Sprednji bazolateralni nevroni amigdale sestavljajo oddaljeni engram spomina strahu 1. del

Uvod:

Nevarni okoljski znaki pogosto ustvarjajo trajne strahove, vendar se še vedno aktivno preiskuje, kako se oblikujejo in shranjujejo.

Spomin na strah je oblika spomina v naših možganih. Gre za prav posebno obliko spomina, zaradi katere se pogosto počutimo prestrašene, prestrašene in nervozne. Toda odnos med tem spominom na strah in našim spominom je zelo zapleten.

Prvič, spomini na strah nimajo nobene zveze z našim kratkoročnim spominom. Večina spominov na strah je shranjenih v naših bankah dolgoročnega spomina. Zato imamo včasih v mislih spomine iz davnih časov.

Drugič, spomini na strah ne vplivajo nujno na naš spomin. Čeprav lahko povzroči spremembe v naši pozornosti in razpoloženju, ni dokazov, da povzroča izgubo spomina. Mnogi ljudje lahko še vedno pokažejo zelo močne spomine, potem ko so doživeli nekaj groznih stvari.

Nenazadnje ne smemo dovoliti, da strašni spomini postanejo tema našega življenja. Sprejeti moramo pozitivne ukrepe, da obdelamo te spomine in se premaknemo v bolj pozitivno smer. To vključuje zdravljenje, družbeno aktivnost, vadbo telesa in možganov ter ohranjanje pozitivnega razmišljanja in duševnega zdravja.

Torej, čeprav nam strašni spomini lahko povzročijo veliko stresa in nelagodja, moramo verjeti v svoje sposobnosti in trud. Lahko se soočimo s temi strašnimi spomini, okrepimo svoj spomin, rastemo in postanemo boljši, samozavestnejši ljudje. Vidi se, da moramo izboljšati spomin. Cistanche deserticola lahko občutno izboljša spomin, saj je Cistanche deserticola tradicionalno kitajsko zdravilno sredstvo s številnimi edinstvenimi učinki, med katerimi je tudi izboljšanje spomina. Učinkovitost mletega mesa izhaja iz različnih učinkovin, ki jih vsebuje, vključno s kislino, polisaharidi, flavonoidi itd. Te sestavine lahko spodbujajo zdravje možganov na različne načine.

Kliknite Spoznaj kratkoročni spomin, kako izboljšati

Priklic nedavnega spomina na strah naj bi odražal ponovno aktivacijo nevronov v več možganskih regijah, aktiviranih med nastajanjem spomina, kar kaže, da anatomsko porazdeljene in medsebojno povezane nevronske skupine sestavljajo spominske engrame strahu.

Obseg, v katerem anatomsko specifični aktivacijski reaktivacijski engrami vztrajajo med dolgotrajnim priklicem spomina strahu, pa ostaja večinoma neraziskan. Domnevali smo, da se glavni nevroni v sprednji bazolateralni amigdali (BLA), ki kodirajo negativno valenco, akutno reaktivirajo med daljinskim priklicem spomina na strah, da spodbudijo vedenje strahu.

Metode:

Z uporabo odraslih potomcev miši TRAP2 in Ai14 je bila obstojna ekspresija tdTomato uporabljena za "PAST" nevronov aBLA, ki so bili podvrženi Fos-aktivaciji med kontekstualnim pogojevanjem strahu (električni šoki) ali pogojevanjem samo s kontekstom (brez šokov) (n=5/skupina) . Tri tedne kasneje so miši ponovno izpostavili istim kontekstnim namigom za daljinski priklic spomina in nato žrtvovali za fosimunohistokemijo.

Rezultati:

TRAPed (tdTomato +), Fos + in reaktivirani (dvojno označeni) nevronski sklopi so bili večji v strahu kot kontekstno pogojene miši, pri čemer so srednja podregija in srednji/kaudalni dorzomedialni kvadranti aBLA prikazovali največjo gostoto vseh treh populacij ansamblov.

Medtem ko so bili ansambli dTomato + pretežno glutamatergični v kontekstu in skupinah strahu, zamrznitveno vedenje med priklicem spomina na daljavo ni bilo povezano z velikostmi ansamblov v nobeni skupini.

Diskusija:

Sklepamo, da čeprav se spominski gram strahu, ki vključuje aBLA, oblikuje in vztraja v oddaljeni časovni točki, plastičnost, ki vpliva na elektrofiziološke odzive engramskih nevronov, in ne velikost njihove populacije, kodira spomin na strah in spodbuja vedenjske manifestacije dolgoročnega priklica spomina na strah.

Uvod

Dražljaji, ki vzbujajo strah, pogosto tvorijo močne in trajne asociativne spomine, ki povezujejo okoljske namige z nevarnimi življenjskimi dogodki.

Poznejša srečanja s podobno zaznanimi grožnjami povzročijo močnejše zaščitno vedenje, ki odraža priklic strahu. Napake pri obdelavi asociacije strahu lahko povzročijo negativne psihiatrične rezultate, vključno z anksioznostjo in posttravmatsko stresno motnjo (PTSD) (Tovote et al., 2015).

Razumevanje celotne kompleksnosti mehanizmov, na katerih temelji spomin na strah, je bistvenega pomena za prepoznavanje nenormalnosti funkcionalnega vezja, ki spodbujajo psihiatrične bolezni, povezane s strahom, in predlagajo nove terapevtske cilje za ponovno vzpostavitev normalne obdelave strahu.

V zadnjih nekaj desetletjih so se raziskave spomina na strah v veliki meri osredotočale na oblikovanje, shranjevanje in priklic kratkoročnega spomina (Kimand Jung, 2006; Kim in Cho, 2020; Lee et al., 2021).

Študije so pokazale, da so široko porazdeljeni medsebojno povezani nevronski ansambli CNS odgovorni za nastanek in shranjevanje spomina na strah (Ramirez et al., 2013; Liu et al., 2014; Roy et al., 2022). Aktivacija teh sklopov zaradi zaznanih groženj ima za posledico potenciran sinaptični prenos, ki predstavlja obstojen fizični odtis, znan kot spominski engram (Yuan et al., 2011; Miyawaki in Mizuseki, 2022).

Priklic kratkoročnega spomina naj bi odražal ponovno aktivacijo istih nevronskih sklopov, ki so bili prvotno aktivirani med nastajanjem spomina, z dokazi, ki kažejo, da lahko celo delna aktivacija posameznega nevronskega sklopa povzroči vedenje, povezano s strahom, kar kaže na priklic spomina (Roy et al., 2022). ). Medtem ko lahko atomsko stabilni engrami potenciranega vezja pojasnijo kratkoročni spomin na strah, obseg, v katerem sodelujejo pri dolgoročnem spominu na strah, ostaja nejasen.

Čeprav se domneva, da je konsolidacija spomina na dolgotrajni strah odvisna od progresivne ali občasne krepitve kratkoročnega spomina, več nedavnih študij kaže, da so sklopi nevronov spomina na kratkoročni strah podvrženi časovno odvisni reorganizaciji, kar ima za posledico migracijo shranjenega spomina v drug nevronski sklop bodisi znotraj iste možganske regije (DeNardo et al., 2019) ali različnih možganskih regij skupaj (Frankland in Bontempi, 2005; Do Monte et al., 2016).

Basolateralna amigdala (BLA) je možganska regija, ki je sestavni del spomina na strah in je bila vpletena v nedavni in oddaljeni priklic spomina na strah (Maren et al., 1996; Gale et al., 2004; Kitamura et al., 2017; Liu et al. ., 2022).

Predvsem so poročila opisala poseben kratkoročni engram strahu in spomina v BLA, ki je (1) aktiviran med nastajanjem spomina, (2) ponovno aktiviran med priklicem spomina in (3) sposoben spodbujati strahu podobna vedenja v kontekstih brez strahu ( Royet sod., 2022; Zaki in sod., 2022). Vendar ostaja nedorečeno, v kolikšni meri se nevronski ansambel aBLA, aktiviran med tvorbo spomina, ponovno aktivira med daljinskim priklicem spomina.

V tej študiji smo testirali hipotezo, da je reaktivacija spominskega sklopa BLAfear opažena v oddaljeni časovni točki 3 tedne po kondicioniranju strahu. Posebnega pomena so hišna vezja BLA, ki prispevajo tako k averzivnemu vedenju kot k vedenju, ki išče nagrado (Hu, 2016), z nevroni z negativno valenco, ki se odzivajo na dražljaje strahu in so lokalizirani specifično na sprednji BLA (aBLA) (Goosensand Maren, 2001; Kim et al., 2016, 2017; Zhang et al., 2020).

Z osredotočanjem na aBLA smo uporabili drugo generacijo ciljne rekombinacije v aktiviranih populacijah (TRAP2) transgenih miših (DeNardo et al., 2019), pri katerih je aktivnost Cre-rekombinaze povezana s c-fos neposrednimi zgodnjimi elementi ojačevalca genskega promotorja s pomočjo izboljšanega Cre kompleks estrogenskih receptorjev (ER). Nevroni, ki izražajo ta kompleks, so lahko podvrženi vztrajni rekombinaciji Cre, tj. lahko se jih "ulovi" z dajanjem ER agonista tamoksifena ali njegovega kratkodelujočega analoga 4-hidroksitamoksifena (4-OHT), kar omogoča trajno izražanje Cre -odvisne efektorske ali reporterske molekule.

Tukaj smo križali miši TRAP2 in Cre-odvisno reportersko linijo tdTomato Ai14 (Madisen et al., 2010) in kvantificirali obseg, do katerega se nevroni aBLA, ki so bili TRAPirani (tdTomatopozitivni) med kontekstualnim kondicioniranjem strahu, ponovno aktivirajo (izrazijo imunoreaktivni protein Fos) med priklicem spomina na daljavo 3 tedne kasneje.

Tako kot pri kratkoročnem spominu na strah tudi naše ugotovitve podpirajo prisotnost nevronskih ansamblov dolgoročnega glutamatergičnega spomina na strah v aBLA.

Predvsem pa velikost nevronskih ansamblov aBLA, ne glede na to, ali so bili aktivirani med kondicioniranjem ali priklicem spomina na daljavo ali oboje, ni bila povezana s strahovim vedenjem, kar kaže, da sta narava plastičnosti, povezane z učenjem strahu, in njen morebiten vpliv na elektrofiziološke odzive ansambelskih nevronov, povezanih s priklicem spomina na daljavo , ne pa velikost skupne populacije, poganja predvsem oddaljeno vedenje strahu in spomina.

Materiali in metode

Etična odobritev

Eksperimentalne postopke je odobril Institucionalni odbor za nego in uporabo živali Univerze v Teksasu Health SanAntonio in so bili v skladu z Vodnikom nacionalnega raziskovalnega sveta za nego in uporabo laboratorijskih živali.

Živali

Vzrejni pari homozigotnih miši Fos2A−iCreER/2A−iCreER knockin (TRAP2, #030323) in R26Ai14/+ (Ai14, #007914) (Jackson Laboratories) so bili križani, da so dobili moške hemizigotne TRAP2:Ai14 potomce (slika 1A). Po odstavitvi so miši združili v skupine in jih namestili v plastične kletke (29 × 18 × 13 cm), ki so vsebovale podlago za glodalce (Sani-chips; Harlan Teklad, Madison, WI, ZDA). Temperatura vivarija je bila nadzorovana (24 °C) s 14 :10 hsvetlo-temno cikel (sveti ob 06.00). Hrana in voda sta bili na voljo ad libitum. Poskusi so se začeli, ko so miši dopolnile 3 mesece.

Vedenjska navajenost

Tako kot v predhodno objavljenih študijah (DeNardo et al., 2019) so bile miši pet zaporednih dni podvržene treningu navajanja neposredno pred kontekstualnim pogojevanjem strahu, da bi zmanjšali indukcijo cfos kot odziv na eksperimentalne pogoje, ki niso bili premalo raziskani (npr. rokovanje, raziskovanje novega konteksta itd.) ( Slika 1B).

Vsaka dnevna seja navajanja je trajala 3 minute in je bila sestavljena iz izpostavljenosti komori za kondicioniranje (Habitest Modular System, Coulbourn Instruments). Senzorični znaki komore so bili sestavljeni iz (1) 70 % etanola (vohalni znak), (2) kovinskega mrežnega dna (haptični znak), (3) vzorčastega ozadja (vidni znak) in (4) vidne svetlobe (vizualni znak).

Poleg tega so vse miši eno minuto držali v rokah, preden so jih dali v komoro za kondicioniranje, in jih nežno "drgnili" 10 sekund po izstopu iz komore. Seje navajanja so bile zasnovane tako, da posnemajo ravnanje, ki bi ga miši doživele na dan kondicioniranja, razen da niso bile opravljene intraperitonealne (IP) injekcije.

Kontekstualno pogojevanje strahu

Miši so bile nato naključno razporejene v skupine, pogojene s strahom (šok) in pogojene s kontekstom (brez šoka/samo kontekst). Kondicioniranje se je začelo na dan 0 in je obsegalo miši, ki so jih dali v komoro za kondicioniranje in jim omogočili raziskovanje 2 min. V naslednjih 4 minutah so miši, pogojene s strahom, prejele serijo petmetrskih sunkov v trajanju 1 s in 0.75 mA intenzivnosti.

Šoki so bili dostavljeni v intervalih, ki so bili za miši nepredvidljivi, a med mišmi enaki. Kontekstno pogojene miši so bile podvržene identičnemu protokolu, razen udarcev stopal (slika 1C). Po zaključku naloge je vsaka miška prejela injekcijo 4-hidroksitamoksifena (4-OHT, 100 mg/kg, IP), raztopljenega v koktajlu sončničnega in ricinusovega olja v razmerju 4:1, pripravljenega, kot je opisano prej (DeNardo et al., 2019).

Miši so bile nato vrnjene v njihove domače kletke, kjer so bile nemotene v sobi, ki meji na vedenjski prostor, vsaj 72 ur, preden so se nadaljevale z običajnim bivanjem.

Tri tedne po kondicioniranju strahu (21. dan) so bile miši podvržene testiranju priklica spomina na daljavo (slika 1D), ki je sestavljeno iz ponovne izpostavljenosti preskusni komori s senzoričnimi znaki, enakimi tistim, ki so bili prisotni med kondicioniranjem. Miši smo pustili raziskovati komoro 5 minut, med katerimi je bilo ocenjeno vedenje strahu (posturalno zamrzovanje) z uporabo programske opreme za sledenje videu FreezeFrame 4 (ActiMetrics, Wilmette IL, ZDA).

Fiksacija možganov in histologija

Devetdeset minut po testiranju priklica spomina so miši globoko anestezirali z izofluranom (5 % v kisiku) in nato opravili transkardialno perfuzijo s 3 0 ml heparinizirane (100 U/mL) izotonične fiziološke raztopine, ki ji je sledilo 100 ml 4 % paraformaldehida (PFA). ) v 0,1 M fosfatnem pufru.

Možgani so bili odstranjeni, naknadno fiksirani v 4 % PFA 6 ur pri sobni temperaturi (~22 °C) in kriozaščiteni v 30 % saharozi-0.01 M fiziološke raztopine s fosfatnim pufrom (PBS) vsaj 2 dni.

Možgane so nato narezali na 30 µm debele koronalne odseke na zamrzovalnem mikrotomu (Leica Microsystems, Wetzlar, Nemčija) in odseke, ki so vsebovali aBLA (Paxinos in Franklin, 2019), shranili v krioprotektorju iz polivinilpirolidona (PVP) pri –20 °C.

Imunohistokemija

Imunsko barvanje je bilo izvedeno, kot je opisano prej (Mitchell et al., 2018; Maruyama et al., 2019).

Na kratko, sekcije so bile sprane v PBS, da se odstrani krioprotektor PVP, in inkubirane 30 min v PBS, ki vsebuje natrijev borohidrid (0,5 %), da se odstranijo avtofluorescenčni aldehidi, ki nastanejo med fiksacijo. Po dodatnih izpiranjih s PBS smo rezine inkubirali v blokirnem pufru (3 % kozji serum, 0,05 % Triton-X-100 v PBS) 2 uri pri ~22 °C, čemur je sledila inkubacija pri 4 °C v blokirnem pufru, ki je vseboval apoliklonski kunčji c. - primarno protitelo Fos (Ab) 72 ur (1:1.500, sinaptični sistemi #226 003) ali primarno monoklonsko mišje protitelo CaMKII 24 ur (1:500, Enzo Life Sciences, #ADI-KAM-CA002).

Po nadaljnjem izpiranju smo odseke Fos in CaMKII ločeno inkubirali 2 uri pri ~22 °C v biotiniliranih kozjih anti-kunčjih IgG sekundarnih Ab (1:250 EMD Millipore #AP132B), čemur je sledilo serijsko izpiranje v 0. 05 M tris-pufrirana fiziološka raztopina (TBS) in 0,1 M natrijev acetat, nato izpostavljena streptavidin-Alexa Fluor 488 (1:250, Invitrogen #S11223) za 1 uro v raztopini za blokiranje na osnovi TBS.

Nazadnje so bili odseki sprani v pufru Tris in nameščeni na stekelca s Fluoromount-G (Invitrogen, #00-4958-02).

Slikanje in analiza

A{{0}}bitna fotopomnoževalna cev, povezana z laserskim skenirnim konfokalnim mikroskopom Zeiss LSM710, opremljenim z ustreznimi laserskimi črtami, je bila uporabljena za zajem slik aBLA z uporabo 20× objektiva (NA 0,8) in luknjice v glavi skeniranja velikosti 47,5 µm. Za vsako sliko je bila uporabljena programska oprema ImageJ (NIH, Bethesda, MD) za ustvarjanje ločenih zemljevidov slikovnih pik fluorescence tdTomato (tj. TRAPed, rdeča) in Alexa-488(Fos, zelena).

Intenzivnost praga slikovnih pik in zaznavanje prekrivanja valovnih dolžin za dvojno označevanje sta bila določena s primerjavo odsekov tkiva, obdelanih z in brez Fo-jevega primarnega Ab, kot je opisano prej (Mitchell et al., 2018; Maruyama et al., 2019). Podatki o štetju celic in solokalizaciji so bili pridobljeni z uporabo te polavtonomni vtičnik ImageJ EzColocalization (Stauffer et al., 2018).

Slike aBLA so bile razdeljene na tri rostro-kavdalne podregije skoraj enake velikosti, pri čemer je vsaka podregija definirana s specifičnim obsegom rostralno-kavdalnih stereotaksičnih koordinat glede na bregmo: rostralno, −0.8 do −1,1 mm; sredina, od -1,2 do -1,5 mm; in repno, od −1,6 do −1,9 mm (Paxinos in Franklin, 2019). Upravljalnik interesnih regij (ROI) v ImageJ je bil nato uporabljen za razdelitev aBLA vzdolž njegovega dorzalno-ventralnega in medialno-lateralnega kvadranta glede na njen obod. Ta predloga je bila nato uporabljena za vse slike v vsaki določeni rostralno-kavdalni podregiji.

Razmejitev perimetra aBLA je bila uporabljena z vtičnikom ImageJ EzColocalization za ustvarjanje 2-D prostorskega grafa vseh nevronskih števil na vsaki sliki. Prostorske ploskve znotraj rostralne, srednje in repne podregije so bile nato ločeno prekrite. To je povzročilo 10 ploskev strahu in 10 kontekstnih ploskev za rostralno podregijo, 10 ploskev strahu in 13 kontekstnih ploskev za srednjo podregijo ter 12 ploskev strahu in 13 kontekstnih ploskev za kavdalno podregijo.

Za popravek večjega števila slikovnih risb podregije v kontekstualni skupini so korekcijski faktorji 1.0(10/10), 0,77 (10/13) in 0,92 (12/13) so bili uporabljeni za rostralno, srednjo in repno podregijo ploskev kontekstne skupine. Da bi se izognili pristranskosti topografske porazdelitve štetja v kontekstualnih podatkih, je bil uporabljen generator naključnih števil v MS Excelu za določitev, katera specifična štetja je treba izključiti iz vsake podregije aBLA.

Nato smo nadalje razdelili podregije aBLA v kvadrante, označene z 1–4 (glej sliko 2D). Da bi to naredili, je bila koordinata presečišča (0,0) določena v MS-Excelu kot točka v ravnini 2-D, kjer je bila površina vsakega kvadranta približno enaka eni četrtini skupne površine vsake rostralno-kaudalne podregije. Kvadrantne osi in koordinate xy vsakega štetja so bile določene in zasukane za 30◦ v smeri urinega kazalca, s čimer so bile poravnane z anatomsko osjo aBLA.

Da bi upoštevali majhne razlike v velikosti podregij in njihovih kvadrantov, so bili podatki o štetju normalizirani na površino (število/mm2), tako da poročane vrednosti predstavljajo gostoto štetja na podregijo ali kvadrant.

Za oceno ekscitatornega fenotipa nevronov, ki jih zajame naš sistem TRAP2, so lokalizacijo ekspresije kondicioniranja TRAPed tdTomato s kalcijem-kalmodulinsko odvisno protein kinazo II (CaMKII), uveljavljenim markerjem glutamatergičnih nevronov (McDonald et al., 2002), kvantificirali iz slike vsaj treh odsekov aBLA na miško z uporabo vtičnika števca celic ImageJ.

Statistika

Statistično testiranje je bilo izvedeno s programsko opremo Prism 9.5.1 (GraphPad, San Diego, CA, ZDA) in je vključevalo testiranje normalne porazdelitve vseh naborov podatkov z uporabo Shapiro-Wilkovega testa. Skupinske primerjave za neprekinjene podatke so bile narejene z dvostranskimi neparnimi študenti t-teste ali z dvo- ali trismerno ANOVA, ki ji sledi Sidakov in Tukeyjev večkratni primerjalni test, za primerjave po parih po pomembnih interakcijah ANOVA.

Korelacijska analiza znotraj skupine je bila izvedena za določitev Pearsonovega koeficienta r ​​in ustrezne P-vrednosti. Korelacije so bile primerjane med skupinami z uporabo Fisherjeve transformacije Z (dodatna tabela 1). Skupinski podatki so izraženi kot povprečje ± SEM. Statistična značilnost je bila nastavljena na P < 0.05.

Rezultati

Kondicioniranje strahu inducira daljinski engram strahu in spomina

Da bi ugotovili, v kolikšni meri se nevroni aBLA, aktivirani med tvorbo spomina na strah, ponovno aktivirajo med priklicem spomina na daljavo, so miši podvržene kondicioniranju s strahom (n=5) ali kontekstom (n=5), čemur je sledila injekcija 4-OHT (Slike 1A–C).

Ob preučevanju oblikovanja spomina na strah (tj. učenja strahu) so opazili pomembno interakcijo zdravljenja (šok proti brez šoka) in časovnega intervala (interval 30 s po vsakem šoku) na obnašanje zmrzovanja [dvosmerna ANOVA, F(5, 40)=6.733, P=0.0001]. Prestrašene miši so pokazale podaljšan čas zmrzovanja glede na izhodiščno vrednost po šoku 3 (275 ± 68 % BL, P=0.0203), 4 (486 ± 76 % BL, P < 0,0001) in 5 (402 ± 26 % BL, P <0,0001) in glede na kontekstno pogojene miši po šoku 4 (251 ± 38 % konteksta, p <0,0001) in 5 (375 ± 25 % konteksta, p <0,0001).

Kot je bilo pričakovano, je ponovna izpostavljenost kondicionirani komori za daljinski priklic spomina 21. dan po kondicioniranju pokazala, da so miši, pogojene s strahom, pokazale bistveno več časa, porabljenega za zamrzovanje v primerjavi s kontekstnimi kontrolami [346 ± 18 %, neparni t-test, t(8) {{7} }.16, P < 0.0001] (slika 1D).
Podatki na sliki 1 skupaj kažejo, da je naš protokol za kondicioniranje strahu povzročil močno tvorbo spomina na strah in daljinski priklic spomina na strah.

Učenje strahu povzroči močan aBLA, specifičen za podregijo, za skupino

Analiza števila TRAPed (tdTomato +) je pokazala bistveno večjo fos-aktivirano populacijo aBLA pri miših, pogojenih s strahom (110 ± 6,2), kot pri miših, pogojenih s kontekstom (77 ± 3,1) [neparni t-test, t(8)=4 .782, P=0.0014] (tabela 1). Kot je bilo pričakovano, je bilo ~70 % kontekstualno in ~ 80 % strahom ujetih nevronov (n=6 aBLA odsekov/skupina) CaMKII + (dodatni sliki 1A, B), kar kaže, da so bili predvsem glutamatergični projekcijski nevroni.

Podobno kot v prejšnjih poročilih (Kim in sod., 2016) smo theaBLA razdelili na tri rostrokavdalne podregije: rostralno, srednjo in repno (slike 2A–C) in primerjali gostote štetja TRAPed (število/mm2) med podregijami znotraj in med zdravljenimi skupinami (slika 2D). Dvosmerna ANOVA je pokazala pomembno interakcijo med podregijo in zdravljenjem [F(2,24)=7.7099,P=0.0038].

Analize znotraj skupine so pokazale, da je bila gostota štetja TRAPed večja v srednji podregiji aBLA v skupinah strahu (239 ± 9) in kontekstu (144 ± 12) glede na rostralno (strah: 86 ± 6,P < { {8}}.0001; kontekst: 81 ± 9, P=0.0035) in kavdalni (strah: 123 ± 15, P < 0,0001; kontekst: 90 ± 12, P {{20) }}.0132) podregije.

Analiza med skupinami je pokazala, da je bila gostota štetja TRAPed znatno večja v srednji podregiji miši, pogojenih s strahom (P < 0.0001).

Za nadaljnjo razmejitev lokacije TRAPed nevronov smo razdelili rostralno, srednjo in repno podregijo aBLA v štiri kvadrante vsako (slika 2E). V srednji podregiji so opazili učinek glavnega zdravljenja na gostoto štetja [trismerna ANOVA, F(1,32)=17.44, P=0.0002] z višja gostota TRAPedcount v skupini strahu kot kontekstna skupina v kvadrantih 3 (218 ± 29 proti 107 ± 17, P=0.0031) in 4 (240 ± 16 proti 101 ± 12, P < 0,0001).

Nadalje smo ovrednotili gostoto štetja TRAPed znotraj skupine in znotraj kvadranta v podregijah aBLA (slika 2E in dodatna tabela 2). Predvsem v primerjavi z rostralno podregijo (59 ± 8) je imel kvadrant 2 skupine s strahom višjo gostoto TRAPed tako v srednjem (245 ± 21, P < 0.0001) kot v repnem delu (172 ± 23, P=0.0040) podregija.

Nato smo ovrednotili razmerje med vedenjem pri zmrzovanju in velikostjo ansambla TRAPed nevronov v celotnem aBLA, v njegovi srednji podregiji in v kvadrantih srednje in kaudalne podregije, kjer se je gostota števila ansamblov razlikovala med skupinami, pogojenimi s kontekstom in strahom. Nobenih pomembnih korelacij ni bilo opaziti niti v skupini s strahom niti v kontekstu (slika 2F), kar kaže na to, da vedenje v zvezi s strahom ne odraža velikosti skupine učenja strahu v podregijah aBLA.

Skupaj ugotovitve na sliki 2 kažejo, da je pogojevanje s strahom povzročilo večji ansambel fos v aBLA kot pogojevanje s kontekstom. Ansambelski nevroni so bili najgosteje lokalizirani v srednji podregiji aBLA, vendar vedenje zaradi strahu ni bilo v korelaciji z velikostjo ansambelske populacije.

For more information:1950477648nn@gmail.com