Učinki Cistanche na spremembe ATPaze v jetrnih mitohondrijih podgan s septikemijo

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-pošta:audrey.hu@wecistanche.com

Wang Zhiqiang Yin Gang

Povzetek: Cilj:Za preučevanje spremembeATPazna aktivnost jetrnih mitohondrijev pri sepsiin učinekCistanchena njem.Metode:40 SD podgan je bilo naključno razdeljenih v skupino za lažno operacijo, 12-kontrolno skupino, 12-urno skupino za dajanje, 16-urno kontrolno skupino in 16-urno skupino za dajanje. Thesepsamodel je bil ponovljen z ligacijo in perforacijo cekuma (C LP) in primerjan. Stopnja preživetja skupine, srednji arterijski tlak (MAP), jetramitohondrijski ATPazaspremembe dejavnosti.Rezultati:Potem ko so podgane ponovile model sepse, jeATPazaaktivnost jetermitohondrijezmanjšala, stopnja 24-urnega preživetja pa se je znatno zmanjšala. TheATPazaaktivnost jetrnih mitohondrijev po dajanjuCistanchese je bistveno izboljšalo v primerjavi s kontrolno skupino (P<0.05), which="" was="" significantly="" positively="" correlated="" with="" the="" reduction="" of="" rat="" mortality.="">Zaključek:Zmanjšana mitohondrijaATPazna aktivnost pri sepsi, preobremenitev celic s kalcijem ter edem in nekroza so neposredni vzroki smrti priseptične podgane. Cistanche poveča aktivnost ATPazeje pomemben mehanizem za zdravljenjesepsa.

Ključne besede: Cistanche, cistanche sepsa mitohondrijski encim ATP

sepsaje klinično kritična bolezen. Čeprav so bili antibiotiki v zadnjih 30 letih posodobljeni, se stopnja umrljivosti zaradi sepse ni bistveno zmanjšala in je še vedno kar 50 odstotkov [1]. Zahodno protibakterijsko "odpravljanje zla" samo zdravljenje ne izboljša prognozesepsa.V patogenezi TKM sepsa sodi med »pravičnost pomanjkanja in zla«, zdravljenje mora temeljiti na načelu »okrepitve telesa« in »odprave zla«. Tradicionalna kitajska medicina je pokazala velik potencial pri zdravljenju sepse.sepsazapletena z odpovedjo več organov je temeljni vzrok za visoko stopnjo umrljivosti, poškodba celične strukture pa je mikroskopska patološka osnova odpovedi več organov [2]. Cistanche je tradicionalno kitajsko zdravilo za tonik, sodobne farmakološke študije so to pokazaleCistancheima učinek odpornosti na peroksidacijo membranskega estra in zaščito delovanja celic [3]. Funkcijamitohondrijsko energijometabolizem je ena od osnovnih funkcij celic in delovanjeATPazaje pomemben indikator za merjenje delovanjamitohondrijsko energijometabolizem. V tem poskusu smo opazovali spremembeATPazaaktivnost jetrnih celic vseptične podganein razmerje med učinkiCistancheo njem in umrljivosti podgan ter je želel zagotoviti teoretično podlago in učinkovito raziskovanje za klinično "okrepitveno" zdravljenjesepsa.

Cistanche

1. Materiali in metode

1.1 Reagenti

Cistancheje bilo kupljeno v Xinjiangu (identificiral ga je profesor Tan Defu z Medicinske fakultete Three Gorges University). Vzeli smo 200 g posušene Cistanche in jo dvakrat raztopili v destilirani vodi. Filtrat smo uparili in koncentrirali do koncentracije 1 g/ml. Natrijev pentobarbital (001104), China National Pharmaceutical Group Shanghai ChemicalReagentPodjetje;ATPazni reagent(20030108), Nanjing Jiancheng Bioengineering Research Institute.

1.2 Eksperimentalni živalski model in združevanje

40 podganjih samcev SD (kupljenih pri Eksperimentalnem živalskem centru Medicinskega kolidža Tongji, Univerze za znanost in tehnologijo Huazhong) je bilo naključno razdeljenih v 5 skupin: lažna operativna skupina (n=8), 12-urna kontrola skupina (n=8), 12-ura upravna skupina (n=8), 16-ura kontrolna skupina (n=8), 16-ura skrbniška skupina (n=8). Skupini z navideznimi operacijami in kontrolni skupini je bila dajana normalna fiziološka raztopina z gavažo, skupini za dajanje pa so dajali 1 g/ml Cistanche dvakrat na dan do 15 dni. Themodel sepseje bila ponovljena z ligacijo cekuma in perforacijo [4]. Pred operacijo so živali prosto pile vodo in bile 12 ur postene.

1.3 Določitev srednjega arterijskega tlaka

Jugularno veno smo vstavili z iglo za lasišče, za antikoagulacijo uporabili heparin, kanilirali levo skupno karotidno arterijo v aortni lok, lastnoročno izdelan kateter pa priključili na biološki večkanalni instrument in povprečnoarterijski tlak(MAP) je bil posnet. Poskusite, ko se MAP stabilizira.

1.4 Določanje aktivnosti mitohondrijske ATPaze

Vzemite 6 g podganjih jeter in jih hitro postavite v medij za ločevanje 0 stopinj [250 mmol saharoze, 2 mmol etoksi-etil piperazina 2-etil sulfonske kisline, 0,1 mmol etilendiamintetraocetne kisline, pH7,4], odprite in izperite nečistoče, ločite suspenzijo medija (1:10), homogenizirajte s teflonskim električnim homogenizatorjem (1200r/min), centrifugirajte pri 2000r/min 10 minut, zadržite supernatant, centrifugirajte pri 10000r /min 15 minut, zavrzite supernatant, vzemite oborino in jo suspendirajte v 2 ml ločevalnega medija, da dobitemitohondrijska suspenzija. Celoten postopek poteka pri 0 do 4 stopinjah. Za merjenje je bila uporabljena metoda za določanje fosforja [5].aktivnost ATPaze(komplet je bil kupljen pri Inštitutu za biološki inženiring Nanjing Jiancheng).

1.5 Statistična obdelava

Vsi eksperimentalni podatki so izraženi kot povprečje±standardni odklon (X±S), programska oprema SPSS pa izvaja enosmerno analizo variance in korelacijsko analizo.

Izvleček Cistanche

2. rezultati

2.1 Učinek zdravila Cistanche na srednji arterijski tlak in 24--urno smrtnost podgan

Krvni tlak kontrolne skupine se je znatno znižal 12 ur po ligaciji in perforaciji slepega cekuma in je postal bolj očiten po 16 urah. V primerjavi s skupino navideznih operacij je bila razlika precejšnja. Krvni tlak priZdravljenje cistanheskupina je bila izboljšana. Stopnja umrljivosti kontrolne skupine je bila znatno višja od stopnje umrljivosti v skupini z navidezno operacijo, stopnja umrljivosti v skupini za administracijo pa je bila bistveno nižja od stopnje ustrezne kontrolne skupine.

2.2 Vpliv Cistanche na aktivnost mitohondrijske ATPaze

Dejavnostinatrijeva-kalijeva ATP-aza, kalcijeva ATP-aza, magnezijeva ATP-aza in kalcij-magnezijeva ATP-azav skupini, ki je prejemala zdravilo, so bile bistveno višje od tistih v ustrezni kontrolni skupini in so dosegle raven skupine z navidezno operacijo, kar je pomembno pozitivno koreliralo z zmanjšanjemsmrtnost podgan (r=0.834) ).

Cistanche

3. Razprava

Na plus -K plus -ATPaza, znana tudi kot natrijeva-kalijeva črpalka, ima pomembno fiziološko vlogo pri ohranjanju fizioloških aktivnosti celice, telesne temperature in normalnega metabolizma ter uravnavanju ravnovesja ionov znotraj in zunaj celice.Pri sepsi, pride do hude disfunkcije natrijeve črpalke v notranji mitohondrijski membrani, ki povzročamitohondrijskiedem. TheNa plus -K plus -ATPencim je poškodovan, neravnovesjemitohondrijskikoncentracija ionov se poveča, encimska aktivnost presnove energije je zavrta, oskrba celic z energijo je izčrpana in nastane citotoksični edem. Hkrati se poveča prepustnost membrane, kar na koncu privede do celične smrti. V poskusu smo ugotovili, da mitohondrijskiNa plus -K plus -ATPazaaktivnost septičnih hepatocitov je bila znatno zmanjšana (P<0.01), indicating="" that="" the="" liver="" tissue="" is="" seriously="" damaged.="" after="" administration="" of="" cistanche,="" the="">Na plus -K plus -ATPazadejavnostmitohondrije jeterse je znatno povečalo (P<0.05), and="" the="" mortality="" of="">septične podganese je bistveno zmanjšalo. Eksperimentalni rezultati kažejo, da zmanjšanjeAktivnost Na plus -K plus -ATPazeje pomembno pozitivno povezana z razvojemsepse pri podganah. ZaviranjeAktivnost Na plus -K plus -ATPaze, celični edem in smrt, ki povzroči odpoved več organov, je lahko hiter razvoj sepse. Eden od pomembnih mehanizmov. V zadnjih letih je bilo veliko poročil oNa plus -K plus -ATPazain številne bolezni, ki so pritegnile pozornost kliničnih in osnovnih delavcev. Zelo pomembno je preučiti zakonitost sprememb v dejavnostiNa plus -K plus -ATPazain njegovo ureditev [6]. Malo je znanega o specifičnem mehanizmuNa plus -K plus -ATPazav razvoju in rezultatusepsa,in potrebne so nadaljnje raziskave.

Stabilnost intracelularnega kalcija in magnezija je potrebna materialna osnova za vzdrževanje odziva znotrajceličnega sproščanja in prenosa informacij [7]. V poskusu je zmanjšanjeAktivnost Ca2 plus -ATPazev kontrolni skupini neposredno vpliva na aktivnost kalcijeve črpalke, zmanjšanje aktivnosti kalcijeve črpalke pa oslabi vlogomitohondrijskikalcijeva črpalka za izločanje Ca2 plus iz celice in preobremenitev Ca2 plus notermitohondrije. Preobremenitev mitohondrijev s kalcijem je pomemben vzrok zamitohondrijskimotnje oksidativne fosforilacije, strukturne poškodbe in nekroza celic [8, 9]. Preobremenitev s Ca2 plus zmanjša potencial mitohondrijske membrane in vsebnost tkivnega ATP [10], izraba energije tkivnih celic pa je oslabljena. Ca2 plus lahko aktivira fosfolipazo v mitohondrijih in povzroči poškodbemitohondrijska membrana, uničijo normalno funkcijo sinteze ATP v mitohondrijih in ovirajo proizvodnjo mitohondrijske energije [11]. Motnje primitohondrijski metabolizem kalcijalahko neposredno vplivamitohondrijsko dihalno funkcijo, povzročamitohondrijski kisikmotnje privzema in oksidacije protonov v transportni verigi elektronov [12]. Hkrati lahko povečanje Ca2 plus poslabša poškodbe mitohondrijev zaradi peroksidacije estra [13]. Vse to neposredno ali posredno vodi v izpad energetske oskrbe celic in odmiranje tkiv in organov ter pospešuje razvoj patoloških sprememb pri sepsi. V poskusu smo tudi ugotovili, da dejavnosti ozM g2 plus -ATPaza in Ca2 plus -M g2 plus -ATPaza pri septičnih podganahso se tudi znatno zmanjšale.Mg2 plus -ATPaza in Ca2 plus -M g2 plus -ATPazasta pomembni snovi za vzdrževanje znotrajceličnega ravnovesja kalcija in magnezija. Widner je poročal, da je zmanjšanje intracelularnih magnezijevih ionov indukcijski dejavnik ireverzibilne poškodbe celic, razmerje Mg 2 plus / Ca2 plus pa je pomemben pokazatelj, ki odraža nepopravljivo poškodbo celic [14]. TheMg2 plus -ATPaza in Ca2 plus -M g2 plus -ATPazadejavnosti vCistanche-aplicirani skupini so bili povečani, A TP-aza je sulfhidrilaza inCistancheima antiperoksidacijski učinek membranskega estra, kar je lahko posledica povečanjaATPazaaktivnost Cistancheja Osnove kemije in Osnove farmakologije [15].

Pri sepsi, mitohondrijskimotnja energetske presnove, zmanjšanaAktivnost encima ATP, mitohondrijski edem, znotrajcelična preobremenitev s kalcijem in motnja ravnovesja kalcija in magnezija so neposredni vzroki za celično smrt sepse in odpoved več organov.Cistancheantagonizira peroksidacijo membranskega estra, poveča aktivnost ATPaze, vzdržuje znotrajcelično homeostazo kalcija in magnezija ter ščiti normalno delovanje celičnih funkcij.Cistancheje pomemben mehanizem za zmanjšanje umrljivostiseptične podgane. Dokazuje dobre možnosti zaCistanche pri zdravljenju sepse