Heterologni režim priprave AZD1222 in pospeševalni režim BNT162b2 učinkoviteje izzove nevtralizirajoča protitelesa, vendar ne spominskih celic T, kot homologni režim BNT162b2

povzetek

Ozadje: Primerjalne analize SARS-CoV-2-specifičnih imunskih odzivov, ki jih izzovejo različni režimi začetne oživitve, so potrebne za vzpostavitev učinkovitih režimov za nadzor COVID-19. Metoda: V tej prospektivni opazovalni kohortni študiji so za konice specifične imunoglobuline G (IgG) in nevtralizirajoča protitelesa (nAbs) poleg odzivov T-celic, specifičnih za konice, v starostno ujemajočih se skupinah homolognega cepljenja BNT162b2/BNT162b2 ali AZD1222/AZD1222, heterolognega AZD1222/ Ocenjeno je bilo cepljenje proti BNT162b2 in predhodna okužba/cepljenje z divjim tipom SARS-CoV-2. Rezultati: Najvišji imunski odzivi so bili doseženi po drugem odmerku cepiva v predhodno necepljenih skupinah in po prvem odmerku v skupini s predhodno okužbo/cepilom. Največji titri anti-spike IgG in nAb so bili znatno višji v skupinah s cepljenjem AZD1222/BNT162b2 in skupinah s predhodno okužbo/cepilom kot v skupinah z BNT162b2/BNT162b2 ali AZD1222/AZD1222. Vendar pa je bila pogostnost celic CD4 in T, ki proizvajajo interferon-c, največja v skupini, cepljeni z BNT162b2/BNT162b2. Podobne rezultate so opazili pri analizi polifunkcionalnih celic T. Ko so analizirali odzive nAb in CD4 plus T-celic proti različici Delta, je skupina s predhodno okužbo/cepljenjem pokazala višje odzive kot skupine drugih homolognih ali heterolognih režimov cepljenja. Zaključek: nAbs se učinkovito izzovejo s heterolognim cepljenjem proti AZD1222/BNT162b2, pa tudi s predhodno okužbo/cepljenjem, medtem ko se odzivi CD4 in T-celic, specifični za konice, učinkovito izzovejo s homolognim cepljenjem z BNT162b2. Imunost, ki prepozna različico, se učinkoviteje ustvari s predhodno okužbo/cepljenjem kot drugi homologni ali heterologni režimi cepljenja.

cistanche tubulosa - izboljšanje imunskega sistema

1. Uvod

Koronavirus 2 hudega akutnega respiratornega sindroma (SARS-CoV-2) se od svojega pojava decembra 2019 širi po vsem svetu, razvoj učinkovitih cepiv proti koronavirusni bolezni 2019 (COVID-19) pa je pospešen [1 ]. Uspeh prizadevanj je bil viden razmeroma hitro in več cepiv, ki uporabljajo beljakovino spike (S) kot antigen cepiva, je uspešno dokazalo varnost in učinkovitost pri preprečevanju simptomatske bolezni COVID-19. Natančneje, cepivo na osnovi mRNA BNT162b2 (Comirnaty, Pfifizer-BioNTech) in cepivo na osnovi adenovirusnega vektorja AZD1222 (Vaxzevria, AstraZeneca) sta bila prvotno odobrena in široko uporabljena kot režim z dvema odmerkoma začetnega povečanja. Dva odmerka BNT162b2 sta imela 95-odstotno (95-odstotni interval zaupanja [CI], 90–98 odstotkov ) učinkovitost proti simptomatskemu COVID-19 [2], dva odmerka AZD1222 pa 70-odstotno (95-odstotni IZ, 55–81). odstotkov ) učinkovitosti [3]. Zanimivo je, da so heterologni režimi prve okrepitve licenčnih cepiv proti COVID-19 pridobili veliko zanimanja in so se nato začeli izvajati v več državah kljub nezadostnim podatkom o imunogenosti in varnosti. BNT162b2, dan kot obnovitveni odmerek pri posameznikih, ki so bili prvotno cepljeni z AZD1222, je povzročil močne titre protiteles (Ab) protiteles (Ab) specifičnih za S-specifični imunoglobulin G (IgG), odzive nevtralizirajočih protiteles (nAb) in T-celice interferona-c plus (IFN-c plus) [4 ,5]. Vendar pa je nekaj študij ocenilo učinkovitost heterolognega cepljenja z AZD1222/BNT162b2 v primerjavi s homolognim cepljenjem z BNT162b2/BNT162b2 [6–8] in v teh študijah ni bilo celovite ocene odzivov T-celic, specifičnih za S. V skladu s tem ostaja nejasno, ali heterologno cepljenje proti AZD1222/BNT162b2 povzroči močne navzkrižne variantne odzive nAb ali T-celic. Še en primer heterolognega začetnega pospeševanja je mogoče opaziti pri posameznikih, ki so bili okuženi s SARS-CoV-2 in pozneje cepljeni proti virusu. Več študij je nakazovalo, da so specifične vezavne ravni Ab in nAb odkrite v visokih ravneh pri posameznikih s predhodno okužbo in cepljenjem, čeprav ni bilo primerjalnih analiz [9, 10]. Zdravstveni delavci s predhodno okužbo s SARS-CoV-2 imajo višje titre Ab kot odziv na en odmerek cepiva mRNA kot tisti, ki predhodno niso bili okuženi [11]. Poleg tega imajo posamezniki s predhodno okužbo okrepljene S-specifične odzive T-celic in odzive spominskih Bcelic, ki izločajo Ab, po prvem odmerku brez poživitvenega odmerka [12]. V tej študiji smo izčrpno preučili humoralno in celično imunogenost homolognih in heterolognih režimov s prvim pospeševanjem v prospektivni opazovalni kohorti z vzporednimi primerjavami S-specifičnih vezavnih Ab, nAb in S-specifičnih odzivov CD4 in T-celic . Ocenili smo tudi imunološke rezultate pri udeležencih, ki so bili okuženi z divjim tipom SARS-CoV-2 in so prejeli cepiva proti COVID-19, da bi ugotovili, ali predhodna okužba in cepljenje učinkovito izzoveta imunski odziv proti različici Delta.

koristi cistanche za moške - krepitev imunskega sistema

2. Metode

2.1. Oblikovanje študija

Marca 2021 je bila ustanovljena multicentrična prospektivna kohorta za preučevanje imunskih odzivov na cepljenje proti COVID-19. Udeleženci v tej kohorti so bili prostovoljno izbrani med zdravstvene delavce in prvotno načrtovano, da prejmejo dva odmerka BNT162b2 v 3-tedenskem intervalu ali AZD1222 v 12-tedenskem intervalu. Vendar pa je del posameznikov, ki so bili prvotno cepljeni z AZD1222, med majem in junijem 2021 prejel poživitveni odmerek BNT162b2 in so bili vključeni v skupino cepljenja AZD1222/BNT162b2. Med udeleženci v kohorti so bili tisti, ki so predhodno imeli okužbo z divjim tipom SARSCoV-2 in so prejeli BNT162b2 ali AZD1222, vključeni kot skupina predhodne okužbe/cepljenja. Vsi prejemniki cepiva, analizirani v tej študiji, so bili starostno usklajeni med skupinami. Vzorci periferne krvi so bili zbrani pri vseh udeležencih v kohorti na vsaki časovni točki (T): pred in 3 tedne po 1. odmerku cepiva (T1 oziroma T2), 5 tednov po 1. odmerku BNT162b2 ali 11 tednov po 1. odmerek AZD1222 (T3) in 14 tednov po 1. odmerku cepiva (T4). Shematski prikaz protokola študije je na sliki 1. Za primerjavo so bili vzorci rekonvalescentov pridobljeni od necepljenih bolnikov, okuženih z različico SARSCoV-2 Delta, potrjeno z verižno reakcijo s polimerazo v realnem času z uporabo Seegene Allplex { {38}}NCoV Assay Kit (Seegene, Koreja) in Illumina BTSeq SARS-CoV-2 komplet za sekvenciranje celotnega genoma (Celemics Inc, Koreja) na sekvencerju MiSeq (150-bp paired-end mode; Illumina, San Diego, CA, ZDA). Bazno zaporedje, pridobljeno prek BTseq, je bilo primerjano z NCBI referenčnim zaporedjem NC_045512.2 z uporabo programske opreme IGV 2.10 za potrditev različice Delta. Študijo so odobrili institucionalni revizijski odbori vsakega sodelujočega inštituta in izvedena v skladu z načeli Helsinške deklaracije. Vsi udeleženci so pred vpisom dali pisno informirano soglasje.

2.2. Udeleženci študije

To kohorto je sestavljalo 22 udeležencev, ki so prejeli homologno cepivo BNT162b2/BNT162b2 (povprečna starost 38.0 let; 31,8 odstotka moških), 20 udeležencev, ki so prejeli homologno cepivo AZD1222/AZD1222 (povprečna starost 39,7 leta; 23,8 odstotka moških). , in 9 udeležencev, ki so prejeli heterologno cepivo AZD1222/BNT162b2 (povprečna starost 38,2 leta; 33,3 odstotka moških). Od 11 udeležencev s predhodno okužbo z divjim tipom SARS-CoV-2 (povprečna starost 38,5 leta; 27,3 odstotka moških) sta bila 2 in 9 cepljena z BNT162b2/BNT162b2 oziroma AZD1222/AZD1222. Demografski podatki različnih cepljenih skupin so navedeni v dodatni tabeli 2. Vsi udeleženci s predhodno okužbo z divjim tipom SARS-CoV-2 so imeli asimptomatski ali blag COVID-19, 3 od njih pa so imeli pljučnico. Mediani čas od potrditve COVID-19 do prvega cepljenja je bil 121,5 (interkvartilni razpon [IQR], 102,3–252,5) dni. Demografski podatki udeležencev s predhodno okužbo z divjim tipom SARS-CoV-2 in cepljenjem so navedeni v dodatni tabeli 1. Vzorci rekonvalescentov so bili pridobljeni pri 17 bolnikih (povprečna starost 53 let; 52,9 odstotka moških), okuženih s SARS -CoV-2 Delta različica in hospitaliziran zaradi zmernega do kritičnega COVID-19 (zmerno, 17,6 odstotka; hudo, 35,3 odstotka; kritično bolni, 47,1 odstotka). Mediani čas od pojava simptomov, povezanih s COVID-19-, do vzorčenja je bil 24 (IQR, 22–32) dni. Demografski podatki rekonvalescentov SARS-CoV-2 Delta so navedeni v dodatni tabeli 2 in tabeli 3.

2.3. Vezavna protitelesa

SARS-CoV-2 S-specifična vezavna protitelesa so bila analizirana s komercialnim imunskim testom. Proteinski test Elecsys anti-S (Roche Diagnostics, Nemčija) je elektrokemiluminescenčni imunski test, ki se uporablja za odkrivanje protiteles, specifičnih za SARS-CoV-2 S, na analizatorju Cobas e411 (Roche Diagnostics, Nemčija) z merilnim območjem od { {8}}.4 U/mL do 250 U/mL (do 2500 U/mL z vgrajeno razredčitvijo 1:10 in do 12.500 U/mL z vgrajeno razredčitvijo 1:50). Rekombinantna receptorska vezavna domena proteina S je bila uporabljena po principu dvojnega antigenskega sendviča. Antigeni v reagentu zajamejo predvsem anti-SARSCoV-2 IgG. Za odkrivanje prejšnjih okužb s SARS-CoV-2 je bil uporabljen test Elecsys proti nukleokapsidnim beljakovinam (Roche Diagnostics, Nemčija) z mejnim indeksom 1,0.

koristi dodatka cistanche-povečanje imunosti

2.4. Test nevtralizacije zmanjšanja plaka

Testi nevtralizacije zmanjšanja plaka za viruse divjega tipa SARS-CoV- 2 (BetaCoV/Korea/KCDC03/2020) in sev različice Delta YS117 (pristopna številka GenBank MZ798798 in pristopna številka GISAID EPI{ {8}}ISL_3411836) smo izvedli z uporabo vzorcev plazme. Virus je bil gojen na celicah Vero E6 v laboratoriju 3. stopnje biološke varnosti v biomedicinskem raziskovalnem centru Avison v Seulu v Koreji. Vzorci inaktivirane plazme (135 l) vzorcev inaktivirane plazme so bili 2--krat serijsko razredčeni (1:40 do 1:1280) in dodani enakemu volumnu 100-kratnika 50-odstotnega infektivnega odmerka tkivne kulture (TCID50) virus. Izolate, ki so vsebovali 100-kratnik TCID50, smo inkubirali v 96-ploščah z vdolbinicami 60 minut pri 37 C. Mešanice virusa in plazme smo inkubirali 60 minut pri 37 C v CO2 inkubatorju. Mešanice virusa in plazme smo nato dodali celicam Vero E6, posejanim v 24-ploščo z jamicami z 1 x 105 celic/jamico in inkubirali 1 uro pri 37 C. Prekrivni medij, sestavljen iz 2 odstotkov fetalnega govejega seruma (FBS) v DMEM celicam E6 smo dodali 1 odstotek agarja in inkubirali 3 dni pri 37 °C v CO2 inkubatorju. Ko je nastal plak, smo uporabili 10-odstotno raztopino formaldehida in 0,33-odstotno nevtralno rdeče v fiziološki raztopini s fosfatnim pufrom (PBS) za fiksiranje in barvanje plasti celične kulture. Nevtralizacijsko razredčitev vsakega vzorca smo določili z identifikacijo vdolbinice z največjo razredčitvijo plazme brez opaznega citopatskega učinka. 50-odstotni nevtralizacijski odmerki (ND50) so bili izraženi kot recipročna razredčitev plazme, kar je povzročilo 50-odstotno zmanjšanje števila plakov v primerjavi s pozitivno virusno kontrolo. Za izračun titrov ND50 je bila uporabljena Spearman–Kärberjeva metoda. V primerjavi z mednarodnimi standardnimi serumi SZO (NIBSC 20–136; titer nAb: 1000 ie/ml) so bili titri nAb pretvorjeni v mednarodne enote na mililiter (ie/ml).

Slika 1. Shematski prikaz kohort prejemnikov cepiva. Shema študije za odkrivanje protiteles, specifičnih za vezavo SARS-CoV-2, nevtralizirajočih protiteles in odzivov T-celic v vzorcih periferne krvi posameznikov, cepljenih proti COVID-19. Študija vključuje BNT162b2/BNT162b2 (n=22), AZD1222/AZD1222 (n=20), AZD1222/BNT162b2 (n=9) in predhodni divji tip SARS-CoV{{20 }} skupine okužb/cepljenja (n=11). Med predhodnimi okužbami/cepljenji z divjim tipom SARS-CoV-2 sta bila 2 in 9 cepljenih z BNT162b2/BNT162b2 oziroma AZD1222/AZD1222. Zgodovina okužbe s SARS-CoV-2 je bila potrjena s pozitivnim testom nukleokapsidnih protiteles proti SARS-CoV-2. T, časovna točka; tedni, tedni.

2.5. T-celični testi

Mononuklearne celice periferne krvi (PBMC) smo izolirali s centrifugiranjem z gradientom gostote z uporabo epruvet Leucosep (Greiner Bio-One), ki vsebujejo medij za ločevanje limfocitov. Po centrifugiranju pri 800 g 15 minut z zaviranjem smo obogateno celično frakcijo, sestavljeno iz PBMC, pobrali in sprali z 20 ml PBS. Po 10-minutnem centrifugiranju pri 300 g smo celično peleto resuspendirali v 10 ml PBS za štetje. Po centrifugiranju pri 300 g 10 minut smo celice do uporabe kriokonzervirali v FBS z 10 odstotki dimetil sulfoksida pri 180 C. Za znotrajcelično obarvanje citokinov (ICS) IFN-c, interlevkina -2 (IL-2) in faktorja tumorske nekroze (TNF) smo uporabili peptidne skupine 15-mernih peptidov, ki se prekrivajo z 11 aminokisline, ki pokrivajo imunodominantne dele proteina SARS-CoV-2 Wuhan S (aa 304–338, 421–475, 492–519, 683–707, 741–770, 785–802 in 885–1273; Miltenyi Biotec). Za primerjavo odzivov T-celic proti sevom Wuhan in Delta smo uporabili dva različna niza peptidnih skupin S, ki obsegata neohranjene regije sekvenc S med sevi Wuhan in Delta (B.1.617.2 linija) (Miltenyi Biotec). Po odmrzovanju PBMC in mirovanju čez noč smo 1  106 PBMC stimulirali s peptidnimi skupinami v končni koncentraciji 1 mg/mL in anti-človeškim CD28/CD49d (1 mg/mL; BD Biosciences) 1 uro v { {45}}plošča z vdolbinicami v mediju RPMI-1640, ki vsebuje 1 odstotek penicilina–streptomicina, 2 mM L-glutamina in 10 odstotkov FBS. PBMC kulturo smo inkubirali še 5 ur po dodatku brefeldina A in monenzina (BD Biosciences) pri 37 C v 5-odstotnem CO2. Po stimulaciji so bile celice sprane s PBS in obarvane z Live/Dead-Aqua (Invitrogen) 20 minut pri sobni temperaturi, čemur je sledil koktajl površinskih Abs 20 minut pri sobni temperaturi, vključno z anti-CD14- BV510, anti-CD19-BV510, anti-CD4- BV650, anti-CD3-BV786 in anti-CD8-APC-Cy7 (BD Bioscience). Celice so bile fiksirane in permeabilizirane z uporabo Foxp3/Transcription Factor Staining Buffer Set (eBioscience) in nato obarvane s koktajlom intracelularnih Abs, vključno z anti-TNF-FITC, anti-IL-2-PE (eBioscience) in anti- IFN-c-APC (BD Biosciences) 20 minut pri sobni temperaturi. Po končanem barvanju smo celice analizirali na instrumentu LSR II s FACSDiva (BD Biosciences), podatke pa analizirali v programski opremi FlowJo (FlowJo LLC).

rastlina cistanche krepi imunski sistem

2.6. Statistična analiza

Podatki, narisani v linearni lestvici, so bili izraženi kot povprečje ± standardni odklon. Podatki, narisani v logaritemskih lestvicah, so bili izraženi kot geometrična sredina ± geometrijski standardni odklon. Mann–Whitney U ali Wilcoxonov test je bil uporabljen za neparne oziroma seznanjene primerjave. Statistične analize so bile {{0}}okrožene, P < 0.05 velja za pomembno. Vse analize so bile izvedene v R studiu ali GraphPad Prism v9.0.

3. Rezultati

3.1. Kinetika imunskih odzivov, ki jih izzovejo različni režimi cepljenja

Najprej smo pregledali titre anti-S IgG po cepljenju z različnimi režimi. Kot je bilo pričakovano, je prvi odmerek pomembno povečal titre anti-S IgG (T2), drugi odmerek pa je dodatno znatno povečal titre anti-S IgG pri homolognem cepljenju BNT162b2/BNT162b2 (T3) in AZD1222/AZD1222 (T4) in heterolognem cepljenju AZD1222/ Skupine cepljenja proti BNT162b2 (T4) (slika 2A). V skupini s predhodno okužbo/cepljenjem je prvi odmerek maksimalno povečal titre anti-S IgG (T3), drugi odmerek pa ni dodatno zvišal titrov anti-S IgG (T4). Pregledali smo tudi S-specifične odzive CD4 in T-celic po neposredni ex vivo stimulaciji s peptidnimi skupinami, ki pokrivajo SARSCoV-2 Wuhansko zaporedje S proteinov divjega tipa. Na podlagi ICS je prvi odmerek pomembno povečal pogostnost celic, ki proizvajajo IFN-c, med celicami CD4 in T, drugi odmerek pa je nadalje znatno povečal pogostnost v skupinah, cepljenih z BNT162b2/BNT162b2 (T3) in AZD1222/BNT162b2 (T4). (Slika 2B). V skupinah AZD1222/AZD1222 in skupinah s predhodno okužbo/cepljenjem je prvi odmerek pomembno povečal pogostnost celic IFN-c plus med celicami CD4 plus T, drugi odmerek pa pogostnosti ni dodatno povečal.

3.2. Primerjava titrov Ab med različnimi režimi

Nato smo primerjali najvišje titre vezave Ab med različnimi režimi cepljenja. Kot najvišje titre smo izbrali titre anti-S IgG po drugem odmerku v skupinah cepljenja z BNT162b2/BNT162b2, AZD1222/AZD1222 in AZD1222/BNT162b2 ter po prvem odmerku v skupini s predhodno okužbo/cepilom. Najvišji titri anti-S IgG so bili znatno višji v skupini cepljenja z AZD1222/BNT162b2 kot v skupinah cepljenja z BNT162b2/BNT162b2 ali AZD1222/AZD1222 (slika 3A). Podobno so bili najvišji titri anti-S IgG bistveno višji v skupini s predhodno okužbo/cepilom kot v skupinah s cepljenjem BNT162b2/BNT162b2 ali AZD1222/AZD1222. Med skupinama z AZD1222/BNT162b2 in predhodno okužbo/cepljenjem ni bilo razlik v titrih IgG proti S. Ocenili smo tudi titre nAb ob najvišjih časovnih točkah: po drugem odmerku v skupinah cepljenja z BNT162b2/BNT162b2, AZD1222/AZD1222 in AZD1222/BNT162b2 in po prvem odmerku v skupini s predhodno okužbo/cepilom. Zanimivo je, da so bili titri nAb bistveno višji v skupini cepljenja AZD1222/BNT162b2 kot v skupinah cepljenja BNT162b2/BNT162b2 ali AZD1222/AZD1222 (slika 3B). Poleg tega so bili titri nAb bistveno višji v skupini s predhodno okužbo/cepljenjem kot v skupinah s cepljenjem BNT162b2/BNT162b2 ali AZD1222/AZD1222. Ni bilo razlik v titrih nAb med skupinama AZD1222/BNT162b2 in skupinami s predhodno okužbo/cepilom. Raven humoralnega odziva, ki so ga izzvali različni režimi cepljenja, je bila razvrščena v močne, zmerne in brez/šibke odzive na podlagi razvrstitve percentila. Delež oseb z močnim odzivom je bil največji v skupini s predhodno okužbo/cepljenjem, ki ji je sledila skupina s cepljenjem AZD1222/BNT162b2 v zvezi z analizo anti-S IgG (slika 3C) in nAb (slika 3D). Ti rezultati skupaj kažejo, da je heterologno pripravo in oživitev, vključno s cepljenjem AZD1222/BNT162b2 in predhodno okužbo/cepljenjem, učinkovitejša pri ustvarjanju humoralnih odzivov kot homologna priprava in oživitev.

3.3. Primerjava S-specifičnih odzivov CD4 in T-celic med različnimi režimi

Primerjali smo tudi S-specifične odzive CD4 in T-celic med različnimi režimi cepljenja ob največjih časovnih točkah: po drugem odmerku v skupinah BNT162b2/BNT162b2, AZD1222/AZD1222 in AZD1222/BNT162b2 in po prvem odmerku v prejšnjih skupinah cepljenja. skupina okužbe/cepljenja. Za razliko od titrov anti-S IgG in nAb je bila pogostnost celic IFN-c plus med celicami CD4 plus T najvišja v skupini cepljenih z BNT162b2/BNT162b2 (slika 4A). Delež oseb z močnim odzivom je bil prav tako najvišji v skupini s cepljenjem BNT162b2/BNT162b2, ki ji je sledila skupina s predhodno okužbo/cepljenjem (slika 4B). Ti rezultati kažejo, da imunizacija z drugo homologno spodbudo BNT162b2 učinkoviteje izzove odzive celic T spomina kot drugo heterologno okrepitev cepljenja ali cepljenje s prvim odmerkom po naravni okužbi s SARS-CoV-2. Nasprotno, pri heterolognih režimih s prvim pospeševanjem je večja verjetnost, da bodo razvili višje ravni humoralnih imunskih odzivov. Analizirali smo tudi relativno pogostost polifunkcionalnih celic CD4 plus T, ki hkrati proizvajajo več citokinov (tj. IFN-c, IL-2 in/ali TNF). Skupina cepljenja z BNT162b2/BNT162b2 je pokazala bistveno višje pogostnosti polifunkcionalnih celic, ki proizvajajo 2 citokina med S-specifičnimi celicami CD4 plus T, kot skupine cepljenja AZD1222/AZD1222 ali AZD1222/BNT162b2 (slika 4C). Med skupinama cepljenja z BNT162b2/BNT162b2 in skupinami s predhodno okužbo/cepilom ni bilo razlik v pogostnosti. Pogostnost polifunkcionalnih celic je bila bistveno višja v skupini cepljenja AZD1222/BNT162b2 kot v skupini cepljenja AZD1222/AZD1222. Tortni grafi, ki predstavljajo eno-, dvojno- in trojno pozitivne celice CD4 plus T v smislu proizvodnje citokinov, ki se odzivajo na prekrivajoče se skupine peptidov S, so prav tako pokazali relativno visoko pogostnost dvojno ali trojno pozitivnih celic pri cepljenju z BNT162b2/BNT162b2 in predhodnem okužbe/- cepljene skupine (slika 4D).

3.4. Imunski odzivi proti različici Delta med različnimi režimi

Končno smo analizirali imunski odziv proti različici Delta. V to analizo smo za primerjavo vključili rekonvalescente, ki so preboleli okužbo SARS-CoV-2 Delta. Titri nAb, specifični za različico Delta, so bili bistveno višji v skupini s predhodno okužbo/cepljenjem kot v skupinah cepljenih z BNT162b2/BNT162b2, AZD1222/AZD1222 ali AZD1222/BNT162b2 in so bili celo višji od tistih v rekonvalescentih posameznikih z Delta (slika 5A). . Pregledali smo tudi odzive celic CD4 plus T proti proteinu S različice Delta. V tej analizi smo izvedli ICS IFN-c po neposredni ex vivo stimulaciji z uporabo dveh različnih nizov peptidnih skupin S, ki obsegata neohranjene regije S sekvenc med sevi Wuhan in Delta, ter izračunali razmerje frekvence Delta Sspecific IFN-c plus celic na frekvenco Wuhan S-specifičnih celic IFN-c plus. Kot je bilo pričakovano, je bilo razmerje največje pri rekonvalescentih posameznikov Delta. Zanimivo je, da je bilo razmerje večje v skupini s predhodno okužbo/cepljenjem kot v skupini s cepljenjem z BNT162b2/BNT162b2 (slika 5B), čeprav so bili odzivi CD4 in T-celic, specifični za Wuhan, najvišji v skupini s cepljenjem z BNT162b2/BNT162b2 (sl. 4A). Ti rezultati skupaj kažejo, da so odzivi nAb in CD4 plus celic T, ki navzkrižno prepoznajo različico Delta, učinkoviteje ustvarjeni s predhodno okužbo/cepljenjem kot homologni ali heterologni režimi cepljenja.

Slika 2. Odzivi protiteles in T-celic, ki jih izzovejo različni režimi začetnega pospeševanja. Longitudinalni imunski odzivi po razporedu vzorčenja od pred cepljenjem do 14 tednov po prvem cepljenju. (A) Protitelesa, specifična za vezavo SARS-CoV-2, so bila izmerjena v BNT162b2/BNT162b2 (n=22), AZD1222/AZD1222 (n=20), AZD1222/BNT162b2 (n {{ 20}}) in skupine predhodne okužbe/cepljenja (n=6). (B) SARS-CoV-2 odziv CD4 in T-celic, specifičnih za konice, je bil izmerjen v BNT162b2/BNT162b2 (n=19), AZD1222/AZD1222 (n=18), AZD1222/BNT162b2 (n=9) in skupine predhodne okužbe/cepljenja (n=7). Podatki so predstavljeni kot geometrična sredina ± geometrična SD (A) ali sredina ± SD (B). Statistične analize med časovnimi točkami znotraj vsake skupine so bile izvedene z uporabo Wilcoxonovega testa predznaka. ns, ni pomembno; *P < 0.05, **P < 0.01, ***P < 0,001, ****P < 0,0001.

Slika 3. Humoralni imunski odzivi ob najvišjih časovnih točkah. (A) Protitelesa, specifična za vezavo SARS-CoV-2, so bila primerjana med BNT162b2/BNT162b2 (n=22), AZD1222/AZD1222 (n=20), AZD1222/BNT162b2 (n {{ 15}}) in skupine predhodne okužbe/cepljenja (n=6) ob največjih časovnih točkah. (B) Nevtralizirajoča protitelesa so primerjali med BNT162b2/BNT162b2 (n=22), AZD1222/AZD1222 (n=20), AZD1222/BNT162b2 (n=9) in predhodno okužbo/cepljenjem ( n=11) skupin ob konicah. Najvišje časovne točke so bile izbrane na naslednji način: po drugem odmerku v skupinah cepljenja z BNT162b2/BNT162b2, AZD1222/AZD1222 in AZD1222/BNT162b2 in po prvem odmerku v skupini s predhodno okužbo/cepljenjem. Podatki so predstavljeni kot geometrična sredina ± geometrična SD in analizirani glede pomembnosti z uporabo Mann-Whitneyjevega testa. (C in D) Odstotki udeležencev z različnimi stopnjami humoralnih imunskih odzivov. Kvantifikacija vrste odziva (močan, zmeren in nič/šibek) je izražena kot del števila prejemnikov cepiva v vsaki skupini. Vrste odzivnih so bile določene s percentilnim rezultatom, izračunanim za vse cepljene udeležence. ns, ni pomembno; *P < {{40}}.05, **P < 0.01, ***P < 0,001, ****P < 0,0001.

4. Razprava

Trenutno odobrena cepiva mRNA in vektorska cepiva proti adenovirusom so pokazala izjemno učinkovitost pri preprečevanju bolezni COVID-19. Vendar se šteje, da heterologno cepljenje s prvim pospeševanjem izboljša imunogenost in ublaži občasno pomanjkanje oskrbe [13]. Poleg tega so se pri cepivih z adenovirusnimi vektorji pojavila varnostna vprašanja po prepoznavanju resnih neželenih dogodkov, vključno s smrtno nevarno vensko trombozo, povezano s cepljenjem proti AZD1222, zlasti pri mlajših ženskah [14,15]. To je vodilo k obnovitveni imunizaciji s heterologno mRNA za tiste, ki so že prejeli prvi odmerek AZD1222. Čeprav podatki o učinkovitosti niso bili na voljo, so številni nacionalni zdravstveni organi sprejeli heterologne sheme odobrenih cepiv proti COVID-19. Tako je primerjalna študija humoralnih in celičnih imunskih odzivov, ki jih izzovejo različni režimi cepljenja s prvim pospeševanjem, informativna in pomaga pri boljšem razumevanju izzivov v resničnem svetu. V tej študiji smo dokazali diferencialno indukcijo humoralne in celične imunosti s heterolognimi primarnimi ojačevalnimi cepivi (dodatna tabela 4). V popolnem nasprotju s specifičnimi vezavnimi ravnmi Ab in nevtralizacijskimi titri, ki so bili najvišji v skupini cepljenja z AZD1222/BNT162b2, so bili odzivi specifičnih celic CD4 in celic T najvišji v skupini cepljenja z BNT162b2/BNT162b2, ne pa v skupini cepljenja z AZD1222/BNT162b2. skupina. Relativno nizke ravni odzivov celic CD4 in T, specifičnih za S, pri udeležencih, cepljenih z AZD1222/BNT162b2-, so bile nepričakovane in te posameznike še vedno lahko izpostavljajo tveganju hude okužbe s SARS-CoV-2. Naše ugotovitve se razlikujejo od tistih, o katerih so poročali Schmidt in sodelavci, ki so predlagali, da so se po heterolognem povečanju BNT162b2 titri nAb in odzivi T-celic znatno povečali pri posameznikih, zdravljenih z AZD1222- [7]. Vendar pa je bila absolutna pogostnost celic CD69 plus IFN-c plus med celicami CD4 plus T le neznatno povečana in ta študija je preprečila poglobljene analize polifunkcionalnosti S-specifičnih odzivov T-celic. Pri posameznikih, ki so bili predhodno okuženi, lahko prvi odmerek cepiva deluje kot obnovitvena imunizacija in močno inducira humoralne in celične odzive [16,17]. Ker se domneva, da je titer nAb ključni korelat zaščite pred okužbo s SARS-CoV-2 [18], se naši rezultati dobro ujemajo z nedavno ugotovitvijo o koristnem povečanju imunosti, pridobljene z okužbo, s prilagojeno učinkovitostjo cepiva > 90 odstotkov po prvem odmerku pri prejemnikih cepiva, ki so imeli predhodno okužbo s SARS-CoV-2 [19]. Poleg tega smo kljub znatnemu pobegu odzivov nAb proti različici Delta med udeleženci študije opazili najvišje ravni nAb, ki navzkrižno prepoznajo različico Delta, v skupini udeležencev s predhodno okužbo z divjim tipom SARS-CoV-2 in cepljenje. Vendar so imeli v skladu s skupino heterolognega cepljenja AZD1222/BNT162b2 tisti s predhodno okužbo, ki so bili cepljeni, šibkejši S-specifični odziv celic CD4 in T kot posamezniki s homolognim cepljenjem BNT162b2/BNT162b2 brez predhodne okužbe. Predvsem naši rezultati kažejo, da dva odmerka BNT162b2 vodita do zanesljive in robustne indukcije S-specifičnih odzivov CD4 in T-celic, ki je bistveno višja kot pri drugih režimih cepljenja s primarnim pospeševanjem. Te ugotovitve so skladne z nedavnim poročilom o štirih različnih cepivih proti COVID-19 [20], medtem ko je naša analiza vključevala heterologne režime s prvim pospeševanjem in hibridno imunost iz predhodne okužbe in cepljenja. V skladu s tem bi lahko izbrali platforme cepiva mRNA zaradi svoje zmožnosti induciranja robustnih spominskih odzivov celic CD4 in T. Ker se incidenca prebojnih okužb po cepljenju po vsem svetu povečuje, je vedno večje zanimanje za imunost, ki ščiti pred hudo boleznijo COVID-19. Ker se nove različice SARS-CoV-2 še naprej pojavljajo in se izmikajo humoralni imunski obrambi, lahko celična imunost, ki cilja na širok spekter epitopov SARS-CoV-2, ki jih prepoznajo celice T, zagotovi stabilno zaščitno imunost [21]. ], čeprav determinante celičnih odzivov pri zaščiti, posredovani s cepivom, še niso natančno opredeljene. Zato ostaja nejasno, ali se povečana humoralna imunogenost heterolognega cepljenja AZD1222/BNT162b2 dosledno prevede v izboljšano zaščito, kar zahteva nadaljnje študije. Poleg tega je treba raziskati, ali lahko ljudje, ki so po cepljenju razvili slab odziv T-celic, kot so tisti, ki so prejeli AZD1222, lahko koristijo formulacije cepiva s T-celicami [22]. Tako imunost, ki jo povzroči okužba, kot imunost, ki jo povzroči cepivo, sčasoma naravno oslabi; vendar se zdi, da je večja zaščita podeljena osebam, ki so bile predhodno okužene s SARS-CoV-2 [23]. Pri cepljenih posameznikih prebojna okužba z različico Omicron povzroči manjše odzive nAb kot okužba z različico Delta [24], razmeroma malo pa je znanega o morebitnih posledicah hibridne imunosti, ki jo dajeta okužba in cepljenje z različnimi sevi. Kljub temu je prisotnost polifunkcionalnih celic T, specifičnih za S, pri predhodno okuženih in cepljenih udeležencih v naši študiji skladna s počasnejšim upadanjem zaščite pred hudo obliko COVID-19 pri tej populaciji in lahko prispeva k spreminjanju resnosti bolezni po ponovni okužbi s SARS -CoV-2 različice [25,26]. Sedanja študija ima več omejitev. Prvič, zaradi majhnih velikosti vzorcev v kohorti je robustna statistična analiza zahtevna; zato bo treba naše ugotovitve dodatno potrditi v večjih kohortah. Drugič, v kasnejših časovnih točkah nismo mogli testirati vzorcev, da bi določili trajnost in upad humoralnih in celičnih imunskih odzivov. Tretjič, naši rezultati lahko podcenjujejo vpliv subdominantnih epitopov T-celic zunaj dominantnih epitopov. Četrtič, preučevali smo samo krožeče limfocite in bodo morda potrebne prihodnje študije dreniranja bezgavk po cepljenju, da bi razumeli mehanizme, na katerih temeljijo diferencialni odzivi, opaženi tukaj. Če povzamemo, trenutna študija z neposrednimi primerjavami, ki se ujemajo s starostjo, osvetljuje neskladno humoralno in celično imunogenost heterolognega pripravka in pospeševanja v kontekstu izpostavljenosti antigenom SARS-CoV-2. Naše ugotovitve poudarjajo, kako posamezne imunološke izkušnje oblikujejo kasnejši imunski odziv, ki ga izzove cepljenje proti COVID-19. Dodatni podatki o učinkovitosti v resničnem svetu in laboratorijske preiskave bodo dodatno prispevali k najprimernejši strategiji cepljenja za zaščito pred nastajajočimi različicami SARS-CoV-2, kar bo vplivalo na razvoj platform cepiv naslednje generacije.

Slika 4. Celični imunski odzivi ob najvišjih časovnih točkah. (A) Pogostnosti konice specifičnih celic IFN-c plus med celicami CD4 in T so primerjali med BNT162b2/BNT162b2 (n=19), AZD1222/AZD1222 (n=18), AZD1222/BNT162b2 ( n=9) in skupine predhodne okužbe/cepljenja (n=7) ob največjih časovnih točkah. Najvišje časovne točke so bile izbrane na naslednji način: po drugem odmerku v skupinah cepljenja z BNT162b2/BNT162b2, AZD1222/AZD1222 in AZD1222/BNT162b2 in po prvem odmerku v skupini s predhodno okužbo/cepljenjem. (B) Odstotki udeležencev z različnimi stopnjami celičnega imunskega odziva. Kvantifikacija vrste odziva (močan, zmeren in nič/šibek) je izražena kot del števila prejemnikov cepiva v vsaki skupini. Vrste odzivnih so bile določene s percentilnim rezultatom, izračunanim za vse cepljene udeležence. (C) Pogostnosti polifunkcionalnih za konico specifičnih celic CD4 in T, ki proizvajajo katero koli kombinacijo IFN-c, IL-2 ali TNF v vsaki skupini cepljenih udeležencev. (D) Delež za konico specifičnih celic CD4 plus T je pozitiven za določeno število citokinov. Podatki so predstavljeni kot povprečje ± SD. Pomembnost je bila analizirana z uporabo Mann-Whitneyjevega testa (A in C). ns, ni pomembno; *P < 0.05, **P < 0.01, ***P < 0,001, ****P < 0,0001.

Še več, sestavina tradicionalne kitajske medicinezelišče cistanchelahko tudi poveča imunost, Mehanizem Cistanche deserticola pri krepitvi imunosti

koristi dodatka cistanche - kako okrepiti imunski sistem

Kliknite tukaj za ogled izdelkov Cistanche Enhance Imunity

【Vprašajte za več】 E-pošta:cindy.xue@wecistanche.com/Whats App: 0086 18599088692/Wechat: 18599088692

Cistanche tubulosapolisaharidi lahko spodbujajo proliferacijo limfocitov T in B, vendar je proliferacijski učinek limfocitov B bistveno močnejši kot pri limfocitih T. Polisaharidi Cistanche deserticola spodbujajo sproščanje citokina IL22 iz limfocitov, kar je povezano s pospeševanjem proliferacije vraničnih limfocitov. Cistanche deserticola lahko aktivira makrofage in uravnava imunski sistem. Polisaharidi Cistanche deserticola, ehinazid in pilozid pomembno vplivajo na tvorbo in aktivnost človeških limfocitov. Lahko poveča proliferacijski odziv limfocitov in s tem okrepi imunsko funkcijo telesa.

ekstrakt cistanche

Funkcionalne komponenteCistanche tubulosaskupni glikozidi pomembno vplivajo na okrevanje celic po poškodbi zaradi sevanja 60Coy in lahko tudi okrepijo imunsko funkcijo pred poškodbami zaradi sevanja.

Izvleček Cistanche tubulosa ne more le nadomestiti prirojene imunske pomanjkljivosti, ampak tudi izboljša pridobljeno imunost.

Slika 5. Navzkrižno variantni imunski odzivi proti Delti, ki jih izzovejo različni režimi s prvim pospeševanjem. (A) Vzorci plazme so bili analizirani z nevtralizacijskimi testi zmanjšanja plaka za različico delta SARS-CoV-2 v BNT162b2/BNT162b2 (n {{10}}), AZD1222/AZD1222 (n {{ 13}}), AZD1222/BNT162b2 (n=9), predhodna okužba/cepljenje (n=11) in Delta-rekonvalescentne skupine (n {{20}}). Delta-nevtralizirajoča protitelesa so primerjali med skupinami v naslednjih časovnih točkah: po drugem odmerku v skupinah s cepljenjem BNT162b2/BNT162b2, AZD1222/AZD1222 in AZD1222/BNT162b2 in po prvem odmerku v skupini s predhodno okužbo/cepljenjem. (B) PBMC so analizirali z znotrajceličnim obarvanjem za IFN-c po neposredni stimulaciji ex vivo z uporabo dveh različnih nizov peptidnih skupin S, ki obsegata neohranjene regije spike sekvenc med sevi Wuhan in Delta v BNT162b2/BNT162b2 (n {{37} }), AZD1222/AZD1222 (n {{40}}), AZD1222/BNT162b2 (n=9), predhodna okužba/cepljenje (n=7) in Delta-rekonvalescent ( n=17) skupin. V vsaki skupini je bilo izračunano razmerje med pogostnostjo celic CD4 plus T, ki proizvajajo IFN-c, proti konici Delta, in pogostnosti celic CD4 plus T, ki proizvajajo IFN-c, proti konici Wuhan. Podatki so predstavljeni kot geometrično povprečje ± geometrični SD (A) ali povprečje ± SD (B) in analizirani glede pomembnosti z uporabo Mann-Whitneyjevega testa. ns, ni pomembno; *P < 0.05, **P < 0,01, ***P < 0,001, ****P < 0,0001.

Reference

[1] Bok K, Sitar S, Graham BS, et al. Pospešen razvoj cepiva proti COVID-19: mejniki, lekcije in obeti. Imuniteta 2021; 54: 1636–51. https://doi. org/10.1016/j.immuni.2021.07.017.

[2] Polack FP, Thomas SJ, Kitchin N et al. Varnost in učinkovitost cepiva BNT162b2 mRNA Covid-19. N Engl J Med 2020; 383: 2603–15. https://doi.org/ 10.1056/NEJMoa2034577.

[3] Falsey AR, Sobieszczyk ME, Hirsch I, et al. 3. faza Varnost in učinkovitost cepiva AZD1222 (ChAdOx1 nCoV-19) Covid-19. N Engl J Med 2021; 385: 2348–60. https://doi.org/10.1056/NEJMoa2105290.

[4] Borobia AM, Carcas AJ, Pérez-Olmeda M, et al. Imunogenost in reaktogenost spodbujevalnika BNT162b2 pri udeležencih, zdravljenih s ChAdOx1-S (CombiVacS): multicentrično, odprto, randomizirano, kontrolirano preskušanje 2. faze. Lancet 2021; 398: 121–30. https://doi.org/10.1016/S0140-6736(21) 01420-3.

[5] Barros-Martins J, Hammerschmidt SI, Cossmann A, et al. Imunski odzivi proti različicam SARS-CoV-2 po heterolognem in homolognem cepljenju ChAdOx1 nCoV-19/BNT162b2. Nat Med 2021; 27: 1525–9. https://doi.org/ 10.1038/s41591-021-01449-9.

[6] Hillus D, Schwarz T, Tober-Lau P, et al. Varnost, reaktogenost in imunogenost homologne in heterologne začetne oživitve imunizacije s ChAdOx1 nCoV-19 in BNT162b2: prospektivna kohortna študija. Lancet Respir Med 2021; 9: 1255–65. https://doi.org/10.1016/S2213-2600(21)00357- X.

[7] Schmidt T, Klemis V, Schub D, et al. Imunogenost in reaktogenost heterolognega cepljenja ChAdOx1 nCoV-19/mRNA. Nat Med 2021; 27: 1530–5. https://doi.org/10.1038/s41591-021-01464-w.

[8] Liu X, Shaw RH, Stuart ASV, et al. Varnost in imunogenost heterolognih v primerjavi s homolognimi glavnimi obnovitvenimi shemami z adenovirusnim vektorjem in mRNA COVID-19 cepivom (Com-COV): enojno slepo, randomizirano, neinferiorno preskušanje. Lancet 2021; 398: 856–69. https://doi.org/10.1016/S0140- 6736(21)01694-9.

[9] Krammer F, Srivastava K, Alshammary H, et al. Odziv protiteles pri seropozitivnih osebah po enkratnem odmerku mRNA cepiva SARS-CoV-2. N Engl J Med 2021; 384: 1372–4. https://doi.org/10.1056/NEJMc2101667.

[10] Bradley T, Grundberg E, Selvarangan R, et al. Odziv protiteles po enkratnem odmerku mRNA cepiva SARS-CoV-2. N Engl J Med 2021; 384: 1959–61. https:// doi.org/10.1056/NEJMc2102051.

[11] Saadat S, Rikhtegaran Tehrani Z, Logue J, et al. Vezavni in nevtralizacijski titri protiteles po enem samem odmerku cepiva pri zdravstvenih delavcih, predhodno okuženih s SARS-CoV-2. JAMA 2021; 325: 1467–9. https://doi.org/ 10.1001/jama.2021.3341.

[12] Reynolds CJ, Pade C, Gibbons JM, et al. Predhodna okužba s SARS-CoV-2 reši odzive celic B in T na različice po prvem odmerku cepiva. Znanost 2021; 372: 1418–23. https://doi.org/10.1126/science.abh1282.

[13] Ledford H. Bi lahko mešanje cepiv proti covidu okrepilo imunski odziv? Narava 2021; 590: 375–6. https://doi.org/10.1038/d41586-021-00315-5.

[14] Schultz NH, Sorvoll IH, Michelsen AE, et al. Tromboza in trombocitopenija po cepljenju proti ChAdOx1 nCoV-19. N Engl J Med 2021; 384: 2124–30. https:// doi.org/10.1056/NEJMoa2104882.

[15] Greinacher A, Thiele T, Warkentin TE, et al. Trombotična trombocitopenija po cepljenju proti ChAdOx1 nCov-19. N Engl J Med 2021; 384: 2092–101. https://doi.org/10.1056/NEJMoa2104840.

[16] Mazzoni A, Di Lauria N, Maggi L, et al. Cepljenje s prvim odmerkom mRNA zadostuje za ponovno aktiviranje imunološkega spomina na SARS-CoV-2 pri osebah, ki so prebolele COVID-19. J Clin Invest 2021; 131: e149150.

[17] Samanović MI, Cornelius AR, Gray-Gaillard SL, et al. Po enem odmerku odmerka mRNA cepiva BNT162b2 so opazili močne imunske odzive pri posameznikih, prekuženih s SARS-CoV-2-. Sci Transl Med 2022;14:eabi8961.. https://doi.org/ 10.1126/scitranslmed.abi8961.

[18] Khoury DS, Cromer D, Reynaldi A, et al. Raven nevtralizirajočih protiteles močno napoveduje imunsko zaščito pred simptomatsko okužbo s SARS-CoV-2. Nat Med 2021; 27: 1205–11. https://doi.org/10.1038/s41591-021-01377-8.

[19] Dvorana V, Foulkes S, Insalata F, et al. Zaščita pred SARS-CoV-2 po cepljenju proti covidu- 19 in predhodni okužbi. N Engl J Med 2022; 386: 1207–20. https://doi.org/10.1056/NEJMoa2118691.

[20] Zhang Z, Mateus J, Coelho CH, et al. Humoralni in celični imunski spomin na štiri cepiva proti COVID-19. Cell 2022; 185: 2434–51. https://doi.org/10.1016/ j.cell.2022.05.022.

[21] Vardhana S, Baldo L, Morice WG et al. Razumevanje odzivov T-celic na COVID-19 je bistveno za obveščanje o strategijah javnega zdravja. Sci Immunol 2022; 7: eabo1303.. https://doi.org/10.1126/sciimmunol.abo1303.

[22] Moss P. Imunski odziv celic T proti SARS-CoV-2. Nat Immunol 2022; 23: 186–93. https://doi.org/10.1038/s41590-021-01122-w.

[23] Goldberg Y, Mandel M, Bar-On YM, et al. Zaščita in slabitev naravne in hibridne imunosti na SARS-CoV-2.N angl. J Med 2022; 386: 2201–12. https://doi. org/10.1056/NEJMoa2118946.

[24] Rossler A, Knabl L, von Laer D, et al. Profil nevtralizacije po ozdravitvi po okužbi s SARS-CoV-2 Omicron. N Engl J Med 2022; 386: 1764–6. https://doi. org/10.1056/NEJMc2201607.

[25] Guerrera G, Picozza M, D'Orso S, et al. Cepljenje proti BNT162b2 inducira obstojne celice T, specifične za SARS-CoV-2-, s fenotipom spomina matičnih celic. Sci Immunol 2021; 6 (eabl5344). https://doi.org/10.1126/sciimmunol.abl5344.

[26] Goldblatt D. SARS-CoV-2: od čredne imunosti do hibridne imunosti. Nat Rev Immunol 2022; 22: 333–4. https://doi.org/10.1038/s41577-022-00725-0.