Učinek ehinakozida na podgane s cerebralno ishemijo

Povzetek: Cilj Preučiti učinekEhinozid(ECH) na monoaminske nevrotransmiterje v zunajcelični tekočini striatuma pri podganah s fokalno cerebralno ishemijo in raziskati možni mehanizem nevroprotektivnega učinka ECH na možgane. Metode Podgane SD so bile naključno razdeljene v kontrolno skupino, modelno skupino, skupine z visokim in nizkim odmerkom ECH in skupino ligustrazina (CXQ). Podgane v vsaki skupini so dobivale ustrezna zdravila ali fiziološko raztopino intraperitonealno enkrat na dan 7 dni. Tretji dan dajanja je bil tulec sonde vstavljen v striatum možganov. Eno uro po zadnjem dajanju smo naredili podganji model fokalne cerebralne ishemije (MCAO). Po izdelavi modela je bila takoj izvedena mikrodializa. Dializat smo vbrizgali v visokozmogljivi tekočinski kromatografsko-elektrokemični detektor (HPLC-ECD) za določitev vsebnosti norepinefrina (NE), dopamina (DA), 5-hidroksitriptamina (5-HT), 3 ,4-dihidroksifenilocetna kislina (DOPAC), homovanilna kislina (HVA), 5-hidroksi indol ocetna kislina (HIAA) v zunajcelični tekočini striatuma vsake skupine. Rezultati V primerjavi s kontrolno skupino so se ravni NE, DA in 5-HT v modelni skupini povečale, povečali pa so se tudi kisli metaboliti DOPAC, HVA in HIAA. V primerjavi z modelno skupino se je vsebnost šestih snovi v skupinah z visokimi in nizkimi odmerki ECH (30, 15 mg · kg - 1 · d - 1) in skupinah CXQ zmanjšala. Zaključek Nevroprotektivni učinek ECH je lahko povezan s povečanjem monoaminskih nevrotransmiterjev po cerebralni ishemiji.

Cistanche v prahu

Ključne besede: Ehinozid; Cerebralna ishemija; striatum; HPLC-ECD; Monoaminski nevrotransmiterji in metaboliti

Ehinaceozid(ECH) je učinkovita sestavina feniletanoidnih glikozidov, izoliranih in prečiščenih izCistanche deserticola, poseben obrat v Xinjiangu. Študije so pokazale, da ima ECH nevroprotektivne učinke, kot so antioksidacija [1-2], zaščita živcev [3-4], zaviranje staranja [5] ter izboljšanje učenja in spomina [6-8]. Rezultati Chen Hong et al. potrdili, da ima ECH zaščitni učinek na nevrone DA pri Parkinsonovi bolezni [9]. Monoaminski nevrotransmiterji so neke vrste pomembne snovi, ki uravnavajo fiziološke aktivnosti telesa.Vsebina v tkivu lahko odraža procese biosinteze, sproščanja, privzema in inaktivacije nevrotransmiterjev [10-11]. Trenutno ni ustreznega poročila o vplivu ECH na monoaminske prenašalce v možganih podgan s cerebralno ishemijo. V tej študiji so z uporabo tehnologije možganske mikrodialize raziskovali učinek ECH na vsebnost monoaminskih nevrotransmiterjev v zunajcelični tekočini striatuma podgan s cerebralno ishemijo in preliminarno raziskali možen mehanizem ECH na nevroprotekcijo možganov.

Prašek izvlečka Cistanche tubulosa

1.Material

1.1 Poskusne živali

Podgane SD, ♂, telesna masa 250~300 g (kupljeno pri Xinjiang Experimental Animal Center, številka licence: 2009-0053).

1.2 Zdravila in reagenti

ECH je daroval profesor Tu Pengfei, Fakulteta za farmacijo, Univerza v Pekingu (čistost nad 95 %); Norepinefrin (NE), dopamin (DA), 5-hidroksitriptamin (5-HT), 3,4-dihidroksifenilocetna kislina (DOPAC), homovanilna kislina (HVA)

5-hidroksi indol ocetna kislina (HIAA) je Sigma; Tetrametilpirazin hidroklorid za injiciranje (CXQ, Harbin Sanlian Pharmaceutical Co., Ltd.); Cinkov fosfatni cement (izdelek Shanghai Medical Instruments Co., Ltd., sestavljen iz tekočine in prahu, pomešan s časom); natrijev 1-alkil sulfat (DIKMA); Hidrat citronske kisline (Tianjin Jinke Fine Chemical Research Institute); Trinatrijev citrat (Acros); dinatrijev etilendiamin tetraocetna kislina (JTTakerChemicalco); Metanol (DIKMA); Acetonitril (DIKMA); Perfuzijska tekočina za cerebralno mikrodializo je sestavljena injekcija natrijevega klorida (Beijing Shuanghe Pharmaceutical Co., Ltd.); Vsa uporabljena voda je voda za ponovno paro.

1.3 Instrument

Ameriški stereotaktični aparat za podganje možgane BAS4100; CMA/12 sonda in tulec sonde; naprava za zavestne živali CMA/120; mikro črpalka CMA/402; Nizkotemperaturni avtomatski zbiralnik vzorcev CMA/150. Infuzijska črpalka Esa 5600A; Infuzijska črpalka Esa 5600A; avtomatska naprava za vbrizgavanje vzorcev Esa 542; Esin elektrokemijski detektor CoulArray; Delovna elektroda iz steklastega ogljika in referenčna elektroda Ag/AgCl; Kolona C18 (DIKMA, ODS5 μm, 150 mm × 4,6 mm); Kromatografska delovna postaja CoulArraywin (podjetje Esa); Vortex mešalnik (tip QL-861); Namizni tester kislosti (HANNA-211); Namizna visokohitrostna centrifuga (tip XYJ-2).

2.Metoda

Cistanche dodatek blizu mene—Imdokazati spomin

Kliknite tukaj za ogled izdelkov Cistanche Improve Memory

【Ask for more】 Email: xue122522@foxmail.com /  Whats App:  0086 18599088692 /  Wechat:  18599088692

2.1 Razvrščanje živali v skupine in upravljanje

Trideset podgan je bilo naključno razdeljenih v pet skupin: ① Kontrolna skupina: 1 ml · kg-1 · d-1 normalna fiziološka raztopina; ② Modelna skupina: fiziološka raztopina 1 ml · kg-1 · d-1; ③ Model+ligustrazin (CXQ) 30 mg · kg-1 · d-1; ④ - ⑤ Model+ECH skupine z visokimi in nizkimi odmerki (ECHB, ECHS): 30, 15 mg · kg-1 · d-1; Vse živali v vsaki skupini so bile injicirane intraperitonealno 7 dni.

2.2 Metoda modeliranja in mikrodializa

Vsako podgano smo tretji dan dajanja zakopali s kanilo: podgane smo anestezirali z 10% kloralhidratom (3,5 ml · kg-1), fiksiranim na možganski stereotaktični aparat BAS4100 in kateter sonde je bil implantiran v levi striatum (koordinate AP: +0.2 mm; ML: - 3.0 mm; DV: - 3.5 mm) v zvezi s "Stereotaktičnim zemljevidom podganjih možganov" Georgea Paxinosa. Po zadnjem dajanju so podgane anestezirali 1 uro kasneje in podganam naredili model žariščne možganske ishemije (model MCAO) z uporabo izboljšane metode šivanja Longa Yang Zanzhang [12]. Ribja vrvica v kontrolni skupini je bila vstavljena le 10 mm, ostali koraki pa so bili enaki tistim v operativni skupini. Po modeliranju vstavite mikrodializno sondo v stanju zavesti in prostega gibanja ter uporabite Ringerjevo raztopino za μ. Cerebralni mikrodializat je bil zbran pri 4 stopinjah in epruveta z dializatom je bila zbrana po 20 minutah. Ko je vsaka epruveta z dializatom zbrana, jo je treba takoj shraniti v hladilniku s temperaturo - 20 stopinj in po dializi prenesti v hladilnik s temperaturo - 70 stopinj. Pred uporabo smo izmerili stopnjo okrevanja sonde, ki je bila uporabljena za pretvorbo koncentracije monoaminskih nevrotransmiterjev v dializatu.

kaj počne cistanche tubulosa—Izboljša spomin

2.3 Analiza HPLC-ECD

Konfiguracija mobilne faze: mobilna faza vsebuje 829 ml 0.15 mol · L-1 pufra citronske kisline in natrijevega citrata na liter; 0.1mol · L-1 dinatrijev EDTA 1ml; Metanol 150ml; Natrijev {{10}}alkil sulfat 0.283 g. Hitrost pretoka mobilne faze nastavite na 0.7ml · min-1 in temperaturo pečice kolone na 28 stopinj. Delovna napetost elektrokemičnega detektorja je 200mV, 400mV in 600mV, z 2, 3 oziroma 4 kanali; Dobiček je 2nA. Volumen injekcije je 25 μl. Standardna krivulja je narisana z mešano standardno raztopino gradienta 0,025, 0,05, 0,1, 0,2, 0,5 mg · L-1.

2.4 Statistična obdelava

Eksperimentalni podatki so izraženi v polju x ± s, podatki ponovljenih meritev pa so analizirani s statistično programsko opremo SPSS13.{1}}.

Slika 1-6 prikazuje spremembe ravni NE, DA, DOPAC, HIAA, HVA in 5-HT v zunajcelični tekočini striatuma podgan. Iz slike je razvidno, da imajo po cerebralni ishemiji monoaminski nevrotransmiterji v zunajcelični tekočini striatuma presnovne motnje, vsebnost vsakega nevrotransmiterja pa se je povečala. Znotraj določenega območja je povečanje očitnejše s podaljševanjem časa ishemije. Po 90 minutah ishemije je bila koncentracija DA in NE v zunajcelični tekočini striatuma več kot trikrat večja od ravni kontrolne skupine. Ravni NE, DA, DOPAC, HIAA, HVA in 5-HT so se v kontrolni skupini znižale z visoke na nizko, kar je lahko povezano z začasno ishemijo levih možganov po ligaciji leve skupne karotidne arterije in poškodbe, ki jih povzroči vstavljanje sonde. Iz krivulje sprememb lahko ECH in CXQ zmanjšata najvišjo koncentracijo DA, DOPAC, HIAA, HVA in 5-HT po cerebralni ishemiji, CXQ in ECH z visokim odmerkom pa sta bolj očitna. Premik krivulje časovnega poteka vsakega nevrotransmiterja navzdol kaže, da lahko ECH zavira povečanje nevrotransmiterjev in njihovih metabolitov v možganih podgan s cerebralno ishemijo.

                                                                           Slika 2 Učinek ehinozida na zunajcelično raven DA v striatumu podgan

Slika 3 Učinek ehinozida na zunajcelično raven DOPAC v striatumu podgan Slika 4 Učinek ehinozida na zunajcelično raven HIVV v striatumu podgan

Slika 5 Vpliv ehinozida na zunajcelični nivo HVA v striatumu podgan Slika 6 Učinek ehinozida na zunajcelični nivo 5-HT instriatuma podgan

4.Diskusija

Superman cistazelišče—Improve spomin

【Vprašajte za več】 E-pošta:cindy.xue@wecistanche.com/Whats App: 0086 18599088692/Wechat: 18599088692

Mehanizem možganske poškodbe, ki jo povzroči cerebralna ishemija, je zapleten. Pri cerebralni ishemiji so monoaminski nevrotransmiterji v možganih moteni, vsebnosti NE, DA in 5-HT pa so bistveno zmanjšane. Hujša kot je cerebralna ishemija, nižje so vsebnosti NE, DA in 5-HT v možganskem tkivu [13]. Z intracerebralno mikrodializno metodo je bilo dokazano, da se vsebnost monoaminskih nevrotransmiterjev med cerebralno ishemijo poveča v zunajcelični tekočini, traja celotno ishemično obdobje in se dodatno poveča s podaljševanjem ishemične dobe. Eksperimentalni rezultati so bili skladni s poročilom [14].Ehinozidje učinkovita sestavina feniletanoidnih glikozidov, izoliranih in prečiščenih iz Cistanche deserticola, posebne rastline v Xinjiangu. Ima številne nevroprotektivne učinke, kot so zaviranje staranja, izboljšanje učenja in spomina ter proti nevronski apoptozi. V tej študiji je bila domača napredna možganska mikrodializa v kombinaciji s HPLC-ECD detekcijsko tehnologijo uporabljena za predhodno raziskovanje učinkaEhinozidna monoaminske nevrotransmiterje in njihove metabolite v zunajcelični tekočini striatuma poskusnih podgan s cerebralno ishemijo. Rezultati so pokazali, da lahko ECH zmanjša povečanje monoaminskih nevrotransmiterjev v zunajcelični tekočini striatuma, ki ga povzroči cerebralna ishemija, in ima boljši učinek na izboljšanje poškodbe cerebralnega ishemičnega tkiva.