Konjugat dendrimer–tesaglitazar inducira fenotipsko spremembo mikroglije in izboljša amiloidno fagocitozo† 2. del

In vitro biološki testi

Kultura celic. Mišja celična linija mikroglije BV2 je bila pridobljena iz ustanove za celične kulture otroške bolnišnice Michigan.

V zadnjih letih so znanstveniki ugotovili, da je celična kultura tesno povezana s človeškim spominom. Študije so pokazale, da je s preučevanjem celične kulture mogoče odkriti molekularne mehanizme v procesu pomnjenja in učenja ter s tem izboljšati človekovo kognitivno sposobnost in spomin.

Celična kultura se nanaša na postopek postavitve bioloških celic v gojišče, ki vsebuje bistvena hranila za rast in razmnoževanje v pogojih in vitro. Celice so osnovne enote življenja in celična kultura daje znanstvenikom platformo za preučevanje vedenja celic in življenjskih aktivnosti. S preučevanjem celic so znanstveniki odkrili veliko informacij o rasti nevronov in sinaptičnih povezavah. Te ugotovitve ne morejo le pomagati ljudem bolje razumeti, kako delujejo možgani, ampak tudi pomagajo pri razvoju novih zdravljenj in zdravil.

Raziskave zadnjih let so pokazale, da je celična kultura tesno povezana tudi s človeškim spominom. Znanstveniki so ugotovili, da oblikovanje in vzdrževanje človeškega spomina zahteva veliko molekularne regulacije in dostave signalov. Ti mehanizmi dostave signala in regulacije imajo veliko podobnosti z mehanizmi v celični kulturi. S proučevanjem mehanizmov dostave signala in regulacije v celični kulturi lahko znanstveniki bolje razumejo človeški spomin in mehanizme učenja.

Poleg tega so nekatere študije tudi pokazale, da lahko celična kultura na določene načine izboljša človeški spomin in sposobnost učenja. Na primer, z metodo, imenovano "električna stimulacija", je mogoče spodbuditi aktivnost celic in povezavo med nevroni, s čimer se izboljšajo človekove kognitivne sposobnosti in učinki učenja. Čeprav je ta metoda še v fazi laboratorijskih raziskav, se pričakuje, da bo v prihodnosti postala nova metoda kognitivnega treninga.

Če povzamemo, obstaja tesna povezava med celično kulturo in človeškim spominom. S preučevanjem celic lahko bolje razumemo človeški kognitivni mehanizem in spominski mehanizem ter pomagamo razviti nove metode zdravljenja in metode kognitivnega usposabljanja. Veselimo se prispevka tehnologije celične kulture človeštvu v prihodnosti! Vidimo lahko, da moramo izboljšati spomin, Cistanche pa lahko bistveno izboljša spomin, ker ima Cistanche antioksidativne, protivnetne učinke in učinke proti staranju, kar lahko pomaga zmanjšati oksidacijo in vnetne reakcije v možganih ter tako ščiti zdravje živčnega sistema. Poleg tega lahko Cistanche spodbuja tudi rast in popravilo živčnih celic ter tako izboljša povezljivost in delovanje nevronskih mrež. Ti učinki lahko pomagajo izboljšati spomin, sposobnost učenja in hitrost razmišljanja ter lahko tudi preprečijo pojav kognitivnih motenj in nevrodegenerativnih bolezni.

Kliknite poznajte dodatke za povečanje spomina

Celice BV2 smo gojili v mediju Dulbecco's Modified EaglesMedium (DMEM) z 10 % toplotno inaktiviranega fetalbovine seruma (HI FBS) in 1 % penicilina/streptomicina (P/S) pri 37 stopinjah in 5 % CO2.

Ko so celice dosegle konfluentnost v bučki za gojenje, so bile celice prenesene v novo bučko z uporabo 0.05 % tripsin–etilendiamin tetraocetne kisline (EDTA). Za poskuse smo celice BV2 zasejali v DMEM s 5 % HIFBS in 1 % P/S. 24–48 ur kasneje so bile celice stimulirane s 100 ng ml-1 (300 EU ml-1) LPS 3 ure, da so celice lahko vstopile v provnetni (M1) fenotip za simulacijo nevroinflamatornega okolja, ki je prisotno pri številnih nevroloških boleznih.

Celice smo nato soobdelovali z LPS in bodisi prostim Tesa ali D-Tesa pri različnih koncentracijah 48 rok, nato pa smo supernatant in celice zbrali za obdelavo. Celice, ki niso bile nikoli zdravljene z LPS (brez LPS), in celice, ki so bile vedno obdelane samo z LPS (samo LPS), so služile kot kontrolne skupine. Proste osnovne raztopine Tesa in D-Tesa so bile sterilizirane z uporabo poli(eter sulfonov) 0.2 µm filtrov.

D-Tesa je bila topna v celičnem mediju. Tesa je bila solubilizirana z uporabo dimetilsulfoksida (DMSO) pri končni koncentraciji manj kot 0.1 % (v/v). Citotoksičnost, test dušikovega oksida in TNF-ELISA. Za test citotoksičnosti smo celice obdelali, kot je opisano zgoraj, v 96-plošči z jamicami, nato pa smo citotoksičnost proste Tesa in D-Tesa ocenili s testom MTT po navodilih proizvajalca.

Za preskus dušikovega oksida smo celice obdelali, kot je opisano zgoraj, v 12-ploščah z vdolbinicami, nato pa smo zbrali supernatante iz obdelanih celic in takoj kvantificirali ravni dušikovega oksida po proizvajalčevem protokolu za Griessov reagent.

Za TNF-ELISA smo celice obdelali, kot je opisano zgoraj, v 12-ploščah z vdolbinicami, nato pa supernatante iz obdelanih celic zbrali in shranili pri –80 stopinjah, dokler niso pripravljeni za nadaljnjo obdelavo.

Nato so bili vzorci odmrznjeni na ledu in izveden TNF-ELISA po protokolu proizvajalca. Za te študije sta bili tako D-Tesa kot prosti Tesa sonikirani in vrtinčeno, dokler nista bila popolnoma topna. Za solubilizacijo proste Tese je bila najprej solubilizirana v DMSO, preden je bila razredčena, kjer je bila končna koncentracija DMSO pod 0.1% (v/v) za vse proste vzorce Tese.

Ker je bil D-Tesa topen v gojiščih celične kulture, tem vzorcem ni bil dodan DMSO. Za vse študije in vitro je bila enakovredna količina prostega ali konjugiranega zdravila uporabljena za celice v obeh skupinah s prostim Tesa in D-Tesa.

Kvantitativni PCR v realnem času (qRT-PCR). Celice smo obdelali, kot je opisano zgoraj, v 12-ploščah z jamicami in po zbiranju supernatanta celice zbrali v reagentu Invitrogen™ TRIzol™ (od Fisher Scientific) in ekstrahirali RNA po protokolu proizvajalca. Koncentracijo in čistost nastale RNA smo analizirali z uporabo Nanodrop.

Enakovredne količine RNA iz vsakega vzorca so bile pretvorjene v cDNA po protokolu proizvajalca za High CapacitycDNA Reverse Transcription Kit (od Applied Biosystems by Thermo Fisher Scientific).

Nastala cDNA je bila uporabljena za analizo qRT-PCR z uporabo zelenega reagenta FAST-SYBR in po protokolu proizvajalca. Vrednosti Ct je izračunal stroj, podatke pa analizirali z uporabo metode 2−ΔΔCt.

Za vsak različni marker je bila vrednost ΔΔCt izračunana z odštevanjem ΔCt za skupino brez LPS od ΔCt za vsak vzorec. Vrednost ΔCt je bila vrednost Ct za gen, ki nas zanima, minus Ct za GAPDH za vsak dani vzorec.

Ko je bil izračunan 2−ΔΔCt za vse skupine, so bile nato vse normalizirane na skupino brez LPS, s čimer je skupina brez LPS dobila relativno raven izražanja 1.0 za vse markerje. Sekvence primerjev naprej in nazaj, uporabljene za qRT -PCR so prikazani v spodnji tabeli. Vsa zaporedja so zapisana od 5′→3′.

Poleg tega so bili komercialno dostopni prajmerji od Biorada za INOS/NOS2 (Qmmucid0023087), TLR4 (QMMucid0023548), CD206/MRC1 (QMMucid0012670), TGF {{9} (QMMucid0017320) ), Socs1 (qmmuced0024846), CD36 (qmmuced0014852), Ide(qmmuced0049796), MMP9 (qmmucid0021296), CCL1(qmmuced0038249), TLR8 (qmmuced0039837), CD86(qmmucid0006086), STAT6 (qmmuci d0006404) in PPAR (qmmucid0018821). Test fagocitoze.

Vpliv prostega Tesa in D-Tesa na fagocitozo -amiloida je bil določen s predhodno opisano metodo.47 Na kratko, HiLyte™ moka 488-označena z -amiloidom1–42 (od Anaspec Inc.) je bila raztopljena v DMSO (končna koncentracija DMSO pod 0.5 % (v/v)) in razredčeno na 5 µg ml-1 v PBS.

Po obdelavi celic s Tesa in D-Tesa po zgoraj opisani shemi zdravljenja smo na celice za 2 uri nanesli raztopino -amiloida. Nato smo celice trikrat sprali s Hankovo ​​uravnoteženo solno raztopino z dvovalentnimi kationi (kalcijem in magnezijem), odstranili iz vdolbinic z uporabo tripsina in resuspendirali v pufru FACS (od Invitrogena).

Vzorci so bili shranjeni na ledu in takoj obdelani s pretočno citometrijo Sony Cell Sorter SH800, podatki pa so bili analizirani s pripadajočo programsko opremo.

Vrata so bila nastavljena z uporabo celic, ki niso bile obdelane s fluorescentnim -amiloidom, in prikazani rezultati so odstotek celic iz vsake skupine, ki so pokazale fluorescenco nad fluorescenco ozadja.

Za vsako skupino so poročali tudi o srednji fluorescentni intenzivnosti (MFA) HiLyte™ 488-označenega -amiloida. Ta test je bil izveden v dvojniku. Statistika. Vsi prikazani podatki so rezultat treh ločenih poskusov, od katerih je bil vsak izveden v treh izvodih, razen če ni drugače navedeno. Za izvedbo statistike sta bila uporabljena GraphPad Prism 5 in Microsoft Excel.

Izvedeni so bili dvostranski, parni Studentovi t-testi z Bonferronijevo korekcijo. Za določitev odstopanj je bil uporabljen Grubbsov test. GraphPad Prism 5 za Windows je bil uporabljen za risanje podatkov (San Diego, CA). Prikazani podatki so povprečje + SEM.

Rezultati in razprava

Sinteza in karakterizacija D-Tesa

Da bi omogočili ciljno, znotrajcelično dostavo do aktiviranih celic mikroglije v možganih, je bila Tesa kovalentno konjugirana na površini G4-PAMAM-OH z cepljivimi estrskimi vezmi med zdravilom in dendrimer-linkerjem (slika 1).

V prvem koraku je Tesa (1) reagirala s tetrametilen glikol azidom (TEG-azid) (2), da je nastal Tesa-TEG-azid (3), ki ima estrsko vez med zdravilom in povezovalnikom (slika 1A).

HPLC spojine (3) je pokazal retenzijski čas 13,4 minute s čistostjo, večjo od 99 % (slika S1B†). Masni spekter (3) je pokazal vrh 610,13 [M + 1]+, ki ustreza molekulski masi Tesa-TEG-azida, kar dodatno potrjuje nastanek produkta (slika S2†). Ločeno smo G4-PAMAM-OH dendrimer (4) reagirali s 5-heksinojsko kislino z uporabo reakcije esterifikacije, da smo proizvedli D-YNE (5) (slika 1B).

Nazadnje sta Tesa-TEG-azid (3) in D-YNE (5) reagirala z visoko učinkovito reakcijo klika bakrovega kataliziranega cikloadicijskega alkina (CuAAC), da je nastala D-Tesa (6) (slika 1B).48 1H NMR potrdili uspešno sintezo vseh intermediatov in končnega produkta; D-Tesa (6) je vsebovala značilne vrhove protonov dendrimerja in povezovalca zdravil, ki dokazujejo uspešno sintezo D-Tesa (slika 2A).

NMR končnega konjugata D-Tesa je razkril, da je bilo na vsak dendrimer pritrjenih povprečno deset molekul Tesa. HPLC je potrdil uspešno kovalentno konjugacijo, saj je D-Tesa pokazala premik od D-YNE in TesaTEG-azida (sl. 2B in S1†).

Tesa ima slabo topnost v vodi, ocenjena na 0,0035 mg mL−1,49 Konjugacija Tese na hidroksilnem dendrimerju je izboljšala njeno topnost v vodi za nekaj velikostnih redov od te ocene. Topnost D-Tese v vodi je bila 22 mg ml-1, in ker Tesa obsega ~19 % mase D-Tese, je bilo raztopljenih 4,2 mg ml-1 ekvivalenta Tese (slika 3A).

Povečana topnost, ki jo omogoča dendrimer, poenostavi formulacijo in odpravi potrebo po potencialno toksičnih pomožnih snoveh.50 Vse te prednosti so dodatek k vrhunski sposobnosti dendrimerja, da dostavi prosta zdravila preko BBB do mikroglije in vivo in potencialno zmanjša odmerek, potreben za doseganje terapevtskega učinka.18–28 Nazadnje je imel D-Tesa povprečno velikost 7,75 ± 0.29 nm (slika S3†) in zeta-potencial 2.86 ± 0,38 mV (N=5 oziroma N=3 meritev).

Sproščanje zdravila

D-Teso smo zasnovali za sproščanje Tese intracelularno v okolju z nizkim pH in visoko koncentracijo esteraze v endosomih/lizosomih aktivirane mikroglije. Prej smo poročali, da dendrimerji PAMAM večinoma vstopajo v celice preko endocitoze v tekoči fazi, vezikli, ki vsebujejo konjugate, pa se preoblikujejo v lizosome.51

D-Teso smo inkubirali pri 37 stopinjah v natrijevem citratnem pufru (pH 5,5) v prisotnosti esteraz, da bi posnemali razmere v lizosomih, kot je bilo izvedeno prej. 52–54 Raziskali smo tudi sproščanje pod pogoji, ki posnemajo pogoje v plazmi (s fosfatnim pufrom [PBS] ] pufra, pH 7,4).

V plazemskih pogojih se po 48 urah sprosti le približno 1,5 % Tese, do 25. dne pa se sprosti manj kot 20 % Tese, kar kaže na stabilnost konjugata v plazmi (slika 3B).

V lizosomskih pogojih se približno 60 % Tese sprosti iz D-Tese v prvih 48 urah, v 19 dneh pa se sprosti skoraj 100 % Tese. Ti rezultati kažejo, da D-Tesa zagotavlja trajno, sproženo sproščanje prostega zdravila v prvih dveh tednih inkubacije v fiziološko pomembnih lizosomskih pogojih.

Poleg tega je minimalno sproščanje Tese v simuliranih plazemskih pogojih (skupina s pH 7,4) v prvih 48 urah pomembno, ker je to tipičen čas kroženja G4-PAMAM-OH pred ledvičnim očistkom, minimalna količina Tese se bo verjetno sprostila iz konjugatov, preden dosežejo mikroglijo.24

D-Tesa je zmanjšala izražanje markerjev M1 in povečala markerje M2

Da bi ocenili sposobnost D-Tese, da inducira premik fenotipa M1 v M2, smo ocenili sposobnost D-Tese, da spremeni izražanje markerjev M1 in M2 in vitro z uporabo mišje mikroglialne celične linije (BV2).

Celice BV2 so bile ustvarjene z ovekovečenjem mišjih mikroglijskih celic in se je izkazalo, da so primerna alternativa primarnim mikroglijskim celicam za preučevanje mikroglijskega vnetnega odziva. 55, 56 V naših poskusih smo za posnemanje nevroinflamatornega okolja, ki je prisotno pri številnih nevroloških boleznih, mikroglijo predhodno obdelali s 100 ng ml-1 (300 endotoksinskih enot (EU) na ml) LPS 3 ure.

Nato smo celice soobdelovali z LPS in bodisi prostim Tesa ali D-Tesa 48 ur, nato pa zbrali vzorce. Celice smo obdelali s koncentracijami 1,5, 15 in 150 µM prostega Tesa ali D-Tesa na podlagi enakovrednega zdravila.

Test MTT je pokazal, da prosti Tesaor D-Tesa pri teh koncentracijah ni povzročil citotoksičnosti (slika S4†). Začetna študija za ugotavljanje odmerka je bila opravljena s Tesa in D-Tesa, da bi določili najučinkovitejši odmerek Tesa in D-Tesa.

Zdravljenje z 1,5 in 15 µM prostim Tesa in D-Tesadom ni spremenilo izločanja dušikovega oksida ali TNF-, kot je bilo ugotovljeno z Griessovim reagentom oziroma TNF-ELISA (slika S5†). Na podlagi teh rezultatov teh nižjih koncentracij nismo analizirali v naših testih qRT-PCR.

Pri mnogih nevrodegenerativnih boleznih je ena glavnih nevrotoksičnih funkcij proinflamatorne mikroglije M1 njihovo izločanje reaktivnih kisikovih vrst (npr. dušikovega oksida), ki neposredno ubijajo nevrone. 57, 58 Kasneje je bilo domnevano, da bi bila ena potencialna terapevtska strategija zmanjšanje tega izločanja teh molekul.

Ocenili smo sposobnost D-Tese, da doseže ta učinek. Po stimulaciji LPS je D-Tesa zmanjšala ravni mRNA izločenega dušikovega oksida in inducibilne sintaze dušikovega oksida (iNOS) za 3.7--krat (p < 0.0001) in 2--krat (p {{ 7}}.011), v tem zaporedju, v primerjavi s celicami, obdelanimi samo z LPS (samo LPS) (sliki 4A in B).

Po drugi strani pa je prosta Tesa zmerneje zmanjšala izločeni dušikov oksid (1.4-krat, p=0.004) in ni povzročila pomembnega zmanjšanja izražanja mRNA iNOS (sliki 4A in B ).

D-Tesa je bila pri zaviranju izločanja dušikovega oksida veliko bolj učinkovita kot prosti Tesain. Nato, odvisno od tega, ali je mikroglija v fenotipu M1 ali M2, mikroglija uravnava bodisi iNOS ali arginazo 1 (Arg1), da presnovi L-arginin za proizvodnjo dušikovega oksida za njihov odziv na ubijanje patogenov M1, ali ornitin in sečnino za odziv celjenja ran M2. 59

Skladno z znižano regulacijo iNOS je D-Tesa 2--krat povečal ravni mRNA Arg1 (p=0.011) v primerjavi s kontrolo samo z LPS, medtem ko prosta Tesa ni bistveno povečala izražanja (p=0 .40) (slika 4C).

D-Tesa in v manjši meri brez Tese sta mikroglijo preklopila s sproščanja citotoksičnega dušikovega oksida na presnovo L-arginina za celjenje ran, kar vpliva na zmanjšanje in morebitno odpravo nevrotoksičnosti, ki jo povzroča mikroglija pri nevrodegeneraciji.5–7,10

Znižanje ravni iNOS in izločenega dušikovega oksida z zdravljenjem z D-Teso je posledica prejšnjega dela, ki je pokazalo, da naravni ligand PPAR (15-deoksi-Δ12,14-prostaglandin J2) zmanjša izražanje in izločanje iNOS in dušikovega oksida pri zdravljenih z LPS primarna mikroglija.60

IL-10, IL-4 in TGF- 1 so vsi citokini, ki jih izloča alternativno aktivirana mikroglija M2, ki lahko inducira nevroprotektivno, protivnetno okolje v možganih.58,61,62Towards v ta namen je D-Tesa povečala izražanje IL-105.5-krat (p=0.011) in IL-4 8.2-krat (p { {15}}.013) v primerjavi s kontrolo samo z LPS (sliki 4D in E).

Brezplačna Tesa ni bistveno povečala ravni IL-10 ali IL-4, čeprav sta bili povprečji 1.7-krat (p=0.066) in 2.{{7} }krat (p=0.11) višja za mikroglijo, obdelano s Teso, v primerjavi s kontrolami samo z LPS (sliki 4D in E). Poleg tega je D-Tesa povečal izražanje TGF- 1 2.3-krat (p=0.015), prosti Tesa pa ni bistveno spremenil izražanja (slika 4F).

Tako D-Tesa inducira izločanje protivnetnih citokinov po zdravljenju mikroglije z LPS, kar lahko ublaži nevrotoksično, provnetno okolje, prisotno pri nevrodegenerativnih boleznih.5–7,10

Ekspresija markerjev podtipa M2-, ki jo povzroči D-Tesa

CD206, Ccl1 in TLR8 so specifični markerji za podtipe mikroglije M2a, M2b oziroma M2c. }}krat (p < 0,001), Ccl1 3.5-krat (p < 0,005) in TLR8 5-krat (p < 0,01), medtem ko prosti Tesa ni bistveno povečal izražanja katerega koli od teh treh markerjev (sl. 5A–C).

Ti podatki kažejo, da mikroglija, obdelana z D-Teso, kaže znatno povečanje označevalcev vseh treh podtipov M2, kar se ujema z razumevanjem, da je fenotip mikroglije plastičen in ne binarni.63–65

Nomenklatura M1/M2 preveč poenostavlja zapletenost, da lahko mikroglija obstaja v spektru aktivacijskih stanj; vzdolž tega kontinuuma so bili opisani trije različni fenotipi M2 (M2a, M2b in M2c) in D-Tesa inducira izražanje markerjev, ki so skladni z vsakim od teh stanj.58,61,63,66,67 Mikroglija M2a je vključena v povečano fagocitozo patogenih beljakovine z uravnavanjem lovilnih receptorjev, obnavljanjem tkiv in protivnetnimi učinki.

Mikroglija M2b je kot mikroglija M1 v tem, da izraža IL-1, TNF- in IL-6; vendar se M2b razlikujejo od mikroglije M1 po tem, da izražajo IL-10 na visokih ravneh in zmanjšujejo izražanje iNOS. Makrofagi in mikroglija M2b stimulirajo Th2 T-celice, kar kaže na eno od vlog M2b pri sprožanju protivnetnega odziva.

M2cmicroglia je vključena v celjenje ran, preoblikovanje tkiva, sekvestracijo železa in aktivacijo STAT3, ki zmanjša proinflamatorno signalizacijo. 58,61,63,66 Aktivnost PPAR zdravila Tesa stimulira zanko naprej, kar ima za posledico povečano izražanje PPAR in njegovega signalnega proteina navzgor (STAT6), ki sta oba markerja M2a.58D-Tesa je povečal izražanje PPAR 2.3-krat (p=0.0036)in STAT6 3.4- krat (p < 0,001), medtem ko se je prosti Tesa povečal STAT6 1.8-krat (p=0.011) brez pomembnega povečanja izraženosti PPAR (1.58-kratno povečanje, p=0.17) (sliki 5D in E).

Povečana ekspresija STAT6 in PPAR ima za posledico proizvodnjo protivnetnih genov in zaviranje pro-vnetnih signalov z zaviranjem aktivnosti NF-κB. Ker je mikroglijo M2a mogoče inducirati z obdelavo mikroglije z IL-4, ki signalizira prek STAT6 in PPAR, lahko uravnavanje teh dveh spodnjih signalnih proteinov povzroči polarizacijo M2a naprej.68

V naših testih je aktivacija LPS zvišala ravni IL-6, TNF- in IL-1, zdravljenje z D-Teso pa je dodatno uravnavalo izražanje teh citokinov (sl. S6A–D†), kar je verjetno dueto D-Tesa inducira fenotip M2b (slika 5B).

Prosti Tesa je povečal izražanje IL-6 in ni bistveno spremenil izražanja TNF- in IL-1 (sl. S6A–D†). Medtem ko te citokine izloča mikroglija M1, mikroglija M2b prav tako izraža te citokine. 58,61 CD86 je marker mikroglije M1 in M2b in se poveča z zdravljenjem z D-Teso (slika S6E†).

Poleg tega je zaviralec signalizacije citokinov (SOCS) družina znotrajceličnih proteinov, ki uravnavajo fenotipsko polarizacijo mikroglije z zaviranjem več signalnih poti, ki jih aktivirajo citokini.69 SOCS1 je eden od članov te družine in dokazano zavira LPS/TLR4 posreduje signalizacijo NF-κB in JAK2, s čimer se zmanjša količina TNF-, IL-1 in IL-6, ki jih sprošča M1 mikroglija po poti LPS/TLR4.

D-Tesa uravnava ekspresijo SOCS1 v primerjavi s kontrolo samo z LPS (slika S6F†), kar kaže na to, da je povečanje IL-6, TNF- in IL-1, ki ga izkazuje D-Tes, lahko posledica indukcije Fenotip M2b in ne prek izboljšanja fenotipa, ki inducira LPS/TLR4, M{10}}.

Poleg tega LPS signalizira prek TLR4 in za preprečevanje čezmerne celične aktivacije ima mikroglija mehanizem negativne povratne zveze, pri čemer aktivacija TLR4 povzroči zmanjšano izražanje TLR4.70

Zdravljenje s prostim zdravilom Tesa in D-Tesa je povečalo ravni TLR4 za 3.6--krat (p < 0.001) oziroma 3.7--krat (p < 0,001) (slika 5F), kar kaže, da sta Tesa in D-Tesa spremenila tipično LPS/TRL4 negativno povratno signalno pot.

For more information:1950477648nn@gmail.com