Kemijske lastnosti mannoglukana iz Cistanche Deserticola

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-pošta:audrey.hu@wecistanche.com

1. Materiali

Uporabljene so bile oralne paste za konje dveh različnih proizvajalcev, ki so vsebovale 10 mg/g (A) oziroma 20 mg/g (B) ivermektina. Opravljen je bil kvantitativni test ivermektina in vsebnost je bila 104,4–107,7 odstotka deklarirane koncentracije.

2. Preskus raztapljanja

Test je bil izveden s Ph. Eur. aparat z lopaticami (Pharma Test, Heinberg, Nemčija), pri mešanju 75 rpm ali 50 rpm, pri 37 -0,5 C. Natrijev lavril sulfat (BDH Chemicals, Poole, Anglija) 0,5 odstotka (w /v) kot medij za raztapljanje smo uporabili vodno raztopino (900 ml). Pasto (4 g A ali 2 g B) smo dali v posodo z brizgo s kanilo (A) ali s kapljanjem vzorca na površino medija za raztapljanje (B). Po časovnih intervalih (15, 30, 45, 60 min in 2 h) smo odvzeli vzorec medija za raztapljanje (2 ml), filtrirali skozi stekleni filter in analizirali.

3. HPLC analiza

Določanje ivermektina je bilo izvedeno s spremenjeno metodo HPLC, kot je opisano v Ph. Eur. Analizirane raztopine smo razredčili z metanolom (1:10). Sistem HPLC je bil sestavljen iz oktadecilne kolone (250 -4 mm; 5 mm; Lichrospher RP-18; Merck), integratorja D-12500 A, detektorja UV-Vis L{{7} }, črpalka L-6200A (Merck-Hitachi, Darmstadt, Nemčija). Kot mobilno fazo smo uporabili mešanico acetonitril:metanol:voda (64:24:16) s pretokom 1,9 ml/min. Volumen vbrizganega vzorca je bil 20 ml, detekcija pa je bila izvedena pri 254 nm.

4. Študije topnosti

Dostopno snov smo stresali v tesno zaprtih steklenicah s primernim topilom (Tabela 1) 20 h pri 37 0,1 C. Suspenzijo smo filtrirali in filtrat po razredčitvi v metanolu analizirali s HPLC. .

5. Stabilnost v kisli raztopini

Raztopine ivermektina v HCl {{0}}.1 M smo hranili v tesno zaprtih steklenih vialah pri 20 C in 37 C. Kromatograme raztopin smo posneli pri t=0 in po 1, 2 in 6 urah. Izračunana je bila površina ivermektina (retenzijski čas 10,5 min) in dodatni vrhovi.

Reference

Smernice FDA za industrijo: SUPAC-SS nesterilne poltrdne dozirne oblike. Povečanje obsega in spremembe po odobritvi: kemija, proizvodnja in nadzor; testiranje sproščanja in vitro in dokumentacija o bioekvivalenci in vivo. Maj 1997. Smernice FIP za testiranje raztapljanja trdnih oralnih izdelkov (1997) Dissolute. Technol. 4: 5–14. Siewert M, Dressman J, Brown C, Shah VP (2003) Smernice FIP/AAPS za testiranje raztapljanja/in vitro sproščanja novih/posebnih dozirnih oblik, AAPS PharmSciTech, 4 (1) člen 7 Sodobni raziskovalni center za tradicionalno kitajsko medicino, šola farmacevtskih znanosti, Zdravstveni znanstveni center Pekinške univerze, Peking, Kitajska

Xiang mei Wu, Pengfei Tu Prejeto 13. februarja 2004, sprejeto 4. aprila 2004, prof. dr. Pengfei Tu, Sodobni raziskovalni center za tradicionalno kitajsko medicino, Fakulteta za farmacevtske vede, Zdravstveni znanstveni center Pekinške univerze, št. 38, Xueyuan Road , Haidian District, Peking 100083, Kitajska Pengfeitu@bjmu.edu.cn Pharmazie 59: 815–816 (2004)

Nov mannoglukan izCistanche deserticolaiz Kitajske je značilen. Spojina je odgovorna za blago stimulacijo z mitogenom povzročene proliferacije T in B limfocitov.

Cistanche deserticolaYC Ma je ​​holoparazit, ki raste na koreninah dvokaličnice Haloxylon ammodendron Bunge, ki je zelo razširjena na severozahodu Kitajske. Ker je pomemben tonik v orientalski medicini, so bile ugotovljene številne aktivne sestavine in farmakološke aktivnosti (Karasawa et al. 1986; Yoshizawa et al. 1990). Te lastnosti so lahko povezane z nekaterimi polisaharidnimi komponentamiCistancheki še niso raziskani. Mitogeni pektični polisaharidi in nevtralni polisaharidi so bili izolirani in karakterizirani izCistanche deserticolaiz Mongolije (Radna et al. 1996; Anna et al. 1997; Bozena et al. 1999). Tukaj poročamo o kemičnih lastnostih novega mannoglukana izCistanche deserticolaiz Kitajske, ki je odgovoren za blago stimulacijo z mitogenom povzročene proliferacije T in B limfocitov. Po steblihCistanche deserticolaYC Ma smo ekstrahirali s 95-odstotnim etanolom, za ekstrakcijo ostanka smo uporabili hladno destilirano vodo. Ekstrakt hladne vode smo oborili z EtOH, protein odstranili in dializirali, pri čemer smo dobili surovi polisaharid CCDP. Surovi polisaharid smo frakcionirali na koloni DEAE in koloni Sephadex G-150, da smo dobili polisaharid brez beljakovin (CDP-6), ki je vseboval glukozo (89,2 odstotka) in manozo (1{{58} }.4 odstotka ), od tega je bil povprečni Mr ocenjen na 6.8 -104. Polisaharid CDP-6 je pokazal [a 20 D 42 (c 1, H2O). Absolutne konfiguracije sladkorjev so bile določene z GC TMS (– )-2-butil glikozidov. CDP-6 je bil metiliran (Needs et al. 1993), hidroliziran, pretvorjen v alditol acetate in analiziran z GC in GC-MS (tabela). Ta rezultat skupaj s podatki o molskem razmerju iz analize metilacije je nakazal, da ima CDP-6 pretežno 1,6-povezan Glcp in hrbtenico 1,6- povezano v manjšem obsegu, razvejeno na O{{ 24}} manoze. Analiza metilacije dveh polimerov (CDP-6-1, CDP-6–2) iz delne hidrolize je potrdila, da ima CDP-6 ogrodje, sestavljeno iz 1,6-povezanih glukozilnih ostankov in 1,6-vezani manozilni ostanki, ki so na O-3 manoze substituirani z vejami, ki jih sestavljajo terminalni, 1,6- povezani glukozilni ostanki in 1,3,{{38} }vezanih manozilnih ostankov. Glede na molska razmerja in literaturo (Bozena et al. 1999; Bacon et al. 1996) je 13C NMR spekter CDP-6 pokazal signale zaradi anomernih ogljikov a-d-Glcp (C{{45 }} pri 98,4 ppm), bd-Map (C-1 pri 104,3–104,9 ppm) in ad-Map (C-1 pri 100,0 ppm). 1H NMR spekter CDP-6-2 v D2O je pokazal protonske signale, ki ustrezajo ad-Glcp (H-1 pri 4,94–4,95 ppm) in a-d-Map (H-1 pri 4,96–5,00 ppm). 13C NMR spekter CDP-6-2 v D2O je pokazal protonske signale, ki ustrezajo aD-Glcp (C-1 pri 98,6 ppm) in ad-Map (C-1 pri 98,4 ppm). Poroča se, da imajo mannoglukani 1,4-povezano glukopiranansko in 1,4-povezano manopiranonsko ogrodje (Radjabi Nassab et al. 1984; Tanabe et al. 2000). CDP-6 ima nekaj drugačnih strukturnih značilnosti s svojim a-1,6-povezanim Glcp in b-1,6-povezanim ogrodjem Map in je nadomeščen z vejami mannoglukana (slika). Da bi raziskali uporaboCistanche deserticolav ljudskem zdravilstvu so ovrednotili učinek CDP-6 na T- in B-celični sistem. Ugotovljeno je bilo, da blago stimulira z mitogenom povzročeno proliferacijo limfocitov T in B.

Eksperimentalno

1. Splošni postopki

Optična rotacija je bila izmerjena z avtomatskim polarimetrom W22-1S. IR spektre smo določili na spektrometru Perkin-Elmer 599B. GC analizo smo izvedli na instrumentu Agilent HP6890N, opremljenem z detektorjem FID. GC-MS smo izvedli na instrumentu Finnigan Trace GC-MS. Homogenost in Mr CDP-6 sta bila ocenjena iz umeritvene krivulje volumna elucije standardnih dekstranov, ki je bila izvedena na

aparat serije Agilent 1100 s kolono Shodex KS-805.1H NMR in 13C NMR spektre smo posneli z instrumentom INOVA-500. Vsebnost beljakovin smo analizirali po Bradfordovi metodi (Andre et al. 1975). Monosaharidi so bili analizirani glede na njihov alditol acetat, potem ko so bili hidrolizirani (2 M TFA, 2 h, 110 C), reducirani in acetirani. Hidrolizate smo analizirali s TLC na plošči s silikagelom, ki je vsebovala 5 odstotkov natrijevega dihidrogen fosfata v BuOH-EtOAc-izopropil alkoholu-HOAC––H2Opiridinu (3,5:10:6:3,5:3:3), sladkorje pa smo odkrili z razprševanjem z orcinolom. -H2SO4. Nastale alditol acetate smo analizirali z GLC z uporabo HP-5 kapilarne kolone (30 m 0,32 mm). CDP-6 je bil metiliran po metodi Ciucanu, čemur je sledila hidroliza, in je bil analiziran kot delno metilirane alditol acetate z GC-MS. Po delni hidrolizi smo produkte dializirali in ločili, pri čemer smo dobili dva polimera, CDP-6-1 in CDP-6–2.

2. Rastlinski material

Rastlino so avgusta 2001 nabrali v provinci Notranja Mongolija na Kitajskem, identificiral pa jo je Hu-Biao Chen, Oddelek za naravno medicino, Fakulteta za farmacevtske vede, Zdravstveni znanstveni center Univerze v Pekingu. Vzorec [E-1-(9)] te rastline je bil deponiran na Fakulteti za farmacevtske vede Univerze v Pekingu. 3. Ekstrakcija, izolacija in čiščenje polisaharida CDP-6 StebloCistanche deserticolaYC Ma (1500 g) ekstrahiramo s 95-odstotnim etanolom (6 L) pod refluksom. Posušen v etanolu netopen ostanek smo trikrat macerirali s hladno destilirano vodo na 12 ur. Ekstrakt hladne vode smo filtrirali in filtrat centrifugirali. Po obarjanju s štirimi volumni EtOH (mešanje in stajanje 24 h pri 4 C) smo dobili oborino (35,5 g). Protein v oborini smo odstranili s Savageovo metodo. Po raztapljanju v destilirani vodi smo ostanek (25,5 g) dializirali in liofilizirali (dobitek: 10,6 g). Surovi polisaharid (8 g) smo raztopili v destilirani vodi (100 mL, 8 % w/v) in ločili z uporabo DEAE kolone (70 5 cm, gradient 0–2 M NaCl, na 1,5 L). Dobimo z vodo eluirano frakcijo (600 mg). Vzorec (250 mg) smo očistili s kolonsko gelsko permeacijsko kromatografijo na kolonah Sephadex G- 150 (4 - 80 cm, 1600 mL, 5 mL na frakcijo). Frakcije CDP-6 (1500–1600 ml) so bile združene, dializirane in liofilizirane. Po razsoljevanju s Sephadexom G-25 (60 1 cm). CDP-6 (110 mg) je bil pridobljen in določen kot en vrh s HPSGC.

Zahvala:Avtor se zahvaljuje dr. Baomei Shao in prof. Xiaoming Gao, Šola za temeljne medicinske vede, Center za zdravstvene znanosti Pekinške univerze, za merjenje imunomodulatorne aktivnosti CDP-6.