260 in 280 nm. Po kvantificiranju smo cDNA sintetizirali z uporabo kompleta FastQuant RT (Tiangen Biotech, Peking, Kitajska) v skladu z navodili proizvajalca. Ravni ekspresije mRNA SIRT1, Foxo3, p53 so bile izmerjene z RT-PCR z uporabo TIANGEN SuperReal PreMix Plus (Tiangen Biotech, Peking, Kitajska) s specifičnimi primerji (tabela 2). Kvantitativni PCR v realnem času je bil izveden s sistemom LightCycler 480 stopinj PCR (Roche, Basel, Švica) z uporabo 20 μL kot celotnega volumna vsake reakcije. Pomnoževanje PCR se je začelo s 15-minutno denaturacijo pri 95 stopinjah, nato pa je sledilo 40 ciklov pri 95 stopinjah za 10 s, 59–63 stopinj (temperatura žarjenja) za 20 sekund in 72 stopinj za 30 sekund ter končna inkubacija pri 72 stopinje 5 min. Dobljeno število pragov ciklov vsakega gena (vrednost Ct) je bilo normalizirano v krat relativnih sprememb v skladu z enačbo metode 2-∆∆CT [30].

Tabela 2: Primerni seznam

Western blot analiza

Raven ekspresije proteinov p53, FOXO3a, HuR, RPS19BP1 in DBC1 v možganskih tkivih je bila analizirana z analizo Western blotting. Celoten protein možganskih tkiv je bil ekstrahiran z uporabo RIPA Lysis Buffer (Beyotime, Kitajska) v skladu z navodili proizvajalca. Koncentracije beljakovin so bile določene s kompletom BCA Protein Assay Kit (Beyotime, Kitajska). 5 mg proteinov smo ločili z uporabo 12-odstotnih SDS-poliakrilamidnih gelov in jih prenesli na PVDF membrano (0.45 μm, Millipore, ZDA). Blote so blokirali s 5 odstotki nemastnega mleka v TBS, nato pa jih inkubirali čez noč pri 4 stopinjah z ustrezno razredčitvijo primarnih protiteles: anti-p53 (SC- 6243, Santa Cruz Biotechnology), anti-FOXO3a (#12829, Cell Signalna tehnologija), anti-HuR (#12582, Cell Signaling Technology), anti-AROS (Ab201091, abcam), anti-DBC1 (#5857, Cell Signaling Technology), anti- - delovanje (AC004, ABclonal Technology) . Po izpiranju membran za odstranitev odvečnih primarnih protiteles so bile membrane 1 uro inkubirane pri sobni temperaturi z ustreznimi sekundarnimi protitelesi v razredčitvi 1:2000-1:5000 (AC004 ali AS003, ABclonal Technology). Membrane so bile 3-krat sprane in nato vizualizirane z uporabo Pierce ECL Western Blotting Substrate (Thermo Scientific). -ukrep je bil uporabljen kot notranji nadzor.

Imunohistokemija

Vzorci tkiva so bili fiksirani v 10-odstotnem nevtralno pufriranem formalinu v 1 uri po kirurški odstranitvi in ​​vgrajeni v parafin z uporabo standardnih postopkov. Nato so bili fiksirani vzorci, vdelani v parafin, razrezani na 5- μm debele odseke, ki so bili deparafinizirani v ksilenu, rehidrirani v etanolu in obdelani z mikrovalovno pečico za pridobitev antigena. Ustrezno razredčeno primarno protitelo, anti-p53 (SC-6243, Santa Cruz Biotechnology) in anti-FOXO3a (#12829, Cell Signaling Technology), smo inkubirali 60 minut pri sobni temperaturi v vlažni komori. Predmetna stekelca smo nato splaknili v PBS in jih nato inkubirali s sekundarnim protitelesom proti protitelesom proti kuncem in vizualizacijo HRP (koncentracija 1:300, #074-1506, KPL). Nato stekelca speremo in rezine razvijemo v raztopini encimskega substrata diaminobenzidina (DAB, Sigma). Slike imunohistokemično obarvanih rezov so bile zajete z digitalnim mikroskopom Olympus (IX-73P1F, Olympus, Japonska).

Statistična analiza

Rezultati so bili izraženi kot srednje vrednosti ± SD za vsaj tri neodvisne poskuse in so bili analizirani s programsko opremo SPSS 18.0. Skupinske razlike v zakasnitvi pobega in hitrosti plavanja pri vadbeni nalogi Morrisovega vodnega labirinta so bile analizirane z uporabo dvosmerne analize variance (ANOVA) s ponavljajočimi se meritvami, pri čemer sta bila dejavnika zdravljenje in dan usposabljanja. Drugi podatki so bili analizirani z enosmerno ANOVA, ki ji je sledil post-hoc Tukeyjev test. Vrednost P, manjša od 0,05, je veljala za pomembno.

SKLEPI

Resveratrol in CR sta pokazala podobno aktivnost proti staranju tako in vitro kot in vivo, kar dokazuje njuna sposobnost zaviranja staranja in apoptoze, ki jo povzroči AAPH, ter obnovitve s starostjo povezane kognitivne okvare, ki jo povzroča dajanje D-gal. Njihovi mehanizmi proti staranju so vključevali uravnavanje aktivnosti TE, zmanjšanje oksidativne škode in uravnavanje poti SIRT1. Na splošno sta 10 μM resveratrola in vitro in visok odmerek resveratrola in vivo pokazala relativno močnejšo aktivnost proti staranju in stimulacijo ravni SIRT1. Ti rezultati kažejo na potencial resveratrola kot mimetika CR.

Okrajšave

AAPH, 2,2′-azobis (2-amidinopropan) dihidroklorid; AMPK, protein kinaza, aktivirana z adenozin monofosfatom; ANOVA, analiza variance; AROS, aktivni regulator SIRT1; CR, kalorična omejitev; DBC1, izbrisan pri raku dojke 1; D-gal, D-galaktoza; FBS, fetalni goveji serum; Foxo3a, viličasta škatla 3a; HuR, Hu antigen R; MEM, minimalni bistveni medij; PBS, fiziološka raztopina s fosfatnim pufrom; PGC-1, koaktivator receptorja G, aktiviran s proliferatorjem peroksisoma-1; RES, resveratrol; SA -gal, s staranjem povezana -galaktozidaza; SD, standardne deviacije; SIRT1, regulator informacij o utišanju; TE, telomeraza.

Avtorski prispevki

Zasnova in zasnova raziskave: Gang Chen; pridobivanje, analiza in interpretacija podatkov: Juan Li, Xia Chun Zhang, Yi-Mei Liu; pridobitev financiranja in kritična revizija rokopisa za intelektualno vsebino: Gang Chen, Ke-Li Chen; pisanje rokopisa: Juan Li. Vsi avtorji so prebrali in odobrili objavo tega rokopisa. ZAHVALA IN SREDSTVA

To delo je financirala China Postdoctoral Science Foundation (2016M601237), projekt Natural Science Foundation (81373704, 30873292).

NASPROTJA INTERESOV

Brez navzkrižja interesov pri vseh sodelujočih avtorjih.

REFERENCE

1. Ramis MR, Esteban S, Miralles A, Tan DX, Reiter RJ. Kalkorična omejitev, resveratrol in melatonin: vloga SIRT1 in posledice za staranje in sorodne bolezni. Mech Aging Dev. 2015; 146–148: 28–41.

2. Colman RJ, Beasley TM, Kemnitz JW, Johnson SC, Weindruch R, Anderson RM. Omejitev kalorij zmanjša s starostjo povezano smrtnost in smrtnost zaradi vseh vzrokov pri opicah rezus. Nat Commun. 2014; 5:3557.

3. Sohal RS, Weindruch R. Oksidativni stres, omejevanje kalorij in staranje. Znanost. 1996; 273: 59–63.

4. Testa G, Biasi F, Poli G, Chiarpotto E. Omejevanje kalorij in mimetiki omejevanja prehrane: strategija za izboljšanje zdravega staranja in dolgoživosti. Curr Pharm Des. 2014; 20: 2950–77.

5. Lane MA, Roth GS, Ingram DK. Mimetiki omejevanja kalorij: nov pristop za biogerontologijo. Metode Mol Biol. 2007; 371: 143–9.

6. Baur JA, Pearson KJ, Price NL, Jamieson HA, Lerin C, Kalra A, Prabhu VV, Allard JS, Lopez-Lluch G, Lewis K, Pistell PJ, Poosala S, Becker KG, et al. Resveratrol izboljša zdravje in preživetje miši na visokokalorični dieti. Narava. 2006; 444: 337–42.

7. Lagouge M, Argmann C, Gerhart-Hines Z, Meziane H, Lerin C, Daussin F, Messadeq N, Milne J, Lambert P, Elliott P, Geny B, Laakso M, Puigserver P, et al. Resveratrol izboljša delovanje mitohondrijev in ščiti pred presnovnimi boleznimi z aktiviranjem SIRT1 in PGC-1alfa. Celica. 2006; 127:1109–22.

8. Howitz KT, Bitterman KJ, Cohen HY, Lamming DW, Lavu S, Wood JG, Zipkin RE, Chung P, Kisielewski A, Zhang LL, Scherer B, Sinclair DA. Majhno molekularni aktivatorji sirtuinov podaljšajo življenjsko dobo Saccharomyces cerevisiae. Narava. 2003; 425: 191–6.

9. Kwon HS, Ott M. Vzponi in padci SIRT1. Trendi Biochem Sci. 2008; 33: 517–25.

10. Brooks CL, Gu W. Kako SIRT1 vpliva na presnovo, staranje in raka? Nat Rev Rak. 2009; 9: 123–8.

11. Harman D. Teorija staranja prostih radikalov. Mutat Re. 1992; 275: 257–66.

12. Mayo JC, Tan DX, Sainz RM, Lopez-Burillo S, Reiter RJ. Oksidativna poškodba katalaze, ki jo povzročajo peroksilni radikali: funkcionalna zaščita z melatoninom in drugimi antioksidanti. Free Radic Res. 2003; 37: 543–53.

13. Hubackova S, Krejcikova K, Bartek J, Hodny Z. IL1- in TGF -Nox4 signalizacija, oksidativni stres in odziv na poškodbe DNA so skupne značilnosti replikativnega, z onkogeni in zdravili povzročenega parakrinega staranja 'Bystander' '. Staranje (Albany NY). 2012; 4: 932–51. https:// doi.org/10.18632/aging.100520.

14. Cui X, Zuo P, Zhang Q, Li X, Hu Y, Long J, Packer L, Liu J. Kronična sistemska izpostavljenost D-galaktozi povzroči izgubo spomina, nevrodegeneracijo in oksidativno škodo pri miših: Zaščitni učinki R{{ 2}} lipoična kislina. J Neurosci Res. 2006; 84: 647–54.

Vprašaj za več:

E-pošta:wallence.suen@wecistanche.com whatsapp: plus 86 15292862950