Antihiperglikemični in hipolipidemični učinki Cistanche Tubulosa

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-pošta:audrey.hu@wecistanche.com

Antihiperglikemični in hipolipidemični učinki Cistanche tubulosain tipa 2 diabetičnih miši db/db

Wen-Ting Xiong, et al

Povzetek

Etnofarmakološki pomen:Posušeno sočno stebloCistanchetubuloza (Schenk) R. Wight je ena sestavina receptov tradicionalne kitajske medicine za sladkorno bolezen. Vendar do zdaj ni bilo nobenih sodobnih znanstvenih poročil, ki bi potrdila to tradicionalno trditev za vrsto Cistanche. Tako smo raziskali učinkeCistanchetubulozao homeostazi glukoze in serumskih lipidih pri samcih miši BKS.Cg-Dock7m þ/þ Leprdb/J (db/db), model sladkorne bolezni tipa 2.

Materiali in metode:Vsebnost verbaskozida in ehinakozidaCistanchetubulozaprahu smo ovrednotili s HPLC. Skupna vsebnost fenolov, vsebnost polisaharidov in antioksidativna aktivnostCistanchetubulozaprašek so tudi ocenili. Nato različni odmerkiCistanche tubuloza(kar ustreza 120,9, 72,6 ali 24,2 mg verbaskozida/kg) so dajali peroralno enkrat na dan 45 dni samcem miši db/db. Kot normalne kontrole so bile uporabljene db/þ miši, ki se ujemajo s starostjo. Med poskusom so merili telesno težo, glukozo v krvi na tešče, glukozo v krvi po obroku in teste tolerance na inzulin. V času žrtvovanja je bila zbrana kri za merjenje ravni inzulina, ocene homeostatskega modela inzulinske rezistence (HOMA-IR) in ravni celotnega holesterola, trigliceridov, HDL-c, LDL-c in VLDL-c; jetra in mišice so bili pobrani za merjenje ravni glikogena.

Rezultati: Cistanchetubulozaznatno zmanjšal povišano raven glukoze v krvi na tešče in po obroku, izboljšal insulinsko rezistenco in dislipidemijo ter zaviral izgubo telesne teže pri miših indb/db. vendarCistanchetubulozani bistveno vplivalo na serumsko raven insulina ali jetrno in mišično raven glikogena.

Zaključek:Ta študija zagotavlja znanstvene dokaze za tradicionalno uporaboCistanchetubulozaza zdravljenje sladkorne bolezni, kar kaže na toCistanchetubulozaima potencial za razvoj v funkcionalno živilsko sestavino ali zdravilo za preprečevanje hiperglikemije in zdravljenje hiperlipidemije.

Ključne besede:Cistanchetubuloza, sladkorna bolezen tipa 2,Antihiperglikemični učinek, hipolipidemični učinek

1. Uvod

Diabetes mellitus (DM) je progresivna in kompleksna presnovna motnja, za katero so značilne predvsem nenormalno visoke ravni glukoze v krvi (hiperglikemija) (Tiwari in Rao, 2002; Stumvollet sod., 2005; Nathan in sod., 2009). Približno 90 odstotkov od 347 milijonov bolnikov s sladkorno boleznijo po vsem svetu ima sladkorno bolezen tipa 2 (od insulina neodvisno) (Danaei et al., 2011). Tri glavne presnovne okvare dosledno prispevajo k hiperglikemiji pri bolnikih s sladkorno boleznijo tipa 2: pomanjkljivo izločanje insulina, visoko izločanje glukoze v jetrih in insulinska rezistenca (Bavenholm et al., 2001). DM tipa 2 lahko skrajša pričakovano življenjsko dobo in predstavlja veliko zdravstveno in ekonomsko breme (Gakidou et al., 2011).

Patogeneza sladkorne bolezni tipa 2 je večfaktorska in je bila povezana z genetskimi dejavniki in dejavniki življenjskega sloga (Stumvoll et al., 2005). Intervencije življenjskega sloga v kombinaciji z oralnimproti-hiperglikemičnozdravila so tipična metoda za obvladovanje sladkorne bolezni tipa 2. Peroralna uporaba zdravilproti-hiperglikemičnoučinek z izboljšanjem treh glavnih presnovnih napak, ki povzročajo hiperglikemijo, ali z zmanjšanjem postprandialnega povečanja ravni glikemije z oviranjem prebave in absorpcije ogljikovih hidratov v črevesju.

Čeprav je več razredov učinkovitih zdravil postalo priznana izbira za medicinsko terapijo pri večini bolnikov s sladkorno boleznijo tipa 2, ima več teh sintetičnih zdravil resne stranske učinke. Na primer, rosiglitazon in pioglitazon povečata incidenco miokardnega infarkta, kongestivnega srčnega popuščanja in perifernega edema ter sta povezana s povečanim tveganjem za rakotvornost in celo smrt po dolgotrajni uporabi (Nissen in Wolski, 2007; Zhang et al., 2007; Home et al., 2009). Zato obstaja kritična potreba po odkritju alternativnih sredstev, ki bi delovala antihiperglikemično, a imela manj stranskih učinkov. V primerjavi s sintetičnimi kemikalijami, naravno pridobljenimiantihiperglikemičnosredstva, kot so zelišča in tradicionalna zdravila, imajo dolgo zgodovino uporabe in lahko na splošno predstavljajo varne potencialne vire novihantihiperglikemičnozdravila (Yeh et al., 2003).

Cistanche, rod parazitskih rastlin, ki spadajo v družino Orobanchaceae, se običajno uporablja kot tradicionalno zdravilo za zdravljenje ledvičnih motenj in neplodnosti, v skladu s Kitajsko farmakopejo (Chinese Pharmacopoeia Commission, 2010). Kot je zapisano v knjigah o kitajski medicini, kot sta BenCao TuJing in Nature ofDrug, se je rod Cistanche več sto let kuhal z ovčetino, krompirjem ali rižem, da bi proizvedli krepčilno hrano za zdravljenje motenj, povzročenih s preobremenitvijo, kar nakazuje, da je rod Cistanche varen za jemati peroralno.

V tradicionalni kitajski medicini se DM imenuje simptom "Xiao Ke" in se že stoletja zdravi s kitajskimi zelišči. Posušeno sočno steblo vrste Cistanche se tradicionalno uporablja kot sestavina devetih receptov proti sladkorni bolezni ("Xiao Ke Fang") v knjigi tradicionalne kitajske medicine Sengji Zonglu. Vendar do zdaj ni bilo nobenih sodobnih znanstvenih poročil, ki bi potrdila to tradicionalno trditev o vrsti Cistanche.

Cistanchetubuloza(Schenk) R. Wight, vrsta Cistanche, ki parazitira v koreninah rastline Tamarix – ki se večinoma goji okoli puščave Taklamakan – je bila nedavno uporabljena za proizvodnjo instant čaja za uporabo kot funkcionalna hrana (DaZhongWeiShengBao, 2010; Baidu Pedia, 2011) .

Cistanchetubulozavsebuje precejšnje količine feniletanoidnih glikozidov (PhG), iridoidov, lignanov, alditolov, oligosaharidov, polisaharidov in hlapnih spojin, kot sta palmitinska kislina in linolna kislina (Song et al., 2000; Jiang in Tu, 2009). Za glavne aktivne sestavine vrste Cistanche se domneva, da so PhG (Xie et al., 2006; Jiang in Tu, 2009).Cistanchetubulozain njegove komponente, kot so PhG, polisaharidi in polifenoli, so poročali, da kažejo dobre antioksidativne lastnosti (Denget sod., 2004; Pellati in sod., 2004; Frum in sod., 2007; Sui in sod., 2011; Wang et al., 2011), učinki proti hipertenziji (Ahmad et al., 1995) in hipoholesterol (Shimoda et al., 2009). Številna poročila so pokazala, da imajo PhG, polisaharidi in polifenoliantihiperglikemičnoučinkujejo ali blagodejno vplivajo na sladkorno bolezen tipa 2 z lovljenjem prostih radikalov in modulacijo oksidativnega stresa, ki ga povzroča glukoza (Pinto et al., 2010; Saltiel, 2001; Gulati et al., 2012). Te sestavine in bioaktivnostCistanchetubulozakažejo, da bi ga lahko potencialno uporabili za zdravljenje sladkorne bolezni tipa 2. Zaradi odsotnosti poročil, ki bi opisovala učinkeCistanchetubulozapri zdravljenju sladkorne bolezni se nam je zdelo vredno raziskati antidiabetično delovanjeCistanchetubuloza. Tako smo preučili učinkeCistanchetubulozao hiperglikemiji in dislipidemiji pri miših BKSdb/db (BKS.Cg-Dock7m þ/þ Leprdb/J, številka zaloge Jacksonovega laboratorija 00642), modelu DM tipa 2, ki kaže številne značilnosti človeškega DM, vključno s progresivno hiperglikemijo, inzulinsko rezistenco in debelostjo (Hummel et al., 1966; Nishina et al., 1994; Uchida et al., 2005; Srinivasan in Ramarao, 2007).

2. Materiali in metode

2.1. Kemikalije

Verbaskozid (čistost 493 odstotkov) in ehinakozid (čistost 493 odstotkov) sta bila kupljena pri Nacionalnem inštitutu za nadzor hrane in zdravil (Peking, Kitajska). Metanol stopnje HPLC je bil kupljen pri Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, ZDA). Akarboza je bila kupljena pri Bayerju (West Haven, CT, ZDA). Prečiščena voda je bila proizvedena z uporabo Millipore Milli-Q Integral 3 System in Q-POD Milli-Q System (Bedford, MA, ZDA).

2.2. Priprava prahu Cistanche tubulosa

Posušena sočna steblaCistanchetubuloza(Šifra vzorca 109092, gojene v Hetianu, Xinjiang, Kitajska) so bile kupljene pri Xinjiang Guru Biology Co. Ltd. (Hetian, Xinjiang, Kitajska). Posušene korenine so bile zdrobljene v prah, presejane skozi 200-mrežasto sito, premešane temeljito zapakirajte v majhne pakete, da prašek izolirate pred svetlobo in vlago, ter shranite pri 4 1C.

2.3. Identifikacija Cistanche tubulosa

Posušeno sočno steblo vzorca 109092 sta iz njihovih morfoloških značilnosti identificirala prof. DeXiang Gu in prof. Xin Liu, ki sta strokovnjaka za vrste Cistanche. Vzorci so bili nadalje identificirani s sekvenciranjem DNK. Celotno genomsko DNA smo izolirali iz vzorca 109.092 z uporabo kompleta AxyPrep™ MultisourceGenomic DNA (Axygen, CA, ZDA). Področje ITS, ki vsebuje fragment 5.8S rDNA, je bilo pomnoženo z zaporedji primerjev ITS1/ITS2 5′ CGT AAC AAG GTT TCC GTA GAA 3′ in 5′ TTA TTG ATA TGCTTA AAC TCA GCG GG 3′ (BGI Genomics, Shenzhen, Kitajska), z metodo, ki so jo opisali Schneeweiss et al. (Schneeweiss et al., 2004). Pomnoženo DNK je sekvenciral BGI (BGI Genomics, Shenzhen, Kitajska) in rezultat primerjal zCistanchetubuloza5.8s zaporedje rDNA v GenBank.

2.4. HPLC analiza

Dva PhG, ehinakozid in verbaskozid, sta bila uporabljena kot standard kakovosti zaCistanchetubuloza, glede na kitajsko farmakopejo (Chinese Pharmacopoeia Commission, 2010). HPLC je najpogosteje uporabljena za kvalitativno in kvantitativno določanje PhG. Vsebnosti verbaskozida in ehinakozida torejCistanchetubulozasmo določili po naši predhodno objavljeni metodi HPLC (Zhao et al., 2011). Na kratko, 0,1 gCistanchetubulozaprašek smo dodali v 1{{10}} ml prečiščene vode in intenzivno mešali z vrtinčenjem na orbitalnem stresalniku (Vortex-Genie 2, Scientific Industries, Bohemia, New York, ZDA) 10 min pri sobni temperaturi. Trdno snov smo dvakrat ponovno ekstrahirali pod enakimi pogoji. Ekstrakte smo združili, naravnali na 50 ml in centrifugirali pri 12,000}g 5 minut. Supernatant je bil filtriran skozi politetrafluoroetilenski (PTFE) filter za brizgo z 0,45 μm porami (Pall, Ann Arbor, MI, ZDA). Nato smo 20 ul supernatanta vbrizgali v sistem HPLC (Binary HPLC Pump 1525, Detector RefractiveIndex 2414, Photodiode Array Detector 2996; Waters, Milford, MA, ZDA), ki je vključeval kolono Symmetry C18 (4,6 mm 250 mm, 5 μm; Waters) in zaščitni steber (3,9 mm 20 mm, 5 mm; Waters); sistem je bil nadzorovan s programsko opremo EmpowerPros (Waters, Milford, MA, ZDA) s hitrostjo pretoka 1 ml/min pri 30 1C. Mobilna faza je bila narejena z mešanjem topila A (0,5 odstotka (V/V) vodne raztopine ocetne kisline) in topila B (metanol), da se je oblikoval linearni gradient 25–40 odstotkov B v 0–10 minutah. Retenzijska časa za ehinakozid in verbaskozid sta bila 10,4 min in 13,6 min pri največji UV-absorpciji 330 nm.

2.5. Analiza skupne vsebnosti fenolov, vsebnosti polisaharidov in antioksidativne aktivnosti Cistanche tubulosa

2.5.1. Priprava vzorca

Cistanchetubulozaekstrakt smo pripravili s prečiščeno vodo z uporabo naše predhodno objavljene metode (Zhao et al., 2011) z manjšimi modifikacijami za določanje skupne vsebnosti fenolov, vsebnosti polisaharidov in antioksidativne aktivnosti (slika 1). Na kratko, 1 gCistanchetubulozaprašek dodamo v 15 ml prečiščene vode pri sobni temperaturi, intenzivno vrtinčimo z uporabo orbitalnega stresalnika 5 minut in supernatant pridobimo s centrifugiranjem pri 3000 g 15 minut. Padavine smo dvakrat ponovno ekstrahirali pod enakimi pogoji. Kombinirani supernatant smo naravnali na 50 ml s prečiščeno vodo in ga pred analizo spustili skozi PTFE brizgalni filter z porami 0,45 μm (Pall).

2.5.2. Analiza vsebnosti skupnih fenolov

Skupna vsebnost fenolov je bila določena z uporabo Folin-Ciocalteureagenta in galne kisline kot referenčne spojine, kot sta opisala Singleton in Rossi (Dubois et al., 1956; Singleton in Rossi, 1965) z manjšimi modifikacijami. Na kratko, 0.1 mlCistanchetubulozaekstrakt smo zmešali z {{0}}.9 mL prečiščene vode in 5 mL Folin-Ciocalteu reagenta (predhodno 10-krat razredčenega z destilirano vodo), pustili stati pri 25 1C 3,5 min, nato smo mešanici dodali 4 mL raztopine natrijevega bikarbonata (7,5 % w/v) in inkubirali pri {{10}}C 60 minut. Absorbanco smo izmerili pri 765 nm s spektrofotometrom (Perkin Elmer λ 25 UV-visible, Waltham, MA, ZDA). Celotna vsebnost fenolov je bila določena z uporabo standardne krivulje, ustvarjene z galno kislino (0–0,6 mg/mL) kot standardom. Rezultati so bili izračunani kot miligramski ekvivalenti galne kisline (GAE)/1 gCistanchetubulozasurov prah. Vsi testi so bili ponovljeni štirikrat.

2.5.3. Analiza vsebnosti polisaharidov

Vsebnost polisaharidov vCistanchetubulozaje bila izmerjena z metodo fenol-žveplova kislina (Dubois in sod., 1951; Duboiset sod., 1956). Na kratko, 1 ml ustrezno razredčenega ekstrakta Cistanchetubulosa in 0.5 ml raztopine fenola smo dali v epruvete z navojnimi pokrovi, ki smo jih zamašili in vrtinčno mešali. Nato smo v 5 sekundah neposredno na površino tekočine dodali 2,5 ml koncentrirane žveplove kisline. Epruvete smo nato zaprli, mešali z vrtinčenjem 5 s, inkubirali 2 minuti pri 100 1C in pustili, da so se pred analizo ohladile na sobno temperaturo. Absorbanca je bila izmerjena pri 490 nm s spektrofotometrom (Perkin Elmer λ25 UV-visible) proti 70-odstotnemu slepemu metanolu. Vsebnost polisaharidov je bila določena s standardno krivuljo, ustvarjeno z glukozo (0–100 mg/mL) kot standardom. Rezultati so bili izračunani kot odstotek polisaharida/Cistanchetubulozasurov prah. Vsi testi so bili trikrat ponovljeni.

2.5.4. Analiza celotne antioksidativne aktivnosti

Antioksidativno delovanjeCistanchetubulozaekstrakta, akarboze in rosiglitazona smo določili s testom 2,2′-amino-di(2-etil benzotiazolin sulfonske kisline-6)amonijeve soli (ABTS) in testom zmanjševanja železovega iona (Fe3þ) antioksidativne moči ( FRAP) z uporabo komercialnih kompletov (Beyotime, Haimen, Kitajska). Z ustreznimi oksidanti lahko ABTS oksidiramo v zeleni ABTS þ; antioksidanti lahko zavirajo ta proces. Celotno antioksidativno aktivnost antioksidantov se lahko odraža z absorbanco ABTS þ pri 734 nm. Absorbanca je bila izmerjena pri 734 nm (ABTS) z uporabo čitalnika mikroplošč (Epoch, Bio-Tek, Richmond, VT, ZDA), s Troloxom (ABTS) kot standard antioksidantov. Rezultati testa ABTS so bili izračunani kot mM Trolox Equivalent Antioxidant Capacity (TEAC)/1 g praška.

V kislih pogojih lahko antioksidanti obnovijo feritripiridiltriazin (Fe3þ-TPTZ) v modri Fe2þ-TPTZ. Celotno antioksidativno aktivnost antioksidantov lahko odraža absorbanca Fe2þ-TPTZ pri 593 nm. Absorbanca je bila izmerjena pri 593 nm (FRAP) z uporabo bralnika mikroplošč (Epoch), s FeSO4 (FRAP) kot antioksidativnim standardom. Rezultati testa FRAP so bili izračunani kot mM FeSO4 ekvivalentna antioksidativna kapaciteta (FEAC)/1 g praška. Vsi testi so bili ponovljeni štirikrat.

2.6. Učinki Cistanche tubulosa na hiperglikemijo pri miših db/db

2.6.1. Živali in skupine zdravljenja

Samce miši BKS.Cg-Dock7m þ/þ Leprdb/J (db/db) in njihove starostno ujemajoče se nediabetične heterozigotne sorodnike iz legla (db/þ) je pri starosti 5–6 tednov prijazno zagotovil National ResourceCenter za model mutantnih miši Center za raziskave živali Univerze Nanjing (Nanjing, Kitajska). Oskrbo živali in poskusne postopke je odobril Odbor za etiko laboratorijskih živali Šole znanosti o življenju Univerze Sun Yat-sen (oznaka odobritve 0046500) in so bili izvedeni v skladu s predpisi Kitajske za poskuse na živalih. Živali so bile nameščene v sobi brez specifičnih patogenov (SPF) 2272 1C pri 6075-odstotni vlažnosti v 12-urnem ciklu svetlo-temno in hranjene s prečiščeno dieto AIN-93G (Trophic Animal Feed High- tech Co., Ltd., Nantong, Kitajska) in zagotovili prečiščeno vodo ad libitum.

Sedem dni po prihodu so nediabetične db/þ miši dobile prečiščeno vodo (nosilec) kot običajna kontrolna skupina za diabetične skupine (n=7), medtem ko so bile diabetične db/db miši stehtane in naključno razdeljene v 6 skupin (n=8) za preiskavo učinkiCistanchetubulozapri diabetičnih db/db miših tipa 2 (tabela 1). Miši db/þ so peroralno dajali nosilec, mišim db/db pa so peroralno dajali vehikel, rosiglitazon (0,52 mg/kg/dan), akarbozo (19,5 mg/kg/dan) ali tri odmerkeCistanchetubuloza(ekvivalentno 120,9, 72,6 ali 24,2 mg verbaskozida/kg/dan in označeno kot CT120.9, CT72.6 ali CT24.2) za trajanje 45 dni. OdmerkiCistanchetubulozaso bili nastavljeni v skladu z odmerkom surovega praška, ki ga priporoča Farmakopeja Ljudske republike Kitajske (PPRC);Cistanchetubulozaodmerki 120,9, 72,6 in 24,2 mg verbaskozida/kg/dan, kar ustreza 5--kratnim, 3--kratnim in 1--kratnim razredčitvam odmerka surovega praška, ki ga priporoča PPRC. Vse testne vzorce za peroralno dajanje smo raztopili v prečiščeni vodi v ustreznih koncentracijah, da bi dali podobne količine testnih vzorcev mišem z enako telesno težo. Celotni dani volumni so bili 01 ml, testni vzorci pa so bili oralno dajani vsaki skupini miši vsak dan med 16:30 in 17:30 45 dni. Telesno težo in raven glukoze v krvi smo spremljali skozi celotno poskusno obdobje. Na koncu poskusa (50. dan) so bile miši 14 ur tešče in odvzeti so bili vzorci krvi iz oftalmične vene, inkubirani pri sobni temperaturi 30 minut, centrifugirani in vzorci seruma shranjeni pri 70 1C za nadaljnji test. Nato so miši evtanazirali. Jetra in skeletne mišice smo pobrali, sprali v ledeno mrzli slanici, da smo odstranili kri, na hitro zamrznili v tekočem dušiku in shranili pri 70 1C za nadaljnje testiranje.

2.6.2. Analiza ravni glukoze v krvi na tešče (FBG), interperitonealni insulinski tolerančni test (ITT) in serumske ravni insulina na tešče (FINS)

Ravni glukoze v krvi na tešče so bile izmerjene po 14-urnem postu pred začetkom poskusa na živalih (0 dni), 1. dan{{10}} in vsakih 5 dni med dnevi 20–45 poskusa z uporabo sistema za spremljanje glukoze v krvi (ACCU-CHEK Active, Roche DiagnosticsGmbH, Mannheim, Nemčija). Odstotna povečanja vrednosti FBG (odstotne vrednosti FBG povečanja: FBG-increase percent ) na dan x (dan 20–45) so bila izračunana z uporabo (BGdan x BGdan 0)/BG0 dan 100, da predstavljajo povečanja vrednosti FBG za vsak skupine v primerjavi z njihovimi začetnimi vrednostmi FBG. Postprandialne ravni glukoze v krvi so bile določene 120 minut po peroralnem dajanju glukoze (2 g/kg telesne mase) 40. dan.

ITT je bil izveden 45. dan poskusa, po postu čez noč (14 ur). Ravni glukoze v krvi repne vene so bile izmerjene pred injiciranjem insulina (0 min) in 30 min, 60 min po interperitonealnem injiciranju insulina (0,1 ie/kg telesne mase). Odzivi glukoze med ITT so bile izražene kot integrirane površine pod krivuljami za insulin (AUCinsulin), izračunane z uporabo trapezoidrule (Vishwakarma et al., 2003). Na koncu poskusa smo serumske ravni inzulina na tešče analizirali s kompletom ELISA za podganji/mišji insulin podjetja Millipore (Bedford, MA, ZDA); vzorci seruma so bili pripravljeni po navodilih kompleta. Indeks Homeostatic Model Assessment of Insulin Resistance (HOMA-IR) je bil izračunan po naslednji formuli: HOMA-IR=insulin na tešče (ng/ml) glukoza v krvi na tešče (mmol/L)/22,5 (Matthews et al., 1985).

2.6.3. Analiza ravni lipidov v serumu

Koncentracije skupnega holesterola (TC), holesterola lipoproteinov visoke gostote (HDL-c) in trigliceridov (TG) v serumu so bile določene z uporabo komercialnih encimskih kompletov (Biosino Biotechnology & Science Inc., Peking, Kitajska). Ravni holesterola lipoproteinov nizke gostote (LDL-c) so bile izračunane kot TC-TG/5 – HDL-c, medtem ko so bile ravni holesterola lipoproteinov zelo nizke gostote (VLDL-c) izračunane kot TG/5, po Friedewaldovi enačbi (Friedewald et al., 1972). Indeks aterogenosti je bil izračunan kot (TC HDL-c)/HDL-c.

2.6.4. Analiza ravni glikogena v jetrih in skeletnih mišicah

Zamrznjena jetra in skeletne mišice so bile obdelane za analizo glikogena takoj po odstranitvi iz zamrzovalnikov 70 1C. Vsebnost glikogena v jetrih in skeletnih mišicah je bila izmerjena s komercialnim kompletom za glikogen (Jiancheng, Nanjing, Kitajska) na podlagi Kepplerjeve in Deckerjeve metode (Keppler in Decker, 1974). Absorbanco vzorcev pri 505 nm smo izmerili po ohlajanju cevi na sobno temperaturo. Količina glikogena v vsakem vzorcu tkiva je bila izražena kot mg glukoze na g tkiva.

2.7. Statistična analiza

Vsi rezultati so izraženi kot povprečje7SEM in so bili analizirani z ANOVA statističnih paketov Social Science Software (SPSS 16.0, Chicago, IL, ZDA) ali GraphPad Prism 5 (La Jolla, CA, ZDA). Indeksi HOMA-IR so bili ocenjeni tudi z dvovzorčnim neodvisnim t-testom po logaritemski transformaciji. Vrednosti AUC so bile izračunane z uporabo GraphPad Prism 5. Šteje se, da vrednosti P, manjše od 0,05, kažejo na statistično pomembne razlike.

3. Rezultati

3.1. Identifikacija vzorca Cistanche

Rezultati poravnave zaporedja kažejo, da je ojačano zaporedje enako zCistanche tubulozageni za delno in popolno zaporedje 5.8S rDNA (614 nukleotidov; pristopna številka Gen-Bank AB217871). Na podlagi njegovih morfoloških značilnosti in genskega zaporedja 5.8S rDNA je vzorec 109.092 identificiran kotCistanchetubuloza.

3.2. Kvantitativna določitev vsebnosti verbaskozida in vsebnosti ehinakozida v Cistanche tubulosa

Vsebnost verbaskozida in ehinakozida vCistanchetubulozaso bile kvantificirane z uporabo ustreznih standardov. Vsebnost teverbaskozida in ehinakozidaCistanchetubulozaso bile 2,66 odstotka oziroma 11,59 odstotka. HPLC kromatogramCistanchetubulozaizvleček je prikazan na sliki 2.

3.3. Skupna vsebnost fenolov, vsebnost polisaharidov in antioksidativna aktivnost Cistanche tubulosa

Skupna vsebnost fenolov vCistanchetubulozaje bila 66,2970,44 mg GA/g. Vsebnost polisaharidov vCistanche tubules was10,1570,26 odstotka. Testa ABTS in FRAP sta pokazala, da sta bili antioksidativni aktivnosti 1,3970,06 mM TEAC/g in 1,6170,04 mM FEAC/g zaCistanchetubuloza, {{0}}.1570.01 mM TEAC/g in 0,1270,01 mM FEAC/g za akarbozo ter 0,1670,01 mMTEAC/g in 0,1370,01 mM FEAC/g za rosiglitazon.

3.4. Antihiperglikemični učinki Cistanche tubulosa pri miših db/db

Naši rezultati so to pokazaliCistanche tubulozabi lahko zaviral povišano raven glukoze v krvi na tešče in povišano raven glukoze v krvi po obroku, povečal občutljivost za inzulin in zmanjšal izgubo telesne teže (BW) diabetičnih miši db/db. Na splošno,Cistanchetubulozaje bil med poskusom učinkovitejši pri zmanjševanju hiperglikemije kot akarboza, poleg tega pa je bila Cistanche tubulosa boljša od akarboze pri izboljšanju insulinske rezistence (vrednosti p so navedene spodaj).

3.4.1. Učinki Cistanche tubulosa na telesno in jetrno težo

V kontrolni skupini s sladkorno boleznijo se je telesna teža v prvih 25 dneh nenehno povečevala. Vendar pa se je z napredovanjem sladkorne bolezni telesna teža diabetičnih kontrolnih miši do 30. dne rahlo zmanjšala (dodatna tabela 1). VCistanchetubulozaskupine, vsi trije odmerkiCistanchetubulozazmanjšal stopnjo izgube teže v primerjavi z diabetičnimi kontrolnimi mišmi (brez pomena, dodatna tabela 1). V skupini s pozitivno kontrolo je rosiglitazon povzročil znatno povečanje telesne mase od 2. dne 0 v primerjavi s kontrolno skupino diabetikov (po0.05). Nasprotno pa je akarboza upočasnila hitrost izgube teže v primerjavi s kontrolno skupino diabetikov. V normalni kontrolni skupini je telesna teža med poskusom nenehno naraščala in je bila znatno nižja kot v kontrolni skupini diabetikov (po0,001).

Na koncu poskusa sta se teža jeter in razmerje med jetri/telesno maso znatno povečala le v skupini z rosiglitazonom (po0,001) v primerjavi s kontrolno skupino s sladkorno boleznijo.

3.4.2. Vpliv Cistanche tubulosa na raven glukoze v krvi

Cistanchetubulozaprikazanoantihiperglikemičnovpliva na miši indb/db po 20-dnevnem peroralnem dajanju in lahko nadzoruje raven FBG in odstotno vrednost povečanja FBG za daljše časovno obdobje na miših db/db na način, ki je odvisen od odmerka, kar je razvidno iz znatno zmanjšanega števila na tešče in po obroku. ravni glukoze v krvi (slika 3, tabela 2). V kontrolni skupini s sladkorno boleznijo se je raven FBG med poskusom stalno povečevala in je bila 45. dan približno 6-krat višja od normalne kontrolne skupine (28,3071,027 mmol/L v primerjavi s 4,6670,350 mmol/L; po0,001). Vsi trije odmerkiCistanchetubulozaznatno zaviral težnjo FBG k povečanju db/db mice med celotnim poskusom, pri čemer je CT120.9 pokazal najmočnejši hipoglikemični učinek (20, 35. in 45. dan: po{{1{{ 16}}}}.001; 4. dan0: po0.05 proti nadzoru sladkorne bolezni). V skupinah s pozitivno kontrolo sta rosiglitazon (0.52 mg/kg) in akarboza (19,5 mg/kg) pomembno zavirala tudi težnjo povečanja FBG pri miših db/db med celotnim poskusom (2. dan{{41} } do 45: po0.001, 10. dan: po 0,05, rosiglitazonev. kontrola sladkorne bolezni; dan 35: po 0,001, dan 40: po 0,01, dan 20 in 45: po 0. 05, akarboza proti nadzoru sladkorne bolezni). Vendar je bila akarboza (19,5 mg/kg) manj učinkovita od rosiglitazona (20. dan: po 0,05; 30. dan: po 0,01; 35–45. dan: po 0,001) in CT120.9 (dan 45: po 0,001) . V normalni kontrolni skupini je raven FBG ostala konstantna med celotnim poskusom in je bila znatno nižja kot v kontrolni skupini diabetikov (po0,001).

Po 20-dnevnem dajanju,Cistanche tubulozaznatno zaviral zvišanje ravni glukoze v krvi pri db/db miših (slika 3). Odstotne vrednosti povečanja FBG v kontrolni skupini s sladkorno boleznijo in skupini z akarbozo (19,5 mg/kg telesne mase) so se med poskusom povečale. FBG-povečanje odstotnih vrednosti trehCistanchetubulozaskupine so se nekoliko povečale le 30. dan. Odstotne vrednosti povečanja FBG skupine CT120.9 so ostale konstantne med 30. in 45. dnem, medtem ko sta se CT72.6 in CT24.2 do 45. dne neznatno povečala (p40.05). poskus, trije odmerkiCistanchetubuloza(CT120.9, CT72.6 in CT24.2) je v primerjavi s kontrolno skupino s sladkorno boleznijo (PO{{) občutno zaviral povečanje vrednosti odstotkov povečanja FBG za 181,5 odstotka, 151,72 odstotka in 123,58 odstotka. 24}}.001). Od 20. do 40. dne so bile vrednosti odstotkov povečanja FBG v treh skupinah s Cistanche tubulosa nižje ali podobne kot v skupini z akarbozo (p40,05). Na 45. dan je bil odstotek povečanja FBG v skupini CT120.9 znatno nižji kot v skupini z akarbozo (po0,01).

Cistanchetubulozaprikazani od odmerka odvisni hipoglikemični učinki (tabela 2). Na koncu poskusa so bile vrednosti FBG v skupini CT120.9 bistveno nižje kot v kontrolni diabetični skupini, akarbozi in dveh drugihCistanchetubulozaskupine (CT120.9 v primerjavi z akarbozo, CT72.6 in CT24.2, po0.01; CT120.9 v primerjavi z diabetično kontrolo, po0.001; tabela 2). Do konca poskusa so ravni FBG vseh trehCistanchetubulozaskupine (CT120.9, CT72.6 in CT24.2) so se povečale za 53,41 odstotka, 83,19 odstotka oziroma 111,33 odstotka v primerjavi z njihovimi začetnimi ravnmi FBG, medtem ko so se ravni FBG v kontrolni skupini s sladkorno boleznijo in skupini z akarbozo povečale za 234,91. odstotkov in 150,76 odstotka . Od treh testiranih odmerkov Cistanche tubulosa je samo CT120.9 vodil do dosledno nižjih ravni FBG med celotnim poskusom. CT72.6 in CT24.2 sta bila manj učinkovita pri zniževanju ravni FBG kot CT120.9 (tabela 2, dodatna slika 1). Ravni FBG skupine CT120.9 so se povečale šele od 30. dne, medtem ko so se ravni FBG drugih dvehCistanchetubulozaskupine in skupina akarboze naraščala hitreje. Od 10. do 40. dne so ravni FBG trehCistanchetubulozaskupine so bile nižje ali podobne skupini s teakarbozo (19,5 mg/kg telesne mase); te razlike niso bile statistično pomembne (p40,05).

4. dan0 je CT120.9 znatno zmanjšal zvišanje postprandialne ravni glukoze v krvi (po0,05, tabela 2) 2 uri po enkratnem peroralnem odmerku glukoze (2 g/kg). Učinek CT120.9 na postprandialno raven glukoze v krvi pri miših db/db je bil primerljiv z 19,5 mg/kg akarboze (p40,05). Učinek CT72.9 in CT24.2 je bil manj učinkovit kot rosiglitazon (po0,001).

3.4.3. Vpliv Cistanche tubulosa na raven serumskega insulina na tešče in interperitonealno toleranco za insulin

Rezultati FINS so pokazali, da je po 45-dnevnem peroralnem dajanju CT120.9 neznatno zvišal serumsko raven insulina (p40,05) pri miših db/db za 40,73 odstotka, medtem ko je rosiglitazon pomembno zvišal serumsko raven insulina za 58,90. odstotkov (po0,05 v primerjavi s kontrolo sladkorne bolezni; tabela 3).

Indeks HOMA-IR je bil izračunan za kvantitativno oceno prispevkov insulinske rezistence in pomanjkljivega delovanja celic k hiperglikemiji na tešče. V primerjavi s kontrolno skupino diabetikov je CT120.9 nepomembno izboljšal sistemski indeks insulinske občutljivosti HOMA-IR za 15,30 odstotka (p40,05), medtem ko je rosiglitazon pomembno izboljšal indeks HOMA-IR za 35,30 odstotka (PO0,001 v primerjavi s nadzor sladkorne bolezni; tabela 3). ITT je bil uporabljen za oceno učinkaCistanchetubulozana občutljivost za insulin po injiciranju eksogenega insulina. Rezultati so pokazali, da je CT120.9 izboljšal odziv inzulina pri diabetičnih miših db/db. Učinek CT120.9 je bil primerljiv z rosiglitazonom in je bil boljši od akarboze. CT12{{10}}.9 in rosiglitazon sta pomembno znižala ravni glukoze v krvi pri 0 minutah (pred insulinom injekcija,po0.001 v primerjavi z nadzorom sladkorne bolezni) in 30 min (po0.01 za CT120,9,po0,001 za rosiglitazon) po injiciranju insulina (slika 4). CT120.9 in rosiglitazon sta zmanjšala AUCinsulin za 27,92 odstotka in 43,89 odstotka v primerjavi s kontrolo sladkorne bolezni. Med ITT ni bilo pomembne razlike med ravnmi glukoze v krvi v skupinah CT120.9 in rosiglitazon. Ravni glukoze v krvi skupine CT120.9 so bile znatno nižje od ravni akarboze po 0 minutah (pred injiciranjem insulina, po0,01: CT120,9 proti akarbozi), 30 minutah (po0,01: CT120,9 proti akarbozi) in 60. min (po0,05: CT120,9 v primerjavi z akarbozo) po injiciranju insulina (slika 4). CT120.9 je znižal AUC insulina za 28,79 odstotka v primerjavi z akarbozo. Akarboza, CT72.6 in CT24.2 niso imeli pomembnih učinkov na AUCinsulin ali ravni glukoze v krvi na kateri koli točki ITT. Tako rezultati FIN kot ITT normalne kontrolne skupine so bili bistveno nižji od rezultatov kontrolne skupine diabetikov (po0,05: FIN; po0,001: ITT).

3.4.4. Vpliv Cistanche tubulosa na ravni glikogena v jetrih in skeletnih mišicah

Raven glikogena v različnih tkivih je neposreden odraz občutljivosti na inzulin, saj inzulin spodbuja znotrajcelično odlaganje glikogena. Rosiglitazon je občutno znižal raven glikogena v jetrih za 59,61 odstotka (po0.001) in zvišal raven glikogena v mišicah za 33,93 odstotka (po0,05 v primerjavi z diabetično kontrolo). CT24.2 je znižal raven glikogena v jetrih za 30,41 odstotka (po0,05 v primerjavi z diabetično kontrolo). Manjši odmerki Cistanche tubulosa niso imeli pomembnega vpliva niti na raven glikogena v jetrih niti v skeletnih mišicah.

3.5. Hipolipidemični učinki Cistanche tubulosa pri miših db/db

Za oceno učinkovCistanchetubulozana dislipidemijo smo določili ravni celotnega holesterola, TG, HDL-c, LDL-c in VLDL-c pri miših db/db. Naši rezultati to dokazujejoCistanchetubulozalahko izboljša dislipidemijo s povečanjem ravni HDL-c, znižanjem ravni TG, LDL-c in VLDL-c poleg znižanja ravni holesterola pri db/db miših. CT120.9 (po0.05) in CT24.2(po0.001) sta pomembno znižala raven TC pri diabetičnih miših db/db (tabela 3 ) v primerjavi z nadzorom sladkorne bolezni. Od vseh eksperimentalnih skupin je samo CT24.2 značilno znižal ravni TG (po0,05) in VLDL-c (po0,05) v primerjavi s kontrolo diabetikov. Vsi trije odmerkiCistanchetubulozaznatno znižal raven LDL (po0.01 za CT120.9, po0,05 za CT72.6, po0,001 za CT24.2, v primerjavi z nadzorom sladkorne bolezni) . Vsi trije odmerkiCistanchetubuloza(CT120.9, CT72.6 in CT24.2) je nepomembno zvišal raven HDL za 9,78 odstotka, 7,32 odstotka in 7,78 odstotka (p40,05 v primerjavi s kontrolo diabetika).

Od teh lipidnih parametrov je nizka raven HDL-c/TC najpomembnejši neodvisni dejavnik tveganja za koronarno arterijsko bolezen. CT120.9 (po0.05) in CT24.2 (po0.001 v primerjavi z nadzorom sladkorne bolezni) znatno zvišala raven HDL-c/TC. Indeks aterogenosti, ki je dejavnik tveganja za koronarno arterijsko bolezen, so zmanjšali vsi trije odmerkiCistanchetubuloza(po{{0}}.001 za CT120.9 in CT24.2, po0.01 za CT72.6 v primerjavi z nadzorom sladkorne bolezni).

V skupini s pozitivno kontrolo je rosiglitazon značilno zvišal ravni TC (po{{0}}.001) in LDL-c (po0,01) v primerjavi s kontrolo sladkorne bolezni. Rosiglitazon je prav tako pomembno zvišal raven HDL-c za 57,32 odstotka (po0,001), vendar ni imel ugodnega učinka na raven HDL-c/TC ali indeks aterogenosti. Akarboza ni imela pomembnega učinka na indekse serumskih lipidov pri db/db miših.

4. Razprava

Ta študija je bila zasnovana za raziskovanje potencialne antihiperglikemične in hipolipidemične aktivnostiCistanchetubuloza.

To so pokazali rezultati testa in vitroCistanchetubulozavsebuje cenjeno količino fenolov in polisaharidov ter kaže dobro antioksidativno delovanje. Skupna vsebnost fenolov vCistanche tubulozanižja od skupne vsebnosti fenolov v čaju (Ankolekar et al., 2011) in kavi (Chu et al., 2011) in višja od mnogih drugihhiperglikemičnozelišča, kot so brusnica (Pinto et al., 2010), morske alge (Nwosu et al., 2011), čičerika (Sreerama et al., 2012) in nekatere tradicionalne zdravilne rastline, ki se uporabljajo pri obvladovanju sladkorne bolezni tipa 2 (Gulatiet et al., 2012). Vsebnost polisaharidov pri Cistanche tubulosa je nižja od vsebnosti polisaharidov v Panax ginsengu (Wanget sod., 2011) in čaju (Chu in sod., 2011) ter večja kot pri mnogih drugihantihiperglikemičnozelišča, kot so Aloe vera L. (Hu et al., 2003), žižuba (Sun et al., 2011), Polyporus umbellatus (Tian et al., 2007), Rheum palmatum (Ni et al., 2007) in nekatere od tradicionalne zdravilne rastline, ki se uporabljajo pri zdravljenju sladkorne bolezni tipa 2 (Gulati et al., 2012). Za rastline z visoko vsebnostjo antioksidantov, kot so polifenoli in feniletanoidni glikozidi (PhG), je pogosto ugotovljeno, da imajo antidiabetično delovanje, kar je vsaj delno posledica njihove sposobnosti zmanjšanja oksidativnega stresa (Pinto et al., 2010; Saltiel, 2001; Gulati et al., 2012). Naš rezultat antioksidativnega testa je skladen s prejšnjimi poročili (Arthur et al., 2011;proti-Bao et al., 2010; Funes et al., 2009), kar je pokazalo, daCistanchetubulozaima pomembne antioksidativne lastnosti. Vrednosti TEAC in vrednosti FRAP pri Cistanche tubulosa sta bili višji kot pri zelenem zelju, korenčku, kumarah, zeleni solati, zeleni (Pellegrini et al., 2003) in nekaterih drugih rastlinah z dobrimi antioksidativnimi učinki, ki se uporabljajo za zdravljenje sladkorne bolezni (Rahimi et al. , 2005) in je bil veliko višji od akarboze in rosiglitazona. Prejšnja klinična preskušanja so pokazala, da lahko lipoična kislina (Konrad in sod., 1999) ali drugi antioksidanti (Paolisso in sod., 1992) izboljšajo občutljivost na inzulin pri bolnikih, ki so odporni na inzulin in/ali diabetiki. Tako je Cistanchetubulosa vir antioksidantov, ki lahko delujejo zaščitno proti sladkorni bolezni in dolgotrajnim zapletom sladkorne bolezni.

Vrste Cistanche so stotine let uporabljali kot krepčilno hrano ali zdravilo, kar nakazuje, da jih je varno jemati peroralno. Prejšnje poročilo o 14-dnevnem testu akutne toksičnosti je pokazaloCistanchetubulozaizvleček spada med dejansko netoksične: največji tolerirani odmerek (MTD) odCistanchetubulozapri miših je bilo ugotovljeno, da je ekstrakt 410 g/kg. Med 14-dnevnim spremljanjem niso zabeležili nobene smrtnosti in testirane miši iz vsake skupine niso pokazale nobenih očitnih znakov toksičnosti med 24-urnim in 14-dnevnim opazovanjem (Zhang et al., 2012). Najvišji odmerek v našem poskusu, 5,084 g CTAE /kg telesne mase/dan, kar je enako 9,10 g surovega prahu /kg pri miših, je veliko nižji od MTD. Tako je odmerek v našem poskusu varen.

DM tipa 2 je ena najbolj razširjenih in resnih presnovnih bolezni na svetu, za katero je značilna predvsem hiperglikemija. V tej študiji smo sprejeli miši BKS.Cg-Dock7m þ/þ Leprdb/J(db/db) kot model sladkorne bolezni tipa 2, da bi raziskali učinkeCistanchetubulozana metabolizem glukoze in lipidov in vivo. db/dbmiške so dobro sprejet genetski model glodalcev presnovnih bolezni, povezanih z življenjskim slogom, ki je še posebej uporaben za ocenjevanje zdravil proti sladkorni bolezni in debelosti. Ta vrsta miši nosi mutacijo v genu za leptinski receptor, kaže hiperglikemijo, hiperlipidemijo, inzulinsko rezistenco in debelost do starosti 6–7 tednov (Hummel et al., 1966; Nishina et al., 1994; Uchida et al., 2005; Srinivasan in Ramarao, 2007).

Z napredovanjem sladkorne bolezni je lahko rahlo zmanjšanje telesne teže diabetične kontrolne skupine (dodatna tabela 1) posledica znižane ravni inzulina v plazmi, ki se pojavi pri diabetičnih db/db miših, starih 10–12 tednov (Hummel et al., 1966) in povečana presnovna učinkovitost pri diabetičnih miših db/db (Trayhurn, 1979). Zmanjšana stopnja izgube teže pri vseh treh odmerkihCistanche tubulije lahko posledica dejstva, daCistanchetubulozatudi povišane ravni inzulina v serumu (tabela 3), kar je koristno za sladkorno bolezen. Rosiglitazon je povzročil znatno povečanje telesne mase, kar je znan stranski učinek rosiglitazona. Znatno povečana jetrna teža in razmerje jetra/telesna teža v skupini z rosiglitazonom (po0,001) sta pokazala, da lahko rosiglitazon povzroči kopičenje lipidov in funkcionalne spremembe v jetrih.

To so pokazali rezultati testa in vivoCistanche tubules lahkozavirajo povišane ravni glukoze v krvi na tešče in povišane ravni glukoze v krvi po obroku ter povečajo občutljivost db/db miši na insulin. Na splošno,Cistanchetubulozaje bila med poskusom učinkovitejša pri zmanjševanju hiperglikemije in dislipidemije ter izboljšanju insulinske rezistence kot akarboza.

Po 20 dneh peroralne uporabe,Cistanchetubulozaznatno zaviral naraščajoče težnje ravni FBG in vrednosti odstotka povečanja FBG na miših db/db nenehno. Na koncu eksperimenta,Cistanchetubulozapokazala svojeantihiperglikemičnoučinek na način, ki je odvisen od odmerka. Ti rezultati kažejo na toCistanchetubulozalahko potencialno deluje kot potencialno sredstvo za zniževanje glukoze v krvi, če ga dajemo v ustreznem odmerku. Večina glukoze se odstrani v skeletnih mišicah po obroku, medtem ko so ravni FBG primarno določene z izločanjem glukoze iz jeter. Rezultati FBG so to pokazaliCistanchetubulozabistveno izboljšalo izločanje glukoze v jetrih miši db/db; slabo jetrno izločanje glukoze je ena od treh glavnih presnovnih okvar pri sladkorni bolezni tipa 2, ki prispevajo k hiperglikemiji (Bavenholm et al.,2001). 3. dan 0 so bile vrednosti odstotkov povečanja FBG v kontrolni skupini diabetikov nižje od pričakovanih ravni, kar bi lahko pojasnilo dejstvo, da so samo CT72,6 (po 0,01), akarboza (po 0,05) androsiglitazon ( po0,001) je znatno zmanjšalo povečanje FBG v primerjavi s kontrolno skupino s sladkorno boleznijo.

To skupno kažejo rezultati v tabeli 2Cistanchetubulozaučinkovito nadziral povišano postprandialno raven glukoze v krvi po obremenitvi z glukozo, kar kaže, da je Cistanche tubulosa možno sredstvo za lajšanje postprandialne hiperglikemije. Visoka postprandialna raven glukoze v krvi je neodvisen dejavnik tveganja za srčno-žilne zaplete, povezane s sladkorno boleznijo tipa 2 (Ceriello, 2005; Blaak et al., 2012). CT120.9 je bistveno zmanjšal zvišanje postprandialne ravni glukoze v krvi, kar nakazuje, da je CT120.9 izboljšal oslabljeno toleranco za glukozo diabetičnih miši db/db, učinek pa je bil primerljiv z 19,5 mg/kg akarboze. Vendar pa je antihiperglikemični učinek CT120. 9 je bil manj intenziven kot pri rosiglitazonu.

Pomanjkljivo izločanje insulina in insulinska rezistenca sta dve od treh glavnih presnovnih napak pri sladkorni bolezni tipa 2, ki prispevata k hiperglikemiji (Bavenholm et al., 2001). Rezultati naše analize theFINS so pokazali, da je visok odmerekCistanchetubulozado neke mere obnovila pomanjkljivo izločanje insulina pri miših db/db. Zato je Cistanchetubulosa učinkovito zavirala povišano raven glukoze v krvi na tešče in po obroku (tabela 2), delno s spodbujanjem izločanja insulina. Hiperglikemija in hiperlipidemija povzročata dodaten oksidativni stres na celice beta in mitohondrije poleg primarne patogeneze diabetesa. Obstajajo in vitro in in vivo dokazi, da je kronična izpostavljenost visokim ravnem glukoze in lipidov v krvi škodljiva za celice tobeta, ki povzročajo pomanjkljivo izločanje insulina, oslabljeno izražanje genov insulina in indukcijo celične smrti z apoptozo (Pitocco et al., 2010). Ker bi lahko antioksidanti zaščitili beta-celične linije in izolirane otočke pred škodljivimi učinki zaradi izpostavljenosti visokim koncentracijam glukoze (Kaneto et al., 1996, Tajiri et al., 1997), lahko Cistanche tubulosa izboljša izločanje inzulina s svojim antioksidativnim učinkom.

Močno oslabljena toleranca za inzulin v kontrolni skupini s sladkorno boleznijo je potrdila na inzulin odporno stanje miši db/db. Rezultati ITT so pokazali, da je visok odmerekCistanchetubulozaizboljšana inzulinska rezistenca pri miših db/db, ki je bila primerljiva z rosiglitazonom in boljša od akarboze, kar kaže, daCistanchetubulozaima močne inzulinske senzibilizirajoče lastnosti.

Homeostazo glukoze v glavnem uravnavajo jetra in skeletne mišice. Večina odlaganja glukoze poteka v jetrih in skeletnih mišicah, pri čemer je glikogen primarna znotrajcelična oblika glukoze, ki jo je mogoče shraniti (Saltiel, 2001). Ravni glikogena v različnih tkivih so neposreden odraz občutljivosti na inzulin, saj inzulin spodbuja znotrajcelično odlaganje glikogena. Z inzulinom stimulirana vsebnost glikogena je pri živalih z inzulinsko rezistenco izrazito zmanjšana sorazmerno s stopnjo pomanjkanja inzulina (Chandramohan et al., 2008).Cistanchetubulozaniso imeli koristnih učinkov na skladiščenje glikogena v jetrih ali skeletnih mišicah.

Za presnovni profil sladkorne bolezni tipa 2 sta značilni oslabljen metabolizem glukoze in inzulinska rezistenca, pogosto v kombinaciji z dislipidemijo (Cha et al., 2005). Dislipidemija je eden glavnih dejavnikov tveganja za srčno-žilne bolezni pri sladkorni bolezni. Značilne značilnosti diabetične dislipidemije so visoka koncentracija trigliceridov (TG) v plazmi, nizka koncentracija holesterola lipoproteinov visoke gostote (HDL-c), povečana koncentracija holesterola lipoproteinov nizke gostote (LDL-c) in povečana koncentracija lipoproteinov zelo nizke gostote. koncentracijo holesterola (VLDL-c) (Mooradian, 2009). Po zdravljenju zCistanchetubuloza45 dni so se ravni celotnega holesterola, TG, LDL-c in VLDL-c pri db/db miših znižale, medtem ko so bile ravni HDL-c zvišane, kar kaže, daCistanchetubulozablagodejno vpliva na dislipidemijo in lahko močno zmanjša tveganje za aterosklerozo, koronarno srčno bolezen in diabetične zaplete (tabela 3). Cistanche tubulosa je bistveno znižala raven TC, kar je skladno s prejšnjim poročilom (Shimoda et al., 2009). Mehanizem, s katerim Cistanche tubulosa izboljša dislipidemijo, je lahko povezan z posredovanjem jetrne ekspresije mRNA, povezane s transportom in presnovo holesterola (Shimoda et al. ., 2009). Čeprav se razširjenost hiperholesterolemije pri DM ne poveča, lahko znižanje ravni holesterola zmanjša relativno tveganje za srčno-žilne bolezni pri bolnikih z DM (Mooradian, 2009). Cistanche tubulosa je pomembno zvišala raven HDL-c/TC in zmanjšala aterogenost indeksa, ki so dejavniki tveganja za koronarno arterijsko bolezen, kar kaže, da je Cistanche tubulosa koristna za zdravljenje sladkorne bolezni in srčno-žilnih bolezni. Pozitivno kontrolno zdravilo rosiglitazon je pomembno zvišalo raven TC, kar je pomembno za povečano tveganje za napredovanje sladkorne bolezni in bolezni srca in ožilja.

5. Zaključek

Za zaključek podajamo prvo predstavitev antihiperglikemičnega inhipolipidemičnoučinkiodCistanchetubulozapri diabetičnih db/db miših tipa 2.Cistanchetubulozanormalizirana hiperglikemija je obnovila občutljivost za insulin in zmanjšala dislipidemijo.Cistanchetubulozaizboljšal vse tri glavne presnovne napake, ki prispevajo k hiperglikemiji pri sladkorni bolezni tipa 2.Cistanchetubulozadokazal velik potencial za preprečevanje napredovanja sladkorne bolezni tipa 2 in zmanjšanje tveganja za aterosklerozo, koronarno srčno bolezen in diabetične zaplete. Kot tradicionalno kitajsko zdravilo in krepčilno živilo bi lahko Cistanchetubulosa nadalje razvili v zdravila, farmacevtska živila ali prehranska dopolnila v prihodnost. Vendar so potrebne nadaljnje raziskave za identifikacijo bioaktivne komponente in pojasnitev mehanizmov, odgovornih za antihiperglikemično inhipolipidemičnoučinkiodCistanchetubuloza.

Zahvala

To delo je bilo podprto z donacijami Nacionalnega programa za raziskave in razvoj ključnih tehnologij v okviru 11. petletnega načrta Kitajske (2007BAI32B06) in Urada vodilne skupine državnega sveta za zmanjševanje revščine in razvoj (2008-3A).

Dodatek A. Dodatno gradivo

Dodatne podatke, povezane s tem člankom, lahko najdete v spletni različici na naslovu http://dx.doi.org/10.1016/j.jep.2013.09.027.

Iz: "Protihiperglikemični in hipolipidemični učinki Cistanche tubulosa" avtorWen-Ting Xiong, et al

---W.-T. Xiong et al. / Journal of Ethnopharmacology 150 (2013) 935–945