Antioksidativna aktivnost Lactobacillus Plantarum NJAU-01 v živalskem modelu staranja

Prosim kontaktirajteoscar.xiao@wecistanche.comza več informacij

Povzetek

Ozadje:Prekomerne reaktivne kisikove spojine (ROS) lahko resno poškodujejo človeško telo in povzročijo različne kronične bolezni. Študije so pokazale, da imajo mlečnokislinske bakterije (LAB) antioksidativne učinke in učinke proti staranju ter so pomemben vir za razvoj mikrobnih antioksidantov. Namen tega prispevka je bil raziskati potencialno vlogo antioksidativnega seva Lactobacillus plantarum NJAU-01, presejanega iz tradicionalnega suhomesnega izdelka Jinhua Ham, pri uravnavanju subakutnega staranja miši, ki ga povzroča D-galaktoza. Skupno 48 miši Kun Ming brez specifičnih patogenov (miši SPF KM) je bilo naključno razdeljenih v 6 skupin: kontrolna skupina s sterilno injekcijo fiziološke raztopine, skupina za staranje s subkutano injekcijo D-galaktoze, skupine za zdravljenje z injekcijo D-galaktoze in intragastričnim dajanjem 10', 10 stopinj in 10 stopinj FU/mL L.plantarum NJAU-01 in pozitivna kontrolna skupina z injekcijo D-galaktoze in intragastričnim dajanjem 1 mg/mL vitamina C.

Rezultati:Rezultati so pokazali, da je terapevtska skupina L. plantarum NJAU-01 pri 10 stopinjah FU/mL je pokazala višjo skupno antioksidativno zmogljivost (T-AOC) in antioksidativne encimske aktivnosti superoksid dismutaze (SOD), glutation peroksidaze (GSH-Px) in katalaze (CAT) kot tiste drugih skupin v serumu, srcu in jetrih. Nasprotno pa je vsebnost markerja oksidativnega stresa malondialdehida (MDA) pokazala nižje ravni kot druge skupine (P<0.05). the="" antioxidant="" capacity="" was="" improved="" with="" the="" supplement="" of="" the="" increasing="" concentration="" of="" l.="" plantarum="">

Za več informacij kliknite tukaj

Sklepi:Tako ta študija dokazuje, da lahko L plantarum NJAU-01 ublaži oksidativni stres s povečanjem aktivnosti encimov, ki sodelujejo pri odpornosti proti oksidaciji, in zmanjša stopnjo oksidacije lipidov pri miših. Ključne besede: Lactobacillus Plantarum NJAU-01, Jinhua Halm, z D-galaktozo povzročeno staranje živali, malondialdehid, antioksidativna sposobnost

Ozadje

Oksidacija je proces, ki je nujno potreben za celično presnovo v telesu. Za oksidacijo so bile odgovorne reaktivne kisikove vrste (ROS) kot prosti radikali, proizvedeni z endogenimi reakcijami redukcije oksidacije (REDOX). Vendar, ko celice prejmejo zunanje dražljaje, ki jih povzroča oksidativni stres, prekomerna proizvodnja ROS preseže celično sposobnost čiščenja ROS [1]. Nekateri raziskovalni podatki so pokazali, da je oksidativni stres povezan z življenjsko dobo organizmov. [2]Če ne morejo presnoviti preostalih ROS, lahko povzročijo resno škodo človeškemu telesu in lahko povzročijo različne kronične bolezni, povezane s staranjem, kot je diabetes, bolezni srca, visoki krvni lipidi, artritis, nevrodegenerativne bolezni, kardiovaskularne in cerebrovaskularne bolezni [3]. Običajno ima telo vrsto encimov ali neencimov in popravljalnih sistemov, ki sodelujejo pri antioksidativni obrambi in jih ščitijo pred oksidativno škodo [4-6]. Na primer, askorbinska kislina porablja kisik s samooksidacijo, reducira kovinske ione, da zmanjša oksidacijsko-redukcijski potencial in sodeluje pri antioksidativni obrambi [7]. Superoksid dismutaza (SOD) lahko pretvori škodljive superoksidne radikale v vodikov peroksid [8]. Katalaza (CAT) sodeluje pri celični antioksidativni obrambi z razgradnjo vodikovega peroksida in s tem preprečuje, da bi Fentonova reakcija proizvedla hidroksilne proste radikale [9]. Vendar pa bi odveč ROS povzročilo oksidativno škodo, ki bi jo povzročili številni dejavniki, kot so obsevanje (rentgenski žarki, y-žarki, ultravijolično), kemični reagenti (kovinski ioni, HONO, HOCl in HOBr), zdravila in njihovi metaboliti ter celo kajenje. Ti naravni antioksidativni sistemi v telesu so pogosto nezadostni za preprečevanje oksidativne škode, zato so potrebni dodatki antioksidantov, kot sta astaksantin in folna kislina [10]. Tako je iskanje razpoložljivega pristopa, ki lahko ublaži ali zavira celične oksidativne poškodbe, deležno precejšnje pozornosti.

Mlečnokislinske bakterije (LAB) so bile široko najdene in uporabljene v fermentiranih mesnih izdelkih. Poleg izboljšanja hranilne vrednosti, okusa in ohranjanja fermentirane hrane imajo LAB tudi dodatne probiotične lastnosti [11, 12]. Nekatere študije so pokazale, da imajo LAB antioksidativne učinke in učinke proti staranju ter so pomemben vir za razvoj mikrobnih antioksidantov [13]. Na primer, je bilo ugotovljeno, da je primer Lactobacillus, ločen od kitajskega domačega likerja, učinkovito ublažil peroksidacijo lipidov in izboljšal presnovo lipidov zaradi visoke sposobnosti čiščenja holesterola in sposobnosti adhezije človeških črevesnih celic [14]. Pred tem smo izolirali in pregledali mlečnokislinsko bakterijo glede na skupno antioksidativno zmogljivost iz pršuta Jinhua in jo identificirali kot Lactobacillus plantarum z odkrivanjem biokemičnih značilnosti, kolonialne morfologije in sekvenciranja 16 s rDNA, imenovano L. plantarum NJAU{{10} } [15]. L. plantarum NJAU-01 je pokazala odlično moč lovljenja in zmanjševanja prostih radikalov DPPH, prostih radikalov hidroksila in prostih radikalov superoksidnega aniona in vitro [16]. V celičnem modelu, povezanem z elektrokemičnim senzorjem, je bila sposobnost makrofaga RAW264.7 kot odziv na oksidativni stres znatno povečana z inkubacijo z L. plan-tarum NJAU-01 [15].Izvleček Cistanche proti sevanjuPoleg tega je L. plantarum NJAU-01 lahko tudi zmanjša stopnjo oksidacije beljakovin v fermentirani klobasi [17]. Tako je L. plantarum NJAU-01 ima dokazano antioksidativni učinek in vitro, kar obeta, da bi ga lahko uporabili pri uravnavanju oksidativnega stresa in vivo.

Cistanche lahko upočasni staranje

Zato je bistveno oceniti antioksidativni učinek L. Plantarum NJAU-01 in vivo z uporabo živalskega modela, ki lahko učinkovito opazuje absorpcijo, transport in metabolizem pri živalih. Miši staranja, ki jih povzroča D-galaktoza, so bile razvite za simulacijo pojava oksidativne škode v procesu staranja telesa že desetletja [18]. D-galaktoza prispeva k nastajanju ROS prek reakcije z aminokislinami, da nastanejo končni produkti glikacije z neencimsko glikacijo s prednostmi nizke toksičnosti, počasnega procesa oksidacije in brez smrtonosnega učinka [19, 20]. Za model staranja miši, ki ga povzroča D-galaktoza, so pogosto poročali, da ocenjuje antioksidativno zmogljivost probiotikov, kot so L-karnitin, ursolna kislina in L. Plantarum AR501 [19,21,22]. Zato so bile te zrele miši, ki jih povzroča staranje D-galaktoze, uporabljene za predhodno preiskavo vloge L. plantarum NJAU-01 pri lajšanju oksidativnega stresa pri miših. L. plan-tarum NJAU-01 smo hranili z D-galaktozo povzročenim staranjem, da bi ovrednotili njegove in vivo antioksidativne učinke z merjenjem skupne antioksidativne zmogljivosti (T-AOC), antioksidativne encimske aktivnosti SOD, glutationa peroksidaze (GSH-Px) in CAT ter vsebnost označevalca oksidativnega stresa malondialdehida (MDA) v mišjem serumu, srcu in jetrih.cistanche herbaTo bo podlaga za nadaljnje raziskave o razvoju in uporabi L. plantarum NJAU-01 kot probiotika.

Rezultati

Telesna teža in indeksi organov pri miših

Nobena od živali ni umrla med obdobjem hranjenja in vključeni so bili datumi vseh miši. Učinki različnih zdravljenj z L. plantarum NJAU-01 na organe miši so prikazani v tabeli 1. Miši v starostni skupini, ki jim je bila vbrizgana D-galaktoza, so pokazale znatno nižjo telesno težo v primerjavi z drugimi skupine (P<0.05). no="" significant="" difference="" was="" ob-served="" in="" kidney="" liver="" index="" and="" lung="" be-tween="" the="" l.="" plantarum="" njau-01="" treatment="" groups="" normal="" positive="" group="" aging="" model="" p="">0.05). Srčni indeks skupine starajočega se modela je bil bistveno višji v primerjavi z indeksom normalne skupine (P<>

Aktivnost T-AOC seruma, srca in jeter miši Aktivnost T-AOC miši med različnimi zdravljenimi skupinami je prikazana na sliki 1. Aktivnost T-AOC modelne skupine starajočih se miši je bila 6,68 U/mL, medtem ko je bila v srcu, serumu in jetrih so bile 6,62, 3,55 oziroma 3,58 U/mg beljakovin, kar je bilo nižje kot pri drugih skupinah (P<0.05). in="" the="" l.="" plantarum="" njau-01="" lp3="" group,="" serum,="" heart,="" and="" liver="" had="" significantly="" higher="" t-aoc="" than="" the="" other="" groups=""><0.05). the="" liver="" t-aoc="" in="" the="" positive="" control="" group="" was="" significantly="" higher="" than="" the="" control="" group="" and="" the="" aging="" model="" group=""><0.05). however,="" the="" antioxidant="" activity="" of="" the="" heart="" and="" liver="" of="" the="" positive="" control="" group="" was="" significantly="" lower="" than="" that="" of="" the="" lp3="" group=""><0.05). the="" above="" results="" indicate="" that="" l.="" plantarum="" njau-01="" can="" enhance="" the="" t-aoc="" of="" the="" mice="" in="" a="" dose-dependent="">

Aktivnost SOD v mišjem serumu, srcu in jetrih

Aktivnosti SOD miši v skupini starajočega se modela v serumu, srcu in jetrih miši so bile 16,72 U/mL, 18,93 U/mg beljakovin oziroma 44,82 U/mg beljakovin, kar je bilo znatno nižje kot pri kontrolni skupini (P<0.05,fig.2).in contrast,the="" sod="" activity="" in="" serum,="" heart="" and="" liver="" of="" mice="" in="" vc="" group="" was="" significantly="" higher="" than="" that="" of="" mice="" in="" the="" aging="" model="" group="" and="" control="" group=""><0.05). the="" sod="" activity="" in="" heart="" of="" mice="" lp2="" group="" was="" 61.85="" mg="" which="" not="" significantly="" different="" from="" that="" positive="" control="" p="">0.05). Po drugi strani pa so bile aktivnosti SOD v serumu, srcu in jetrih skupine z visokimi odmerki 48,83 U/mL, 74,67 U/mg beljakovin oziroma 69,55 U/mg beljakovin, kar je bilo znatno višje od tistih v drugih skupinah (P<0.05). these="" results="" showed="" that="" l.="" plantarum="" njau-01="" could="" alleviate="" the="" oxidative="" damage="" induced="" by="" d-galactose="" to="" the="" body,="" and="" increase="" sod="">

GSH-Px v mišjem serumu, srcu in jetrih

Skupina LP3 je pokazala večjo aktivnost GSH-PX kot miši v drugih skupinah v serumu, srcu in jetrih (P<0.05, fig.="" 3).="" the="" gsh-px="" activity="" in="" the="" heart="" and="" liver="" tissues="" of="" mice="" in="" the="" positive="" control="" group="" was="" signifi-cantly="" higher="" than="" that="" of="" mice="" in="" the="" control="" group="" and="" the="" aging="" model="" group=""><0.05). there="" was="" no="" significant="" difference="" for="" the="" serum="" gsh-px="" activity="" between="" lp1="" and="" control="" group="" p="">0.05). Poleg tega so bile skupine modelov staranja v srcu in jetrih miši 50,39 U/mL, 8,48 U/mg beljakovin oziroma 62,67 U/mg beljakovin, kar kaže nižjo aktivnost GSH-Px kot druge skupine (P<0.05). therefore,l.="" plantarum="" njau-01="" has="" an="" enhancing="" effect="" on="" the="" antioxidant="" enzymatic="" activity="" of="" gsh-px="" in="" mice,="" and="" the="" strain="" concentration="" is="" related="" to="" the="" antioxidant="">

Aktivnost CAT v mišjem serumu, srcu in jetrih

Kot je prikazano na sliki 4, so bile aktivnosti CAT v serumu, srcu in jetrih miši LP3 22,98 U/mL, 137,99 U/mg beljakovin oziroma 136,31 U/mg beljakovin, ki so imele višjo aktivnost CAT kot pri drugem zdravljenju. skupine (P<0.05), indicating="" that="" the="" concentration="" of="" the="" strain="" had="" a="" marked="" effect="" on="" the="" cat="" activity.="">rast penisa cistancheV nasprotju s tem je skupina modela staranja pokazala nižjo aktivnost CAT kot miši v drugih skupinah v serumu, srcu in jetrih miši (P<0.05). as="" for="" vc="" group,="" it="" presented="" higher="" cat="" activity="" than="" the="" control="" group="" and="" aging="" model="" group="" in="" serum,="" heart="" and="" liver="" of="" mice=""><0.05). these="" findings="" demonstrate="" that="" l.="" plantarum="" njau-01="" can="" enhance="" the="" cat="" activity="" in="" mice="" serum,="" heart="" and="" liver="">

Vsebnost MDA v serumu, srcu in jetrih miši

Vsebnost MDA v serumu, srcu in jetrih miši v skupini starajočega se modela je bila znatno višja kot v kontrolni skupini (P<0.05, fig.="" 5).="" the="" serum="" mda="" content="" of="" mice="" in="" the="" lp3="" group="" was="" 14.29="" nmol/ml,="" and="" the="" mda="" contents="" in="" the="" heart="" and="" liver="" were="" 8.00="" and="" 26.49="" nmol/mg="" protein,="" respectively,="" being="" significantly="" lower="" than="" that="" in="" the="" other="" groups=""><0.05). there="" was="" no="" significant="" difference="" in="" mda="" content="" among="" the="" positive="" control="" lp1="" and="" lp2="" groups="" p="">0.05).

Diskusija

Model subakutnega staranja miši z indukcijo D-galaktoze se pogosto uporablja in je dobro priznan [14, 23, 24]. Model vključuje neprekinjeno vbrizgavanje D-galaktoze, ki se reducira v galaktozo z galaktozno reduktazo znotraj celic, kar povzroči spremembo osmotskega tlaka med celico in okoljem ter nato otekanje celic in staranje [25]. Znotrajcelični encimi, ki lajšajo oksidativni stres, kot so SOD, CAT in GSH-Px, ne zadostujejo za izločanje reaktivnih kisikovih vrst, ko so celice v telesu izpostavljene akutnemu oksidativnemu stresu. To je neposredna in učinkovita metoda za preučevanje antioksidativne aktivnosti LAB z injiciranjem LAB v subakutno starajoče se miši, ki jih povzroča D-galaktoza, in primerjavo encimske antioksidativne aktivnosti, kot so SOD, GSH-Px in CAT, s kontrolno skupino [21].

V tej študiji so skupino modela staranja in skupino pozitivne kontrole (injekcija z Vc) primerjali z različnimi odmerki skupine, ki je prejemala L. plantarum NJAU-01. Organski indeks je razmerje med težo organa pri poskusni živali in njeno telesno težo in povečanje organskega koeficienta kaže na zastoj, edem ali hiperplazijo organa, medtem ko zmanjšanje organskega koeficienta kaže na atrofijo organa in druge degenerativne spremembe. Indeks organov je bil uporabljen tudi za izražanje sprememb v stopnji staranja, kot je razvidno iz študij Yu et al. (2016) in Xu et al. (2016)[18,26]. Ta študija je pokazala, da so imele miši v skupini starajočega se modela manjšo težo in višji srčni indeks kot miši v drugih skupinah. Dajanje D-galaktoze je znatno zmanjšalo antioksidativno encimsko aktivnost v serumu, srcu in jetrih miši v skupini starajočega se modela. Predlagano je bilo, da dodatki L. plantarum NJAU-01 zmanjšajo poškodbo jeter pri miših z oksidativnim stresom, ki jih povzroča D-galaktoza, tako da uravnavajo nenormalne aktivnosti SOD, GSH-Px in CAT na normalne ravni. To je v skladu s poročanimi študijami pri preučevanju antioksidativne vloge ciljnih sevov, vključno z L. plantarum AR113 in ARS01 [12], L. del-brueckii subsp. bulgaricus F17 [27]. Tako je D-galaktozni subakutni mišji model staranja v trenutni študiji učinkovit za zagotavljanje zaupnih dokazov za raziskovanje antioksidativne zmogljivosti LAB in vivo.

Prejšnji rezultati raziskav so pokazali, da se antioksidativni mehanizem LAB kaže predvsem v naslednjih vidikih: kelatirani kovinski ioni, avtotrofni antioksidativni encimski sistemi, proizvodnja antioksidantnih me-tabolitov, povečana aktivnost antioksidativnih encimov gostitelja, nadzor antioksidativnih signalnih poti in uravnavanje skupine črevesnih bakterij [28]. Ti vidiki igrajo ključno vlogo pri lajšanju bolezni, katerih razvoj vključuje oksidativni stres [29]. MDA velja za biomarker lipidne peroksidacije in lahko vodi do zamrežene polimerizacije makromolekul, kar ima potencialno vlogo pri citotoksičnosti in genotoksičnosti. Vsebnost MDA se običajno uporablja kot osnova za oceno stopnje peroksidacije lipidov in odraža stopnjo poškodbe celic [30].koristi cistanche salsaSedanja študija je pokazala, da so miši z oksidativnim stresom, povzročenim z D-galaktozo, občutno znižale ravni MDA v serumu, srcu in jetrih z injiciranjem L. plantarum NJAU-01, kar kaže, da L. Plantarum lahko učinkovito zmanjša nastajanje lipidni peroksid pri miših. To je skladno s študijo in vitro, ki je pokazala učinkovito sposobnost lovljenja prostih radikalov seva L. plantarum NJAU-01 [16]. Podobno so odstavljeni pujski, hranjeni z L. plantarum ZLP001, pokazali nižjo vsebnost MDA v serumu (4,1 nmol/ml) kot kontrolna skupina (6,23 nmol/ml), kar dokazuje, da ima L. Plantarum ZLP001 antioksidativno delovanje [31]. Trenutna študija je pokazala, da bi dodatki L. plantarum NJAU-01 lahko bistveno zmanjšali stopnjo oksidacije lipidov pri miših, ki jih povzroča D-galaktoza, in zaščitili miši pred oksidativnim stresom.

V telesu obstaja niz encimskih obrambnih sistemov za lovljenje prostih radikalov, kot so SOD, GSH-Px in CAT, ki sinergistično lovijo superoksidne radikale, hidroksilne radikale in vodikov peroksid [32] Oksidacija prostih radikalov in antioksidant obrambni sistem organizma v stanju dinamičnega ravnovesja. Ko je telo izpostavljeno dražljajem, ki povzročajo oksidativni stres, se to dinamično ravnovesje lahko poruši. Prekomerna proizvodnja ROS poškoduje beljakovine, lipide in molekule nukleinskih kislin, kar končno vodi v staranje organizmov in razvoj različnih bolezni [3]. SOD lahko pretvori superoksidne radikale v vodikov peroksid, ki je še vedno citotoksičen in lahko ustvari hidroksilne radikale s Fentonovo reakcijo [34]. Hidroksilni radikal je eden najbolj aktivnih ROS, ki lahko reagira z organsko snovjo v celici s hitro reakcijsko hitrostjo in destruktivnim učinkom [35]. Poleg tega lahko CAT razgradi hidroksilne radikale, da sodeluje pri celični antioksidativni obrambi [36]. V fizioloških pogojih se lahko v celicah proizvajajo antioksidativni encimi, kot je GSH-Px, da te celice zaščitijo pred oksidativnimi poškodbami [25]. Ta študija je pokazala, da lahko L. plantarum NJAU-01 znatno poveča aktivnosti SOD, GSH-Px, CAT in T-AOC v serumu, srcu in jetrih miši, kar kaže, da L. plantarum NJAU-01 blaži oksidativno škodo, ki jo povzroča D-galaktoza. Ta učinek je mogoče pripisati dvema vidikoma.L. plantarum NAJU-01 lahko spodbudi aktivnost antioksidativnih encimov pri miših, ki uravnavajo ravnovesje ROS na normalne ravni pri miših. Po drugi strani pa bi lahko tudi lovil proste radikale in deloval sinergistično s SOD, GSH-Px in CAT za zmanjšanje oksidativnega stresa. Za Lactobacillus fermentum [37] in Lactobacillus fermen-tum ME-3 so poročali tudi o uravnavanju aktivnosti antioksidativnih encimov s probiotičnimi bakterijami [38]. Ta študija dokazuje, da ima L. plan-tarum NJAU-01 antioksidativni učinek pri miših in je obetavna alternativa sintetičnim ali rastlinskim antioksidantom. Običajno se uporablja kot biološki vir antioksidantov za preučevanje predjedi klobas ali funkcionalnih izdelkov [18]. Čeprav so raziskave o antioksidativnem delovanju LAB v zadnjih letih pritegnile veliko pozornosti, raziskave osnovnega mehanizma antioksidacije L. Plantarum NJAU-01, zlasti presnovnih poti, izražanja beljakovin in regulacije črevesja flora je še vedno skromna. Poleg tega navzkrižno in dopolnjevanje več antioksidativnih mehanizmov v mlečnokislinskih bakterijah zahteva nadaljnje preiskave.

Sklepi

Ta predhodna študija je dokazala učinek L. plan-term NJAU-01, izoliranega iz šunke Jinhua, na model staranja miši, ki ga povzroča D-galaktoza. Ugotovljeno je bilo, da lahko dodatek L. Plantarum NJAU-01 med procesom hranjenja miši znatno poveča aktivnost antioksidativnih encimov in zmanjša vsebnost MDA. Ta študija potrjuje možnost L. plan-tarum NJAU-01 kot bioantioksidanta in postavlja temelje za nadaljnje preučevanje antioksidativnega mehanizma L.plantarum.

Metode

Bakterijski sev in živalski pripravek

L.plantarum NJAU{{0}} (CGMCC14194) smo presejali iz tradicionalno suhomesnatega proizvoda Jinhua ham z morfološkimi, biokemičnimi in molekularno genetskimi identifikacijskimi metodami [15]. Ta sev je imel visoko antioksidativno aktivnost in je bil ohranjen na Visoki šoli za prehransko znanost in tehniko Univerze Yangzhou [16]. Lactobacillus Plantarum NJAU-01 je bil shranjen kot zamrznjena (-80 stopinj) zaloga v juhi De Man, Rogosa, Sharpe (MRS) (Bio-way Technology Co., Ltd, Šanghaj, Kitajska), dopolnjena z 20 odstotki (v/v) glicerol. Sev 1-odstotnega inokuluma smo dvakrat aktivirali in gojili v 10 ml juhe MRS pri 37 stopinjah 18 ur. Bakterijska suspenzija 100 μL je bila nato nacepljena v trdno gojišče MRS z avtomatskim razredčilom in ploščo (referenca 414,000, Interscience, Saint-Nom-la-Breteche, Francija). Inokulirano trdno gojišče MRS smo gojili pri 37 stopinjah 24 ur, število živih celic pa smo prešteli s samodejnim števcem kolonij HD (Scan 1200, Interscience, Saint-Nom-la-Breteche, Francija) in stopnjo skeniranja. različica programske opreme 8.0 (Interscience, Saint-Nom-la-Breteche, Francija). Zaznali smo, da je koncentracija bakterijske suspenzije 2 × 10' CFU/mL in 10 ml kulture seva centrifugirali pri 6,000 g 10 minut pri 4 stopinjah, da smo zavrgli supernatant. Peleto smo trikrat sprali s sterilno fiziološko raztopino in jo nato raztopili v 20 ml sterilne fiziološke raztopine, pri čemer smo dobili 1 × 10 stopinj FU/mL L.plantarum NJAU-01. Nato smo alikvot 2 ml bakterijske suspenzije pri 1 × 10 stopinj FU/mL odstranili v novo epruveto, da smo ga združili z 18 ml sterilne fiziološke raztopine za pripravo odmerka 1 × 10 stopinj FU/mL bakterij. Analogno smo koncentracijo 1 × 107 CFU/mL naredili z redčenjem bakterijske suspenzije 1 × 10 stopinj FU/mL. Za poskusno žival so bile izbrane KM miši razreda SPF (samice, stare 4 tedne, težke 18-20 g). Krmo in posteljnino za živali je zagotovil Inštitut za primerjalno medicino Univerze Yangzhou (Yangzhou, Jiangsu, Kitajska). Vse poskuse na živalih je odobril Odbor za dobro počutje živali in Odbor za etiko Univerze Yangzhou in so bili v skladu s smernicami Institucionalnega upravnega odbora in Odbora za etiko laboratorijskih živali (Številka licence IACUC: 201811009). Miši so bile vzgojene pri 20±2 stopinjah z relativno vlažnostjo 55±5 odstotkov. Podgane so bile naključno hranjene s standardno hrano za podgane med poldnevnim ciklom svetlobe in teme (svetla faza od 7.00 do 19.00). Štiri miši so bile vzgojene v kletki, hranjene z dieto brez patogenov in vodo. Vsi materiali, vključno s pokrovi, podajalniki, steklenicami in posteljnino, so bili pred uporabo avtoklavirani. Miši so bile aklimatizirane en teden pred vzpostavitvijo modela staranja miši.

Vzpostavitev mišjega modela staranja

Vzpostavljen je bil model staranja subakutne miši, ki ga povzroča D-galaktoza, in se nanaša na Zhao et al. z manjšimi modifikacijami [39]. Metoda dajanja galaktoze je bila izvedena s subkutano injekcijo v vrat in hrbet. Skupaj 48 SPF miši je bilo po enem tednu aklimatizacije naključno razdeljenih v 6 skupin (8 podgan/skupino). Naključna števila so bila ustvarjena s standardno funkcijo=RAND() v programu Microsoft Excel. Miši v vsaki skupini, razen v kontrolni skupini, so subkutano injicirali 500 mg D-galaktoze na kg telesne teže (Shanghai Blue Season Biological Co., Ltd, Šanghaj, Kitajska) 4 tedne enkrat na dan (raztopina D-galaktoze, 50 g/L). Kontrolni skupini so injicirali 10 ml sterilne fiziološke raztopine na kg telesne teže. Poleg tega so tri skupine zdravljenja prejele intragastrične odmerke L.cistanche tubulosa doziranje redditPlantarum NJAU-01 (10' CFU/mL, 10 stopinj CFU/mL in 10 stopinj FU/mL) pri 20 ml na kg telesne teže in označen kot skupina LP1, skupina LP2 oziroma skupina LP3. Miši v kontrolni skupini in skupini za staranje so bile intragastrično hranjene s sterilno fiziološko raztopino po 20 ml/kg dnevno. Miši v skupini pozitivne kontrole so bile zdravljene z 1 mg/ml vitamina C (Vc) pri 20 ml/kg dnevno. Celoten poskus je trajal štiri tedne.

Priprava vzorcev tkiva

Miši so bile evtanazirane do nezavestnega stanja z intraperitonealno injekcijo 3-odstotnega izoflurana. Prenehanje srčnega utripa in neodzivnost na škodljive dražljaje (ščip v zadnji taci) sta bila uporabljena kot merila za preverjanje smrti. Miši je bilo odstranjeno zrklo in odvzeta kri. Nato smo kri takoj centrifugirali pri 3,00xg 10 min pri 4 stopinjah, da smo dobili serum, in shranili pri -20 stopinjah do analize. Po evtanaziji so miši nezavedno usmrtili z vlečenjem vratnih vretenc in pobrali jetra, srce, vranico, ledvice, pljuča in možgane ter jih stehtali, da bi določili indekse organov. Vzorce jeter in srca smo homogenizirali v 10-odstotni tkivni homogenat z 0,9-odstotnim NaCl, supernatant pa zbrali s centrifugiranjem, kot je navedeno zgoraj.

Zaznavanje parametrov

T-AOC in antioksidativne encimske aktivnosti SOD, GSH-Px in CAT ter vsebnost MDA so bile določene s kompletom za analizo skupne antioksidativne kapacitete (metoda ABTS, A015-2-1), testom superoksid dismutaze (SOD). komplet (metoda WST-1, A001-1-2), komplet za analizo glutation peroksidaze (GSH-PX) (kolorimetrična metoda, A0060201), komplet za analizo katalaze (CAT) (kolorimetrična metoda, A007-2-1 ) oziroma komplet za analizo malondialdehida (MDA) (metoda TBA, A003-2-1). Vsi kompleti so bili kupljeni pri Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute Co, Ltd (Nanjing, Jiangsu, Kitajska). Vsi vzorci so bili testirani v treh izvodih, postopki odkrivanja pa so bili izvedeni v skladu z navodili.

Statistična analiza

Podatki so bili analizirani s programsko opremo Data Processing System 7.05 (Hangzhou Ruifeng Information Technology Co., Ltd, Hangzhou, Kitajska). Različna povprečja so bila primerjana z Duncanovo metodo novega kompleksnega obsega. Test statistične pomembnosti je bil izveden na ravni 0,05 (P<>

Ta članek je izvleček iz Ge et al. BMC Microbiology (2021) 21:182 https://doi.org/10.1186/s12866-021-02248-5