Kemične sestavine listov Cistanche
Apr 13, 2023
Povzetek: Cistanchelisti se že dolgo uporabljajo v tradicionalni medicinizdravljenjeishemična možganska kap, angina, inhipertenzijain kot zdrav napitek terkozmetika zaproti staranju. Namen te študije je bil izolirati čim več spojin iz ekstrakta etanolakakijevih listov za identifikacijo biološko aktivnih spojin. Antioksidativni učineksloja etil acetata iz etanolnega ekstrakta listov kakija je dokazal2,2-difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH) test in spletna tekočinska kromatografija visoke ločljivosti-2,20 -casino-bis (3-etilbenzotiazolin-6-sulfonska kislina) analiza (HPLC-ABTS). Nov flavonoid,kempferol-3-O- -D-2"-kumaroilgalaktozid (1) in novo naravno spojino, kaempferol-3-O- -D-2"-feruloilglukozid (3) smo izolirali iz plasti etil acetata, skupaj s 25 prejznane spojine, vključno zštirinajst flavonoidov, en ionon, dva kumarina, sedem triterpenoidov,in en acetofenon. Interpretacija spektrometričnih in spektroskopskih podatkov je določila njihove strukture. Vse izolirane spojine so bile hitro ovrednotene s pomočjo spletnegaHPLC-ABTSesej, in od teh spojine4–8, 11, 13, 15, in16 jasno pokazalaantioksidativne učinke. Thekoličina teh spojin je bila {{0}}.3–0,65 odstotka ekstrakta.
Ključne besede:Diospyros kaki; listi persimona; flavonoid; antioksidant
1. Uvod
Diospyros kakiThunb. (kaki) spada v družino Ebenaceae in je zelo razširjenrazdeljen v Koreji, na Kitajskem in Japonskem. Njegove plodove uživamo sveže ali suhe, liste paže dolgo uporablja kot tradicionalno zdravilo za zdravljenje ishemične kapi, angine, hipertenzije,ateroskleroza in nalezljive bolezni [1]. Poleg tega so bili uporabljeni njeni listikot zdrave pijače in kozmetika zaradi svojih lastnosti proti staranju in sposobnostipomaga preprečevati kopičenje holesterola in melanina [1]. Nedavne raziskave so pokazaleda imajo izvlečki listov kakija širok spekter bioloških lastnosti,vključno z odstranjevanjem radikalov, nevroprotekcijo, zaviranjem tromboze, antiaterosklerozo,in protialergijsko [2–6]. Prejšnja fitokemična preiskava je pokazala, da različnevrsteflavonoidiin terpenoidi so glavne sestavine [7] in več taninov,poročali so tudi o naftokinonih, kumarih, iononih in maščobnih kislinah [8–12]. Reaktivne kisikove spojine (ROS) so reaktivne molekule, proizvedene v bioloških sistemih,in ravnovesje med nastajanjem in izločanjem ROS je normalno dobro nadzorovanocelična fiziologija [13]. Vendar pa prekomerno nastajanje ROS povzroča oksidativno škodo,in posledično staranje in s starostjo povezane bolezni, vključno z rakom, sladkorno boleznijo in Parkinsonovo boleznijobolezen [14]. Zato odkrivamo antioksidante, kot so flavonoidi in fenolne spojinebi lahko bila obetavna strategija za zdravljenje teh bolezni.
Kot del našega stalnega projekta iskanja biološko aktivnih spojin [15], theantioksidativni učinek ekstrakta etanola (EtOH) in pregrad topil iz kakijalisti so bili ovrednoteni s testom 2,2-difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH) in spletnim visoko zmogljivimtekočinska kromatografija-2,20 -casino-bis (3-etilbenzotiazolin-6-sulfonska kislina)(HPLC-ABTS) analizo. Fitokemijska študija na listih kakija je privedla do izolacijeenega novega flavonoida (1), ena nova naravna spojina (3) in25 prejznane spojine. Uporaba spektroskopskih in spektrometričnih metod je karakterizirala strukture. Vse izolirane spojine so bile hitro pregledane glede njihoveantioksidativne učinke z uporabo spletne HPLC-ABTS. Poleg tega je kvantitativna analizavse izolirane spojine smo izvedli v tej študiji.
2. Rezultati in razprava
2.1. Antioksidativni učinek listov kakija
Ocenili smo antioksidativni učinek etanolnega (EtOH) izvlečka listov kakija.za predhodni pregled preko DPPH (slika1A). 0.125 mg/ml odizvleček je odstranil približno 80 odstotkov radikala DPPH, medtem ko je 0,025 mg/ml askorbinske kislinekislina je sestavljala 94 odstotkov radikala. Spletna analiza HPLC-ABTS je bila izvedena hitrozagotoviti zanesljivost teh rezultatov (slika1D). Galna kislina in Trolox sta bila uporabljena kot internastandardi. Kromatogram pri 734 nm (negativni vrh) je nakazal, da je približnodevet sestavin ima lahko antioksidativno delovanje. Galna kislina in troloks (6-hidroksi- 2,5,7,8-tetrametil kroman-2-karboksilna kislinakisline) so bili uporabljeni kot notranji standardi za zagotovitevzanesljivost rezultatov. Ugotovljeno je bilo, da je večina teh vrhov derivatov flavonoidovkot sta flavonoidni glikozid in flavanol, na podlagi izvedene dereplikacijske analizes primerjavo ultravijoličnih (UV) in masnih spektrov spojin z objavljenimipodatke. Frakcioniranje, vodeno z biološkim preizkusom, je pokazalo, da so te antioksidativne spojineveliko v plasti etil acetata (EtOAc), medtem ko je voda (H2O) plast je bila šibkadejavnost (slika1B,C).
Slika 1. Učinki čiščenja DPPH ekstrakta EtOH (A), plasti EtOAc (B) in plasti H2O (C) HhO plasti listov kakija: (D) spletni kromatogram ABTS-HPLC ekstrakta EtOH.
2.2. Fitokemične preiskave
Za identifikacijo teh antioksidativnih spojin, različne kromatografske in spektroskopskeso bile izvedene metode za izolacijo in strukturno karakterizacijospojine. Nov flavonoid (1) in nova naravna spojina (3) so bili pridobljeni izetil acetatna plast etanolnega ekstrakta, skupaj s 25 predhodno prijavljenimi spojinami,in sicer kempferol-3-O- -2"-kumaroilglukozid (2) [16], ( plus )-katehin (4) [17], hiperozid(5) [17], izokvercitrin (6) [18], kvercetin-3-O- -2"-galoilgalaktozid (7) [19], kvercetin-3-O- -2"-galoilglukozid (8) [20], trifolin (9) [18], astragalin (10) [18], kemferol-3-O- - 2"-galoilgalaktozid (11) [21], kemferol-3-O- -arabinozid (12) [22], kemferol-3-O- - 2"-galoilglukozid (13) [23], kvercetin-3-O- -2"-kumaroilglukozid (14) [24], kvercetin(15) [15], kempferol (16) [25], (6S,9S)-roseozid (17) [26], skopoletin (18) [27], umbeliferon(19) [28], 1-(2,4-dihidroksi-6-metilfenil)etanon (20) [29], barbinervična kislina (21) [30], diospirinska kislina B (22) [7], rotugenska kislina (23) [31], pomolinska kislina (24) [32], siarezinolna kislina(25) [33], oleanolna kislina (26) [25] in ursolna kislina (27) [25] z uporabo spektroskopskih inspektrometričnih in fizikalnih podatkov v primerjavi z objavljenimi podatki in tudi s tankimianaliza s plastno kromatografijo (TLC) (slike2 in3). Med temi spojine2, 16, 17, 19, 20, in24 so bili najprej izolirani izD. kaki.
Spojina 1 je bila pridobljena kot rumen prah, v katerem je bila molekulska formula ugotovljena kot C3olO3 na podlagi podatkov masne spektrometrije visoke ločljivosti (HRMS). Spekter je pokazal absorpcijske pasove pri 207 in 315 nm, kar kaže, da ima spojina 1 flavonolno ogrodje. Podatki 'H jedrske magnetne resonance (NMR) (tabela 1, slika S1) so pokazali tipičen vzorec kumaroiliranega flavonolnega glikozida, ki prikazuje dva niza signalov tipa AA'BB' ({{10}}).{{11 }} (2H, d, J= 8.5 Hz, H-2' in H-6 ),6,87 (2H, d, J{{20}} .5 HzH-3' in H-5')) v obroču B kemferola kot tudi signali (0 7.45 (2H, d, J=8. 5 HzH-2 in H{{3{{104}}}}"), 6,81 (2H, d, J=8.5 Hz, H-3 in H-5 odstotkov ) v aromatskem obroču kumaroilne skupine Dva dubletna signala (8H 7,65 (1H, d, J=15,5 Hz, H-7"") in 6,35 (1Hd, J=16.0 Hz, H-8"), kar kaže na trans-olefinske protone skupine držav. Poleg tega anomerni protonski signal (0H 5,57 (1H, d, J=8.0 Hz, H-1) so opazili v območju sladkorja, kar kaže na prisotnost ciklične sladkorne skupine s konfiguracijo B. 13C in izboljšanje brez popačenja s podatki NMR za prenos polarizacije (Iable 1Slika S2) prikazuje 30 resonanc, ki vključujejo dva trans-olefinska ogljika, deset aromatskih ogljikov in šest ogljikov glukozilnega dela ter deset neprotoniranih ogljikov, vključno z dvema karbonilnima ogljikoma. Zlasti kemični premiki pri C-2, C-3 in C-4 (8c 158,1, 134,9 in 179,2) so bili značilni signali flavonol3-0-glikozida. Poleg tega signal karbonilnega ogljika pri C-1" (8c 168,7) in dva signala trans-olefinskega ogljika pri C-2'" in C-3"(6 146).9 , 115.2) so bili tipični kemijski premiki kumaroilne skupine. Anomerni ogljikov signal pri C-1(6C 100.4) in drugi signali za glikozilni del od C-2" do C-6" ' (6c74,3, 73,4, 70,5, 77,4 in 62,0). Te enodimenzionalne (1D) podatke NMR je bilo mogoče prekrivati s tistimi za kempferol-3-0-B-2"-kumaroilglukozid (2) (16]. Vendar pa je natančna primerjava podatkov 13C NMR med obema spojinama pokazala, da ima spojina 1 del galaktoze, kar je bilo dodatno dokazano z NMR podatki nuklearne Overhauserjeve izboljšane spektroskopije (NOESY) (slika S6). Medtem ko je korelacija NOES med V spojini 2 opazili H-2 in H-4, med tema protonoma v spojini 1 ni bilo korelacije. Na splošno je interpretacija podatkov 13C NMR in NOESYNMR učinkovita metoda za določanje vrste glikozilnega dela Ugotovljeno je bilo, da je lokacija galaktoznega dela pri C-3 v skladu s premikom nizkega polja C-2in C-4, kar dodatno dokazuje korelacija heteronuklearne večkratne vezi (HMBC med H{ {123}}" in C-3 (slika S5). Pokazalo se je, da je položaj kumaroilne skupine pri C-2" na podlagi premika navzdol (0 5.36 (1H, dd, J=10.0, 8,0 Hz, H{ {134}}")) in korelacijo HMBC med H-2' in C-1. Posledično je bila struktura spojine 1 določena kot kaempferol-3-0-B-2"-kumaroilgalaktozid. Čeprav je bila spojina 2 predhodno izolirana iz različnih virov, vključno z Ouercus suber (16] in Alliumporrum (34), spojina 1 je bila prvič izolirana in strukturno karakterizirana.
Spojina3 je bil izoliran kot rumen prah in določena je bila molekulska formulakot C31H28O14 z analizo podatkov HRMS. UV spekter je pokazal UVabsorpcija pri 210 in 327 nm zaradi istega aglikona s spojinami1 in2. The1H NMR podatki (tabela1, slika S10) so bile podobne tistim pri spojini2, ampak spojina3 imel feruloilno skupino namesto kumaroilne skupine, kar dokazuje prisotnost andodatna metoksi skupina (δH 3.91 (3H, s, 3000 -OCH3)). Poleg tega anomerni protonsignal (δH 5.64 (1H, d, J {{0}},0 Hz, H-100 )), kar kaže, da je glikozilna povezavaje bil-konfiguracijain signal, premaknjen navzdol (5,03 (1H, t,J = 8,5 Hz, H-200 )) je bilo prikazano v območju sladkorja, kot pri spojini1. The13Podatki C NMR (tabela1, SlikaS11) je pokazala 31 resonanc, ki so sestavljale dveprev-olefifinski ogljiki, deset kvartarnih ogljikov,deset aromatskih ogljikov, šest ogljikov glukozilnega dela in en metoksi ogljik ter deset neprotoniranihogljiki, vključno z dvema karbonilnima ogljikoma, ki ustrezata kempferolu, feruloilu,in skupine glukoze. Zlasti ogljikovi signali iz C-200 na C-600 (δC 75.8, 76.3, 71.5, 78.8 in 62.5) nakazujejo prisotnost glukoznega dela. Lokacije glukoznega delain feruloilno skupino so bile dodeljene s korelacijami dolgega dosega HMBC med H-100 inC-3 (δC 134.8) in H-200 in C-1000 (δC 168.4) (slika S14). Položaj dodatnegametoksi skupino je določila ključna korelacija med 3000 -OCH3 in C-3000 (δC 149.4). Zgornji rezultati kažejo na strukturo spojine3 kot kempferol-3-O- - 2"-feruloil glukozid. Kolikor nam je znano, spojina3 je bil prijavljen le kot aprodukt hidrolize 3-O- -(2-O-feruloil)-glukozil-7,40 -di-O- -glukozil kemferol, izoliran odAllium tuberosum[35]. Zato je struktura3 je bil pojasnjen kot novnaravna spojina.
Spojina11 je bil izoliran kot rumen prah. The1H NMR podatki (slika S19)prikazal niz AA0 BB0 signali vrste (δH 8.06 (2H, d, J {{0}},0 Hz, H-20 , H-60 ), 6.87 (2H, d, J {{0}}.0 Hz, H-30, H-50 )) v obroču B kemferola in singletni signal priδH 7.02 (2H, s, H-3000 , H-7000 ) galoilnega dela v aromatski regiji, kar je značilen signaldodeljenega flavonola. Anomerni protonski signal (δH 5.78 (1H, d, J {{0}},0 Hz, H-100 )) je pokazala, da je bila glikozilna povezava a-konfiguracija. Poleg tega nižje poljepremaknjeni protonski signal (5,27 (1H, t,J = 9,5 Hz, H-200 )) je predlagal, da galoilna skupinaje bil vezan na hidroksilno skupino C-200 ker bi ta premik lahko pripisalianizotropni vplivO-galoilni del [21]. The13Podatki C NMR (slika S20)je pokazal 26 resonanc, kar kaže na dodeljeni flavonolni glikozid. Signali ogljikaod C-200 na C-600 (δC 71.1, 72.7, 68.2, 76.0 in 60.1) nakazujejo prisotnost galaktozedel. Zato struktura spojine11 je bil potrjen kot kempferol-3-O- -200 - galoilgalaktozid. Čeprav sestavljeno11 je bil predhodno izoliran iz različnih virov,vključno zD. kaki[21,36], samo1H NMR in MS podatki so bili predhodno sporočeni. torejthe13Podatki C NMR so bili v tej študiji prvič sporočeni
2.3. Antioksidativne aktivnosti izoliranih spojin
Vse izolirane spojine so bile ovrednotene glede njihovih antioksidativnih učinkov z uporabo rapid onlinijska HPLC-ABTS analiza za določitev, katere spojine so prispevale k antioksidantuučinek listov kakija. spojine4–8, 11, 13, 15, in16 pokazal močan antioxidativne dejavnosti (slika4). Večina teh spojin sta bila kempferol in kvercetinizpeljanke, vendar nekatere izpeljanke (1–3, 9, 10, 12, in14) ni prikazal dejavnosti. Therazmerje struktura-aktivnost ni bilo v celoti ugotovljeno, vendar je bilo delno razkrito. notrizlasti kvercetin in kemferol z galoilnimi deli (7, 8, 11, in13) je bilo ugotovljeno, daimajo močne aktivnosti, vendar tisti s kumaroilnimi ali feruloilnimi deli (1–3 in16) nipokazati kakršne koli dejavnosti.
Slika 4.Aktivnosti odstranjevanja radikalov izoliranih spojin (4–8, 11, 13, 15, in16) so bili ocenjeni na spletuHPLC-ABTS test.
2.4. Kvantitativna analiza izoliranih spojin
Kvantitativna analiza vseh izoliranih spojin v ekstraktu, topnem v EtOAcje bilo izvedeno, da bi potrdili, da bi lahko bili antioksidativni učinki listov kakijaki jih povzročajo te aktivne spojine. Specifična metoda HPLC z detekcijo niza diod inza sočasno določanje je bil razvit evaporativni detektor sipanja svetlobe27 spojin. Vsebnost vseh izoliranih triterpenoidov je bila približno 5,9 odstotkaizvleček in od teh ekstrakt siarezinolne kisline (25), oleanolna kislina (26), in ursolakislina (27) je predstavljal pomemben delež, kot so poročali v prejšnjih študijah [7]. Thevsebnost flavonoidov je bila približno 5,4 odstotka, od tega aktivnih spojinje bilo 3,2 odstotka (tabela2). Zlasti vsebnost kemferola-3-O- -200 -galoilgalaktozid(9), kempferol-3-O- -2"-galoilglukozid (10), izokvercitrin (13) in kvercetin-3-O- -2"- galoilglukozid (15) so bili več kot 0,3 odstotka. Analitično metodo smo preverili z uporabo apreprost postopek validacije za zagotavljanje ustreznosti metode, ki se je izkazala za ustreznospecifičnost, linearnost, točnost in natančnost.
Vprašaj za več:
E-pošta:wallence.suen@wecistanche.com Whatsapp plus 86 15292862950
