Dietna Cistanche je ublažila akutno poškodbo ileuma race

Povzetek: Aflatoksin B1 (AFB1) je stabilen toksičen presnovek, ki ogroža zdravje ljudi in živali ter močno onesnažuje krmo za živali in hrano za ljudi. Ta študija je bila namenjena raziskovanju učinkovdietna cistančao poškodbi ileuma pri racah, ki jo povzroči dajanje AFB1, in raziskati njene osnovne mehanizme. Race (N=450, en dan star samec) s podobno težo so bile naključno razporejene v 3 skupine, ki so vsebovale kontrolno skupino, skupino AFB1 (60 µg AFB1 kg−1 telesne teže) in cistanche (500 mg cistanche kg−1 dieta) plus skupina AFB1. Uporaba AFB1 je izrazito povečala poškodbo ileuma, adukte AFB1-DNA v plazmi ter oksidacijski stres in vnetje. Dodajanje cistanche v prehrano je zaščitilo ileum pred morfološkimi poškodbami, ki jih je povzročilo dajanje AFB1, zmanjšalo adukte AFB1-DNA v plazmi ter odpravilo oksidacijski stres in vnetje v ileumu rac.Antioksidacijainprotivnetno učinki cistanchelahko zaščiti ileum pred akutno poškodbo z aktiviranjem signalne poti Nrf2-ARE in zaviranjem signalne poti NF-κB. Končno,cistancheje bila dietnaantioksidacijainprotivnetnopovzročitelja preko aktiviranja signalne poti Nrf2-ARE in zaviranja signalne poti NF-κB akutne poškodbe, ki jih povzroča dajanje AFB1.

Ključne besede:cistanche; akutni ileum; AFB1-adukti DNK; Nrf2-SO;

Kliknite tukaj za izdelke Cistanche proti staranju

Vprašaj za več:

E-pošta:wallence.suen@wecistanche.com Whatsapp plus 86 15292862950

1. Uvod

Meso je pomemben vir visokokakovostnih beljakovin za človeško prehrano. Račje meso se zaradi svojih zaželenih prehranskih lastnosti obilno uživa po vsem svetu, zlasti v Aziji [1]. Zato je vzreja rac pritegnila pozornost ljudi. Pri racah obstajajo različne slabosti v procesu vzreje, kot je AFB1, ki ogrožajo zdravje rac. Aflatoksin B1 (AFB1) je eden izmed najpogostejših toksičnih metabolitov, ki jih proizvaja vrsta Aspergillus. AFB1 je priznan kot najbolj strupen med skupinami aflatoksinov (AF), skupaj z vrsto toksičnih učinkov, ki ogrožajo zdravje ljudi in živali [2].

Za ljudi ali živali je hrana ali krma običajen in pomemben način izpostavljenosti AFB1, vendar se štejeta in ne prezreta tudi vdihavanje in neposreden stik s kožo ali sluznico [3]. Prejšnje študije so dokazale, da ima AFB1 močno toksičnost, ki je zelo kompleksna in močna, kar ima za posledico zastoj rasti, biološke malformacije, toksičnost za jetra, motnje prebavnega trakta in celo raka [4, 5]. AFB1, pridobljen s hrano ali stikom s sluznico, je imel negativne učinke na dihala, prebavni sistem in tkiva ter na rast [3,6,7]. Poškodbe tkiv in organov, ki jih povzroča dajanje AFB1, povezane z oksidacijskim stresom in vnetjem. Uporaba AFB1 je zaznamovala povečano vsebnost aduktov AFB1-DNA v poškodovanem organu [8]. Absorpcija in pretvorba hranil in toksinov sta se zgodili v želodcu in tankem črevesu, tako da

Imunski sistem črevesne sluznice je prva linija za zaščito telesa pred poškodbami [9]. Funkcionalnost in morfologijo zdravega gastrointestinalnega trakta lahko uničijo neugodni dejavniki, kot so toksikanti, bakterije in virusi [10,11]. AFB1 je povzročil uničenje črevesne strukture, kar se kaže z izločanjem epitelijskih celic v jejunalnih resicah in infiltracijo limfocitnih celic v črevesju piščanca [12,13]. Funkcionalnost in morfologijo variacije lahko pripišemo procesu presnove toksinov, ki ga pogosto spremlja vnetje oksidativnega stresa. Nujno je treba najti protistrup za zmanjšanje in zmanjšanje nevarnosti AFB1 za ljudi in živali.

Posledično je AFB1 zaradi svoje močne toksičnosti ena najpomembnejših skrbi v perutninski industriji. cistanche je neke vrste polifenolna komponenta, ki se pojavlja v korenikah kurkume (Cur cuma Longa Linn) kot funkcionalni krmni dodatek, ki se uporablja v krmi za živino [14] in se pogosto uporablja

kot zelena in naravna začimba, barvilo, konzervans in aroma v prehrambeni industriji. Rastlinski izvlečki, kot je cistanche, ki vsebujejo polifenole, so izboljšali telesno odpornost [15]. cistanche igra ključno vlogo proti patološkim stanjem in dejavnostim, ki jih povzroča oksidativni stres, kadar se uporablja kot terapija za zdravljenje in preprečevanje kroničnih bolezni [16,17]. Klinična preskušanja so pokazala, da cistanha nima hudih toksičnih ali stranskih učinkov ter ima antikancerogene in antitoksikogene lastnosti, zaradi česar je cistanha privlačno kemopreventivno sredstvo proti poškodbam tkiv, ki jih povzroča AFB1- [18–20]. Literatura je dokazala, da ima cistanche sposobnost proti vnetjem, proti apoptozi in antioksidaciji z aktiviranjem poti Nrf2/HO-1, povečano antioksidativno sposobnost za odpravo vnetja in oksidativnega stresa v telesu ter odpravo AFB1-povzročenega oksidativni stres [21–25]. cistanche je zaviral oksidacijski stres in tvorbo vnetja z aktiviranjem Nrf2-ARE in zaviranjem signalne poti NF-κB pri demoniranju ostankov ledvic [26], antioksidacijskimi in protivnetnimi lastnostmi. Poleg tega je prehranska cistanča bistveno izboljšala antioksidativno zmogljivost pri brojlerjih [27] in racah [28]. Ni bilo poskusa korelacije vloge cistanhe v signalni poti Nrf2-ARE in NF-κB ter v živalskem modelu akutnega dajanja AFB1.

Ta študija je osvetlila to vprašanje in zagotovila teoretično osnovo za cistanche kot krmni dodatek za zaščito zdravja rac pred dajanjem AFB1 in zmanjšanje gospodarskih izgub krmne in rejske industrije zaradi onesnaženja z AFB1.

2. Materiali in metode

2.1. Kemikalije

cistanche je bil kupljen pri Nanjing Nutri-herb Biotech Co., Ltd. (Nanjing, Jiangsu, Kitajska, CAS: 458-37-7), njegova čistost je bila več kot 98-odstotna z analizo HPLC. AFB1 (čistost večja ali enaka 98 odstotkom, ŠT. CAS. 1162-65-8) je bil kupljen pri Shanghai Yuan ye Bio-Technology Co., Ltd. (Šanghaj, Kitajska). Protitelesa, uporabljena v tej študiji, so bila kupljena pri Bey time Biotechnology, Šanghaj, Kitajska, vključno z GAPDH (kataloška številka: AG019), Nrf2 (kataloška številka: AF7623), fosfo-NF-κB p65 (Ser276) (kataloška številka: AF5875), HRP označeni kozji protizajčji IgG (H plus L) (kataloška številka: A0208) in kozji z oznako HRP

Anti-mišji IgG (H plus L) (kataloška številka: A0216).

2.2. Race in reja

Eksperimentalni protokol je bil izveden v skladu s praksami, opisanimi v Priročniku za nego in uporabo kmetijskih živali v raziskavah in poučevanju kmetijstva Severovzhodne kmetijske univerze (številka protokola: NEAU-[2011]-9).

Race (n {{0}}, enodnevni samci Anas platyrhynchos, 33,8 ± 0,2 g) brez pomembne razlike v teži so bile kupljene v komercialni valilnici in naključno razvrščene v 3 skupine (tabela 1), z 10 ponovite ograde (kletke) na skupino in 15 rac na ograde za 70-dan

poskus hranjenja. Bazalne diete so bile oblikovane v skladu z nacionalnim raziskovalnim svetom (1994). Race v skupini T0 in T0 plus AFB1 so bile hranjene z bazalno dieto iz koruze in soje (tabela 2), race v skupini T500 plus AFB1 so bile hranjene z bazalno prehrano, dopolnjeno s 500 mg

cistanche kg−1 diete (T500) 70-dnevni poskus. 70 dni so race s podobno telesno težo v skupinah T0 plus AFB1 in T500 plus AFB1 hranili s 60 µg AFB1 kg−1 telesne teže in race v skupini T0 so hranili z enako količino raztopine PBS. Race so hranili v eksperimentalni bazi Acheng na severovzhodni kmetijski univerzi in jim zagotovili ad libitum dostop do vode in hrane v prahu. Petnajst rac s podobno telesno težo (1,4 ± 0,3 kg) iz vsake skupine je bilo izbranih in postenih 12 ur, nato pa so race v skupini T0 hranili z raztopino PBS in race v T0 plus AFB1 in 60 µg AFB1 kg-1 telesne teže. Skupine T500 in AFB1 hkrati. Po 12 urah je petnajst rac v vsaki skupini dobilo vzorce rac.

2.3. Zbirka vzorcev

Vzorce krvi (10 mL) smo pridobili s pomočjo heparinskih epruvet iz žil račjih kril in jih centrifugirali pri 1000 × g 15 minut pri 4 ◦C. Dobljeno plazmo smo takoj ločili in shranili pri –80 ◦C za analizo. Race so anestezirali z vdihavanjem etra in jih ubili, da so dobili ileum. Ileum smo nemudoma 3-krat sprali v PBS in ga posamično shranili v posodo s tekočim dušikom, nato pa pri –80 °C za qRT-PCR in analizo antioksidativne kapacitete. Nato smo pridobili približno 0,125 cm3 ileuma in ga dali v 4-odstotno raztopino paraformaldehida za rez tkiv, približno 1 mm3 ileuma pa dali v elektronski mikroskop.

raztopino pri 4 ◦C za poznejše ultrastrukturno opazovanje.

2.4. Test ravni antioksidantov v plazmi

Plazemske koncentracije skupne superoksid dismutaze (T-SOD), glutation peroksidaze (GSH Px), glutation S-transferaze (GSH-ST) in malondialdehida (MDA) so bile izmerjene s kompleti za testiranje (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, Kitajska). oziroma z

UV-VIS spektrofotometer (UV1100, MAPADA, Šanghaj, Kitajska).

2.5. Test ravni aduktov AFB1-DNA v plazmi

Nastajanje aduktov AFB1-DNA v plazmi je bilo določeno s kompleti ELISA v skladu s specifikacijami kompleta (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nan jing, Kitajska).

2.6. Test antioksidativne sposobnosti v ileumu

Ileum (100.00 mg) je bil spremenjen in zmešan v 0,9 ml fiziološke raztopine za možgansko kap (4 ◦C, 0,9 odstotka NaCl, pH=7).2 –7,4), da dobimo 10 odstotkov homogenata ileuma/SPSS. Aktivnost ali vsebnost skupne superoksid dismutaze (T-SOD U/mg beljakovin), reduktivnega glutationa Glu (GSH-PX µmol/mg beljakovin), glutation S-transferaze (GSH-ST U/mg beljakovin) in malondialdehida (MDA nmol/ mg beljakovin) v ileumu so ocenili s kompleti za testiranje (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, Kitajska) z UV-VIS

spektrofotometer (UV1100, MAPADA, Šanghaj, Kitajska).

2.7. Izolacija RNA in kvantitativna verižna reakcija s polimerazo v realnem času (qRT-PCR)

Celotno RNA račjega ileuma (100,00 mg) smo izolirali z uporabo reagentnega kompleta (TaKaRa, Japonska) v skladu s protokolom, ki ga priporočajo proizvajalci. Koncentracijo in čistost celotne RNA smo zaznali pri razmerju A260/A280 s spektrofotometrom (IMPLEN, Nemčija). 1 µg skupne RNA v vsakem vzorcu smo pretvorili v cDNA s kompletom reagentov Prime Script™ RT z radirko gDNA (TaKaRa, Dalian, Kitajska) v skladu z

po protokolu, ki ga priporočajo proizvajalci. Dobljeno cDNA iz vsakega račjega ileuma smo uporabili kot predlogo za komplet RT-PCR (qRT-PCR) TB Green™ Premix Ex Taq™ (TaKaRa, Dalian, Kitajska). Pristopno število genov rac je bilo pridobljeno od NCBI in

račje genske začetnike je sintetiziral Sangon Biotech Co., Ltd. (Šanghaj, Kitajska) (tabela 3). Ustrezno gensko izražanje v račjem ileumu je bilo določeno z aparatom Quanta gen Q225 termični cikeler. QRT-PCR je bil izveden v izbranem realnem času Monad

Sistem PCR (instrument za PCR v realnem času ABI 7500 (ZDA)), ki teče do pogojev: en cikel pri 95 ◦C za 30 s, 40 ciklov pri 95 ◦C za 5 s in pri 60 ◦C za 30 s. Relativno razmerje genske ekspresije detekcijske mRNA je bilo zaznano z metodo 2−∆∆Ct in normalizirano na ekspresijo -aktina.

2.8. Western Blotting

Račji ​​ileum je bil zdrobljen in liziran v pufru RIPA, ki je vseboval 1 mmol/L PMSF (Beyotime, Šanghaj, Kitajska) v ledu. Skupna koncentracija beljakovin v ileumu je bila določena s kompletom za testiranje bicinhoninske kisline (BCA) (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, Kitajska). 12-odstotni in 10-odstotni SDS-poliakrilamidni gel za elektroforezo sta bila

uporablja za pridobivanje ciljnih proteinov z različno molekulsko maso. Nato smo ciljne proteine ​​prenesli na poliviniliden-difluoridno (PVDF) membrano (Beyotime, Šanghaj, Kitajska) za madeže s trans bloting aparatom. PVDF membrano smo sprali 3-krat po 10 minut vsakič v 1 × PBST in nato blokirali 2 uri v 5-odstotnem posnetem mleku. Membrano PVDF smo ponovno 3-krat sprali in inkubirali s primarnimi protitelesi GAPDH, Nrf2 in P-P65 (Beyotime Biotechnology, Šanghaj, Kitajska) 8–12 ur pri 4 °C. Naslednji dan je bila PVDF membrana ponovno 3-krat sprana in inkubirana z ustreznim protitelesom, označenim s hrenovo peroksidazo, pri 37 °C 1 uro, nato pa ponovno 3-krat sprana.

Trakovi ciljnih beljakovin so bili odkriti in vizualizirani pod delovanjem izboljšanega kompleta za zaznavanje fluorescence BeyoECL Star (Beyotime Biotechnology, Šanghaj, Kitajska). Slike madežev so bile posnete in analizirane s slikovno platformo Essential V6 (UVITEC, Cambridge,

Anglija). Protein GAPDH je služil kot notranji kontrolni protein. Vsi rezultati poskusa so bili ponovljeni v treh izvodih. Relativne ekspresije ciljnih proteinov so bile izražene kot razmerje med intenzivnostmi pasov proteinov in GAPDH.

2.9. Statistična analiza

Eksperimentalni podatki so bili pridobljeni vsaj šestkrat in vsak vzorec je bil izmerjen trikrat. Analiza raziskovalnih podatkov s testom Independent-Samples T, ki ga izvaja SPSS (različica 22.0, SPSS Inc., Chicago, IL, ZDA) s 5 odstotki. Verjetnost napake in statistična pomembnost je bila p < {{4} }.05 v tej študiji