Kitajska medicina Cistanche Kemična sestava in analiza sestavin v telesu Ⅲ

Poglavje 3 Kvantitativna analiza večkomponentnih komponent Cistanche deserticola na podlagi RPLC-HILIC-MS/MS

Kemična sestava tradicionalne kitajske medicine je zapletena in vsebuje različne spojine, kot so primarni in sekundarni metaboliti [55-561. Doseganje celovite in zanesljive analize kemičnih sestavin tradicionalne kitajske medicine (vključno s hidrofilnimi in hidrofobnimi komponentami) je še vedno velik tehnični problem. Poleg tega se vsebnost vsake komponente v tradicionalni kitajski medicini zelo razlikuje, s konvencionalnimi metodami tekoče masne spektrometrije pa je težko natančno količinsko opredeliti tako glavne komponente kot komponente v sledovih hkrati. 1571 Tradicionalno ločevanje z enim stolpcem ni dovolj in analiza spojin v sledovih v tradicionalni kitajski medicini bo omejena s konstantami. Zaradi interference spojin je pojav prekrivanja vrhov resen. Čeprav so bile za izboljšanje ločevanja kompleksnih matrik uporabljene različne napredne kromatografske tehnike, kot so kolone za kromatografijo jedra in lupine in submikronskih delcev, kolone za hidrofilno interakcijsko kromatografijo itd., je še vedno izziv doseči celovito ločevanje različnih spojin z uporabo en stolpec [58 -59. Kromatografija z več kolonami, ki združuje vsaj dva ortogonalna kromatografska mehanizma, kot je dvodimenzionalna LC, LC s preklapljanjem kolon in tandemska LC z dvema kolonama, je veljala za izvedljivo orodje, ki lahko znatno razširi pokritost metabolitov. Nobenega dvoma ni, da lahko dvodimenzionalni LC in LC s preklapljanjem kolon znatno povečata največjo zmogljivost 160). Vendar sta obe metodi odvisni od ventila, instrumenti so zapleteni in dolgotrajni, povezovalne cevi in ​​regulatorje pa je enostavno namestiti. Ostanki obstajajo in ti dve metodi lahko povzročita vrsto dejavnikov negotovosti, ki vodijo v kvantitativno neponovljivost1571. Čeprav reverzno-fazna hidrofilna interakcijska kromatografija-tandem (RPLC-HILIC) ne more bistveno povečati največje zmogljivosti, je oprema instrumenta preprosta, v povezovalnih ceveh in regulatorjih ni ostankov in še vedno lahko uresniči spremembo iz hidrofilnega v hidrofobnega. Celovito zadrževanje velikega števila široko polarnih spojin [61-66. Poleg tega se lahko način spremljanja več reakcij (MRM), ki je edinstven za trojni kvadrupolni (QgQ) masni spektrometer, uporabi kot druga dimenzija ločevanja za nadaljnje izboljšanje zmogljivosti ločevanja RPLC-HILIC. Skratka, RPLC-HILIC-MRM združuje inherentne prednosti RPLC, HILIC in MRM in naj bi postal zanesljiva analitična metoda.

KAKO ČASA TRAJA, DA CISTANCHE ZAČNE DELOVATI?

Vsebnost vsake komponente tradicionalne kitajske medicine se zelo razlikuje. V primerjavi z glavnimi komponentami ljudje posvečajo več pozornosti razvoju občutljivejših metod za popolno odkrivanje teh spojin v sledovih ali celo ultra-sledovih. Način MRM se pogosto priporoča zaradi njegove odlične občutljivosti in dobrega linearnega dinamičnega razpona167. Vendar pa je zaradi nasičenosti končnega pomnoževanja elektronov komore Q3 masnega spektrometra QqQ linearno območje običajno zoženo in zgornja meja kvantifikacije (ULOQ) ne more v celoti pokriti vsebnosti nekaterih glavnih spojin brez zanesljivega spremljanja te komponente v sledovih. Zato lahko zatiranje proizvodnje produktnih ionov razširi ULOO. Z uporabo oslabljenih parametrov spojine, kot so ionski pari,depotential(DP) inenergija trka(CE) lahko zmanjša število ionov ciljnega produkta in s tem razširi ULOQ[68-69]

Tradicionalna kitajska medicinaCistanči Herbaje posušeno mesnato steblo z luskastimi listiCistanches rastlina. Je ena izmed pogosto uporabljanih tradicionalnih kitajskih zdravil in je znana kot "puščavski ginseng". Feniletanoidni glikozidi so bili vedno vroča raziskovalna tema pri Cistanche deserticola, v zadnjih letih pa so bili dobro prepoznani tudi farmakološki učinki drugih hidrofilnih komponent, kot je manitol! 70-721. Vendar pa je v naši rutinski kvantitativni analizi CH vsebnost glavnih komponent, kot je nprechinaceaside,verbaskozidin manitola so bile včasih previsoke, da bi presegle merilno območje UV-detektorja ali detektorja izhlapevanja svetlobe (ELSD). Zato je z vidika splošnega vrednotenja kakovosti pomembno vzpostaviti analitično metodo, ki lahko hkrati spremlja hidrofilne in hidrofobne komponente ter natančno količinsko opredeli glavne komponente in komponente v sledovih.

Poskus v tem poglavju je vzpostavil zanesljivo metodo, primerno za analizo kompleksnih matrik - RPLC-HILIC-MS/MS tekočinsko masno spektrometrijo (serijsko sklopljena kromatografija s hidrofilno interakcijo z obrnjeno fazo in tandemsko masno spektrometrijo), ki je dosegla detekcijo 23 polarnosti v Cistanche deserticola . Istočasno ločevanje, analiza in določanje vsebnosti širokega spektra spojin (ki zajema hidrofilne in hidrofobne komponente); ob uporabi načina SMRM za zagotovitev ponovljivosti te metode, z uporabo ustreznih vrednosti CE in različnih ionskih parov za razširitev borovega stožca. ULOQ glavnih komponent, kot sta inulin in verbaskozid, omogoča hkratno kvantifikacijo glavnih komponent in komponent v sledovih v Cistanche deserticola, kar zagotavlja izvedljivo orodje za izboljšanje nadzora kakovosti Cistanche deserticola in pomoč pri doseganju razširjenega ciljnega metabolizma rastlin. Genomika.

Razdelek 1 Eksperimentalni materiali

1. Instrument

Tekočinski masni spektrometer HPLC-Qtap-MS je opremljen s Shimadzu HPLC (opremljen z 2 črpalkama LC-20ADxR, avtomatskim vzorčevalnikom SIL-20ACxR, UV detektorjem SPD-M20A, CTO-20AC termostat, spletno odplinjevanje DGU-20A3R Sestavljen je iz stroja, krmilnika CBM-20A, Shimadzu Corporation, Japonska) in masnega spektrometra SCIEX5500 Qtrap (ionski vir ESI, SCIEX, Foster City, CA, ZDA) . Zajem podatkov in izračun sta bila dokončana s programsko opremo Analyst Software1.6.2. Sistem za čiščenje ultračiste vode Mili-Q (Milipore Company, ZDA), elektronska analitična tehtnica Mettler ME204 (Mettler Toledo Company, Švica), ultrazvočni ekstraktor (230V, Bransonmodel 5510, Danburry, CT, ZDA).

2. Materiali in reagenti

Kolona Waters Acquity UPLC HSS T3 (2,1 x 100 mm, 1,8 μm), kolona Waters XBridge Amide (4,6 mm x 150 mm, 3,5 μm).polietereterketon(PEEK) cevovod (Agilent Company, ZDA). Metanol, acetonitril in mravljinčna kislina za masno spektrometrijo so bili kupljeni pri ThermoFisher (Pittsburgh, PA, ZDA), voda pa je bila ultračista voda Milli-Q (Millipore, Bedford, MA, ZDA), izdelana v laboratoriju. . Niacin (nikotinska kislina, cLogP, 0.799), jantarna kislina (cLogP, -0.526) so bili kupljeni pri Sigma-Aldrich Company (St. Louis, MO, ZDA): uridin (cLogP, -2.219), adenoidni adenozin (cLogP, -2.158), inozin (cLogP, {{10}}.106) in gvanozin (cLogP , -3.326) so bili kupljeni pri Beijing Xinjingke Biotechnology Co., Ltd. Salidrozid (cLogP -0.296), 6-deoksikatalpol (cLogP, -3.071), fenilalanin (cLogP, -1.556), 8-epiloganska kislina (cLogP, -2.366), manitol (cLogP, -2.046), saharoza (cLogP , -3.087), glurozid (cLogP, -1.757), alaschaniozid A (alashaniozid A, cLogP -0.971 ), ehinakozid (ehinakozid, cLogP, -1 .811), ferulinsko kislino (cLogP, 1,421), akteozid (cLogP, -0.890), izoakteozid (cLogP, -0.057) in pinorezinol- -D-glukopiranozid (cLogP, -0.384) je zagotovil ključni laboratorij za naravna in biomimetična zdravila pekinške univerze, cistanozid F (cistanozid F, cLogP, -2.211), kupljen pri Chengdu Mansite Biotechnology Co., Ltd., cistanozid A (cistanozid A, cLogP, -1.365), 2'-acetilakteozid (cLogP, -0.040) in likviritin apiozid (cLogP, -0.267) so bili kupljeni v Šanghaju Shidande Biotechnology Co., Ltd. in tubulozid A (tubulozidA, cLogP, 0,287) je bil kupljen pri Chengdu Weiqi Biotechnology Co., Ltd. Čistost vseh referenčnih snovi je bila testirana s HPLC-DAD-IT-TOF-MS in čistost je bila večja od 98 %. Vse vrednosti cLogP kontrolne snovi so bile izračunane s programsko opremo ChemBioDraw Ultra14.0 (CambridgeSoftCambridge, MA, ZDA).