Določanje akteozida in ehinakozida Cistanche Tubulosa

[Povzetek]Cilj: Izdelati metodo določanja (komponenta učinkovitosti na strani države in strani ehinaceje) v Cistanche Tubulosa s tekočinsko kromatografijo visoke ločljivosti. Za primerjavo vsebnosti glavne komponente v dveh habitatih, štirih gostiteljih in štirih serijah pri Cistanche tubulosa. Zagotoviti znanstvene dokaze za u－ uporabo vrst Cistanche tubulosa. Metode: s kromatografsko kolono Kromasil C18 (4,6 mm×250 mm, 5 μm); Mobilna faza: metanol, acetonitril-1 % ocetne kisline (14∶9∶77); Hitrost pretoka: 1.0 mL·min-1; Valovna dolžina zaznavanja 334 nm; Temperatura kolone je bila 30 stopinj. Rezultati: Dve komponenti sta imeli dober linearni razpon standardne krivulje v testu (r=0.999,9). Povprečna stopnja izterjave je 96,89 odstotka in 100,7 odstotka, dinarski odstotek pa 0,91 odstotka in 1,96 odstotka. Rezultati analize so pokazali, da obstaja pomembna razlika med vsebnostjo glavnih komponent učinkovitosti (stateside in ehinakozid) v različnih regijah, serijah in gostiteljih v Cistanche tubulosa. Zaključek: Metoda je preprosta, natančna in ponovljiva. Zagotavlja eksperimentalno podlago za medicinsko vrednost Cistanche tubulosa.

[Ključne besede] Cistanche tubulosa; akteozid; ehinakozid; določitev vsebine

Poskus Cistanche deserticola

Kliknite tukaj za ogled izdelkov Cistanche

【Vprašajte za več】 E-pošta:cindy.xue@wecistanche.com/Whats App: 0086 18599088692/Wechat: 18599088692

Cistanche deserticola je bila prvič zapisana v "Shennong Materia Medica Classic" in je eno najpogosteje uporabljenih zdravil pri receptih za tonificiranje ledvic in krepitev janga. V zadnjih letih je obsežno izkopavanje Cistanche deserticola povzročilo hitro zmanjšanje divjih virov. Kot nadomestek za Cistanche deserticola je cevasta roža Cistanche deserticola, proizvedena v Xinjiangu, predstavljala 60 odstotkov ponudbe v državi.

Cistanche v prahu

Feniletanol glikozidi, kot sta ehinakozid in ergosterol glikozid, so ena od glavnih farmakoloških sestavin Cistanche tubulosa. Ehinozid ima nevroprotektivne učinke [3], osteoprotektivne učinke [4] in učinke proti staranju [5]. Ergosterozid izboljša motnje spomina, zdravi Alzheimerjevo bolezen in ima učinke, podobne androgenom. Tubular Cistanche: znan tudi kot Hongliu Dayun, gostujejo različne rastline Tamarix L. [8-9]. Avtor je s HPLC metodo določil vsebnost zgornjih dveh komponent v Cistanche deserticola. Metoda določanja in rezultati zagotavljajo znanstveno podlago za nadzor kakovosti in zdravilne vrednosti tega zdravila.

Feniletanol glikozid je glavna aktivna sestavina Cistanche deserticola

1 Instrument in testno zdravilo

Reagent in preskusno zdravilo: ehinacetin (številka serije 111670-200401), ergosterol (številka serije 111530-200505), referenčna snov, ki jo zagotavlja Kitajski inštitut za nadzor farmacevtskih in bioloških izdelkov. Acetonitril in metanol sta kromatografsko čista, medtem ko je voda ultračista voda; Vsi ostali reagenti so analitično čisti. Vse zdravilne snovi Cistanche deserticola je zbral in identificiral profesor Ju Aihua z medicinske univerze Notranja Mongolija. Instrument: ameriška tekočinska kromatografija visoke ločljivosti Agilent 1100.

2 Metode in rezultati

2.1 Kromatografski pogoji in preskus prilagodljivosti sistema

Kromatografska kolona: kromatografska kolona Kromasil C18 (4,6 mm × 250 mm, 5 μm）; mobilna faza: acetonitril metanol 1-odstotna raztopina ocetne kisline (9:14:77); valovna dolžina detekcije je 334 nm; pretok hitrost: 1,0 ml · min-1; Temperatura kolone 30 stopinj; Volumen injekcije 20 μ L. Teoretično število plošč ne sme biti manjše od 5000 na podlagi izračuna glikozidov ehinaceje. Stopnja ločevanja obeh farmakoloških komponent je dober, s stopnjo ločitve, večjo od 1,5 od sosednjih vrhov. (Glej sliko 1-3).

Slika 1 Kromatogram referenčne snovi ehinacetina

Slika 2 Kromatogram referenčne snovi ergosterol

Slika 3 Kromatogram Cistanche deserticola

2.2 Priprava raztopine vzorca

Natančno odtehtajte približno 0,5 g praška Cistanche deserticola (presejanega skozi sito 60 mesh) in ga postavite v 100 ml rjavo erlenmajerico. Natančno dodamo 50 mL mobilne faze, stehtamo maso, soniciramo 40 minut in jo postavimo na sobno temperaturo; Ponovno stehtajte maso, uporabite mobilno fazo, da nadomestite izgubo teže, dobro pretresite, filtrirajte, ponovno vzemite filtrat in ga postavite na stran.

2.3 Priprava referenčne raztopine

Natančno stehtajte ustrezno količino referenčnih materialov ehinacetina in ergosterola ter dodajte mobilno fazo, da pripravite raztopino, ki vsebuje približno {{0}}.14 mg ehinacetina oziroma 0,10 mg ergosterola na 1 ml.

2.4 Pregled linearnega razmerja

Natančno odtehtajte 6,4 mg referenčne snovi ehinaceje in 3.0 mg referenčne snovi ergosterola, ju dajte v 10 mL merilno bučko, razredčite z mobilno fazo in enakomerno pretresite; Natančno posesajte 0.1, 0.25, 0.5, 1.0, 2.0 in 3.0 ml v 5 ml merilno bučko, razredčimo z mobilno fazo na lestvico in pretresemo; Absorbirajte 20 μ Vbrizgajte vzorec L in merite v skladu z zgornjimi kromatografskimi pogoji. Os Y predstavlja površino vrha, os X pa volumen vbrizga. Narišite standardno krivuljo. Izmerjeni podatki kažejo, da je količina ehinacetina 0,26 μ g-7,75 μ Obstaja dobro linearno razmerje med površino vrha in prostornino injiciranja med g, regresijska enačba pa je Y=831,41X21. 88, 0,9999 R 2=0; Količina ergosterol glikozida je 0,30 μg-7.50 μ Obstaja dobro linearno razmerje med površino vrha in volumnom injekcije med g, regresijska enačba pa je Y=671.53X plus 158,71, R{ {39}}.9999.

Ehinozid, glavna kemična sestavina Cistanche deserticola

2.5 Preskus natančnosti

Natančno odtehtajte 0,5 g zgornjega medicinskega praška, pripravite testno raztopino v skladu z metodo, opisano v "2.2", injicirajte 6-krat zaporedoma in zabeležite površine vrhov 2 komponent. Odstotek RSD površine vrha njegovega ehinakozida je 1,46 odstotka; Vsebnost ergosterol glikozida je 1,62 odstotka.

2.6 Preskus stabilnosti

Vzemite {{0}},5 g vzorca v prahu in pripravite preskusno raztopino v skladu z metodo, opisano v "2.2". Vzorec vbrizgajte ob 0, 1, 2, 4, 8 in 12 urah po pripravi. Rezultati so pokazali, da je RSD odstotek površine vrha ehinacetina 1,5 odstotka; Vsebnost ergosterol glikozida je 2,0 odstotka.

2.7 Preskus ponovljivosti

Natančno stehtajte 6 vzorcev prahu iz iste serije, proizvedene v Minfengu, Hotan, Xinjiang, pri čemer vsak tehta približno 0,5 g. Pripravite in izmerite površino vrha v skladu z metodo pod "2.2". Izračunajte RSD odstotkov površine vrha ehinakozida v 6 vzorcih kot 1,85 odstotka in ergosterola kot 1,93 odstotka.

2.8 Dodatek vzorca in preizkus izkoristka

Natančno stehtajte 6 vzorcev medicinskega praška iz iste serije, proizvedene v Minfengu, Hotan, Xinjiang, pri čemer vsak vzorec tehta približno 0,1 g. Dodajte določeno količino ehinacetina in ergosterola ter pripravite preskusno raztopino po metodi, opisani v "2.2". Povprečne stopnje izterjave so bile 96,89 odstotka oziroma 100,7 odstotka, pri čemer je bil odstotek RSD 0,91 odstotka oziroma 1,96 odstotka. (Glej tabele 1-2)

Tabela 1. Rezultati testa izločanja glukozida iz ananasovega soka

Tabela 2. Rezultati testa izločanja ergosterolnega glikozida

2.9 Določitev vzorca

Iz vsake epruvete vzemite zdravilni prašek Cistanche deserticola in ravnajte po metodi v "2.2". Izmerjeni rezultati so prikazani v tabeli 3.

Tabela 3 Določanje ehinacetina in ergosterozida v Cistanche deserticola

3 Razprava

3.1 Izbira mobilne faze

Primerjali smo dve skupini mobilnih faz: 1) metanol acetonitril 1 odstotna raztopina ocetne kisline (14:9:77); (2) Metanol: 1 odstotek mravljinčne kisline (21,5:78,5). Rezultati so pokazali, da je elucija z mobilno fazo (1) povzročila zmeren relativni retencijski čas, manj vrhov nečistoč in dobro ločitev obeh komponent.

3.2 Izbira pogojev ekstrakcije

Učinke različnih ekstrakcijskih metod (segrevalni refluks, ultrazvok) in čase ekstrakcije (40 min, 50 min) na vsebnost učinkovin smo primerjali z uporabo mobilne faze kot ekstrakcijskega topila. Na koncu je bilo ugotovljeno, da čeprav je bila najvišja vsebnost izmerjena po 50-minutnem segrevanju in refluktiranju, ni bilo izbire zaradi slabe oblike vrha. Vsebnost, merjena z ultrazvokom 40 minut in ultrazvokom 50 minut, je podobna, zato je bil kot pogoj ekstrakcije izbran ultrazvok 40 minut.

3.3 Raziskave so pokazale

kitajsko zelišče cistanche

Različni gostitelji in habitati imajo pomembne razlike v vsebnosti ehinakozida in ergosterola v Cistanche deserticola, kar kaže, da na kakovost zdravilnega materiala pomembno vplivata lokacija in gostitelj. Zato je sistematično preučevanje korelacije med izvorom, gostiteljem in kakovostjo zdravilnega materiala tubuloznega tubulosa velikega pomena za izbiro optimalnih gostiteljskih rastlin in oceno kakovosti tubuloznega tubuloza.

referenca

[1] Chen Fei, Chen Zhuo, Xing Xuefei et al. Napredek raziskav o Cistanche deserticola [J]. Drug Evaluation Research, 2013, 36 (6): 469-475

[2] Song Hailong, Jia Xiaoguang, Xie Haihui. Napredek raziskav o kemičnih sestavinah Cistanche tubulosa [J]. Xinjiang Traditional Chinese Medicine, 2010, 28 (01): 76-78

[3] ZHU M,LUC,LIW. Prehodna izpostavljenost ehinakozidu zadostuje za aktiviranje signalizacije Trk in zaščito nevronskih celic pred rotenonom [J].J Neurochem, 2013, 124(4): 571-580. [4] LIF YANG X, YANG Y, et al. Antiosteoporotična aktivnost ehinakozida pri podganah z ovariektomijo [J]. Phytomedicine, 2013, 20 (6): 549-557.

[5] XIE H, ZHU H, CHENG C, et al. Ehinakozid zavira celično staranje človeških fibroblastičnih celic MRC-5[J]. Pharmazie, 2009, 64 (11): 752-754.

[6] Park Jinghua, Pu Xiaoping, Ma Jian et al. Izboljšanje motnje pridobivanja spomina, ki jo povzroča skopolamin, s celiaozidom [J]. Kitajski farmakološki bilten, 2001, 17 (6): 625-626

[7] Lai Qinghai, Wang Linlin, Ding Hui et al. Napredek raziskav pri zdravljenju osteoporoze s Cistanche deserticola [J]. Journal of Liaoning University of Traditional Chinese Medicine, 2016, 18 (3): 102-104

[8] Wang Changlin, Guo Yuhai, Tu Pengfei et al. RAPD analiza parazitske Cistanche deserticola na različnih vrstah Tamarix [J]. Kitajski časopis za tradicionalno kitajsko medicino, 2009, 34 (3): 264-268

[9] Huang Xiaofang, Xu Rong, Chen Jun et al. Stanje raziskav in obeti o značilnostih habitatov, parazitskih mehanizmih in transportu hranil Cistanche deserticola [J] Chinese Journal of Traditional Chinese Medicine, 2012, 37 (19): 2831-2835