Vpliv glikozidov Cistanche na izražanje mitohondrijskega prekurzorskega proteina in keratina tipa II citoskeletnega 6A v podganjem modelu vaskularne demence

Za več informacij se obrnite na:Joanna.jia@wecistanche.com

Povzetek

Uvod

Žilnidemencaje druga najpogostejša vrsta demence (Neltner et al., 2014; Sachdev et al., 2014; Tatlisumak et al., 2014; Sinclair et al., 2015; Thomas et al., 2015; Reijmer et al., 2016 ). Trajna in nepopravljiva okvara spomina, ki se pojavi pri bolnikih z vaskularno demenco, povzroči resno poslabšanje kakovosti življenja in predstavlja veliko ekonomsko breme za bolnikovo družino (Barker et al., 2014; Burke et al., 2014; Chen et al. sod., 2014; Brandenburg in sod., 2016). Preprečevanje in zdravljenje bolezni sta v državah s starajočim se prebivalstvom vedno bolj pomembna. Zato se povečuje raziskovalno zanimanje za iskanje učinkovitih zdravil za zdravljenje vaskularne demence.

Cistancheje rastlina, ki se uporablja kot nootropik v tradicionalni kitajski medicinski teoriji (Chen et al., 2014; Szalárdy et al., 2015; You et al., 2015). Glikozidi izCistanche(GC) so pripravek, pridobljen izCistanche. Obstaja veliko dokazov, ki podpirajo idejo, da lahko GC izboljša regeneracijo aksonov (Procaccio et al., 2014; Love et al., 2015; Brandenburg et al., 2016; Gu et al., 2016). Številne študije na živalih so pokazale, da GC krepi kognitivno funkcijo (Procaccio et al., 2014; Talarowska et al., 2014; Fischer in Maier, 2015).

Prej smo uporabili dvostransko okluzijo skupne karotidne arterije za vzpostavitev modelov podganžilnidemenca. V tem modelu se prostorsko učenje in spomin znatno izboljšata po posegu z GC (Chen et al., 2015). GC lahko tudi regulira in izboljšaimunostvendar je najbolj znan kot tonik za živce in ojačevalec spomina (Chen et al., 2014; Procaccio et al., 2014; Szalárdy et al., 2015; You et al., 2015; Brandenburg et al., 2016).

Vendar pa je malo študij raziskalo molekularne mehanizme, na katerih temeljijo učinki GC vžilnidemenca. Tukaj uporabljamo proteomiko za raziskovanje razmerja med beljakovinami in vaskularno demenco, da določimo mehanizem, na katerem temelji nevroprotektivni učinek GC.

Cistanchedeserticola ima veliko učinkov, kliknite tukaj, če želite izvedeti več

Materiali in metode

Živali

Šest tednov stare odrasle samce podgan Wistar brez specifičnih patogenov (n=37), težke 230–270 g, je zagotovil Experimental Animal Center, provinca Hubei, Kitajska (številka licence: SYXK (E) { {7}}). Poskus je sledil nacionalnim smernicam za oskrbo in uporabo laboratorijskih živali ter soglasnim avtorskim smernicam o etiki in dobrem počutju živali, ki jih je pripravilo Mednarodno združenje veterinarskih urednikov. Rokopis je bil pripravljen v skladu s smernicami Animal Research: Reporting of In Vivo Experiments (ARRIVE).

Podgane so bile nameščene v skupinah po tri na kletko pri 25 stopinjah s 12 --urnim ciklom svetloba/tema in prostim dostopom do hrane in vode. Podgane (n=37) so bile naključno dodeljene kontrolni skupini (n=10), skupini z vaskularno demenco (n=12) in skupini z vaskularno demenco in GC (zdravljeni z GC, n=15).

Vzpostavitev podganjih modelov vaskularne demence

Pod globoko anestezijo z 10-odstotnim kloralhidratom so bile obojestranske skupne karotidne arterije podgan pri vaskularni demenci in skupinah, zdravljenih z GC, skrbno ločene od okoliških tkiv, nato tesno podvezane s 10-0 šivnim navojem na obeh koncih in skupna karotida arterije so bile prerezane. Podgane v kontrolni skupini so bile podvržene istemu kirurškemu posegu, le da so bile skupne karotidne arterije izpostavljene, vendar ne podvezane. Morrisov vodni labirint je bil izveden v skladu s prej opisanimi metodami, da bi preverili, ali je bil živalski model uspešno vzpostavljen (Chen et al., 2015).

Farmakološko zdravljenje

Cistanche v prahu(Št. certifikata Z20050216, Sinphar Tian-Li Pharmaceutical Co., Ltd., Hangzhou, Kitajska) je bil zmešan z ultračisto vodo in ekstrahiran z ultrazvočnim aparatom TF-2000C (Tuofen, Šanghaj, Kitajska) (moč 100 odstotkov, 30 stopinj, 40 minut). Koncentracijo GC smo izmerili s testiranjem feniletanoidnih glikozidov. Po poškodbi so vse podgane v skupini, zdravljeni z GC, prejemale GC (10 mg/kg/dan, 1 ml, intraperitonealno, enkrat na dan) 14 zaporednih dni. Podgane v kontrolni skupini in skupini z vaskularno demenco so prejele fiziološko raztopino (1 ml, intraperitonealno).

Imunohistokemija

Po 14 dneh dajanja GC (ali fiziološke raztopine) so sedem podgan iz vsake skupine obglavili in ekstrahirali možgane. Možganska skorja je bila odstranjena, tkivo hipokampusa pa skrbno razrezano in razrezano na 3- μm debele dele z zamrzovalnim mikrotomom. Odseki hipokampalnega tkiva so bili fiksirani s 4 odstotki paraformaldehida 30–60 minut, sprani s PBS in inkubirani v 3 odstotkih H2O2 10 minut, čemur je sledil kozji serum 15 minut, vse pri sobni temperaturi.

Odseke smo nato inkubirali v zajčjem anti-podganjem fosforiliranem p-tau primarnem protitelesu

(1:1, 000 v PBS; Bioworld Technology, Inc., TX, ZDA) in kunčje primarno protitelo proti podganjemu amiloidu beta (A ) (1:1, 000; Bioworld Technology, Inc.) v mokri škatli pri 37 stopinjah 2–3 ure, pred inkubacijo v sekundarnem protitelesu (kozji protimišji IgG; Bioworld Technology, Inc.) 15 minut pri sobni temperaturi. Vzorce smo vizualizirali s 3,3′-diaminobenzidin tetrahidrokloridom (Dako, Tokio, Japonska). Slike so bile zajete s svetlobnim mikroskopom (Olympus, Tokio, Japonska) in obdelane s programom Photoshop (različica 7.0; Adobe, San Jose, CA, ZDA).

Imunopozitivni delci so bili rjavi, zato je bilo rjavo obarvanje v citoplazmi izbrano kot pozitivna reakcija, polkvantifikacija pa je bila izvedena s sistemom za analizo slik HMIAS-2000 (Qianpin Co., Wuhan, Kitajska). V vsakem vzorcu je bilo naključno izbranih pet vidnih polj in v vsakem pogledu izbranih pet pozitivnih celic, povprečna vrednost sive pa je bila izmerjena kot niz relativnih vrednosti.

Cistanchelahko izboljšaimunostin preprečitisrčno-žilniincerebrovaskularnibolezni

Dvodimenzionalna gelska elektroforeza (2-DE)

Po 14 dneh dajanja GC ali fiziološke raztopine je bilo osem podgan iz vsake skupine anesteziranih in obglavljenih, tkiva hipokampusa pa so bila hitro pobrana in takoj zamrznjena v tekočem dušiku. Vsa tkiva smo homogenizirali v tekočem dušiku z uporabo možnarja in pestiča ter zbrali v pufru za lizo (7 M sečnina, 2 M tiosečnina, 2 odstotka CHAPS, 20 mM Tris). Netopne delce smo odstranili s centrifugiranjem pri 13,000 × g 20 minut pri 4 stopinjah. Kontaminirano nukleinsko kislino je prekinilo 5 minutno prekinjeno zvočno nihanje. Vzorce ponovno centrifugiramo pod enakimi pogoji in zberemo supernatante. Koncentracija beljakovin je bila izmerjena z Bradfordovim testom (Beyotime Inc., Kitajska) in vzorci so bili do uporabe shranjeni pri –80 stopinjah.

Da bi raziskali profil izražanja beljakovin v hipokampusu, smo 2-DE izvedli v skladu z navodili proizvajalca (GE Healthcare, Pittsburgh, PA, ZDA). Raztopino beljakovin (120 ug/vzorec) smo prilagodili z rehidracijskim pufrom na končni volumen 350 μL. Izoelektrično fokusiranje je bilo izvedeno z uporabo trakov IPG (pH 4–7, velikost 22 cm) na sistemih Ettan IPG ali II (vsi od GE Ettan IPGphor3, GE Healthcare). Nato smo trakove uravnotežili 15 minut.

{{0}}DE je bila izvedena z 12,5-odstotnim poliakrilamidnim gelom natrijevega dodecil sulfata (SDS) (24 cm × 19,5 cm × 1.0 mm) z 0,5-odstotnim agaroznim tesnilnim lepilom v elektroforezi Ettan DALTSix (GE, Ettan DALTSix, GE Healthcare).

Izvajali smo elektroforezo pri 2 W 45 minut, čemur je sledilo ločevanje pri 17 W 4 ure, dokler bromofenol modro ni doseglo skoraj dna 2-DE gela.

Geli so bili obarvani s srebrovim nitratom (Damao Chemical Reagent Factory, Tianjin, Kitajska) in slike so bile zajete na sistemu za skeniranje slik 2-DE (VT, ZDA).

Za skeniranje in analizo slike 2-DE je bila uporabljena programska oprema Image Master 2D Platinum 5.0 (GE, Inc., PA, ZDA).

informacije so bile pridobljene z uporabo masnega spektrometra 4700 MALDI TOF/TOF (GE, Inc.).

Matrično podprta laserska desorpcijska/ionizacijska masna spektrometrija s časom preleta

Za prstne odtise peptidne mase in kasnejšo analizo so geli narezali in podvrgli rahlo spremenjenemu protokolu v gelu, kot je opisano v navodilih proizvajalca. Tam je bil metanol (Fisher M/4056/17), acetonitril (Fisher A/0626/17), tripsin (Promega V5280), raztopina za razrešitev tripsina (Promega V530), amonijev bikarbonat (Sigma A6141), C-18 ZipTip (Millipore ZTC18M096) in trifluoroocetno kislino (GE HealthCare).

Na kratko, beljakovinske lise smo razbarvali z raztopino za razbarvanje (30 mM K3Fe(CN)6:100 mM NaS2O3=1:1) in dehidrirali s 100 mm amonijevim bikarbonatom in acetonitrilom, reducirali s triklorometil fosfatom 20 minut pri sobni temperaturi, in nato alkiliramo v jodoocetni kislini 30 minut v temi. Gel smo inkubirali v 50 μL 12 ng/μL modificirane raztopine tripsina v 25 mM amonijevem bikarbonatu, pH 8,6, pri 37 stopinjah čez noč. Peptide ekstrahiramo iz čepa gela z 1 odstotkom mravljinčne kisline/2 odstotkom acetonitrila in koncentriramo z uporabo C-18 Zip-Tips. Nato so bili vzorci pripravljeni z uporabo tarče Prespotted AnchorChip (PAC96) z matriko alfa-ciano-4-hidroksicimetne kisline za 96 vzorčnih točk in 24 umeritvenih točk. Informacije o peptidu masnega spektra so bile pridobljene z uporabo masnega spektrometra 4700 MALDI TOF/TOF. Dobljeni podatki so bili analizirani z uporabo GPS Explorerja (Applied Biosystems Inc., NY, ZDA), ki je sprožil iskanje po bazi podatkov MASCOT (Matrix Science, London, Združeno kraljestvo) z uporabo podmnožice miške baze podatkov Nacionalnega centra za biotehnološke informacije.

Cistanchelahko deluje protibakterijsko in preprečuježilnidemenca

Western blot test

Hipokampus smo pripravili in izmerili koncentracijo beljakovin, kot je opisano zgoraj. Vzorce beljakovin smo naložili na poliakrilamidni gel SDS, podvrgli elektroforezi in prenesli na membrano iz poliviniliden difluorida. Membrana je bila sprana v fiziološki raztopini s tris pufrom in Tween 20, blokirana v 10-odstotnem nemastnem mleku in 0,05-odstotnem Tweenu v fiziološki raztopini s fosfatnim pufrom. Membrane smo čez noč inkubirali pri 4 stopinjah s poliklonalnim protitelesom kunčjega anti-mitohondrijskega prekurzorskega proteina (1:2, 000; Proteintech Inc., Chicago, IL, ZDA) in citoskeletnega 6A kunčjega anti-keratina tipa II (KRT6A) poliklonsko protitelo (1:1,000; Proteintech Inc.) v 10-odstotnem nemastnem mleku. Sekundarno protitelo, kozje anti-kunčje protitelo, konjugirano s hrenovo peroksidazo (Google Biotechnology Inc., Wuhan, provinca Hubei, Kitajska), je bilo razredčeno (1:2,000) v 10-odstotnem nemastnem mleku in inkubirano pri 25 stopinjah za 1 uro. Kot notranja referenca je bilo uporabljeno mišje monoklonsko protitelo proti aktinu (1:2, 000; Google Biotechnology Inc.). Western blot sistem za skeniranje (V300; EPSON, Nagano-ken, Japonska) in AlphaEaseFC Adobe PhotoShop (Alpha Innotech, CA, ZDA) sta bila uporabljena za določitev mitohondrijskih prekurzorskih beljakovin in ravni ekspresije KRT6A, izražene kot integrirana optična gostota, normalizirana na -aktin.

Statistična analiza

Kvantitativni podatki so bili izraženi kot povprečje ± SD. Za skeniranje in analizo 2-informacij DE je bila uporabljena programska oprema ImageMaster 2D Platinum 5.0 (GE, Inc.). Dvosmerna analiza variance je bila izvedena z uporabo GraphPad Prism 6.0 (GraphPad Software, Inc., La Jolla, CA, ZDA). P < 0.05="" je="" veljalo="" za="" statistično="">

Rezultati

Učinki GC na p-tau in imunoreaktivnost A v hipokampusu podganjih modelov vaskularne demence

Imunohistokemija je pokazala, da je bila ekspresija p-tau in A večja po 14 dneh zdravljenja z GC kot v kontrolni skupini. Vendar je bila ekspresija teh proteinov v skupini, zdravljeni z GC, znatno nižja kot v skupini z vaskularno demenco (P < 0.05;="" slika="">

GC regulirana ekspresija mitohondrijskega prekurzorskega proteina in KRT6A v hipokampusu podganjih modelov vaskularne demence

Ekspresija obeh proteinov je bila bistveno drugačna v skupini, zdravljeni z GC, kot v skupini z vaskularno demenco: mitohondrijski prekurzorski protein (znan tudi kot protein toplotnega šoka (HSP) 75 kDa) je bil reguliran navzgor, KRT6A pa znižan (sliki Slike 22, 33 ). Podatki o beljakovinah so navedeni v tabeli 1.

Diskusija

Vaskularna demenca je sindrom, za katerega so značilne okvare spomina, vedenja in kognicije, povzročajo pa jo predvsem cerebrovaskularne bolezni (Barker et al., 2014; Burke et al., 2014; Oliveira et al., 2014; Szalárdy et al., 2015). Patologija, ki je skupna vsem vrstam demence in je odgovorna za njeno napredovanje, je nevrodegeneracija (Foster et al., 2014; Fischer in Maier, 2015; Kalaria et al., 2015;

Cistanchelahko poveča imuniteto inpreprečitižilnidemenca

Chen et al., 2016; Pérez -Hernández et al., 2016). Mnogi rastlinski izvlečki imajo terapevtske lastnosti. Bioaktivnost teh spojin proti nevrodegeneraciji je predvsem posledica njihovih antioksidativnih in antiamiloidogenih učinkov (Fischer in Maier, 2015; You et al., 2015; Pérez -Hernández et al., 2016).

Cistancheje kitajsko zelišče, ki se uporablja kot nootropik v tradicionalni kitajski medicini. Nastajajoče raziskave to kažejoCistancheje koristen pri amneziji, zlasti pri zaviranju napredovanja izgube spomina (Procaccio et al., 2014; You et al., 2015; Pérez-Hernández et al., 2016). Obstaja veliko dokazov, da lahko GC spodbuja regeneracijo aksonov in deluje kot modulator rasti živcev (Talarowska et al., 2014; Gu et al., 2016; Xu et al., 2016). V našem prejšnjem delu z uporabo Morrisovega vodnega labirinta smo ugotovili, da se je latenca pobega podganjih modelov vaskularne demence zmanjšala po zdravljenju z GC, kar kaže, da GC izboljša sposobnost prostorskega učenja. Čeprav se GC obširno uporablja zaradi njegovega nevroprotektivnega učinka (Chen et al., 2015), mehanizem, na katerem temelji ta učinek, ostaja nejasen.

Dobro je znano, da so peptidi A in p-tau močno izraženi v senilnih plakih in nevrofibrilarnih pentljah. Proteini A in tau igrajo ključno vlogo pri morfogenezi nevronov, vendar v določenih patoloških situacijah ustvarjajo aberantne agregate, ki so nevrotoksični (Love et al., 2015; Sadigh-Eteghad et al., 2015; Sinclair et al., 2015; Thomas et al., 2015; Wang et al., 2015; Reijmer et al., 2016). Sedanji rezultati imunohistokemije kažejo, da je bila ekspresija proteina p-tau in A v podganjih modelih vaskularne demence, zdravljenih z GC, bistveno večja kot pri kontrolnih podganah, vendar manjša kot pri nezdravljenih modelih podgan. Zato se lahko nevroprotektivni učinek GC pojavi z zmanjšanjem toksičnosti A in p-tau.

Naša proteomska študija na hipokampusu podgan je pokazala velike razlike v izražanju mitohondrijskega prekurzorskega proteina, keratina in KRT6A. Kar zadeva funkcijo, špekuliramo, da je lahko nevroprotektivni učinek GC povezan s preoblikovanjem strukture dendritične hrbtenice.

Mitohondrijski prekurzorski protein spada v družino HSP70 (Rao et al., 2014; Gutiérrez -Aguilar in Baines, 2015; McGeer in McGeer, 2015). HSP75 sodeluje pri aktivaciji in zorenju molekularnega nadzornika ter ohranja stabilnost in normalno delovanje celic (Booth et al., 2014, 2016; Tavallai et al., 2015).

Menijo, da ima mitohondrijski prekurzorski protein pomembno vlogo pri transdukciji nekaterih signalnih poti (Reid et al., 2014; Booth et al., 2015a, b). Nedavne študije so pokazale, da družina HSP90 uravnava delovno okolje zvijanja mitohondrijskih beljakovin (An et al., 2014; Liu in Landgraf, 2015; Roberts et al., 2015; Stary in Giffard, 2015). HSP75 je lokaliziran v mitohondrijih in zavira nastajanje prostih kisikovih radikalov (Radu et al., 2014; Holloway et al., 2016). Naši rezultati kažejo, da se je izražanje HSP75 v skupini, zdravljeni z GC, povečalo za 2.54-krat, kar nakazuje, da ima GC vlogo antioksidanta, izboljša celično oksidativno ravnovesje in upočasni apoptozo. Ta ugotovitev daje zanimive namige o interakcijah mitohondrijskega proteina šaperona z drugimi proteini.

Druga različno izražena beljakovina je bila KRT6A. Keratini, imenovani tudi citokeratini, so vmesni filamentni proteini, ki ustvarijo netopno gosto mrežo skozi citoplazmo in dajejo strukturno podporo epitelijski celici (Haricharan et al., 2014; Rorke et al., 2015; Szymanski et al., 2015). . Vendar pa imajo citokeratini tudi aktivno vlogo v različnih procesih celičnega preživetja (proliferacija in apoptoza) (Zhu et al., 2013; Schwingshackl et al., 2015; Popov in Komianos, 2016). Ti proteini so lahko podvrženi fosforilaciji in so tudi del premostitvenega stika med epitelno celico in njenim mikrookoljem (Lessard et al., 2013; Gil Lorenzo et al., 2014; Zhou et al., 2014; Chakrabarti et al., 2015) . CK6a je prevladujoča izoforma v mlečni žlezi (Bramanti et al., 2015a, b, 2016) in je povečana pri celjenju robov ran na koži, kar kaže, da je citokeratin vključen v celično proliferacijo in migracijo. Vendar smo prvi, ki smo pokazali znižanje regulacije KRT6A v hipokampusu; Izražanje KRT6A je bilo 158-kratno zmanjšano v skupini, zdravljeni z GC, v primerjavi s skupino z vaskularno demenco.

Zato je lahko nevroprotektivni učinek GC povezan z zaviranjem nevroglialne hiperplazije med cerebrovaskularno ishemijo.

Rezultati naše študije skupaj kažejo, da ima GC svoje učinke na učenje in spodbujanje spomina pri podganjih modelih vaskularne demence z zmanjšanjem izražanja A in p-tau, s čimer oslabi kopičenje teh dveh toksičnih proteinov in posledično zmanjša nevronska toksičnost. Poleg tega lahko GC uravnava izražanje mitohondrijskega prekurzorskega proteina in KRT6A, ki sta povezana s sinaptično morfogenezo citoskeleta in mitohondrijsko presnovo energije. Zato naši podatki zagotavljajo nov vpogled v osnovne mehanizme GC, pri čemer poudarjajo možnost, da imajo GC več ciljev, kar ponuja obetavno novo terapevtsko možnost za zdravljenje vaskularne demence.

Opombe pod črto

Financiranje:To študijo je podprla Nacionalna naravoslovna fundacija Kitajske, št. 30960520; naravoslovna fundacija kitajske avtonomne regije Notranja Mongolija, št. 2016MS0837.

Nasprotja interesov: Niso navedena.

Raziskovalna etika:Protokol študije je odobril odbor za etiko živali prve bolnišnice v Wuhanu. Eksperimentalni postopek je sledil vodniku Nacionalnega inštituta za zdravje za nego in uporabo laboratorijskih živali (Publikacije NIH št. 8023, revidirana 1978) in "Smernicam soglasnih avtorjev o etiki in dobrem počutju živali", ki jih je izdalo Mednarodno združenje za veterinarske urednike (IAVE). ). Potrudili so se čim bolj zmanjšati število in trpljenje živali, uporabljenih v poskusih. Prispevek je bil pripravljen v skladu s smernicami »Raziskave na živalih: poročanje o smernicah za poskuse in vivo« (ARRIVE Guidelines).

Pogodba o prispevku: Izjavo o "pogodbi o založbi" je pred objavo podpisal pooblaščeni avtor v imenu vseh avtorjev.

Preverjanje plagiatorstva: Ta članek je bil dvakrat preverjen s programsko opremo iThenticate za preverjanje podvajanja.

Strokovni pregled:Izveden je bil dvojno slep in strog postopek strokovnega pregleda, da se zagotovi celovitost, kakovost in pomen tega dokumenta.

Avtor: Slone-Murphy J, Francoz B, Yu J, Li CH, Qiu Y, Song LP, Zhao M

Reference

1. An J, Haile WB, Wu F, Torre E, Yepes M. Aktivator plazminogena tkivnega tipa posreduje nevroglialno sklopitev v centralnem živčnem sistemu. Nevroznanost. 2014; 257: 41–48.

2. Barker R, Ashby EL, Wellington D, Barrow VM, Palmer JC, Kehoe PG, Esiri MM, Love S. Patofiziologija perfuzije bele snovi pri Alzheimerjevi bolezni in vaskularni demenci. možgani. 2014; 137: 1524–1532.

3. Booth L, Roberts JL, Cruickshanks N, Grant S, Poklepovic A, Dent P. Regulacija toksičnosti OSU-03012 s stresnimi proteini ER in zdravili, ki povzročajo stres ER. Mol Cancer Ther. 2014; 13: 2384–2398.

4. Booth L, Roberts JL, Tavallai M, Nourbakhsh A, Chuckalovcak J, Carter J, Poklepovic A, Dent P. OSU-03012 in zdravljenje z viagro zavira aktivnost več proteinov spremljevalcev in moti krvno-možgansko pregrado : posledice za terapije proti raku. J Cell Physiol. 2015a;230:1982–1998.

5. Booth L, Roberts JL, Cash DR, Tavallai S, Jean S, Fidanza A, Cruz-Luna T, Siembiba P, Cycon KA, Cornelissen CN, Dent P. GRP78/BiP/HSPA5/Dna K je univerzalna terapevtska tarča za človeško bolezen. J Cell Physiol. 2015b;230:1661–1676.

6. Booth L, Shuch B, Albers T, Roberts JL, Tavallai M, Proniuk S, Zukowski A, Wang D, Chen CS, Bottaro D, Ecroyd H, Lebedyeva IO, Dent P. večkinazni inhibitorji se lahko povežejo s toplotnim šokom proteine ​​preko njihovih NH2-koncev, s katerimi zavirajo delovanje šaperona. Oncotarget. 2016; 7: 12975–12996.

7. Bramanti V, Grasso S, Tibullo D, Giallongo C, Raciti G, Viola M, Avola R. Modulacija ekstracelularne s signalom povezane kinaze, ciklina D1, glialnega fibrilarnega kislega proteina in izražanja vimentina v kulturah astrocitov, predhodno obdelanih z estradiolom, zdravljenih z

dejavniki rasti kompetenc in napredovanja. J Neurosci Res. 2015a;93:1378–1387.

8. Bramanti V, Grasso S, Tomassoni D, Traini E, Raciti G, Viola M, Li Volti G, Campisi A, Amenta F, Avola R. Vpliv rastnih faktorjev in steroidnih hormonov na izražanje heme oksigenaze in ciklina D1 v primarni astrogliji celične kulture. J Neurosci Res. 2015b;93:521–529.

9. Bramanti V, Grasso S, Tibullo D, Giallongo C, Pappa R, Brundo MV, Tomassoni D, Viola M, Amenta F, Avola R. Nevroaktivne molekule in rastni faktorji modulirajo ekspresijo citoskeletnih beljakovin med proliferacijo in diferenciacijo astroglialnih celic v kulturi. J Neurosci Res. 2016; 94: 90–98.

10. Brandenburg S, Muller A, Turkowski K, Radev YT, Rot S, Schmidt C, Bungert AD, Acker G, Schorr A, Hippe A, Miller K, Heppner FL, Homey B, Vajkoczy P. Rezidentna mikroglija namesto perifernih makrofagov spodbujajo vaskularizacijo možganskih tumorjev in so vir alternativnih proangiogenih dejavnikov. Acta Neuropathol. 2016; 131: 365–378.

11. Burke MJ, Nelson L, Slade JY, Oakley AE, Khundakar AA, Kalaria RN. Morfometrija mikrovaskulature hipokampusa pri demencah po možganski kapi in s starostjo. Neuropathol Appl Neurobiol. 2014; 40: 284–295.

12. Chakrabarti KR, Whipple RA, Boggs AE, Hessler LK, Bhandary L, Vitolo MI, Thompson K, Martin SS. Farmakološka regulacija AMPK pri raku dojke vpliva na citoskeletne lastnosti, ki so vključene v tvorbo mikrolovk in ponovno

Priponka. Oncotarget. 2015; 6: 36292–36307.

13. Chen A, Akinyemi RO, Hase Y, Firbank MJ, Ndung'u MN, Foster V, Craggs LJ, Washida K, Okamoto Y, Thomas AJ, Polvikoski TM, Allan LM, Oakley AE, O'Brien JT, Horsburgh K , Ihara M, Kalaria RN. Hiperintenzivnost čelne bele snovi, klasmatodendroza in neovaskularne nenormalnosti pri staranju in demenci po možganski kapi. možgani. 2016; 139: 242–258.

14. Chen J, Zhou SN, Zhang YM, Feng YL, Wang S. Glikozidi Cistanche izboljšajo učenje in spomin pri podganjem modelu vaskularne demence. Eur Rev Med Pharmacol Sci. 2015; 19: 1234–1240.

15. Chen S, Yin ZJ, Jiang C, Ma ZQ, Fu Q, Qu R, Ma SP. Azijatikozid zmanjša okvaro spomina, ki jo povzroči prehodna cerebralna ishemija-reperfuzija pri miših s protivnetnim mehanizmom. Pharmacol Biochem Behav. 2014;122:7–

16. Fischer R, Maier O. Medsebojna povezava oksidativnega stresa in vnetja pri nevrodegenerativnih boleznih: vloga TNF. Oxid Med Cell Longev. 2015;2015:610813.

17. Foster V, Oakley AE, Slade JY, Hall R, Polvikoski TM, Burke M, Thomas AJ, Khundakar A, Allan LM, Kalaria RN. Piramidalni nevroni prefrontalnega korteksa pri demencah po možganski kapi, vaskularnih in drugih s staranjem povezanih demencah. možgani. 2014; 137: 2509–2521.

18. Gil Lorenzo AF, Bocanegra V, Benardon ME, Cacciamani V, Valles PG. Regulacija Hsp70 na Nox4/p22phox in celovitost citoskeleta kot učinek losartana v gladkih mišičnih celicah žil. Spremljevalci celičnega stresa. 2014; 19: 115–134.

19. Gu C, Yang X, Huang L. Cistanches herba: nevrofarmakološki pregled. Front Pharmacol. 2016; 7: 289.

20. Gutiérrez -Aguilar M, Baines CP. Strukturni mehanizmi od ciklofilina D odvisnega nadzora prehodne pore mitohondrijske prepustnosti. Biochim Biophys Acta. 2015; 1850: 2041–2047.

21. Haricharan S, Hein SM, Dong J, Toneff MJ, Aina OH, Rao PH, Cardiff RD, Li Y. Prispevek izvorne alveolarne celice k malignemu fenotipu visoke stopnje raka dojke, povezanega z nosečnostjo. Onkogen. 2014; 33: 5729–5739. [

22. Holloway KR, Sinha VC, Bu W, Toneff M, Dong J, Peng Y, Li Y. Usmerjanje onkogenov v definirano podmnožico mlečnih celic dokazuje, da iniciacijska onkogena mutacija opredeljuje nastali tumorski fenotip. Int J Biol

Sci. 2016; 12: 381–388.

23. Kalaria RN, Ferrer I, Love S. Žilne bolezni, hipoksija in sorodna stanja. V: Love S, Perry A, Ironside J, Budka H, ​​uredniki. Greenfieldova nevropatologija. London: CRC; 2015.

24. Lessard JC, Pina-Paz S, Rotty JD, Hickerson RP, Kaspar RL, Balmain A, Coulombe PA. Keratin 16 uravnava prirojeno imunost kot odziv na preboj epidermalne pregrade. Proc Natl Acad Sci US A. 2013; 110: 19537–19542.

25. Liu W, Landgraf R. Fosforilirani in nefosforilirani serin 13 CDC37 stabilizirajo različne interakcije med odjemalcem in veznimi domenami HSP90. Biokemija. 2015; 54: 1493–1504.

26. Love S, Chalmers K, Ince P, Esiri M, Attems J, Kalaria R, Jellinger K, Yamada M, McCarron M, Minett T, Matthews F, Greenberg S, Mann D, Kehoe PG. Napaka: Razvoj, ocena, validacija in izvajanje protokola soglasja za oceno cerebralne amiloidne angiopatije v možganskem tkivu po smrti. Am J Neurodegener Dis. 2015; 4: 49.

27. McGeer PL, McGeer EG. Usmerjanje na mikroglijo za zdravljenje Alzheimerjeve bolezni. Strokovno mnenje o ciljih. 2015; 19: 497–506.

28. Neltner JH, Abner EL, Baker S, Schmitt FA, Kryscio RJ, Jicha GA, Smith CD, Hammack E, Kukull WA, Brenowitz WD, Van Eldik LJ, Nelson PT. Arterioloskleroza, ki prizadene več možganskih regij, je povezana s hipokampalno sklerozo staranja. možgani. 2014; 137: 255–267.

29. Oliveira NR, Marques SO, Luciano TF, Pauli JR, Moura LP, Caperuto E, Pieri BL, Engelmann J, Scaini G, Streck EL, Lira FS, Pinho RA, Ropelle ER, Silva AS, De Souza CT. Vadba na tekalni stezi poveča ravni beljakovin SIRT-1 in PGC-1 alfa ter fosforilacijo AMPK v kvadricepsih podgan srednjih let na način, ki je odvisen od intenzivnosti. Mediatorji vnetja. 2014;2014:987017. [brezplačen članek PMC]

30. Pérez -Hernández J, Zaldívar -Machorro VJ, Villanueva-Porras D, Vega-Ávila E, Chavarría A. Potencialna alternativa proti nevrodegenerativnim boleznim: fitozdravila. Oxid Med Cell Longev. 2016;2016:8378613. [PMC brezplačno

članek] [PubMed] [Google Scholar]

31. Popov K, Komianos J. MEDIAN: mehanokemijske simulacije kontrakcije in poravnave polarnosti v aktomiozinskih mrežah. Računalnik PLoS

Biol. 2016;12:e1004877. [PMC brezplačen članek] [PubMed] [Google Scholar]

32. Procaccio V, Bris C, Chao de la Barca JM, Oca F, Chevallier A, Amati-Bonneau P, Bonneau D, Reynier P. Perspektive nevroprotekcije na osnovi zdravil, ki ciljajo na mitohondrije. Rev Neurol (Pariz) 2014; 170: 390–400. [PubMed] [Google Scholar]

33. Radu M, Semenova G, Kosoff R, Chernoff J. PAK signalizacija med razvojem in napredovanjem raka. Nat Rev Rak. 2014; 14: 13–25. [PMC brezplačen članek] [PubMed] [Google Scholar]

34. Rao VK, Carlson EA, Yan SS. Prehodna pora mitohondrijske prepustnosti je potencialna tarča zdravila za nevrodegeneracijo. Biochim Biophys Acta. 2014;1842:1267– 1272. [Brezplačni članek PMC] [PubMed] [Google Scholar]

35. Reid SP, Shurtleff AC, Costantino JA, Tritsch SR, Retterer C, Spurgers KB, Bavari S. HSPA5 je bistveni dejavnik gostitelja za okužbo z virusom ebole. Protivirusna res. 2014; 109: 171–174. [PubMed] [Google Scholar]

36. Reijmer YD, van Veluw SJ, Greenberg SM. Ishemična možganska poškodba pri cerebralni amiloidni angiopatiji. J Cereb Blood Flow Metab. 2016; 36: 40–54. [PMC brezplačen članek] [PubMed] [Google Scholar]

37. Roberts JL, Tavallai M, Nourbakhsh A, Fidanza A, Cruz-Luna T, Smith E, Siembida P, Plamondon P, Cycon KA, Doern CD, Booth L, Dent P. GRP78/Dna K je tarča za Nexavar/ stivarga/votrient pri zdravljenju človeških malignomov, virusnih okužb in bakterijskih bolezni. J Cell Physiol. 2015; 230: 2552–2578. [PMC brezplačen članek] [PubMed] [Google Scholar]

38. Rorke EA, Adhikary G, Young CA, Rice RH, Elias PM, Crumrine D, Meyer J, Blumenberg M, Eckert RL. Strukturne in biokemične spremembe, na katerih temelji fenotip, podoben keratodermi, pri miših brez funkcije suprabazalnega transkripcijskega faktorja AP1. Cell Death Dis. 2015;6:e1647. [PMC brezplačen članek] [PubMed] [Google Scholar]

39. Sachdev P, Kalaria R, O'Brien J, Skoog I, Alladi S, Black SE, Blacker D, Blazer DG, Chen C, Chui H, Ganguli M, Jellinger K, Jeste DV, Pasquier F, Paulsen J, Prins N, Rockwood K, Roman G, Scheltens P. Mednarodno združenje za vaskularne vedenjske in kognitivne motnje (2014) Diagnostična merila za vaskularne kognitivne motnje: izjava VASCOG. Alzheimer Dis Assoc Disord. 28: 206–218.

40. Sadigh-Eteghad S, Sabermarouf B, Majdi A, Talebi M, Farhoudi M, Mahmoudi J. Amiloid-beta: ključni dejavnik pri Alzheimerjevi bolezni. Med Princ Prakt. 2015; 24: 1–10.

41. Schwingshackl A, Roan E, Teng B, Waters CM. TREK-1 uravnava izločanje citokinov iz kultiviranih človeških alveolarnih epitelijskih celic neodvisno od citoskeletnih preureditev. PLoS One. 2015; 10: e0126781.

42. Sinclair LI, Tayler HM, Love S. Ravni sinaptičnih beljakovin, spremenjene pri vaskularni demenci. Neuropathol Appl Neurobiol. 2015; 41: 533–543.

43. Stary CM, Giffard RG. Napredek pri pristopih, usmerjenih v astrocite, za zdravljenje možganske kapi: nastajajoča vloga mitohondrijev in mikroRNA. Neurochem Res. 2015; 40: 301–307.

44. Szalárdy L, Z ádori D, Klivényi P, Toldi J, Vécsei L. Motnje transporta elektronov in nevrodegeneracija: od koncepta Alberta Szent-Gyorgyija (Szeged) do novih pristopov za povečanje mitohondrijske bioenergetike. Celica Oxid Med

Longev. 2015;2015:498401.

45. Szymanski WG, Zauber H, Erban A, Gorka M, Wu XN, Schulze WX. Komponente citoskeleta določajo lokacijo beljakovin na membranskih mikrodomenah. Proteomika celic Mol. 2015; 14: 2493–2509.

46. ​​Talarowska M, Bobinska K, Zajaczkowska M, Su KP, Maes M, Galecki P. Vpliv oksidativnega/nitrozativnega stresa in vnetja na kognitivne funkcije pri bolnikih s ponavljajočimi se depresivnimi motnjami. Med Sci Monit. 2014; 20: 110–115.

47. Tatlisumak T, Putaala J, Debette S. Manj pogosti vzroki kapi: diagnoza in zdravljenje. V: Norrving B, urednik. Oxfordov učbenik možganske kapi in možgansko-žilne bolezni. Oxford: Oxford University Press; 2014. str. 153–162. [Google Učenjak]

48. Tavallai M, Hamed HA, Roberts JL, Cruickshanks N, Chuckalovcak J, Poklepovic A, Booth L, Dent P. Nexavar/Stivarga in viagra medsebojno vplivata na ubijanje tumorskih celic. J Cell Physiol. 2015; 230: 2281–2298. [PMC brezplačen članek] [PubMed] [Google Scholar]

49. Thomas T, Miners S, Love S. Postmortem ocena hipoperfuzije možganske skorje pri Alzheimerjevi bolezni in vaskularni demenci. možgani. 2015; 138: 1059– 1069. [PubMed] [Google Učenjak]

50. Wang Y, Lin J, Chen QZ, Zhu N, Jiang DQ, Li MX, Wang Y. Prekomerna ekspresija mitohondrijskega Hsp75 ščiti nevralne matične celice pred nevrotoksičnostjo, ki jo povzroča topni faktor, ki izvira iz mikroglije, z uravnavanjem odpiranja prehodnih por mitohondrijske prepustnosti in vitro. Int J Mol Med. 2015; 36: 1487–1496.

51. Xu Q, Fan W, Ye SF, Cong YB, Qin W, Chen SY, Cai J. Cistanche tubulosa ščiti dopaminergične nevrone z regulacijo apoptoze in nevrotrofnega faktorja, pridobljenega iz glialnih celic: in vivo in in vitro. Sprednje staranje

Neurosci. 2016; 8: 295.

52. You SP, Zhao J, Ma L, Tudimat M, Zhang SL, Liu T. Preventivni učinki feniletanolnih glikozidov iz Cistanche tubulosa na jetrno fibrozo, povzročeno z govejim serumskim albuminom pri podganah. Daru. 2015;23:52.

53. Zhou Q, Anderson C, Zhang H, Li X, Inglis F, Jayagopal A, Wang S. Represija horoidalne neovaskularizacije prek poti aktinskega citoskeleta z mikroRNA-24. Mol Ther. 2014; 22: 378–389.

54. Zhu M, Lu C, Li W. Prehodna izpostavljenost ehinakozidu zadostuje za aktiviranje signalizacije Trk in zaščito nevronskih celic pred rotenonom. J Neurochem. 2013; 124: 571–580.