Primerjava enkratnega in ponavljajočega se odmerjanja protivnetnih mezenhimskih stromalnih celic človeške popkovine v mišjem modelu polimikrobne sepse
Jul 07, 2023
Povzetek
Mezenhimske stromalne celice (MSC) izboljšajo predklinično sepso in s sepso povezano akutno ledvično poškodbo (SAAKI), vendar klinična preskušanja MSC z enim odmerkom niso pokazala močne učinkovitosti. Ta študija je preučevala imunomodulatorne učinke novega produkta MSC (CD362-izbrane MSC iz človeške popkovine [hUC-MSC]) pri mišjih modelih endotoksemije in polimikrobne sepse. Sprva so miši prejele intraperitonealni (ip) lipopolisaharid (LPS), čemur so sledili enkratni ip odmerki hUC-MSC ali nosilca. Nato so miši opravili ligacijo in punkcijo cekuma (CLP), čemur so sledili intravenski (iv) odmerki hUC-MSC po 4 urah ali 4 in 28 urah. Analize so vključevale serumske/plazemske teste biokemičnih indeksov, vnetnih mediatorjev in biomarkerja AKI NGAL; večbarvna pretočna citometrija peritonealnih makrofagov (LPS) in subpopulacij intrarenalnih imunskih celic (CLP) ter histologija/imunohistokemija ledvic (CLP). Po 72 urah po injekcijah LPS so hUC-MSC zmanjšali vnetne mediatorje v serumu in razmerje peritonealnih makrofagov M1/M2. Ponavljajoči se, vendar ne enkratni odmerki hUC-MSC, aplicirani 48 ur po CLP, so povzročili nižje serumske koncentracije vnetnih mediatorjev, nižji NGAL v plazmi in odpravo s sepso povezanega zmanjšanja intrarenalnih celic T in subpopulacij mieloidnih celic. Hierarhična analiza združevanja vseh 48-h analitov v serumu/plazmi je pokazala delno so-združevanje živali s ponavljajočimi se odmerki hUC-MSC CLP s skupino Sham, vendar ni razkrila izrazitega znaka odziva na terapijo. Ugotovljeno je bilo, da so ponavljajoči se odmerki CD362-izbranih hUC-MSC potrebni za modulacijo sistemskih in lokalnih imunskih/vnetnih dogodkov pri polimikrobni sepsi in SA-AKI. Spremenljivost med posamezniki in pomanjkanje učinka uporabe enkratnega odmerka MSC v modelu CLP sta skladna z dosedanjimi opažanji iz kliničnih preskušanj v zgodnji fazi.
Ključne besede
Akutna poškodba ledvic · Mezenhimske stromalne celice · Regenerativna medicina · Sepsa · Vnetje · Celična terapija
Kliknite tukaj za nakup dodatka Cistanche
Uvod
Za sepso je značilna smrtno nevarna disfunkcija organa zaradi nereguliranega odziva gostitelja na okužbo, ki jo povzročajo bakterijski, glivični, virusni in parazitski patogeni [1]. Vsako leto sepsa prizadene skoraj 50 milijonov ljudi po vsem svetu, kar pogosto povzroči hude sistemske posledice in poškodbe organov, vključno z akutno ledvično okvaro (AKI), ki povzroči približno 11 milijonov smrti [2, 3]. Mezenhimske stromalne celice (MSC) so multipotentne celice z obsežnimi imunomodulatornimi lastnostmi, ki jih je mogoče izolirati iz različnih tkiv [4]. Zdaj je dobro znano, da MSC ponuja potencialno terapijo za modulacijo bolezni za sepso in s sepso povezano AKI (SA-AKI) [5, 6]. Več nedavnih študij z uporabo modelov ligacije in punkcije cekuma pri miših in podganah (CLP), lipopolisaharidov (LPS) ali fekalnega peritonitisa je pokazalo, da lahko sistemsko dajanje MSC zmanjša vnetje, prepreči bakterijsko okužbo in izboljša obnovo poškodovanega tkiva v sepse [7–11], vključno s SA-AKI, [10, 12–15] z moduliranjem ravnovesja med vnetnimi in protivnetnimi stanji.
Nedavno preskušanje pri zdravih odraslih je potrdilo, da ima preventivno intravensko (iv) zdravljenje s 4 × 106 MSC/kg zgodnje imunomodulatorne učinke na odziv gostitelja na LPS [16]. Poleg tega je dajanje alogenskih MSC bolnikom s septičnim šokom (NCT01849237, NCT02421484 in NCT02328612) in s sepso povezanim sindromom akutne dihalne stiske (NCT01775774) pokazalo dobro varnost in prenašanje v kliničnih preskušanjih 1. faze [16–19]. Kljub tem spodbudnim rezultatom so Galstyan et al. prav tako poročali, da en sam odmerek iv MSC ni preprečil smrti zaradi disfunkcije organov, povezane s sepso, kar povečuje možnost, da bodo za pridobitev pomembne klinične koristi potrebni dodatni odmerki [17]. Nedavno preskušanje faze 2 brez sepse (NCT01602328), v katerem so bili enkratni odmerki alogenskega MSC intra-vrtinčno dostavljeni bolnikom s sterilno AKI po operaciji kardiopulmonalnega obvoda, prav tako ni pokazalo ugodnega učinka na disfunkcijo organov in preživetje bolnikov kljub obetavnemu rezultati predkliničnega preskušanja in 1. faze [20]. Ali bi ponavljajoče se odmerjanje med zgodnjim potekom sepse in drugih akutnih vnetnih sindromov lahko povečalo ali razširilo učinke MSC na modulacijo bolezni, ostaja razmeroma premalo raziskano na predklinični in translacijski ravni. Poleg tega nepopolno poznavanje mehanizma delovanja, odziva na odmerek in optimalnih kliničnih indeksov za dajanje MSC pri sepsi omejuje možnosti za načrtovanje uspešnih poskusov [5, 21, 22].
V trenutni študiji smo izvedli predklinično preiskavo protivnetnih učinkov CD362-izbranih MSC iz človeške popkovine (hUC-MSC) na mišjih modelih sepse. Ta hUC-MSC, izbran s površinskim markerjem, je nov terapevtski izdelek, ki je dokazal učinkovitost pri podganjih modelih bakterijske pljučnice in sepse, če so ga dajali zgodaj po začetku bolezni [23, 24]. Kot zdravilo v preskušanju klinične kakovosti (IMP) je hUC-MSC trenutno v preskušanju faze I/II pri bolnikih z zmerno do hudo sindromom akutne respiratorne stiske (ARDS) zaradi COVID-19 (NCT03042143) in pri več avtoimunske vnetne bolezni (POLARIZ). Naš cilj je bil prikazati protivnetni potencial enkratnih odmerkov hUC-MSC na mišjih modelih endotoksemije/polimikrobne sepse, ki jo povzroča LPS in CLP [25, 26], in pri slednjem ugotoviti, ali je drugo dajanje hUC-MSC med zgodnji potek bolezni je povzročil večje ali pogostejše ugodne učinke na sistemsko vnetje in organsko specifično poškodbo, kar ponazarja SA-AKI.
Cistanche tubulosa
Materiali in metode
1. Celice
Anti-CD362 plus -izbrani hUC-MSC so bili gojeni iz etično pridobljenega tkiva človeške popkovine, pridobljenega od Tissue Solutions Ltd. (Glasgow, UK). Primarna izolacija in ekspanzijske kulture CD362 plus hUC-MSC so bile izvedene, kot je opisano prej [19, 23, 27]. Kriokonzervirane viale (1 × 107 v 1 ml) anti-CD362 plus -izbranih hUC-MSC so bile odmrznjene in prenesene v 9 ml fiziološke raztopine s fosfatnim pufrom (PBS). Po analizi živih/mrtvih s tripan modrim barvilom ali avtomatiziranim celičnim števcem (NucleoCounter® NC-200™, Chemometec A/S, Danska) smo zahtevano število celic peletirali s centrifugiranjem pri 400 × g 5 minut in celice smo resuspendirali v 100 ul sterilne fiziološke raztopine za intraperitonealno (ip) ali iv injekcijo.
2. Postopki na živalih
Vsi postopki na živalih so bili izvedeni z licenco (št. 255/17) Etičnega odbora za poskuse na živalih Univerze v Barceloni in z dovoljenjem (AE19125/P082 in AE19125/P066) Regulativnega organa za zdravstvene izdelke, Irska, ter odobreni Odbor za etiko raziskav o oskrbi živali NUI Galway. Vsi postopki so bili izvedeni v licenciranih obratih za živali na NUI Galway in Univerzi v Barceloni.
Za LPS model endotoksemije so uporabili 10-12 teden stare samce miši C57BL/6 iz Charles River Ltd., Kent, Združeno kraljestvo. Miši smo injicirali ip s 5 ug/g LPS (LPS 0111:B4, kataloška št. L2630, Sigma Aldrich, UK) v 100 ul sterilne fiziološke raztopine. Miši so bile med študijo nameščene v skupinah po 3-5 miši/kletko v ločeno prezračenih kletkah. Posamezne ip injekcije 2, 5 × 105 hUC-MSC ali enake količine nosilca (sterilna fiziološka raztopina) so bile dane 4 ure po injekcijah LPS. Živali so spremljali vsake 4 ure do konca študije z uporabo liste za oceno stiske in podpornih ukrepov v skladu z vnaprej določenim protokolom. Humana evtanazija je bila izvedena na določeni eksperimentalni končni točki ali prej, če so živali presegle vnaprej določen prag stopnje resnosti. V času evtanazije so bili peritonealni eksudati zbrani za analizo s pretočno citometrijo s skrbnim lovljenjem 5 ml sterilnega PBS v peritonealno votlino in iz nje.
Ligacijo in punkcijo cekuma (CLP) smo izvedli na {{0}} tednov starih samcih miši C57BL/6 (Charles River Ltd., UK). Miši so prejele buprenorfin {{1{{20}}}}.1 mg/kg (Richter Pharma AG, Avstrija) subkutano 25-30 min pred posegom in bile anestezirane z 1.{{8 }} odstotkov izoflurana (s pretokom O2 0,5 L/min) na NUI Galway ali z Anesketinom (100 mg/mL; Dechra Veterinary Products SLU, Španija) in Rampun (20 mg/mL; Bayer, Nemčija) na Univerzi v Barceloni. Spodnjo polovico trebuha smo obrili in očistili s 4-odstotnim klorheksidinom ali povidon-jodom ter zarezali 1 cm navpično vzdolž srednje črte. Cekum je bil eksternaliziran in distalnih 50 odstotkov ligiranih s 4.0- 6.0 M šivi. Material slepega črevesa je bil izpuščen s prebadanjem 'skozi in skozi' z iglo 21-gauge in izločena je bila kapljica fekalne snovi, preden so slepo črevo ponovno vstavili v peritonealno votlino in zašili mišico in kožo. Lažno operirane miši so bile podvržene identičnemu postopku, vključno z odpiranjem peritoneuma in razkrivanjem črevesja, vendar brez ligacije in perforacije cekuma. Miši so prejele 0, 5 ml Gelofusina (Braun Melsungen AG, Nemčija) z ip vkapanjem pred zaprtjem rane. Pooperativna podpora je vključevala subkutano (sc) dajanje razredčenega buprenorfina vsakih 8-12 ur do vnaprej določenih končnih točk (48 ali 72 ur za posamezne poskuse). Dajanje 1 × 106 hUC-MSC ali enakovrednih volumnov nosilca (sterilne fiziološke raztopine) je bilo izvedeno iv preko repne vene 4 ure ali 4 in 28 ur po CLP. Pogosto spremljanje in podpora sta bila izvedena v skladu z etično odobrenim protokolom. Humana evtanazija je bila izvedena na določeni eksperimentalni končni točki ali prej, če so živali presegle vnaprej določen prag stopnje resnosti.
Celična odmerka za dva živalska modela, uporabljena za študijo, sta bila izbrana na podlagi predhodnih poročil o protivnetnih učinkih človeških MSC v podobnih modelih [9, 13, 14, 28, 29]. Velikosti skupin za študijo LPS so bile izbrane empirično na podlagi ustreznih predhodnih poročil za ta model [30, 31]. Velikosti skupin za študijo CLP so bile določene za primarni rezultat plazemske NGAL 24 ur po operaciji. Z uporabo podatkov iz pilotnega poskusa je bila izračunana velikost vzorca 9 živali na skupino, ki zagotavlja 90-odstotno moč ob predpostavki 5-odstotne stopnje pomembnosti in dvostranskega testa (http://www.3rs-reduction.co.uk/html /6__moč_in_vzorec_velikost.html). Za izbiro končne velikosti skupine n=10 je bila uporabljena pričakovana stopnja osiromašenja 10 odstotkov.
Izvleček Cistanche
3. Vzorčenje krvi in pridobivanje tkiv
Vzorci venske krvi do največjega volumna 20 μL so bili občasno odvzeti iz repnih in obraznih ven z aseptično tehniko z uporabo igel velikosti 25-21 in zbrani v epruvete, ki vsebujejo heparin (VWR International, Dublin, Irska). Končni vzorec krvi je bil odvzet s srčno punkcijo v času evtanazije. Serum smo zbrali v mikroepruvete s serumskim gelom in aktivatorjem strjevanja (Sarstedt, Wexford, Irska). Vzorce plazme in seruma smo pripravili s centrifugiranjem pri 10,000×g 10 minut. Vzorci seruma so bili shranjeni pri –80 stopinjah in nato analizirani na biokemične parametre v NationWide Laboratories (Lancashire, UK). Takoj po evtanaziji so secirali vranico, pljuča, ledvice in jetra.
4. Imunski testi
Koncentracija lipokalina, povezanega s plazemsko nevtrofilno želatinazo (NGAL), je bila kvantificirana z razvojnim kompletom mišjega Lipocalin-2/NGAL Duo-Set ELISA (R&D Systems, Minneapolis, MI, ZDA) v skladu s protokolom, ki ga predlaga proizvajalec (podrobnosti v dopolnilnih metodah). ). Za večkratno kvantifikacijo citokinov in kemokinov v serumu je bil uporabljen standardni 23-plex test mišjih citokinov Bio-Plex Pro (Bio-Rad, Accuscience) v skladu z navodili proizvajalca. Vzorce smo analizirali na sistemu Bioplex 200 multiplex ELISA (BioRad, Accuscience).
5. Polkvantitativno točkovanje odsekov ledvičnega tkiva
Obarvane dele ledvice smo analizirali na slep način s svetlobno mikroskopijo pri 40-kratni povečavi z uporabo mikroskopa s svetlim poljem Olympus BX43 (Olympus, Center Valley, PA) in s programsko opremo IS TCapture (Tucsen Photonics Co., Fujian, Kitajska). Za vsako ledvico je bilo zajetih dvajset neprekrivajočih se polj obarvanega odseka, pozitivno obarvano območje pa je zaslepljeni opazovalec ocenil za (A) tubularno dilatacijo, odlitek in nekrozo (PAS) in (B) izražanje NGAL [32]. Točkovanje je bilo izvedeno na 0-4 polkvantitativni lestvici točkovanja (podrobnosti v dopolnilnih metodah). Povprečni rezultati so bili izračunani za vsako ledvico, končni rezultati pa so bili izraženi kot skupinsko povprečje ± SD.
Cistanche v prahu
Diskusija
Sepsa in njen pogost zaplet SA-AKI sta velik izziv za javno zdravje zaradi nenehnega pomanjkanja učinkovitih zdravljenj in razočarajočih rezultatov kliničnih preskušanj v poznih fazah [2, 3]. Več nedavnih predkliničnih študij je poročalo o rezultatih, ki kažejo, da imajo MSC iz različnih virov in njihovi izdelki pozitivne učinke na resnost bolezni in preživetje v modelih sepse in AKI [7, 8, 11–15]. Kljub temu ostajajo klinične koristi MSC pri sepsi in SA-AKI nedokazane z le omejenimi podatki, ki so na voljo pri bolnikih [5]. Do danes so klinična preskušanja dokumentirala, da je enkratna intravenska infuzija MSC v okolju dajanja LPS, sepse in ARDS varna in izvedljiva [16–19], vendar očitno ne zmanjša smrti zaradi odpovedi organov, povezane s sepso [17]. . V tej študiji smo primerjali učinke iv dajanja z enim in dvojnim odmerkom značilnega terapevtskega izdelka za humane MSC (CD362- izbrani hUC-MSC) v mišjem CLP modelu polimikrobne sepse. Sprva smo v skladu z nedavno poročanimi rezultati za ta isti produkt MSC na modelih bakterijske pljučnice in sepse pri podganah [23, 24] potrdili možnost zgodnjega dajanja hUC-MSC za modulacijo sistemskega vnetja, ki ga povzroči LPS, pri miših. Pri mišjem CLP modelu polimikrobne sepse pa so naši rezultati pokazali, da enkratni odmerki hUC-MSC, dani iv 4 ure po indukciji fekalnega peritonitisa, niso imeli jasnega ugodnega učinka na sistemsko vnetje ali organsko specifično (ledvično) poškodbo tkiva. Nasprotno pa je dajanje drugega iv odmerka hUC-MSC 24 ur kasneje povzročilo večkratne signale izboljšanega vnetja in ledvične poškodbe 48 ur po začetku sepse. Kljub temu koristi režima dvojnega odmerka za preživetje niso bile dokazane. Naši rezultati poudarjajo pomen izvajanja in vivo študij terapevtskih izdelkov MSC na več modelih in poročanja o pozitivnih in negativnih predkliničnih rezultatih za boljše informiranje o kliničnem prevodu in načrtovanju preskušanja. Naši rezultati skupaj zagotavljajo tudi dokaze, da je mogoče omejeno ali odsotno korist zgodnjih shem z enim odmerkom protivnetnih produktov MSC v preskušanjih sepse vsaj delno premagati s ponavljajočim se odmerjanjem.
V modelu mišjega LPS je en sam zgodnji odmerek hUCMSC moduliral sistemske ravni prirojenih in adaptivnih vnetnih mediatorjev vsaj 72 ur, čeprav brez očitnega učinka na ocene resnosti in preživetje. Fenotipska analiza peritonealnih makrofagov je zagotovila dokaze, da je bilo dajanje hUC-MSC povezano s predvidenim lokalnim imunomodulatornim učinkom – nagnjenostjo makrofagov proti polarizaciji M2, kar je bilo povezano z razrešitvijo vnetne poškodbe in spodbujanjem obnove tkiva [29, 35] in je verjetno posredovan z navzkrižnim pogovorom MSC z rezidenčnimi mieloidnimi celicami [36]. Nedavne študije so dejansko poročale, da je lahko terapevtska imunomodulacija z MSC v primeru sepse odvisna od njihove fagocitoze mieloidnih celic (mononuklearnih fagocitov), ki so nato podvržene alternativni aktivaciji, kar ima za posledico proizvodnjo IL-10 in drugih parakrinih anti- vnetni mediatorji [7, 27, 37]. Čeprav bi bilo zanimivo ugotoviti, ali se koristi takšne imunomodulacije povečajo s ponavljajočimi se odmerki hUC-MSC po dajanju LPS, smo sklepali, da bi imel eksperimentalni model, ki bi bolje odražal razvijajočo sepso, večji klinični pomen. Tako smo po potrjeni biološki aktivnosti hUC-MSC pri miših z dajanjem LPS uporabili mišji model CLP za karakterizacijo protivnetnih učinkov, povezanih s ponavljajočim se odmerjanjem in kvantifikacijo ledvično specifičnih učinkov hUC-MSC v okolju polimikrobne sepse. in SA-AKI. V naših rokah je bil ta model povezan z zmerno hudo sepso (približno 70-odstotno, 50-odstotno in 40-odstotno preživetje po 48, 96 oziroma 168 urah pri nezdravljenih živalih) brez očitne odpovedi jeter in ledvic. Naša opažanja za model, vključno s stopnjami umrljivosti in trendi serumskih jetrnih parametrov in albumina, so v skladu z zelo obsežnim profiliranjem mišjega CLP, o katerem so poročali Li et al. [38], ki prav tako dokumentira znižano telesno temperaturo, krvni tlak in srčni utrip v prvih 48 urah po CLP. Zanimivo, medtem ko Li et al. dokumentirano povečan serumski kreatinin in dušik sečnine v krvi 8 in 16 ur po CLP, njihovi rezultati kažejo, da so ti ledvični funkcionalni biomarkerji padli na normalno (ali pod normalno) raven do 48 ur – morda odražajo razvijajoče se učinke spremenjenega metabolizma/mišične mase na teh biomarkerjev, ko model napreduje [38]. V skladu s tem je analiza seruma/plazme in ledvičnega tkiva po 48 urah pokazala pomembno sistemsko vnetje in odziv na poškodbo ledvic brez očitnih dokazov o ishemični poškodbi/nekrozi. Te zadnje analize so zagotovile najjasnejši dokaz za modulacijski učinek režima dvojnega odmerka hUCMSC na resnost polimikrobne sepse v primerjavi z dajanjem enkratnega odmerka, ki je bil v nasprotju z rezultati, o katerih so nedavno poročali na modelu CLP pri podganah [24], nerazločljiv. iz skupine CLP, zdravljene s fiziološko raztopino, pri vseh pregledanih indeksih. Zlasti klinično pomemben biomarker AKI, NGAL, se je v tem modelu izkazal za dragocenega diskriminatorja resnosti sepse in učinka zdravljenja in je lahko pomemben biomarker za prihodnja klinična preskušanja celičnih terapij sepse in SA-AKI [33, 39]. ].
Naši rezultati o učinku iv MSC na preživetje pri modelih sepse pri majhnih živalih so v nasprotju z nekaterimi drugimi poročili [28, 40], predvsem pa so v skladu z opaženimi učinki alogenskih MSC v kliničnih preskušanjih pri ljudeh [5, 16– 18, 41]. V zvezi s tem bi izpostavili potencialno vlogo pristranskosti objave – natančneje selektivne objave rezultatov, ki odražajo pozitivne učinke – kot pomembno gonilo nerealnih pričakovanj glede učinkovitosti shem MSC z enim odmerkom in drugih naprednih terapij v najzgodnejših fazah kliničnega prevod [42]. Sun in drugi so v nedavni metaanalizi 29 študij na živalih o učinkovitosti terapij z MSC pri sepsi dejansko zaznali znatno pristranskost objave in pomanjkanje jasnosti glede optimalnega odmerka celic med temi predkliničnimi poročili [43]. Kljub temu poročamo tudi o značilnih pozitivnih ugotovitvah, ki lahko pomagajo pri napredovanju translacijskih ciljev za UC-MSC pri sepsi ali drugih sistemskih in organsko specifičnih vnetnih boleznih, kot so AKI, bolezni jeter ali dihal. V obeh modelih te molekularne spremembe kažejo na kompleksne interakcije hUC-MSC z imunskim odzivom Th1 in Th2. Takšni učinki na aktivacijo celic T-efektorja in ravnotežje fenotipa T-pomočnika lahko igrajo ključno vlogo pri modulaciji akutne faze sepse, saj nediskriminatorna, neregulirana aktivacija imunskih efektorjev, ki povzroči visoke ravni krožečih citokinov, prispeva k odpovedi več organov [44]. in v primeru T-celic lahko sledi razširjena apoptoza in posledične imunske pomanjkljivosti [45]. Pokazalo se je tudi, da lahko dajanje MSC zmanjša lokalizirano vnetje tkiva z uravnavanjem homeostaze citokinov in zmanjšanjem prometa imunskih celic v organe [44]. V skladu s tem je naša kvantitativna analiza vrste populacij intrarenalnih imunskih celic 48 ur po sepsi, ki jo povzroča CLP, razkrila pomanjkljivosti, ki jih povzroča sepsa, ki vplivajo tako na prirojene kot adaptivne efektorje, vključno z izgubo dvojno negativnih celic T, o katerih so nedavno poročali biti zgodnji odziv na AKI [46]. Predvsem pri živalih, zdravljenih z dvojnim, vendar ne z enim odmerkom hUC-MSC, so obstajali dokazi o ponovnem izčrpavanju intrarenalnih imunskih celic. Ker so bili podobni trendi opaženi tudi v pljučih in vranici, naši rezultati kažejo na možnost ponavljajočih se iv odmerkov MSC za splošno izboljšanje izčrpanosti imunskih celic iz nelimfoidnih in limfoidnih organov – vidik sepse, ki je bil povezan s kasnejšo smrtnostjo zaradi sekundarna okužba [47, 48]. Na podlagi dodatnega opazovanja povečane celične smrti med intrarenalnimi celicami CD45 plus pri nezdravljenih živalih CLP je verjetno, da to odraža neposredne ali posredne učinke hUC-MSC za zmanjšanje mitohondrijske disfunkcije in proapoptotičnega signaliziranja [49–51]. Kljub temu bodo potrebni bolj osredotočeni poskusi, da bi v celoti razjasnili mehanizme, s katerimi sistemsko dajanje MSC ohranja število mieloidnih in/ali limfoidnih celic pri sepsi, in da bi ugotovili, ali jih je mogoče terapevtsko izkoristiti.
Cistanche kapsule
Glede na inherentno variabilnost, ki jo mi in drugi opazujemo pri posameznih rezultatih za mišji model CLP, smo domnevali, da bi hierarhična analiza združevanja kvantitativnih odčitkov za vrsto krožečih mediatorjev, povezanih z vnetjem, po 48 urah pomagala bolje opredeliti značilen "podpis odziva" med živalmi, zdravljenimi z MSC. Čeprav se je 60 odstotkov skupine z dvojnim odmerkom združilo v vzorec, ki jih je ločil od večine skupin z enim odmerkom in nezdravljenih skupin ter je bil bližje navidezni skupini, ni bilo mogoče prepoznati zelo jasnega večanalitnega profila modulacije bolezni. Pristop analize glavnih komponent (PCA) je dal podoben zaključek (podatki niso prikazani). Priznati je treba, da podatkov o živalih, ki niso uspele preživeti 48 ur, ni bilo mogoče pridobiti in je možno, da bi analize na eni ali več zgodnejših časovnih točkah zagotovile bolj značilno ločitev med odzivnimi/neodzivnimi. Kljub temu ta analiza poudarja kompleksnost variacij med posamezniki, ki so neločljivo povezane z živalskimi modeli sepse in celičnimi terapijami, tudi ob upoštevanju načel dobrega eksperimentalnega načrta [52, 53], in ki odraža podobne izzive, s katerimi se srečujemo pri klinični uporabi nove terapije za sepso [18, 20, 41, 54, 55].
Treba je priznati nekatere omejitve študije. Najprej smo se osredotočili na raziskovanje in vivo učinkov izbranega hUC-MSC, izbranega za CD362-, saj je ta celični izdelek v kliničnih preskušanjih za druge bolezni, ki jih povzročajo vnetja, vključno z ARDS,-19-povezanim s COVID-om. Ta zasnova študije je onemogočila nadaljnji vpogled v primerjalne učinke celičnega produkta pri sepsi in SA-AKI, testiranega z neizbranimi hUC-MSC ali z MSC, pridobljenimi iz kostnega mozga ali drugih tkiv. Drugič, ker so bili uporabljeni odmerki celic izbrani na podlagi predhodnih študij protivnetnih učinkov človeških MSC pri miših, ni mogoče ugotoviti, ali večkratno dajanje večjega ali manjšega števila celic zagotavlja večjo korist. Nazadnje, ker so bile velikosti skupin za poskuse modela CLP prilagojene za obravnavo učinkov hUC-MSC na sistemski vnetni biomarker resnosti sepse/SA-AKI, je možno, da bi večje velikosti skupin jasneje opredelile učinke ponavljajočih se odmerkov na preživetje. Medtem ko ta vprašanja dodatno poudarjajo potrebo po zaporednih predkliničnih poskusih, ki se čim bolj držijo ključnih parametrov, potrebnih za optimalno zasnovo kliničnega preskušanja, rezultati, ki jih tukaj predstavljamo, podpirajo nadaljnjo osredotočenost na režime večodmernih protivnetnih MSC pri sepsi in SA-AKI.
Reference
1. Singer, M., Deutschman, CS, Seymour, CW, Shankar-Hari, M., Annane, D., Bauer, M., Bellomo, R., Bernard, GR, Chiche, JD, Coopersmith, CM, Hotchkiss , RS, Levy, MM, Marshall, JC, Martin, GS, Opal, SM, Rubenfeld, GD, van der Poll, T., Vincent, JL, in Angus, DC (2016). Tretja mednarodna konsenzna definicija za sepso in septični šok (sepsa-3). Journal of the American Medical Association, 315(8), 801–810. https://doi.org/10.1001/jama.2016.0287
2. Hoste, EA, Bagshaw, SM, Bellomo, R., Cely, CM, Colman, R., Cruz, DN, Edipidis, K., Forni, LG, Gomersall, CD, Govil, D., Honore, PM, Joannes-Boyau, O., Joannidis, M., Korhonen, AM, Lavrentieva, A., Mehta, RL, Palevsky, P., Roessler, E., Ronco, C., et al. (2015). Epidemiologija akutne ledvične poškodbe pri kritično bolnih bolnikih: večnacionalna študija AKI-EPI. Intenzivna medicina, 41 (8), 1411–1423. https://doi.org/ 10.1007/s00134-015-3934-7
3. Rudd, KE, Johnson, SC, Agesa, KM, Shackelford, KA, Tsoi, D., Kievlan, DR, Colombara, DV, Ikuta, KS, Kissoon, N., Finfer, S., Fleischmann-Struzek, C ., Machado, FR, Reinhart, KK, Rowan, K., Seymour, CW, Watson, RS, West, TE, Marinho, F., Hay, SI, et al. (2020). Globalna, regionalna in nacionalna pojavnost in umrljivost sepse, 1990-2017: Analiza za študijo globalnega bremena bolezni. Lancet, 395 (10219), 200–211. https://doi. org/10.1016/S0140-6736(19)32989-7
4. Arutyunyan, I., Elchaninov, A., Makarov, A., & Fatkhudinov, T. (2016). Popkovina kot prospektivni vir za terapijo na osnovi mezenhimskih matičnih celic. Mednarodna matična celica, 2016, 6901286. https://doi.org/10.1155/2016/6901286
5. Fazekas, B., & Grifn, MD (2020). Terapije na osnovi mezenhimskih stromalnih celic za akutno poškodbo ledvic: napredek v zadnjem desetletju. Kidney International, 97 (6), 1130–1140. https://doi.org/10. 1016/j.kint.2019.12.019
6. Hickson, LJ, Herrmann, SM, McNicholas, BA, & Grifn, MD (2021). Napredek v smeri klinične uporabe mezenhimskih stromalnih celic in drugih regenerativnih terapij, ki modulirajo bolezni: Primeri s področja nefrologije. Ledvica 360, 2 (3), 542–557. https://doi.org/10.34067/kid.0005692020
7. Weiss, ARR, Lee, O., Eggenhofer, E., Geissler, E., Korevaar, SS, Soeder, Y., Schlitt, HJ, Geissler, EK, Hoogduijn, MJ, & Dahlke, MH (2020). Diferencialni učinki toplotno inaktiviranih msc s pomanjkanjem sekretoma in presnovno aktivnih msc pri sepsi in alogenski presaditvi srca. Matične celice, 38 (6), 797–807. https://doi.org/10.1002/stem.3165
8. Jerkic, M., Gagnon, S., Rabani, R., Ward-Able, T., Masterson, C., Otulakowski, G., Curley, GF, Marshall, J., Kavanagh, BP, & Lafey, JG (2020). Stromalne mezenhimske celice človeške popkovine delno ublažijo sistemsko sepso s povečanjem ubijanja bakterij peritonealnih makrofagov z indukcijo hemeoksigenaze-1 pri podganah. Anesteziologija, 132 (1), 140–154. https://doi.org/10.1097/ ALN.0000000000003018
9. Wu, KH, Wu, HP, Chao, WR, Lo, WY, Tseng, PC, Lee, CJ, Peng, CT, Lee, MS, in Chao, YH (2016). Ekspresija časovne serije signalizacije receptorja 4, podobnega cestnini, pri septičnih miših, zdravljenih z mezenhimskimi matičnimi celicami. Šok, 45 (6), 634–640. https://doi. org/10.1097/SHK.0000000000000546
10. Chang, CL, Leu, S., Sung, HC, Zhen, YY, Cho, CL, Chen, A., Tsai, TH, Chung, SY, Chai, HT, Sun, CK, Yen, CH in Yip , HK (2012). Vpliv mezenhimskih matičnih celic, pridobljenih iz apoptotičnega maščobnega tkiva, na zmanjšanje poškodb organov in zmanjšanje umrljivosti pri sindromu sepse pri podganah, ki ga povzročita punkcija in vezava cekuma. Journal of Translational Medicine, 10, 244. https://doi. org/10.1186/1479-5876-10-244
11. Hall, SR, Tsoyi, K., Ith, B., Padera Jr., RF, Lederer, JA, Wang, Z., Liu, X., & Perrella, MA (2013). Mezenhimske stromalne celice izboljšajo preživetje med sepso v odsotnosti heme oksigenaze-1: pomen nevtrofilcev. Matične celice, 31 (2), 397–407. https://doi.org/10.1002/stem.1270
12. Zhang, G., Zou, X., Huang, Y., Wang, F., Miao, S., Liu, G., Chen, M., in Zhu, Y. (2016). Zunajcelični vezikli, pridobljeni iz mezenhimskih stromalnih celic, ščitijo pred akutno poškodbo ledvic z antioksidacijo s povečanjem aktivacije nrf2/are pri podganah. Raziskave ledvic in krvnega tlaka, 41 (2), 119–128. https://doi.org/10. 1159/000443413
13. Luo, CJ, Zhang, FJ, Zhang, L., Geng, YQ, Li, QG, Hong, Q., Fu, B., Zhu, F., Cui, SY, Feng, Z., Sun, XF & Chen, XM (2014). Mezenhimske matične celice izboljšajo akutno poškodbo ledvic, povezano s sepso, pri miših. Šok, 41 (2), 123–129. https://doi. org/10.1097/SHK.0000000000000080
14. Condor, JM, Rodrigues, CE, Sousa Moreira, R., Canale, D., Volpini, RA, Shimizu, MH, Camara, NO, Noronha Ide, L., & Andrade, L. (2016). Zdravljenje s človeškimi mezenhimskimi matičnimi celicami, pridobljenimi iz Whartonovega želeja, zmanjša s sepso povzročeno poškodbo ledvic, poškodbo jeter in endotelijsko disfunkcijo. Translacijska medicina izvornih celic, 5(8), 1048–1057. https://doi.org/10.5966/sctm. 2015-0138
15. Zullo, JA, Nadel, EP, Rabadi, MM, Baskind, MJ, Rajdev, MA, Demaree, CM, Vasko, R., Chugh, SS, Lamba, R., Goligorsky, MS, in Ratliff, BB (2015) ). Sekretom endotelijskih matičnih celic, vgrajenih v hidrogel, in mezenhimskih matičnih celic daje navodila za polarizacijo makrofagov pri endotoksemiji. Translacijska medicina matičnih celic, 4(7), 852–861. https://doi.org/10. 5966/sctm.2014-0111
16. Perlee, D., van Vught, LA, Scicluna, BP, Maag, A., Lutter, R., Kemper, EM, van 't Veer, C., Punchard, MA, Gonzalez, J., Richard, MP , Dalemans, W., Lombardo, E., de Vos, AF, & van der Poll, T. (2018). Intravenska infuzija človeških maščobnih mezenhimskih matičnih celic spremeni odziv gostitelja na lipopolisaharid pri ljudeh: randomizirano, enojno slepo, s placebom nadzorovano preskušanje z vzporednimi skupinami. Matične celice, 36 (11), 1778–1788. https:// doi.org/10.1002/stem.2891
17. Gennadiy Galstyan, PM, Parovichnikova, E., Kuzmina, L., Troitskaya, V., Gemdzhian, E., & Savchenko, V. (2018). Rezultati pilotnega randomiziranega ruskega kliničnega preskušanja mezenhimskih stromalnih celic v enem središču pri bolnikih s hudo nevtropenijo in septičnim šokom (RUMCESS). International Journal Blood Research and Disorders, 5(1), 33. https://doi.org/10.23937/2469-5696/1410033
18. McIntyre, LA, Stewart, DJ, Mei, SHJ, Courtman, D., Watpool, I., Granton, J., Marshall, J., Dos Santos, C., Walley, KR, Winston, BW, Schlosser, K., Fergusson, DA, & Canadian Critical Care Trials Group, & Canadian Critical Care Translational Biology Group. (2018). Celična imunoterapija za septični šok. Klinično preskušanje faze I. American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine, 197(3), 337–347. https://doi.org/10. 1164/rccm.201705-1006OC
19. Matthay, MA, Calfee, CS, Zhuo, H., Thompson, BT, Wilson, JG, Levitt, JE, Rogers, AJ, Gotts, JE, Wiener-Kronish, JP, Bajwa, EK, Donahoe, MP, McVerry , BJ, Ortiz, LA, Exline, M., Christman, JW, Abbott, J., Delucchi, KL, Caballero, L., McMillan, M., et al. (2019). Zdravljenje z alogenskimi mezenhimskimi stromalnimi celicami za sindrom zmerne do hude akutne dihalne stiske (študija START): randomizirano varnostno preskušanje faze 2a. Lancet Respiratory Medicine, 7 (2), 154–162. https://doi.org/10. 1016/S2213-2600(18)30418-1
20. Swaminathan, M., Staford-Smith, M., Chertow, GM, Warnock, DG, Paragamian, V., Brenner, RM, Lellouche, F., FoxRobichaud, A., Atta, MG, Melby, S., Mehta, RL, Wald, R., Verma, S., Mazer, CD, in raziskovalci, A.-A. (2018). Alogenske mezenhimske matične celice za zdravljenje AKI po operaciji srca. Journal of American Society of Nephrology, 29(1), 260–267. https://doi.org/10.1681/ASN.2016101150
21. Gotts, JE in Matthay, MA (2018). Celična terapija pri sepsi. Korak bližje. American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine, 197(3), 280–281. https://doi.org/10.1164/rccm. 201710-2068ED
22. Griffin, MD, & Swaminathan, S. (2020). Uvodnik: Inovativna biološka zdravila in zdravila za zdravljenje ledvičnega vnetja. Frontiers in Pharmacology, 11, 38. https://doi.org/10.3389/fphar.2020.00038
23. Horie, S., Masterson, C., Brady, J., Loftus, P., Horan, E., O'Flynn, L., Elliman, S., Barry, F., O'Brien, T. , Lafey, JG in O'Toole, D. (2020). CD362(plus) mezenhimske stromalne celice iz popkovine za npr. coli pljučnica: Vpliv režima odmerjanja, prehoda, kriokonzervacije in antibiotične terapije. Raziskovanje in terapija matičnih celic, 11(1), 116. https://doi.org/10.1186/s13287-020-01624-8
24. Gonzalez, H., Keane, C., Masterson, CH, Horie, S., Elliman, SJ, Higgins, BD, Scully, M., Lafey, JG, in O'Toole, D. (2020). Mezenhimske stromalne celice CD362(plus), pridobljene iz popkovine, ublažijo polimikrobno sepso, povzročeno z ligacijo in punkcijo cekuma. Mednarodni časopis za molekularne znanosti, 21(21). https://doi.org/10.3390/ijms21218270
25. Lewis, AJ, Seymour, CW, in Rosengart, MR (2016). Trenutni mišji modeli sepse. Kirurške okužbe, 17 (4), 385–393. https://doi.org/10.1089/sur.2016.021
26. Remick, DG, & Ward, PA (2005). Vrednotenje endotoksinskih modelov za preučevanje sepse. Šok, 24 (Suppl 1), 7–11. https:// doi.org/10.1097/01.shk.0000191384.34066.85
27. de Witte, SFH, Luk, F., Sierra Parraga, JM, Gargesha, M., Merino, A., Korevaar, SS, Shankar, AS, O'Flynn, L., Elliman, SJ, Roy, D. , Betjes, MGH, Newsome, PN, Baan, CC in Hoogduijn, MJ (2018). Imunomodulacija s terapevtskimi mezenhimskimi stromalnimi celicami (MSC) se sproži s fagocitozo msc s strani monocitnih celic. Matične celice, 36 (4), 602–615. https:// doi.org/10.1002/stem.2779
28. Zhao, X., Liu, D., Gong, W., Zhao, G., Liu, L., Yang, L. in Hou, Y. (2014). Ligandi receptorja 3, podobni tollu, poli(I:C), izboljšajo imunosupresivno delovanje in terapevtski učinek mezenhimskih matičnih celic na sepso z zaviranjem mir-143. Matične celice, 32 (2), 521–533. https://doi.org/10.1002/stem.1543
29. Nemeth, K., Leelahavanichkul, A., Yuen, PS, Mayer, B., Parmelee, A., Doi, K., Robey, PG, Leelahavanichkul, K., Koller, BH, Brown, JM, Hu, X., Jelinek, I., Star, RA, & Mezey, E. (2009). Stromalne celice kostnega mozga ublažijo sepso prek od prostaglandina E(2) odvisnega reprogramiranja gostiteljskih makrofagov, da povečajo njihovo proizvodnjo interlevkina-10. Nature Medicine, 15 (1), 42–49. https://doi.org/10.1038/nm.1905
30. Fletcher, AL, Elman, JS, Astarita, J., Murray, R., Saeidi, N., D'Rozario, J., Knoblich, K., Brown, FD, Schildberg, FA, Nieves, JM, Heng , TS, Boyd, RL, Turley, SJ, & Parekkadan, B. (2014). Presaditve fibroblastičnih retikularnih celic bezgavk kažejo močno terapevtsko učinkovitost pri mišji sepsi z visoko smrtnostjo. Science Translational Medicine, 6(249), 249ra109. https:// doi.org/10.1126/scitranslmed.3009377
31. Gonzalez-Rey, E., Anderson, P., Gonzalez, MA, Rico, L., Buscher, D., & Delgado, M. (2009). Matične celice odraslega človeka, pridobljene iz maščobnega tkiva, ščitijo pred eksperimentalnim kolitisom in sepso. Gut, 58 (7), 929–939. https://doi.org/10.1136/gut.2008. 168534
32. Kaucsar, T., Godo, M., Revesz, C., Kovacs, M., Mocsai, A., Kiss, N., Albert, M., Krenacs, T., Szenasi, G. in Hamar, P. (2016). Razmerje lipokalina, povezano z nevtrofilno želatinazo urina/plazme, je občutljiv in specifičen marker subklinične akutne ledvične poškodbe pri miših. PLoS One, 11 (1), e0148043. https://doi.org/10.1371/journ al.pone.0148043
33. Park, HK, Kim, S., Lee, S.-S., Kim, H.-J., Ahn, H.-S., Song, JY, Um, T.-H., Cho, C .-R., Jung, H., Koo, H.-K., Sim, YS, Song, J.-U., & Park, J.-H. (2015). Ali plazemski NGAL pomaga pri napovedovanju akutne ledvične poškodbe pri bolnikih s sepso?: Sistematični pregled in meta-analiza. European Respiratory Journal, 46 (suppl 59), PA2148. https://doi.org/10.1183/13993003.congr ess-2015.PA2148
34. Koeze, J., van der Horst, ICC, Keus, F., Wiersema, R., Dieperink, W., Kootstra-Ros, JE, Zijlstra, JG, & van Meurs, M. (2020). Lipokalin, povezan s plazemsko nevtrofilno želatinazo, pri sprejemu v enoto intenzivne nege kot napovedovalec napredovanja akutne ledvične poškodbe. Clinical Kidney Journal, 13 (6), 994–1002. https://doi. org/10.1093/ckj/sfaa002
35. Lee, KY (2019). M1 in M2 polarizacija makrofagov: mini pregled. Medicinsko biološka znanost in inženirstvo, 2(1), 1–5. https://doi.org/10.30579/mbse.2019.2.1.1
36. Eggenhofer, E., Luk, F., Dahlke, MH, & Hoogduijn, MJ (2014). Življenje in usoda mezenhimskih izvornih celic. Frontiers in Immunology, 5, 148. https://doi.org/10.3389/fmmu.2014.00148
37. Luk, F., de Witte, SF, Korevaar, SS, Roemeling-van Rhijn, M., Franquesa, M., Strini, T., van den Engel, S., Gargesha, M., Roy, D. , Dor, FJ, Horwitz, EM, de Bruin, RW, Betjes, MG, Baan, CC in Hoogduijn, MJ (2016). Inaktivirane mezenhimske matične celice ohranjajo imunomodulatorno sposobnost. Matične celice in razvoj, 25 (18), 1342–1354. https://doi.org/10.1089/scd. 2016.0068
38. Li, JL, Li, G., Jing, XZ, Li, YF, Ye, QY, Jia, HH, Liu, SH, Li, XJ, Li, H., Huang, R., Zhang, Y., & Wang, H. (2018). Ocena biomarkerjev, povezanih s klinično sepso, v modelu septične miši. Journal of International Medical Research, 46 (6), 2410–2422. https://doi.org/10.1177/0300060518764717
39. Cai, L., Rubin, J., Han, W., Venge, P. in Xu, S. (2010). Izvor več molekularnih oblik HNL/NGAL v urinu. Clinical Journal of the American Society of Nephrology, 5(12), 2229– 2235. https://doi.org/10.2215/CJN.00980110
40. Capcha, JMC, Rodrigues, CE, Moreira, RS, Silveira, MD, Dourado, P., Dos Santos, F., Irigoyen, MC, Jensen, L., Garnica, MR, Noronha, IL, Andrade, L. , & Gomes, SA (2020).
41. Schlosser, K., Wang, JP, Dos Santos, C., Walley, KR, Marshall, J., Fergusson, DA, Winston, BW, Granton, J., Watpool, I., Stewart, DJ, McIntyre, LA, Mei, SHJ, & Canadian Critical Care Trials, G., & Canadian Critical Care Translational Biology, G. (2019). Učinki zdravljenja z mezenhimskimi matičnimi celicami na sistemske ravni citokinov v varnostnem preskušanju stopnjevanja odmerka faze 1 pri bolnikih s septičnim šokom. Critical Care Medicine, 47 (7), 918– 925. https://doi.org/10.1097/CCM.0000000000003657
42. van Rhijn-Brouwer, FCC, Gremmels, H., Fledderus, JO, & Verhaar, MC (2018). Značilnosti mezenhimskih stromalnih celic in regenerativni potencial pri srčno-žilnih boleznih: posledice za celično terapijo. Presaditev celic, 27 (5), 765–785. https:// doi.org/10.1177/0963689717738257
43. Sun, XY, Ding, XF, Liang, HY, Zhang, XJ, Liu, SH, Bing, H., Duan, XG, in Sun, TW (2020). Učinkovitost terapije z mezenhimskimi matičnimi celicami za sepso: metaanaliza predkliničnih študij. Raziskovanje in terapija matičnih celic, 11(1), 214. https://doi.org/ 10.1186/s13287-020-01730-7
44. Laroye, C., Gibot, S., Reppel, L. in Bensoussan, D. (2017). Jedrnat pregled: mezenhimske stromalne/matične celice: novo zdravljenje sepse in septičnega šoka? Matične celice, 35 (12), 2331–2339. https:// doi.org/10.1002/stem.2695
45. Brady, J., Horie, S. in Lafey, JG (2020). Vloga adaptivnega imunskega odziva pri sepsi. Eksperimentalna medicina intenzivne nege, 8 (Suppl 1), 20. https://doi.org/10.1186/s40635-020-00309-z
46. Martina, MN, Noel, S., Saxena, A., Bandapalle, S., Majithia, R., Jie, C., Arend, LJ, Allaf, ME, Rabb, H., in Hamad, AR (2016 ). Dvojno negativne celice alfa-beta T se zgodaj odzovejo na Aki in jih najdemo v človeških ledvicah. Journal of American Society of Nephrology, 27(4), 1113–1123. https://doi.org/10.1681/ ASN.2014121214
47. Hotchkiss, RS, Tinsley, KW, Swanson, PE, Schmieg Jr., RE, Hui, JJ, Chang, KC, Osborne, DF, Freeman, BD, Cobb, JP, Buchman, TG, & Karl, IE (2001) ). Apoptoza, ki jo povzroči sepsa, povzroči progresivno globoko zmanjšanje B in CD4 plus T limfocitov pri ljudeh. The Journal of Immunology, 166 (11), 6952–6963. https://doi.org/10.4049/jimmunol.166.11.6952
48. Condotta, SA, Cabrera-Perez, J., Badovinac, VP, in Grifth, TS (2013). T-celično posredovana imunost in vloga TRAIL-a pri imunosupresiji, ki jo povzroča sepsa. Kritični pregledi v imunologiji, 33 (1), 23–40. https://doi.org/10.1615/critrevimmunol.20130 06721
49. Khosrojerdi, A., Soudi, S., Hosseini, AZ, Eshghi, F., Shafee, A., & Hashemi, SM (2021). Imunomodulatorni in terapevtski učinki mezenhimskih matičnih celic na disfunkcijo organov pri sepsi. Šok, 55 (4), 423–440. https://doi.org/10.1097/SHK.0000000000 001644
50. Nie, P., Bai, X., Lou, Y., Zhu, Y., Jiang, S., Zhang, L., Tian, N., Luo, P., in Li, B. (2021) . Človeške mezenhimske matične celice popkovine zmanjšajo oksidativno poškodbo in apoptozo pri diabetični nefropatiji z aktiviranjem Nrf2. Raziskovanje in terapija matičnih celic, 12(1), 450. https://doi.org/10.1186/s13287-021-02447-x
51. dos Santos, CC, Murthy, S., Hu, P., Shan, Y., Haitsma, JJ, Mei, SH, Stewart, DJ, & Liles, WC (2012). Mrežna analiza transkripcijskih odzivov, ki jih povzroča zdravljenje eksperimentalne sepse z mezenhimskimi matičnimi celicami. American Journal of Pathology, 181 (5), 1681–1692. https://doi.org/10.1016/j.ajpath.2012.08.009
52. von Kortzfeisch, VT, Karp, NA, Palme, R., Kaiser, S., Sachser, N. in Richter, SH (2020). Izboljšanje ponovljivosti pri raziskavah na živalih z razdelitvijo študijske populacije na več "mini poskusov". Znanstvena poročila, 10 (1), 16579. https://doi.org/10. 1038/s41598-020-73503-4
53. Tanavde, V., Vaz, C., Rao, MS, Vemuri, MC, & Pochampally, RR (2015). Raziskave z uporabo mezenhimskih matičnih/stromalnih celic: metrika kakovosti za razvoj referenčnega materiala. Citoterapija, 17 (9), 1169–1177. https://doi.org/10.1016/j.jcyt.2015. 07.008
54. Pickkers, P., Heemskerk, S., Schouten, J., Laterre, PF, Vincent, JL, Beishuizen, A., Jorens, PG, Spapen, H., Bulitta, M., Peters, WH in van der Hoeven, JG (2012). Alkalna fosfataza za zdravljenje akutne poškodbe ledvic, povzročene s sepso: prospektivno randomizirano, dvojno slepo, s placebom kontrolirano preskušanje. Intenzivna nega, 16(1), R14. https://doi.org/10.1186/cc11159
55. Pickkers, P., Mehta, RL, Murray, PT, Joannidis, M., Molitoris, BA, Kellum, JA, Bachler, M., Hoste, EAJ, Hoiting, O., Krell, K., Ostermann, M ., Rozendaal, W., Valkonen, M., Brealey, D., Beishuizen, A., Meziani, F., Murugan, R., de Geus, H., Payen, D., et al. (2018). Učinek človeške rekombinantne alkalne fosfataze na 7--dnevni očistek kreatinina pri bolnikih z akutno ledvično okvaro, povezano s sepso: randomizirano klinično preskušanje. Journal of the American Medical Association, 320(19), 1998–2009. https://doi.org/10.1001/jama.2018.14283
Barbara Fazekas1 · Senthilkumar Alagesan2 · Luke Watson2 · Olivia Ng1,2 · Callum M. Conroy1,2 · Cristina Català3 · Maria Velascode Andres3 · Neema Negi1 · Jared Q. Gerlach4 · Sean O. Hynes5,6 · Francisco Lozano3,7,8 · Stephen J. Elliman2 · Matthew D. Grifn1,9,10
1 Inštitut za regenerativno medicino pri CÚRAM Center for Research in Medical Devices, School of Medicine, National University of Ireland Galway, Galway, Irska
2 Orbsen Therapeutics Ltd., Galway, Irska
3 Institut d'Investigacions Biomèdiques August Pi i Sunyer, Barcelona, Španija
4 Glycoscience Group, Nacionalni center za biomedicinsko inženirstvo, Nacionalna univerza Irske Galway, Galway, Irska
5 Disciplina patologije, Medicinska fakulteta, Nacionalna univerza Irske Galway, Galway, Irska
6 Oddelek za histopatologijo, Univerzitetne bolnišnice Galway, Galway, Irska
7 Servei d'Immunologia, Hospital Clínic de Barcelona, Barcelona, Španija
8 Department de Biomedicina, Universitat de Barcelona, Barcelona, Španija
9 Oddelek za nefrologijo, Saolta University Health Care Group, Galway University Hospitals, Galway, Irska
10 Nacionalna univerza Irske Galway, REMEDI, Biomedicinske znanosti, Corrib Village, Dangan, Galway H91 TK33, Irska
