Disekcija protitelesnih odzivov oseb, cepljenih z Gam-COVID-Vac, kaže na vpletenost epitopov zunaj RBD v nevtralizacijo SARS-CoV-2
Oct 16, 2023
Povzetek: Milijoni ljudi so bili cepljeni z Gam-COVID-Vac, vendar natančne specifičnosti induciranih protiteles niso v celoti raziskane. Plazma 12 preiskovancev, ki še niso bili okuženi, in 10 preiskovancev s koronavirusno boleznijo 2019 (COVID-19), ki so rekonvalescenti, je bila pridobljena pred in po dveh imunizacijah z Gam-COVID-Vac. Reaktivnost protiteles v vzorcih plazme (n=44) so preučevali na plošči rekombinantnih zvitih in razvitih proteinov hudega akutnega respiratornega sindroma koronavirusa 2 (SARS-CoV-2) in 46 peptidov, ki zajemajo konico beljakovine (S) in z encimsko imunskim testom podrazreda imunoglobulina G (IgG) (ELISA). Sposobnost protiteles, ki jih povzroča Gam-COVID-Vac, da zavirajo vezavo receptorske vezavne domene (RBD) na njen receptor angiotenzinske konvertaze 2 (ACE2), so raziskali s testom molekularne interakcije (MIA). Zmogljivost protiteles za nevtralizacijo virusa so preučevali s psevdotipiziranim testom za nevtralizacijo virusa (pVNT) za Wuhan-Hu-1 in Omicron. Ugotovili smo, da je cepljenje Gam-COVID-Vac povzročilo znatno povečanje IgG1, ne pa tudi drugih podrazredov IgG proti prepognjenemu S, spike protein podenoti 1 (S1), spike protein podenoti 2 (S2) in RBD na primerljiv način pri naivnih in rekonvalescentih predmetov. Nevtralizacija virusa je bila močno povezana s protitelesi, ki jih povzroči cepljenje, specifičnimi za zložen RBD in nov peptid (tj. peptid 12). Peptid 12 je bil lociran blizu RBD v N-terminalnem delu S1 in je lahko potencialno vključen v prehod konformacije koničastega proteina pred v postfuzijsko. Če povzamemo, je cepljenje Gam-COVID-Vac povzročilo protitelesa IgG1, specifična za S, pri preiskovancih, ki še niso bili in okrevajo, na primerljiv način. Poleg protiteles, specifičnih za RBD, so bila z nevtralizacijo virusa povezana tudi protitelesa, inducirana proti peptidu blizu N-konca RBD.
Ključne besede: SARS-CoV-2; COVID-19; Gam-COVID-Vac; epitop; protitelesa; nevtralizacija virusov; test molekularnih interakcij; Omikron
koristi dodatka cistanche-povečanje imunosti
Kliknite tukaj za ogled izdelkov Cistanche Enhance Imunity
【Vprašajte za več】 E-pošta:cindy.xue@wecistanche.com/Whats App: 0086 18599088692/Wechat: 18599088692
1. Uvod
Po prvih primerih okužbe s hudim akutnim respiratornim sindromom Coronavirus 2 (SARS-CoV-2) konec leta 2019 v Wuhanu na Kitajskem se je nova koronavirusna bolezen (COVID-19) hitro razširila po vsem po svetu in prerasla v globalno pandemijo [1–4]. Hiter razvoj cepiv proti COVID-19 in uvedba globalnih programov cepljenja skupaj s pojavom manj patogenih različic SARS-CoV-2 veljata za pomembne dejavnike za zmanjšanje smrti, povezanih s COVID-19- in resnost pandemije [1,5]. Prva cepiva, ki so postala na voljo, so bila genetska cepiva, ki so temeljila na prenosu gena, ki kodira površinski protein S SARS-CoV-2, ki ga posreduje adenovirus [6–8]. Protein SARS-CoV-2 S je sestavljen iz podenote S1, ki vsebuje receptorsko vezavno domeno (RBD), ki se veže na svoj receptor ACE2 na človeških celicah, in podenote S2, ki zagotavlja pritrditev virusa na membrano gostiteljske celice s proteolitično cepitvijo fuzijski peptid (FP) med okužbo z virusom [9]. Gen S, ki se uporablja za prenos genov v določenih cepivih na osnovi adenovirusa (npr. COVID-19 Vaccine Janssen), se lahko spremeni, da stabilizira protein in vpliva na njegovo cepitev, vendar to ne velja za druga [10]. Človeške celice, ki so okužene z adenovirusi, ki vsebujejo gen, ki kodira S, proizvajajo različno količino antigena S, ki se sprosti in ga glavni histokompatibilni kompleks (MHC) razreda II predstavi T-celicam, kar povzroči pomoč T-celicam CD4+ za proizvodnjo S-specifičnih protiteles. Protein S, izražen s transfektiranimi celicami, je predstavljen tudi z MHC razreda I na površini okužene celice in sproži aktivacijo S-specifičnih citotoksičnih celic CD8+ T, ki lahko prepoznajo celice, ki proizvajajo antigen S, in jih uničijo. Načelo cepljenja, tj. vnos genetske informacije, ki kodira S, v gostiteljske celice in kasnejša proizvodnja antigena S v okuženih celicah, je podoben cepivom z messenger ribonukleinsko kislino (mRNA), čeprav se tehnologija prenosa genov razlikuje od tehnologije adenovirusa. cepiva na osnovi. Tako "genetska cepiva" do neke mere posnemajo naravno okužbo s SARS-CoV-2. Identifikacija epitopov, ki jih prepoznajo protitelesa cepljenih oseb, vključenih v nevtralizacijo virusa, je ključna ne samo za razumevanje mehanizma delovanja obstoječih cepiv, ampak tudi za razvoj izpopolnjenih strategij aktivnega cepljenja in pasivne imunizacije proti COVID-19 [11 ,12]. Večina trenutnih cepiv je osredotočena na pridobivanje odziva protiteles, specifičnih za S, s posebnim poudarkom na odzivu protiteles, specifičnih za RBD, ker je bilo ugotovljeno, da so protitelesa, specifična za RBD, povezana z visoko nevtralizirajočo aktivnostjo proti SARS-CoV-2 [ 13–15]. Vendar pa število mutacij, ki jih pridobi vsaka nova skrb vzbujajoča varianta (VOC), kaže na pomen identifikacije epitopov, ohranjenih med HOS, na katere ciljajo nevtralizirajoča protitelesa, ki se nahajajo ne samo v RBD, ampak tudi zunaj RBD [16]. Pravzaprav obstajajo študije, ki kažejo na prisotnost nevtralizirajočih epitopov zunaj RBD, ki jih protitelesa prepoznajo po imunizaciji [17–20]. Leta 2020 je vektorsko cepivo Gam-COVID-Vac, imenovano tudi Sputnik-V, postalo na voljo za uporabo v klinični praksi in je trenutno odobreno za uporabo v več kot 70 državah (https://sputnikvaccine.com/about-vaccine / (dostop 17. 1. 2023)). Po podatkih vira Our World In Data (OWID) je 79 milijonov ljudi v Rusiji prejelo vsaj en odmerek cepiva, 72 milijonov pa jih je popolnoma cepljenih (https://ourworldindata.org/ covid-vaccinations?country= RUS (dostopano 22. marca 2022)). Gam-COVID-Vac je sestavljen iz dveh vrst cepiva, ki temeljita na dveh različnih človeških adenovirusnih vektorjih (hAd26 in hAd5), ki nosita nativno obliko S-proteina Wuhan-Hu-1 seva SARS-CoV{{ 73}}. Sputnik-V obsega dve injekciji, eno s hAd26 in drugo s hAd5 in svetlobo Sputnik, samo s hAd26. Dva različna adenovirusna vektorja se uporabljata za prvo in drugo imunizacijo, da se zmanjša možnost, da cepljeni subjekti ustvarijo imunost na protein S proti adenovirusu. Pravzaprav bi protitelesa, specifična za adenovirus, omejila učinkovitost poživitvenih cepiv z nevtralizacijo vektorskega nosilca adenovirusa. Zato se 21. dan po prvem odmerku cepiva z rAd26 izvede ponovna dostava antigena z vektorjem rAd5 [8,21]. Nekaj študij je v znatnem obsegu raziskalo odzive protiteles, specifične za S- in RBD, ter aktivnost nevtralizacije virusa v serumih cepljenih z Gam-COVID-Vac [10,22,23]. Poročali so o povečanju protiteles IgG, specifičnih za RBD, tri mesece po dajanju Gam-COVID-Vac in pokazalo se je, da protitelesa navzkrižno reagirajo z zaskrbljujočimi različicami Alfa, Beta, Delta in Omicron [24–26]. Gam-COVID-Vac so primerjali tudi z več drugimi licenčnimi cepivi proti SARS-CoV-2, ki so za Sputnik-V pokazala visoko nevtralizacijo virusa in visoko učinkovitost proti{102}}povezani umrljivosti s COVID-om, čeprav nekoliko slabša. nekaterim cepivom mRNA v zvezi z nevtralizacijo virusa [24]. Nazadnje je bilo dokazano, da imunizacija bolnikov, pozitivnih na virus humane imunske pomanjkljivosti (HIV+), zdravljenih s protiretrovirusno terapijo (zdravljenih z ART), z Gam-COVID-Vac kaže epidemiološko učinkovitost proti izvirnemu divjemu tipu in različici Delta SARS-CoV{{ 113}} [27]. Vendar do zdaj ni bila opravljena podrobna analiza prepoznavanja epitopa s protitelesi pri osebah, cepljenih z Gam-COVID-Vac, zato so potrebni podatki za razumevanje izotipa imunoglobulina in odzivov podrazreda IgG pri osebah, cepljenih z Gam-COVID-Vac. Tu smo raziskali dve skupini oseb, ki sta bili cepljeni z Gam-COVID-Vac, eno, ki je imela predhodno okužbo s SARS-CoV-2, in drugo skupino oseb, ki še niso bile okužene s SARS-CoV-2. Izvedli smo natančno analizo epitopske specifičnosti induciranih protiteles z uporabo zvitih in nezvitih proteinov in peptidov, pridobljenih iz mikro nizov SARS-CoV-2-, ki zajemajo celoten protein S, vključno z RBD. Poleg tega so analizirali odzive podrazreda IgG. Naša študija razkriva, da subjekti, cepljeni z Gam-COVID-Vac, razvijejo protitelesa, specifična za RBD, ki lahko blokirajo interakcijo RBD-ACE2. Zanimivo je, da smo ugotovili, da je bila nevtralizacija virusa povezana tudi s protitelesi, usmerjenimi proti peptidu zunaj RBD, ki je lahko vključen v prehod preto-post-fuzijske konformacije koničastega proteina.
cistanche tubulosa - izboljšanje imunskega sistema
2. Rezultati
2.1. Preiskovanci, cepljeni z Gam-COVID-Vac, vključujejo preiskovance, ki še niso bili okuženi z virusom COVID-19, in osebe, ki rekonvalescente
Rekonvalescenti so bili okuženi s sevom Wuhan-Hu-1 glede na njegovo razširjenost in podatke o zaporedju, pridobljene v času okužbe v moskovski regiji. Naivni subjekti v času vključitve niso imeli simptomov COVID-19 in niso imeli protiteles, specifičnih za SARS-CoV-2-. Preiskovanci so vključevali 15 žensk in 7 moških s srednjo starostjo 60 (tj. 25–70 let) (tabela 1).
Tabela 1. Demografske, klinične in serološke značilnosti subjektov.
Vzorec plazme je bil pridobljen od vsakega subjekta ob časovni točki 0 (tj. osnovna črta) (slika 1A), nato je bil vsak subjekt cepljen s Sputnikom-V z intervalom približno 21 dni med prvim in drugim injekcijo (časovni točki 1 in 2). V časovni točki 3 je bil zbran drugi vzorec plazme za določitev odzivov protiteles, ki jih povzroči cepivo (slika 1A). Osebe so opazovali dodatnih 120 dni. 110. dan po končnem cepljenju je imel en subjekt (tj. subjekt 22) COVID-19, medtem ko drugi niso razvili nobenih simptomov COVID-19 (tabela 1).
Slika 1. Zasnova študije in odzivi specifičnih protiteles za SARS-CoV-2- pred in po cepljenju s Sputnikom-V. (A) Zasnova študije. Vzorci plazme so bili pridobljeni pri preiskovancih, ki še niso bili okuženi s COVID{4}} (n=12) in preiskovancih okrevali (n=10) v časovni točki 0 (izhodišče), nato so preiskovanci prejeli dva Sputnik-V cepljenja v časovnih točkah 1 oziroma 2, vzorec plazme pa je bil pridobljen v časovni točki 3 (tj. dan 80–85 po prvem cepljenju). (B) Raven protiteles IgG, specifičnih za nukleokapsid (os y: ISU) pri predhodno nezdravljenih in okrevajočih osebah (os x) na začetku. Vodoravna črta označuje mejo za pozitivnost. (C) Ravni protiteles IgG (osi y: ISU), specifične za RBD, S, S1 in S2 pri subjektih v časovni točki 0 in 3 (osi x). (D) Od leve proti desni ravni protiteles IgG1, IgG2, IgG3 in IgG4 (osi y: vrednosti OD optične gostote) do S (zgornji del) in RBD (spodnji del) v časovnih točkah 0 in 3 ( x-osi). Navedene so pomembne razlike med skupinami, kot jih je določil Wilcoxonov test: ** p < 0.01, *** p < 0,001, **** p < 0,0001, ns—ni pomembno.
2.2. Cepljenje Gam-COVID-Vac povzroči široke odzive IgG na S, vključno s S1, RBD in S2
koristi dodatka cistanche-povečanje imunosti
Izvedli smo podrobno analizo odzivov protiteles proti velikemu panelu mikromrežnih zvitih in razvitih SARS-CoV-2 proteinov in peptidov, ki obsegajo S protein v vzorcih plazme preiskovancev, ki še niso bili okuženi s SARS-CoV-2-in okrevali po celotnem ciklusu imunizacij z Gam-COVID-Vac (slika 1A, B; tabela 1). Pri primerjavi vzorcev plazme od časovne točke 0 in časovne točke 3 po cepljenju je bila ugotovljena pomembna indukcija odzivov IgG proti prepognjenim, vendar ne razvitim RBD, S, S1 in S2 (slika 1C). Tri mesece po cepljenju so osebe pokazale 21-kratno povečanje RBD-specifičnih protiteles IgG (p < 0.{{20}}001) in {{ 18}}kratno povečanje S-specifičnih protiteles IgG (tj. časovna točka 0: mediana 0,291, časovna točka 3: mediana 5,778) (p < 0,0001). Protitelesa IgG proti S1 so se povečala za 3.7--krat (p=0.0023) in protitelesa IgG proti S2 so se povečala za 2.8--krat (p=0.0094) (slika 1C ). Cepljenje z zdravilom Gam-COVID-Vac je povzročilo predvsem odzive IgG na zvite S, S1 in RBD primerljivo pri naivnih in okrevajočih osebah (slike 1C, S2 in S3), kar kaže, da se lahko uporablja za spodbujanje SARS-CoV-2- specifične protitelesne odzive tudi pri okrevajočih. Pomembna povečanja protiteles IgG proti RBD, S in S1 so opazili pri naivnih in okrevajočih osebah (slika S2) in ni bilo pomembnih razlik glede ravni IgG proti RBD, S, S1 in S2 pri naivnih in okrevajočih osebah v časovni točki 3 (Slika S3).
2.3. Cepljenje Gam-COVID-Vac sproži predvsem odziv podrazreda IgG1 na S in RBD
Poročali so, da alergen-specifična imunoterapija (AIT) inducira predvsem za alergen specifične odzive IgG1 in IgG4, ki se ne razlikujeta le glede svojih efektorskih funkcij (IgG1 lahko posreduje od protiteles odvisno celično citotoksičnost (ADCC) in aktivacijo komplementa, medtem ko IgG4 teh nima efektorske funkcije), temveč tudi glede njihove kinetike (IgG1: hiter začetek in zgodnji upad: IgG4: počasen nastop, vendar trajne ravni) [28–30]. Zato smo raziskali odzive podrazreda IgG (tj. IgG1–IgG4) na S in RBD pri osebah, cepljenih s Sputnikom-V. Slika 1D kaže, da je cepljenje povzročilo skoraj izključno odziv podrazreda IgG1 na S in RBD. Po cepljenju so ugotovili pomembna zvišanja ravni IgG1, specifičnih za S in RBD (p=0.0002 oziroma p=0.0071). Vendar ni bilo mogoče zaznati ustreznih odzivov podrazreda IgG2, IgG3 ali IgG4, specifičnih za S in RBD (slika 1D).
2.4. Indukcija protiteles, ki nevtralizirajo virus, in protiteles, ki zavirajo interakcijo RBD-ACE2, s cepljenjem Gam-COVID-Vac
Za odkrivanje protiteles, ki nevtralizirajo virus, smo uporabili test pVNT, kjer so bili virusu podobni delci psevdotipizirani s S-proteinom iz prvotnega seva Wuhan-Hu-1 in nedavno opisanega VOC Omicron. Protitelesa z nevtralizirajočo aktivnostjo za sev Wuhan Hu-1 so bila najdena pri vseh razen pri enem (tj. preiskovancu 22) od 22 preiskovancev (slika 2A, tabela 2), medtem ko so bili titri nevtralizirajočih protiteles za Omicron znatno nižji (slika 2B) in le pri 17 od 20 preiskovancev (slika 2A, tabela 2). Pri subjektih 6, 7, 10, 11, 15 ni bila ugotovljena nobena pomembna nevtralizacija (slika 2A, tabela 2). Titri nevtralizacije virusa za Omicron so bili 25-krat nižji kot za WT (mediana 141,9 oziroma 5,7 za Wuhan-Hu-1 oziroma Omicron) (slika 2B).
Slika 2. Aktivnost nevtralizacije virusa v plazmi 3 mesece po cepljenju s Sputnikom-V in povezava z odzivi protiteles IgG na peptide, pridobljene iz RBD in S. (A) Nevtralizacija virusa (ID50) (os y) proti sevu Wuhan-hu-1 (zeleno) in Omikronu (oranžno) je bila pridobljena s plazmo naivnih (modra) in rekonvalescentov (rdeča) predmetov (osi x). (B) Primerjava nevtralizacije virusa (os y: ID50, pridobljen za plazmo testiranih oseb, stolpci predstavljajo mediane z interkvartilnim razponom (IQR) Wuhan Hu-1 (zeleno) in Omicron (oranžno) Vodoravna črta predstavlja rezultate, dobljene s plazmo zdravega, neokuženega kontrolnega subjekta (zdrava kontrola, HC) Pomembne razlike med sevi so bile določene z Mann–Whitneyevim testom: **** p < 0. {{30}}001. (C) Lokalizacija RBD in peptidov v korelaciji z nevtralizacijo virusa v shemi S (S1, S2). (D) Korelacije med titri nevtralizacije virusa za Wuhan-Hu{{19 }} (WT) ali Omicron (osi y) in ravni IgG, specifične za RBD in peptide, pridobljene iz konic 12, 32 in 46A (osi x: ISU). Modri in rdeči simboli označujejo naivne oziroma okrevale osebe. Zvezdice kažejo pomembne korelacije glede na neparametrični Spearmanov test, * p < 0,05, ** p < 0,01, *** p < 0,001 **** p < 0,0001, ns=ni pomembno.
Tabela 2. Primerjava ravni IgG, specifičnih za S, S1, S2 in RBD, izmerjenih z mikromrežo z inhibicijami vezave RBD na ACE2 in titri nevtralizacije virusa (Wuhan-Hu-1, Omicron), določenimi za plazmo iz preiskovanih predmetov. Toplotno kartiranje je bilo izvedeno za vsak parameter posebej z uporabo programa Excel. Najvišja stopnja je bila temno rdeča, najnižja pa bela.
Dejstvo, da so se pri vseh subjektih, razen pri enem (tj. subjektu 22), protitelesa, ki nevtralizirajo virus, po cepljenju povečala, kaže, da so bila inducirana s cepljenjem (tabela 2). Subjekt 21 je že pokazal visoko blokado interakcije RBD-ACE2 pri MIA in visoko nevtralizacijo virusa na začetku (tabela 2). Predvsem so imeli vzorci plazme rekonvalescentov, cepljenih z Gam-COVID-Vac, ki so imeli zmerno bolezen (št. 1, 2, 17, 18, 21), višje nevtralizacijske titre virusa kot tisti rekonvalescentov, ki so imeli blago bolezen (št. 22) ali brez simptomov (#4, 5, 7, 9) (tabeli 1 in 2). Vendar je bila ključna ugotovitev, da inhibicija vezave RBD na ACE2 in nevtralizacija virusa nista vedno povezani. Več kot 25-odstotna inhibicija vezave RBD Wuhan Hu-1 na ACE2 se je pojavila le pri 6 preiskovancih, ki so prav tako pokazali inhibicijo v testu nevtralizacije virusa zaradi cepljenja (tj. preiskovanci 1, 2, 3, 17, 18 , in 19) (tabela 2). Zanimivo je, da so nevtralizirajočo aktivnost virusa (50-odstotni infektivni odmerek (ID50) > 100) opazili pri 6 preiskovancih, čeprav niso pokazali nobene ali slabe inhibicije vezave RBD na ACE2 (Tabela 2: Preiskovanci 6, 10, 12, 13, 16, 20) .
2.5. Nevtralizacija virusa pri subjektih, cepljenih z Gam-COVID-Vac, je močno povezana z odzivi IgG na RBD in na peptid 12, pridobljen iz S
Kot je navedeno prej, je plazma več preiskovancev, cepljenih z Gam-COVID-Vac (npr. pri preiskovancih 6, 10, 12, 13, 16, 20; tabela 2), pokazala aktivnost nevtralizacije virusa, vendar ni zavirala interakcije RBD-ACE2. Zato smo analizirali reaktivnost protiteles IgG na peptide, ki zajemajo protein S, z analizo čipov na podlagi mikromrež [13] (slika S4 in slika 2C) in povezali peptidno specifične odzive IgG z nevtralizacijo virusa Wuhan-Hu{{19} } sev in Omicron (slika 2D). Odzivi IgG na tri peptide (tj. peptide 12, 32, 46A), kot so odzivi IgG na zložen RBD, so pomembno korelirali z nevtralizacijo seva Wuhan-Hu-1 (slika 2C, D). Peptid 12 je izstopal, ker so bili odzivi protiteles na razvit peptid 12 (slika S1), ne pa na razvita peptida 32 in 46A, znatno povečan z Gam-COVID Vac pri naivnih osebah (slika 3A) in je bil tudi v pomembni korelaciji z nevtralizacijo omikrona (slika 2D). ). Pri rekonvalescentih za peptide 12, 32 ali 46A niso opazili pomembnega povečanja (slika 3A). Zaporedje peptida 12 je visoko ohranjeno med sevi SARS-CoV-2 (slika 4) in se nahaja v S1 blizu N-konca RBD in tako označuje regijo, ki je lahko pomembna za prehod pred- na postfuzijsko konformacijo proteina S (slika 3B).
Slika 3. Mediana ravni protiteles IgG (osi y: ISU) proti peptidom, pridobljenim iz S (P12, P32, P46A) pri cepljenih preiskovancih, ki še niso bili cepljeni in okrevali, v časovnih točkah 0 in 3 (osi x) (A) . Navedene so pomembne razlike med skupinami, kot jih je določil Wilcoxonov test: * p < 0.05, ns=ni pomembno. (F) (B) Slika 3. Mediana ravni protiteles IgG (osi y: ISU) proti peptidom, pridobljenim iz S (P12, P32, P46A) pri cepljenih preiskovancih, ki še niso bili cepljeni in okrevali, v časovnih točkah 0 in 3 (x -osi) (A). Navedene so značilne razlike med skupinami, kot jih je določil Wilcoxonov test: * p < 0,05, ns=ni pomembno. (B) Vizualizacija peptidov 12, 32 in 46A v površinski predstavitvi koničastega proteinskega trimera SARS-CoV-2 (stranski pogled, konformacija pred fuzijo), ustvarjenega s PyMOL. Peptid 12 je v modelu S-trimer označen z rdečo, peptid 32 z modro in 46A z oranžno. Ogljikovi hidrati so prikazani v svetlo sivi barvi.
Slika 4. Poravnava zaporedja beljakovin Wuhan-Hu-1 (zgoraj) in Omicron (spodaj) S-proteina SARS-CoV-2. RBD je obarvan svetlo rumeno in peptidi 12, 22, 25, 32, 33, 46A in 47 so podčrtani. Zaporedje S-proteina Wuhan ustreza izolatu WA1 (pristopna št. GeneBank: BCN86353.1), zaporedje S-proteina Omicron Omicron je klas GRA, linija B.1.1.529 BA.1 na podlagi zbirke podatkov GISAID ( https://www.gisaid.org/ (dostopano 15. marca 2022)). Aminokislinske substitucije so barvno kodirane glede na njihovo hidropatijo in lastnosti naboja (roza=hidrofobna, zelena=nevtralna, svetlo modra=bazična hidrofilna in svetlo rdeča=kisla hidrofilne).
3. Razprava
Vektorsko cepivo Gam-COVID-Vac, imenovano tudi Sputnik-V, je bilo eno prvih cepiv proti SARS-CoV-2, ki je bilo na voljo za uporabo v klinični praksi. Vendar je na voljo razmeroma malo informacij o finih specifičnostih odzivov protiteles pri osebah, ki so bile cepljene proti COVID-19. V tej študiji smo izvedli podrobno analizo odzivov protiteles proti zloženim in razvitim proteinom SARS-CoV-2 in peptidom, ki obsegajo protein S, v vzorcih plazme oseb, ki še niso bile okužene s SARS CoV-2-in okrevali po celoten ciklus cepljenja z Gam COVID-Vac. Gam-COVID-Vac je sprožil večinoma IgG1, vendar nobenih drugih odzivov podrazreda IgG na prepognjene S, S1, S2 in RBD na primerljiv način pri naivnih in okrevajočih osebah, kar kaže, da se lahko uporablja za spodbujanje SARS-CoV-2- specifične protitelesne odzive tudi pri okrevajočih. Tako kot druga genetska cepiva je bil odziv protiteles, ki ga povzroči Gam-COVID-Vac, v glavnem v podrazredu IgG1, ki ima krajšo razpolovno dobo v primerjavi z odzivom podrazreda IgG4, ki je bolj vzdržen. Na primer, specifični odzivi podrazreda IgG4 so povezani z dolgotrajno zaščito med alergen-specifično imunoterapijo, medtem ko se specifični odzivi IgG1 razvijejo hitro, vendar izginejo po nekaj mesecih [28–30]. V skladu s tem bodo potrebne pogoste obnovitvene injekcije Gam-COVID-Vac in drugih genetskih cepiv, da bodo odzivi nevtralizirajočih protiteles na visoki ravni. Cepljenje z Gam-COVID-Vac povzroči protitelesni odziv, ki v veliki meri posnema odziv po naravni okužbi s SARS-CoV-2 [13]. Poleg tega odzivi protiteles po naravni okužbi pripadajo predvsem podrazredu IgG1 in so usmerjeni proti zvitim S, S1, S2 in RBD [13]. Nova in zanimiva ugotovitev naše študije je bila, da je plazma več preiskovancev, cepljenih z Gam-COVID-Vac (npr. pri preiskovancih 6, 10, 12, 13, 16, 20; tabela 2), pokazala aktivnost nevtralizacije virusa, vendar ni zavirala Interakcija RBD-ACE2. Zato smo analizirali reaktivnost protiteles IgG na peptide, ki obsegajo celoten protein S, z analizo čipov na podlagi mikromrež [13] (sliki 2D in S4) in korelirali peptidno specifične odzive IgG z nevtralizacijo virusa Wuhan-Hu{{62} } in Omicron BA.1 (slika 2D). Odzivi IgG na tri peptide (tj. peptide 12, 32, 46A), kot so odzivi IgG na RBD, so pomembno korelirali z nevtralizacijo seva Wuhan-Hu-1 (slika 2C, D). Vendar je bil peptid 12 edinstven, ker so bili odzivi protiteles samo na peptid 12, ne pa tudi na peptida 32 in 46A, znatno okrepljeni s cepljenjem (slika 3A) in so bili tudi v pomembni korelaciji z nevtralizacijo omikrona (slika 2D). Obseg s cepivom povzročenega povečanja odzivov IgG na peptid 12 je bil skromen, vendar pomemben pri naivnih osebah in povsem primerljiv s povečanjem protiteles IgG, usmerjenih proti S in S1. Vendar lahko protitelesa IgG proti izoliranemu nezvitemu peptidu (slika S1) predstavljajo le del protiteles, usmerjenih proti peptidu 12 v zvitem proteinu. Poleg tega niso pomembne samo ravni, ampak tudi avidnost protiteles. Zaporedje peptidov 12 je zelo ohranjeno med sevi Wuhan-Hu-1 in BA.1 Omicron VOC (slika 4) in izhaja iz regije, ki je lahko pomembna za prehod pred v postfuzijsko konformacijo proteina S (slika 3B). Poleg tega primerjava novih mutantnih variant omikrona (BA.1, BA.2, BA.4/5, BA.2.12.1, BA.2.75, BQ.1) kaže, da peptid 12 (284–313 aa. ) ostaja nespremenjen v smislu aminokislinskega zaporedja, v nasprotju z na primer peptidom 32 (https://covariants.org/shared-mutations, (dostop 28. 11. 2022)). Predvsem so bila opisana monoklonska protitelesa s sposobnostjo nevtralizacije virusa, ki ciljajo na regijo N-terminalne domene (NTD), katere del je peptid 12 [31], in poročali so, da lahko tudi druga cepiva inducirajo protitelesni odziv, usmerjen proti tej regiji. [18–20,32], kar kaže, da je lahko regija, ki jo določa peptid 12, pomembna za indukcijo nevtralizirajočih protiteles. Zato lahko domnevamo, da lahko protitelesa, inducirana s cepljenjem Gam-COVID-Vac, nevtralizirajo SARS-CoV-2 z dvema mehanizmoma, prvim preprosto z zaviranjem interakcije RBD–ACE2 in drugim s ciljanjem na regijo, ki vsebuje peptid 12 S- protein, ki je lahko vključen v strukturne spremembe (tj. prehod predfuzijske v fuzijsko konformacijo S). Naša študija ima omejitve. Na primer, uporabili smo nevtralizacijski test, ki temelji na psevdotipiziranih lentivirusih, vendar so ti testi široko uporabljeni in zanesljivi [33]. Omejitev naše študije je tudi, da so bili peptidi na naši mikromreži razviti in so tako morda identificirali le del nevtralizirajočih protiteles, ki so prepoznala razvite peptide, medtem ko je bil lahko še večji delež protiteles vezan na konformacijske epitope v identificiranih regiji. Poleg tega je omejitev naše študije, da smo analizirali le majhno število subjektov. Vendar pa naša študija jasno kaže, da lahko protitelesa z različno specifičnostjo epitopa prispevajo k zaščitnemu učinku cepljenja Gam COVID-Vac. Poleg tega študija kaže odziv na potencialno ohranjen peptid, ki se lahko uporabi za ustvarjanje široko nevtralizirajočih protiteles.
koristi dodatka cistanche - kako okrepiti imunski sistem
4. Materiali in metode
4.1. Raziskovalna populacija in etična izjava
Zdrave osebe z (n {{0}}) ali brez (n=12) predhodnih okužb s SARS-CoV-2 so bile vključene v študijo decembra 2020 na Inštitutu Nacionalnega raziskovalnega centra za Imunologija Zvezne medicinske biološke agencije Rusije (Etična številka: #12-1, 29. december 2020). Vsi udeleženci so dali pisno informirano soglasje. Prejšnja okužba s SARS-CoV-2 je bila potrjena s prejšnjim pozitivnim testom PCR in simptomi COVID-19 ali s prisotnostjo SARS-CoV-2-specifičnih protiteles, usmerjenih proti nukleokapsidnemu antigenu in/ali RBD in/ali antigen S, kot je opisano [13]. Vsi preiskovanci so bili intramuskularno cepljeni z dvema odmerkoma Sputnika-V (Gam-COVID-Vac, Biocard, Moskva, Rusija) v presledku treh tednov. Vzorce krvi smo odvzeli en dan pred prvim cepljenjem (T0, slika 1A) in 80 do 85 dni po prvem cepljenju (T3, slika 1A).
4.2. Odkrivanje odzivov specifičnih protiteles SARS-CoV-2-
Imunoglobulinski odziv oseb, ki še niso bile okužene in rekonvalescentov s COVID{{0}}, so ocenili v vzorcih plazme pred in po imunizaciji s Sputnik-V (slika 1A). Specifični IgG za obsežno skupino proteinov SARS-CoV-2 in 46 peptidov (25–30 mer), ki zajemajo protein S, je bil izmerjen v 1:50 razredčenih vzorcih plazme s tehnologijo mikromrežnega čipa kot prej opisano [13]. Zaporedja aminokislin, število aminokislin in molekulska masa za vse sintetične peptide na čipu z mikro nizi so predstavljeni v tabeli 3. Za peptida 12 in 32 ter RBD, izražen v Escherichia coli (E. coli) (razgrnjen) v celicah človeške embrionalne ledvice 293 (HEK293) pa so na voljo (zloženi) spektri krožnega dikroizma (CD) (slika S1). Peptida 12 in 32 nista pokazala specifične sekundarne strukture, kot je določeno s krožnim dikroizmom (CD), kot je prikazano na sliki S1. Natančneje, steklena stekelca, ki vsebujejo mikromreže, obdane z epoksi okvirjem (Paul Marienfeld GmbH & Co. KG, Lauda-Königshofen, Nemčija), so bila aktivirana z amino reaktivnim kompleksnim organskim polimerom, MCP-2 (Lucidant Polymers, Sunnyvale, CA). , ZDA), da bi olajšali vezavo proteinov in peptidov. Antigeni/peptidi SARS-CoV-2 so bili opazovani s koncentracijo 0,5–1 mg/mL v (75 mM Na2HPO4, pH=8.4) v trojnikih z uporabo SciFlexArrayer S12 (Scienion AG, Berlin, Nemčija) [13]. Ekspresija in čiščenje proteinov ter sinteza peptidov so opisani v [13]. Reaktivnost protiteles IgG na antigene z mikromrežami smo izmerili tako, da smo mikromreže najprej 5 minut izpirali s fiziološko raztopino s fosfatnim pufrom z 0,5 % Tween 20 (PBST) in jih sušili s centrifugiranjem z uporabo centrifuge Sigma 2–7 in MTP-11113 rotor (oba Sigma Laborzentrifugen GmbH, Osterode am Harz, Nemčija). Nato smo dodali alikvote 35 µL vzorcev plazme, razredčenih v razmerju 1:50 (razredčilo za vzorce, Thermofisher, Waltham, MA, ZDA) in inkubirali 2 uri pri 22 ◦C. Po drugem koraku pranja smo nanesli 30 µL sekundarnih protiteles (DyLight 550 (Pierce, Rockford, IL, ZDA), označenih s protičloveškim IgG (Jackson ImmunoResearch Laboratories, West Grove, PA, ZDA)) in jih inkubirali 30 minut pri 22 ◦ C RT. Čipe smo nato oprali, posušili in nato skenirali s konfokalnim laserskim skenerjem (Tecan, Männedorf, Švica). Analiza slike je bila izvedena s programsko opremo za pridobivanje in analizo slike MAPIX microarray (Innopsys, Carbonne, Francija) in pretvorba izmerjenih fluorescenčnih enot v standardizirane enote ISAC (ISU) je bila izvedena, kot je opisano [13]. Specifične ravni protiteles so izražene v standardiziranih enotah ISAC (ISU). Odzive protiteles IgG1–4, specifične za S in RBD, smo izmerili v vzorcih plazme (razredčenih 1:50) v dvojnikih z ELISA, kot je opisano prej [13] z variacijo<5% for their average values.
Tabela 3. Sintetični SARS-CoV-2 peptidi, pridobljeni iz koničastih beljakovin §.
4.3. Spektri daljnega UV krožnega dihroizma (CD).
Za peptide, P12 in P32 ter RBD, izražen v celicah E. coli in HEK293, je bila analiza CD-ja izvedena z uporabo predhodno opisanega spektropolarimetra Jasco J-180 (Japan Spectroscopic Co., Tokio, Japonska) [34]. CD spektre peptidov in proteinov (slika S1) smo izmerili pri koncentraciji 0.1 mg/mL v 10 mM NaH2PO4 (pH 8,0), ki je bil uporabljen za opazovanje antigenov.
4.4. Test nevtralizacije virusa na osnovi psevdovirusa (PVT)
Aktivnost nevtralizacije virusa v vzorcih plazme je bila določena s testom nevtralizacije virusa na osnovi psevdovirusa, kot je opisano prej [35]. Za proizvodnjo SARS-CoV-2 spike virusu podobnih delcev (VLP) so bile celice HEK293T sotransficirane s 3 plazmidi: lentivirusnim pakirnim plazmidom pCMV∆8.2R (Addgene, Teddington, UK), pUCHR-GFP in plazmid pCAGGS-S∆19, ki kodira divji tip SARS-CoV-2 spike protein (identičen referenčnim izolatom Wuhan-Hu-1 in WA1) ali plazmid pCAGGS-S∆19-Om kodira SARS-CoV-2 Omicron spike protein (prijazno darilo Andreja Gorčakova, Laboratorija za imunogenetiko, Inštitut za molekularno in celično biologijo, Sibirska podružnica Ruske akademije znanosti, Novosibirsk, Rusija). Pred uporabo v pVNT so bili VLP titrirani z omejitvijo redčenja in 4 dni inkubirani s hACE2-transfektiranimi celicami HEK293T. Za uporabo v testu je bil izbran odmerek virusnih delcev, ki je dal 50% celic, pozitivnih na zeleni fluorescentni protein (GFP). Za pVNT so bili vsi vzorci plazme toplotno inaktivirani 30 minut pri 56 ◦C pred uporabo. Četrti dan smo celice po okužbi ponovno suspendirali in s pretočno citometrijo izmerili odstotek GFP-pozitivnih celic. Vrednosti ID50 so bile izračunane z uporabo sigmoidne krivulje (programska oprema GraphPad Prism 9.2.0, Sigmoidal, 4PL), rekonstruirane z odstotkom nevtralizacije pri različnih navedenih koncentracijah v plazmi.
4.5. Test molekularnih interakcij (MIA)
Za zaznavanje sposobnosti vzorcev plazme COVID{{0}} rekonvalescentov ali naivnih oseb (tabela 1), pred in po imunizaciji Sputnik-V, za zaviranje vezave 5{{0}} ng/ml RBD-hu-1 na receptor ACE2 je bil izveden test molekularne interakcije (MIA), kot je opisano [13,36–39]. Ta test lahko meri inhibicijo označenega RBD na ELISA ploščo vezanega ACE2 s protitelesi ali inhibicijo interakcije RBD-ACE2 z drugimi spojinami [38]. Na kratko, rekombinantni ACE-2 (GenScript, Piscataway, NJ, ZDA) je bil čez noč prevlečen (2 µg/mL) na plošče NUNC Maxisorb s 96 jamicami (Thermofisher). Nato smo izvedli tri cikle pranja s pralnim pufrom in nato plošče blokirali 3 ure pri sobni temperaturi z blokirnim pufrom. Vzorce seruma smo razredčili 1:2 v PBS, 0,05 % Tween 20, 1 % BSA in predhodno inkubirali 2 uri s 50 ng His-označenega rekombinantnega RBD (GenScript). Nato smo predhodno inkubirane vzorce seruma za 3 ure dodali na plošče, ki so vsebovale ACE-2, plošče pa smo sprali in inkubirali čez noč z 1:1000 razredčenim mišjim monoklonskim protitelesom proti His tag (Dianova, Hamburg, Nemčija) . Po 3 korakih pranja smo za 2 uri dodali 1:1000 razredčeno HRP-vezano protitelo proti miši IgG1 (GE Healthcare, Chicago, IL, ZDA) in detekcijo izvedli z ABTS. Srednje vrednosti optične gostote (OD), ki ustrezajo vezanemu RBD, so bile izmerjene pri 405 nm in 492 nm (referenčna) v bralniku TECAN Infinite F5 ELISA z integrirano programsko opremo i-control 2.0 (Tecan Group Ltd., Männedorf, Švica). Kontrola medpomnilnika (prekrivanje brez RBD) je bila odšteta od vsakega rezultata. Določitve so bile izvedene v dvojnikih in rezultati so prikazani kot srednje vrednosti z variacijo<5%.
koristi dodatka cistanche - kako okrepiti imunski sistem
4.6. Vizualizacija peptidov v strukturi proteina Spike
Površinska predstavitev koničastega proteina SARS-CoV-2 je bila ustvarjena v sistemu PyMOL (PyMOL Molecular Graphics System, različica 2.5.0a0, Schrödinger, LLC, New York, NY, ZDA). na vnos PPP 6XR8.
4.7. Statistična analiza
Statistična analiza je bila izvedena z uporabo GraphPad Prism (različica 9.2.0 GraphPad Software, La Jolla California). Za primerjavo med dvema ali več skupinami so bili uporabljeni Wilcoxonov test (slike 1C, D in 3A), Mann–Whitneyjev test (sliki 2B in S3) in Friedmanov test (slika S2). p < 0.05 velja za statistično pomembno. Korelacijo med obema skupinama smo določili s Spearmanovim rank testom (slika 2D). Normalizirana nelinearna regresija je bila izvedena s programsko opremo GraphPad Prism (Sigmoidal 4PL). Podatki so predstavljeni kot mediana ± IQR. Zvezdice označujejo pomembne razlike med skupinami, * p < 0.05, ** p < 0.01, *** p < 0,001, **** p < 0,0001, ns—ni pomembno.
5. Sklepi
Če povzamemo, je naša študija prva, ki je poglobljeno preučevala specifičnost epitopa in podrazreda IgG protiteles, induciranih z Gam-COVID-Vac, in razkrila različne mehanizme nevtralizacije virusa, ki ga povzroča Gam-COVID-Vac, s protitelesi. Zlasti smo pridobili dokaze, da so protitelesa, usmerjena na peptid (tj. peptid 12), ki se nahaja blizu, vendar zunaj RBD v N-terminalnem delu S1, povezana z nevtralizacijo virusa. Potencialna virusno nevtralizirajoča aktivnost protiteles, specifičnih za peptid 12-, je lahko posledica njihove zmožnosti motenja prehoda konformacije spike proteina pred v postfuzijsko. Predlagamo razmislek o vključitvi regije, ki jo določa peptid 12 v imunogeni obliki, v cepiva za induciranje protiteles proti temu epitopskemu območju in za testiranje protiteles, induciranih s takimi cepivi, za nevtralizacijo virusa. V primeru, da je mogoče povečati virusno nevtralizacijo cepiv, lahko vključitev epitopov imunogenega peptida 12 izboljša učinkovitost cepiv proti COVID-19. Poleg tega lahko razmislimo o razvoju protiteles proti peptidno 12-definiranemu epitopu za pasivno imunizacijo. Ker je peptidno 12-definiran epitop ohranjen v trenutno znanih različicah SARS-CoV-2, cepiva in protitelesa, usmerjena proti peptidu 12. maja, navzkrižno ščitijo pred različicami SARS-CoV-2. Tako zagotavljamo novo znanje, ki je lahko v pomoč pri razvoju novih aktivnih in pasivnih strategij cepljenja proti COVID-19.
Reference
1. Rodriguez-Coira, J.; Sokolowska, M. Kandidatna cepiva SARS-CoV-2 – Sestava, mehanizmi delovanja in stopnje kliničnega razvoja. Alergija 2021, 76, 1922–1924. [CrossRef] [PubMed]
2. Šarma, A.; Ahmad, FI; Lal, SK COVID-19: Pregled razvoja, prenosa, odkrivanja, nadzora in preprečevanja nove koronavirusne bolezni. Virusi 2021, 13, 202. [CrossRef] [PubMed]
3. Aršad, B.; Iqbal, T.; Bhatti, KP Review-Insights on Off-Label terapevtske strategije proti blagi in hudi okužbi s COVID-19. pak. J. Pharm. Sci. 2021, 34, 1469–1484. [CrossRef] [PubMed]
4. Zaman, W.; Saqib, S.; Ullah, F. COVID-19: Filogenetski pristopi lahko pomagajo pri iskanju virov za naravno zdravilo. fitoter. Res. 2020, 34, 2783–2785. [CrossRef]
5. Rubio-Casillas, A.; Redwan, EM; Uversky, VN SARS-CoV-2 Intermitentna virulentnost kot rezultat naravne selekcije. COVID 2022, 2, 1089–1101. [CrossRef]
6. Logunov, DY; Dolžikova, IV; Zubkova, OV Varnost in imunogenost vektorskega heterolognega prime-boost cepiva proti COVID-19 na osnovi rAd26 in rAd5 v dveh formulacijah: dve odprti, nerandomizirani študiji faze 1/2 iz Rusije. Lancet 2020, 396, 887–897, popravek v Lancet 2021, 397, 98. [CrossRef]
7. Folegatti, PM; Ewer, KJ; Aley, PK Varnost in imunogenost cepiva ChAdOx1 nCoV-19 proti SARS-CoV-2: Preliminarno poročilo faze 1/2, enojno slepega, randomiziranega kontroliranega preskušanja. Lancet 2020, 396, 467–478, popravek v Lancet 2020, 396, 1884. [CrossRef]
8. Logunov, DY; Dolžikova, IV; Shcheblyakov, DV Varnost in učinkovitost vektorskega heterolognega prime-boost cepiva proti COVID-19 na osnovi rAd26 in rAd5: vmesna analiza randomiziranega kontroliranega preskušanja faze 3 v Rusiji. Lancet 2021, 397, 671–681, popravek v Lancet 2021, 397, 670. [CrossRef]
9. Jackson, CB; Farzan, M.; Chen, B.; Choe, H. Mehanizmi vstopa SARS-CoV-2 v celice. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2022, 23, 3–20. [CrossRef]
10. Heinz, FX; Stiasny, K. Razlikovalne lastnosti trenutnih cepiv proti COVID-19: znane in neznane predstavitve antigena in načinov delovanja. Cepiva NPJ 2021, 6, 104. [CrossRef]
11. Lim, HX; Masomian, M.; Khalid, K.; Kumar, AU; MacAry, PA; Poh, CL Identifikacija epitopov B-celic za pridobivanje nevtralizirajočih protiteles proti koničastemu proteinu SARS-CoV-2 z bioinformatiko in ciljanjem na monoklonska protitelesa. Int. J. Mol. Sci. 2022, 23, 4341. [CrossRef]
12. Moroy, G.; Tuffery, P. Na peptidih temelječe strategije proti napadu SARS-CoV-2: posodobljena perspektiva In Silico. Spredaj. Zdravilo. Discov. 2022, 2, 899477. [CrossRef]
13. Gattinger, P.; Niespodziana, K.; Stiasny, K. Nevtralizacija SARS-CoV-2 zahteva protitelesa proti epitopom konformacijske receptorske vezavne domene. Alergija 2022, 77, 230–242. [CrossRef]
14. Niu, L.; Wittrock, KN; Clabaugh, GC Strukturna pokrajina nevtralizirajočih protiteles proti SARS-CoV-2 vezavni domeni receptorja. Spredaj. Immunol. 2021, 12, 647934. [CrossRef]
15. Šan, S.; Mok, CK; Zhang, S. Močno in zaščitno človeško nevtralizirajoče protitelo proti različicam SARS-CoV-2. Spredaj. Immunol. 2021, 12, 766821. [CrossRef]
16. Bajpai, P.; Singh, V.; Chandele, A. Široko nevtralizirajoča protitelesa proti SARS-CoV-2 zagotavljajo nov vpogled v nevtralizacijo različic in drugih človeških koronavirusov. Spredaj. Celica. Okužiti. Microbiol. 2022, 12, 928279. [CrossRef]
17. Vishwakarma, P.; Yadav, N.; Rizvi, ZA Hud akutni respiratorni sindrom Coronavirus 2 Spike Novi epitopi na osnovi beljakovin inducirajo močne imunske odzive in vivo in zavirajo replikacijo virusa in vitro. Spredaj. Immunol. 2021, 12, 613045. [CrossRef]
18. Garrett, ME; Galloway, JG; Wolf, C. Obsežna karakterizacija odzivov protiteles na SARS-CoV-2 Spike protein najde dodatne epitope, ki jih povzroči cepivo, poleg tistih za blago okužbo. eLife 2022, 11, e73490. [CrossRef]
19. Peng, M.; Dou, X.; Zhang, X. Zaščitni antigenski epitopi, razkriti z imunosignaturami po treh odmerkih inaktiviranega cepiva SARS-CoV-2. Spredaj. Immunol. 2022, 13, 938378. [CrossRef]
20. Polvere, I.; Parrella, A.; Zerillo, L. Raznolikost humoralnega imunskega odziva na različna cepiva proti COVID-19: Posledice za politiko »Green Pass«. Spredaj. Immunol. 2022, 13, 833085. [CrossRef]
21. Tuhvatulin, AI; Dolžikova, IV; Shcheblyakov, DV Odprto, nerandomizirano preskušanje faze 1/2 o varnosti, prenašanju in imunogenosti cepiva z enim odmerkom "Sputnik Light" za preprečevanje okužbe s koronavirusom pri zdravih odraslih. Lancet Reg. Zdravje Eur. 2021, 11, 100241. [CrossRef] [PubMed]
22. Gonzalez, S.; Olszevicki, S.; Salazar, M. Učinkovitost prve komponente Gam-COVID-Vac (Sputnik V) na zmanjšanje okužb, potrjenih s SARS-CoV-2, hospitalizacij in umrljivosti pri bolnikih, starih 60–79 let: Retrospektivna kohortna študija v Argentini. EClinicalMedicine 2021, 40, 101126. [CrossRef] [PubMed]
23. Gushchin, VA; Dolžikova, IV; Shchetinin, AM Nevtralizirajoča aktivnost serumov ljudi, cepljenih s Sputnikom V, proti zaskrbljujočim različicam (VOC: B.1.1.7, B.1.351, P.1, B.1.617.2, B.1.617.3) in moskovskemu endemičnemu SARS -CoV-2 Različice. Cepiva 2021, 9, 779. [CrossRef] [PubMed]
25. Voko, Z.; Poljubček, Z.; Surjan, G. Državna učinkovitost petih cepiv proti SARS-CoV-2 na Madžarskem – študija HUN-VE. Clin. Microbiol. Okužiti. 2022, 28, 398–404. [CrossRef] [PubMed]
25. Jeewandara, C.; Fernando, S.; Pushpakumara, PD Imunski odzivi po prvem odmerku Sputnika V (Gam-COVID-Vac). Sci. Rep. 2022, 12, 1727. [CrossRef]
26. Ikegame, S.; Siddiquey, MNA; Hung, CT Nevtralizirajoča aktivnost serumov cepiva Sputnik V proti različicam SARS-CoV-2. Nat. Komun. 2021, 12, 4598. [CrossRef]
27. Gushchin, VA; Tsyganova, EV; Ogarkova, DA Zaščita Sputnika V pred COVID-19 pri ljudeh, okuženih s HIV, na protiretrovirusnem zdravljenju. EClinicalMedicine 2022, 46, 101360. [CrossRef]
28. Shamji, MH; Valenta, R.; Jardetzky, T. Vloga alergen specifičnih IgE, IgG in IgA pri alergijski bolezni. Alergija 2021, 76, 3627–3641. [CrossRef]
29. Eckl-Dorna, J.; Weber, M.; Stanek, V. Dve leti zdravljenja z rekombinantnim cepivom proti alergiji na cvetni prah trav BM32 inducira stalno naraščajoč alergen-specifični odziv IgG4. EBioMedicine 2019, 50, 421–432. [CrossRef]
30. Shamji, MH; Kappen, JH; Akdis, M. Biomarkerji za spremljanje klinične učinkovitosti alergenske imunoterapije za alergijski rinokonjunktivitis in alergijsko astmo: dokument o stališču EAACI. Alergija 2017, 72, 1156–1173. [CrossRef]
31. Tortorici, MA; Beltramello, M.; Lempp, FA Ultramočna človeška protitelesa ščitijo pred izzivom SARS-CoV-2 prek več mehanizmov. Znanost 2020, 370, 950–957. [CrossRef]
32. Cia, G.; Pucci, F.; Rooman, M. Analiza nevtralizacijske aktivnosti protiteles, ki ciljajo na odprte ali zaprte konformacije koničastega proteina SARS-CoV-2. Int. J. Mol. Sci. 2022, 23, 2078. [CrossRef]
33. Meng, B.; Datir, R.; Choi, J. SARS-CoV-2 koničasta N-terminalna domena modulira od TMPRSS2-odvisen vstop virusa in fuzogenost. Cell Rep. 2022, 40, 111220. [CrossRef]
34. Resch, Y.; Weghofer, M.; Seiberler, S. Molekularna karakterizacija Der p 10: diagnostični marker za široko preobčutljivost pri alergiji na hišne pršice. Clin. Exp. Alergija 2011, 41, 1468–1477. [CrossRef]
36. Byazrova, M.; Jusubalijeva, G.; Spiridonova, A. Vzorec cirkulirajočega SARS-CoV-2-izločanja specifičnih protiteles in nastajanja spominskih celic B pri bolnikih z akutnim COVID-19. Clin. prevod Immunol. 2021, 10, e1245. [CrossRef]
36. Gattinger, P.; Borochova, K.; Dorofeeva, Y. Protitelesa v serumu rekonvalescentov po blagi bolezni COVID-19 ne preprečijo vedno vezave virusa na receptor. Alergija 2021, 76, 878–883. [CrossRef]
37. Gattinger, P.; Tulajeva, I.; Borochova, K. Omicron: Različica SARS-CoV-2, ki vzbuja resnično skrb. Alergija 2022, 77, 1616–1620. [CrossRef]
38. Gattinger, P.; Ohradanova-Repič, A.; Valenta, R. Pomen, aplikacije in značilnosti testov za merjenje nevtralizirajočih protiteles SARS-CoV-2. Int. J. Mol. Sci. 2023, 24, 5352. [CrossRef]
39. Gattinger, P.; Kratzer, B.; Tulajeva, I.; Niespodziana, K.; Ohradanova-Repič, A.; Gebetsberger, L.; Borochova, K.; Garner-Spitzer, E.; Trapin, D.; Hofer, G.; et al. Cepivo, ki temelji na fuzijski beljakovini zvite receptorske vezavne domene-PreS s potencialom za induciranje sterilizacijske imunosti na različice SARS-CoV-2. Alergija 2022, 77, 2431–2445. [CrossRef]
