Vpliv prehranske obremenitve s kalcijem in fosfatom na kinetiko kalciproteinskih delcev pri odraslih z normalnim in okvarjenim delovanjem ledvic

Povzetek

Plazma se približuje metastabilnosti v zvezi z vsebnostjo kalcija in fosfata, pri čemer so potrebne le manjše motnje v ionski aktivnosti za vzdrževanje rasti kristalov, ko so nukleirani. Fiziološko gledano se kalcij in fosfat vsak dan občasno absorbirata iz hrane, vendar plazemske koncentracije teh ionov postprandialno minimalno odstopajo. To pomeni obstoj mineralnega puferskega sistema, ki se prenaša s krvjo, za sekvestracijo kalcijevih fosfatov in zmanjšanje tveganja odlaganja v mehkih tkivih. Kalciproteinski delci (CPP), endogeni mineralno-proteinski koloidi, ki vsebujejo plazemski protein fetuin-A, lahko izpolnjujejo to funkcijo, vendar manjkajo dokončni dokazi, ki bi povezovali prehransko obremenitev z minerali in njihovo tvorbo. Tukaj dokazujemo, da se CPP oblikuje kot normalen fiziološki odziv na hranjenje pri zdravih odraslih in da se to zgodi kljub minimalni spremembi običajnih mineralnih markerjev v serumu. Nadalje smo pri posameznikih s kronično ledvično boleznijo (CKD), pri katerih je ravnanje z minerali oslabljeno, pokazali, da so ravni prekurzorjev CPP na tešče in po obroku izrazito povečane in v močni obratni korelaciji z delovanjem ledvic. Ta študija poudarja pomemben, a pogosto zanemarjen prispevek koloidne biokemije k mineralni homeostazi in ponuja nov vpogled v disregulacijo metabolizma mineralov pri KLB.

Kliknite tukaj za nakup izdelkov Cistanche

Uvod

Kalcij in fosfat tvorita zelo netopne soli v vodni raztopini in medtem ko je metabolizem v vseh živih organizmih odvisen od teh bistvenih hranil, njuno soobstoj v bioloških tekočinah ustvarja inherentno tveganje mineralizacije in potrebo po strogi regulaciji1. Večina zunajceličnih tekočin, kot je plazma, velja za metastabilne ali se približujejo metastabilnosti v zvezi z njihovimi kalcijevimi in fosfatnimi ionskimi aktivnostmi2, pri čemer zlahka vzdržujejo rast kristalov, če so nukleirani. To težnjo po obarjanju kalcija in fosfata so vretenčarji izkoristili zaradi svojih edinstvenih biomehanskih lastnosti med razvojem skeletnih in zobnih tkiv. Vendar pa je to hkrati zahtevalo mehanizme hitre mobilizacije in učinkovitega transporta mineralnih prekurzorjev za izpolnjevanje potreb po rasti in obnovi teh trdih tkiv, kot tudi strategije za omejevanje mineralizacije na ta mesta in preprečevanje neželene kalcifikacije v mehkih tkivih3 . Dejansko so celo zmerna povišanja koncentracij kalcija in fosfata v plazmi povezana s povečanim tveganjem za patološko kalcifikacijo arterij in tkiv4. Ker se presežek kalcija in fosfata skoraj izključno izloča preko ledvic, je to tveganje skupaj s povezanimi srčno-žilnimi posledicami bistveno večje pri bolnikih s kronično ledvično boleznijo (CKD), kjer postanejo motnje v presnovi mineralov očitne z relativno majhnim zmanjšanjem glomerulne filtracije. hitrost (GFR)5,6. Glede na obilico kalcija in fosfata v prehrani, ki so ji sesalci občasno izpostavljeni, bi lahko domnevali, da je tveganje za zunajmaternično mineralizacijo največje po obroku zaradi pričakovanega porasta mineralnih ionov, absorbiranih iz črevesja. Vendar se v nasprotju s tem pričakovanjem koncentracije kalcija in fosfata v plazmi v postprandialnem obdobju minimalno spreminjajo in medtem ko povečano izločanje urina pomaga ohranjati homeostazo7, ta odziv ni takojšen in zaostaja za nekaj ur po zaužitju milimolarnih količin kalcija in fosfata8. Kot rešitev za ta fiziološki izziv se je že dolgo domnevalo, da bo sistem za pufriranje in transport mineralov v krvi9, v zadnjem času pa se je pozornost usmerila na koloidne mineralno-proteinske komplekse, ki bi lahko izpolnjevali to funkcijo in varno spremljali občasno pretok mineralov skozi zunajcelično tkivo. tekočino na mesta uporabe ali odlaganja10.

V plazmi je najmočnejši in najpogostejši regulator mineralizacije beljakovin jetrni glikoprotein fetuin-A11, ki sodeluje z nastajajočimi koloidnimi mineralno-proteinskimi kompleksi, da tvori kalciproteinske delce (CPP) 12,13. Podobno kot apolipoproteini solubilizirajo svoj lipidni tovor za transport, fetuinA stabilizira slabo topne kalcijeve fosfate, preprečuje rast kristalov in precipitacijo, hkrati pa olajša njihov vnos v tkiva za uporabo ali očistek 14–16. Nezmožnost izdelave ali zadostne stabilizacije CPP, kot je razvidno iz fetuin-A izločenih miših, ima za posledico enega najhujših znanih fenotipov ektopične kalcifikacije17, kjer kompleksi, ki vsebujejo minerale, precipitirajo neposredno v lumnu mikrovaskulature, kar vodi do okluzije, ishemije, nekroza in fbroza18. CPP nastane skozi niz urejenih korakov, na začetku z vezavo spontano oblikovanih grozdov kalcijevih in fosfatnih ionov na fetuin-A, pri čemer nastanejo kalciproteinski monomeri (CPM)19, ki nato služijo kot gradniki za večje polimerne strukture; najprej se združi, da nastane sferični primarni CPP (CPP-I), ki vsebuje amorfni kalcijev fosfat, preden se preoblikuje v večji in gostejši elipsoidni sekundarni CPP (CPP-II), ki vsebuje kristalni hidroksiapatit12.

Poleg domnevne fiziološke vloge nastajanja CPP pri sekvestriranju in razprševanju odvečnih mineralov so povišane ravni opažene tudi v stanjih oslabljenega metabolizma mineralov, vključno s kronično ledvično boleznijo20. V tem okolju so bile višje serumske ravni CPM in CPP povezane s povečanim tveganjem za srčno-žilne dogodke21–25 in umrljivostjo22. Predklinične študije kažejo, da lahko CPP neposredno inducira kalcifikacijo žilnih gladkih mišičnih celic 26, 27, aktivacijo celičnih vnetnih in citotoksičnih poti 28, 29, kot tudi vaskularne luminalne in endotelne lezije 30. Skupaj je bilo predlagano, da lahko dolgotrajna izpostavljenost kronično povišanim ravnem serumskega CPP pomaga razložiti povezave med presežkom mineralov v prehrani in slabimi izidi bolnikov pri KLB14,31. Zanimivo je, da nedavni podatki prav tako kažejo, da se CPM v obtoku filtrira v glomerulih29, kar pomeni, da lahko okvara ledvic vpliva na presnovo CPP prek več mehanizmov.

Nedavni metodološki napredek omogoča neposredno kvantifikacijo CPM32, CPP-I in CPP-II33, pri čemer se ti testi zdaj uporabljajo v več opazovalnih in intervencijskih kliničnih študijah 24, 25, 34–39. Druga nova dopolnilna metoda za ocenjevanje tega sistema je test T50, funkcionalna ocena sposobnosti seruma, da se upre ex vivo tvorbi CPP-II, ko je izpostavljen prenasičenim količinam kalcija in fosfata40. Nižji T50 je bil dosledno povezan s povečanim tveganjem za vaskularno patologijo in umrljivostjo pri posameznikih z normalnim delovanjem ledvic41, kot tudi v različnih kohortah kronične ledvične bolezni, vključno s kronično ledvično boleznijo brez dialize22,42,43 in tudi od dialize odvisno kronično ledvično boleznijo44. Poleg kinetike nastajanja CPP-II je mogoče izmeriti tudi velikost (hidrodinamični radij) molekul CPP-II, ki nastanejo v testu T5040,45, in lahko zagotovi dodatne prognostične informacije o vaskularnem tveganju46,47.

Zamisel o prehranskem izvoru CPP je močno podprta z opažanjem, da je hranjenje z visoko vsebnostjo fosfatov povezano s povečanimi okoljskimi ravnmi CPM48 in CPP33 v študijah na živalih ter zmanjšanjem serumskih CPM34 in CPP37 pri bolnikih na hemodializi, zdravljenih s črevesnimi vezivci fosfatov. Vendar dokončnega opazovanja učinka prehranskega vnosa mineralov na akutno kinetiko CPP pri ljudeh ni. Poleg tega vpliv CKD na presnovo CPP po obroku še ni dokumentiran. Da bi odpravili te ključne vrzeli v dokazih, smo izvedli nadzorovano študijo o vplivu standardiziranega vnosa hrane na serumsko velikost CPM, CPP-I, CPP-II, T50 in CPP-II pri teščih odraslih z normalnim ali okvarjenim delovanjem ledvic.

Izvleček Cistanche

Metodologija

1. Preučite populacijo.

Preučevali smo 14 posameznikov s kronično ledvično boleznijo in 16 zdravih kontrol, ki so ustrezali starosti in spolu. Vsak udeleženec je moral biti star najmanj 18 let, da je bil upravičen. Udeleženci so bili izključeni, če: (i) so v preteklosti imeli mineralno ali kostno bolezen, ki ni bila povezana s kronično ledvično boleznijo; (ii) so bili zdravljeni s črevesnim vezalcem fosfatov ali kalcitriolom; ali (iii) so imeli gastrointestinalne motnje, anamnezo laktozne intolerance ali niso bili pripravljeni zaužiti študijskega obroka. Za skupino s kronično ledvično boleznijo smo vključili sedem posameznikov z ocenjeno hitrostjo glomerulne filtracije (eGFR) med 30 in 60 ml/min/1,73 m2 in sedem z eGFR<30 mL/min/1.73 m2, excluding participants who required dialysis or with a previous kidney transplant. Healthy controls had no history of chronic medical conditions and had normal kidney function (eGFR>60 ml/min/1,73 m2). Študijo je izvedla Helsinška deklaracija.

Vsi posamezniki so dali pisno informirano soglasje in študijo je odobril lokalni etični odbor (Melbourne Health Human Research Ethics Committee MH2018.363).

2. Postopek.

Vsakega udeleženca so preučevali po nočnem postu, zbiranje vzorcev pa se je začelo med 7.30 in 9.30 zjutraj. Intravenska kanila je bila vstavljena na začetku študijskega obdobja. Pred odvzemom vsakega vzorca krvi je bilo začetnih 5 ml odvzema iz kanile zavrženih. Dva začetna vzorca krvi na tešče sta bila odvzeta v 30-minutnem razmaku, da bi upoštevali izhodiščno variacijo. Srednje vrednosti teh dveh časovnih točk so bile uporabljene kot "čas 0". Takoj po odvzemu drugega vzorca na tešče so udeleženci zaužili standardiziran obrok (tekoči zajtrk Sanitarium Up&Go; 250 ml, okus vanilije), ki je vseboval 815 kJ energije, 300 mg kalcija in 188 mg fosfata (tabela 1). Udeležencem je bilo naročeno, naj celotno pijačo popijejo v 5 minutah. Serijske vzorce krvi smo zbrali v petih časovnih točkah po obroku (30, 60, 120, 180 in 240 min) od začetka obroka. Med študijskim obdobjem so udeleženci smeli piti vodo, vendar niso smeli uživati ​​nobene druge hrane ali pijače.

3. Meritve rezultatov.

Zbrana je bila kri za ponavljajoče se merjenje novih markerjev metabolizma mineralov (CPM, CPP-I, CPP-II, T50 in velikost CPP-II) ob vsaki časovni točki. Fetuin-A je bil izmerjen ob vsaki časovni točki glede na njegovo vlogo glavne beljakovine, ki veže minerale, prisotne v CPM in CPP. Izmerili smo tudi serumski fosfat, skupni kalcij, magnezij, albumin in bikarbonat na vsaki časovni točki ter serumski intaktni obščitnični hormon (PTH) in intaktni fibroblastni rastni faktor-23 (iFGF23) v treh časovnih točkah ({{12 }}, 120 in 240 min). Serumski citrat je bil izmerjen pri 0, 30 in 60 minutah. Serumska sečnina, kreatinin in 1,25 dihidroksi vitamin D so bili izmerjeni enkrat na tešče (0 min). Vzorce krvi za nove markerje mineralnega metabolizma, PTH, iFGF23, 1,25 dihidroksi vitamina D in serumski citrat, smo pustili strjevati 30 minut pred centrifugiranjem, nato pa smo alikvote seruma shranili pri –80 stopinjah do šaržne analize. Vse ostale biokemične meritve so bile opravljene ob odvzemu vzorcev z uporabo standardnih laboratorijskih metod.

4. Gel-filtracija in citometrični testi za CPM in CPP.

Uporabili smo dva komplementarna testa za kvantitativno opredelitev različnih frakcij krožečega združenja CPP49. Oba testa uporabljata fluorescentno označen bisfosfonatni derivat OsteoSense 680EX (Perkin Elmer), ki se specifično veže na kalcijev fosfat v trdni fazi in prednostno na kristalne faze (npr. hidroksiapatit). Metoda 'gel-filtracije' Miura et al.32 je bila uporabljena za merjenje majhne (<50 nm diameter), low-density mineral-laden fetuin-A colloids. Briefly, frozen serum samples were thawed for 24 h at 25 °C to induce aggregation of CPM and phase transition to crystalline calcium phosphate. Samples were then centrifuged for 30,000g for 2 h at 4 °C to remove larger CPP-I and CPP-II, leaving less dense crystal-laden fetuin-A monomer and multimers for staining with OsteoSense (0.5 µM) in HEPES-buffered DMEM (pH 8.0). Unbound dye was subsequently removed by gel filtration (Micro Bio-Spin® Columns with Bio-Gel® P-30, Bio-Rad) and the resultant fluorescence was measured using an infrared scanner (Odyssey CLx, LI-COR; EX 685 nm, EM 700 nm). Miura and colleagues32 referred to the mineral detected as low-density (L)-CPP, however, here we refer to them as CPM to reflect the origin of this mineral fraction in vivo. In our hands, the mean interassay analytical coefficient of variation (CVA) for the CPM assay was 4.9%.

Za pretočno citometrično analizo so bili alikvoti zamrznjenega seruma obdelani z uporabo standardiziranih postopkov, opisanih prej50. CPP-I in CPP-II sta bila izmerjena, kot je opisano prej, z nastavitvijo pretočnega citometra BD FACSVerse za ločevanje delcev<200 nm from the background and operate with fluorescence triggering on OsteoSense-positive events33,37. In this assay, CPP is distinguished from membrane-delimited mineral-containing extracellular vesicles using phosphatidyl serine–binding cadherin-FITC (Haematologic Technologies Inc., Essex Junction, VT). CPP-I and CPP-II were distinguished by differences in side scatter (SSC) intensity (related to particle size) and OsteoSense fluorescence intensity. Interassay CVA for CPP-I and CPP-II were<15% and<10%, respectively.

5. Drugi označevalci mineralov.

Serumski T50 je izmeril Calciscon AG, Biel, Švica, kot je bilo prej opisano z uporabo nefelometra Nephelostar (BMG Labtech, Ortenberg, Nemčija)40. Povprečni medtestni CVA za T50 je bil 3,4 odstotka. Hidrodinamični radij CPP-II je bil izmerjen z dinamičnim sipanjem svetlobe z uporabo DynaPro Plate Reader II (Wyatt Technology, Santa Barbara, CA, ZDA), kot so opisali Chen et al. 47 Intertest CVA za velikost CPP-II je bil 4 odstotke. Za merjenje iFGF23 (Kainos Laboratories, Tokio, Japonska), 1,25 dihidroksi vitamina D Immunodiagnostic Systems, Boldon, Združeno kraljestvo, so bili uporabljeni komercialni imunski testi in fetuin-A (R&D Systems, Minneapolis, ZDA) v skladu z navodili proizvajalca. Povprečni medtestni CVA je bil 3,8 odstotka, 5,5 odstotka oziroma 3,2 odstotka. Serumski citrat je bil izmerjen s kolorimetričnim testom (Sigma-Aldrich, Darmstadt, Nemčija) s povprečno vrednostjo CVA med preskusi 3,5 odstotka.

6. Statistična analiza.

Using GLIMPSE, a validated linear mixed model power and sample size calculator51, we estimated that 10 participants would provide>90-odstotna moč za zaznavanje podvojitve CPP v obdobju po obroku s stopnjo napake tipa I 0,05. Študija ni bila zasnovana za odkrivanje razlik med skupinami.

Demografske podatke in biokemične podatke na tešče smo primerjali med skupinami z uporabo neparnega t-testa ali Kruskal-Wallisovega testa za normalne oziroma poševne zvezne spremenljivke ter testa hi-kvadrat za kategorične spremenljivke.

Naš cilj je bil opisati postprandialni odziv znotraj in med skupinami za vsak ponovljeni parameter. Da bi to naredili, smo prilagodili linearne modele mešanih učinkov (LMM) za vsak parameter z uporabo pristopa omejene največje verjetnosti in z nestrukturirano kovariančno matriko52. Za vsak LMM smo modelirali skupino, kategorični čas in interakcijo med skupinami in časom kot fiksne učinke, za vsakega udeleženca pa je bil vključen naključni presek, da bi upoštevali korelacijo ponovljenih meritev. Kontrolna skupina in čas '0' sta bila uporabljena kot referenčna vrednost za skupino oziroma čas. Ocene koeficientov za izraze interakcije med skupinami in časom so bile uporabljene za testiranje razlik v odzivu po obroku med CKD in kontrolnimi skupinami. Po prilagoditvi vsakega LMM smo izvedli tudi post hoc parne primerjave, da bi testirali razlike v srednjih vrednostih med skupinami na vsaki časovni točki in da bi testirali odstopanje od izhodišča na tešče znotraj vsake skupine. Za te parne primerjave smo uporabili Bonferronijevo korekcijsko metodo za prilagoditev več primerjav. Velikost CPM, CPP-I, CPP-II, CPP-II, PTH in iFGF23 so bili naravno logaritmično transformirani pred namestitvijo LMM, da se zagotovi normalna porazdelitev ostankov. Zaradi lažje interpretacije so bile ocene koeficientov za pogoje interakcije iz teh modelov nato potencirane, da bi izpeljali ocene odstotne spremembe. Za LMM CPM so izrazi interakcije po posameznih skupinah nakazovali pomembno razliko v odzivu po obroku med skupinami. Za nadaljnje raziskovanje vpliva delovanja ledvic na postprandialne ravni CPM smo izračunali tudi površino pod krivuljo (AUC) za CPM z uporabo metode kubičnega zlepka (čas 0 do 240 min) in preučili razmerje med eGFR , AUC in največjo koncentracijo CPM (z uporabo Spearmanove rang korelacije) kot tudi med kronično ledvično boleznijo in časom največje koncentracije CPM (z uporabo testa hi-kvadrat).

Več vzorcev je imelo nezaznavne ravni CPP-I (2 vzorca v kontrolni skupini in 6 v skupini s kronično ledvično boleznijo) ali CPP-II (5 v kontrolni skupini in 10 v skupini s kronično ledvično boleznijo). Za glavne analize je bila za te levo cenzurirane vrednosti uporabljena spodnja meja kvantifikacije za test (133 delcev/mL). Da bi ocenili morebitno pristranskost iz tega pristopa, smo izvedli analizo občutljivosti, kjer so bili LMM za CPP-I in CPP-II ponovno nameščeni po imputiranju lefcenzuriranih vrednosti z uporabo večnivojske regresije Tobit, kjer sta bila čas in skupina vnesena kot neodvisni spremenljivki 53.

Dvostranske vrednosti p<0.05 were considered significant. All data were analyzed using Stata MP version 17.0 (StataCorp, College Station, USA) and figures were produced using GraphPad Prism version 9.2.0 (GraphPad Sofware, San Diego, USA).

Herba Cistanche

Diskusija

Kolikor nam je znano, je to prva študija, ki je poročala o pomembnem postprandialnem učinku prehranskega vnosa na serumske ravni CPM, CPP-I in CPP-II pri ljudeh. Ti učinki so bili pogosti pri posameznikih z normalnim in okvarjenim delovanjem ledvic; vendar pa je bil postprandialni nihanje serumskega CPM veliko bolj izrazit pri udeležencih KLB. Ugotovili smo tudi zgodnji in prehodni postprandialni učinek na T50, ki je bil prisoten ne glede na delovanje ledvic in ga je spremljalo sočasno povečanje fetuina-A v serumu.

Naše ugotovitve so skladne z idejo, da lahko črevesna absorpcija prehranske mineralne obremenitve neposredno vodi do tvorbe krožečih CPM, CPP-I in CPP-II. To je bilo že predlagano 10, 15, 16, vendar v veliki meri temelji na podatkih o živalih 33, 48. Nasprotno pa so bili dokazi pri ljudeh posredni, saj so izhajali iz študij črevesnih vezivcev fosfatov pri bolnikih s kronično ledvično boleznijo, odvisnih od hemodialize34,37,55. Majhna študija Yamade et al. predlagal dnevne variacije serumskega CPP z najvišjimi vrednostmi po obroku, vendar je ta študija uporabila starejšo tehniko testiranja, ki ni mogla ločeno kvantificirati podvrst CPM in CPP, vsi udeleženci pa so bili hospitalizirani zaradi obvladovanja nestabilne sladkorne bolezni56. Nasprotno pa so bili vsi udeleženci v tej študiji klinično stabilni in, kolikor nam je znano, smo prvič dokazali, da postprandialne ekskurzije opazimo ne le pri posameznikih s kronično ledvično boleznijo, ampak tudi pri zdravih odraslih, kar utemeljuje vlogo nastajanja CPM in CPP pri normalnem fiziološkem odzivu na zaužitje hrane.

Povišanja serumskih CPM in CPP so opazili tudi po razmeroma skromnih in fiziološko pomembnih prehranskih mineralnih obremenitvah (tabela 1). V nasprotju s tem pa je prišlo do minimalne postprandialne variacije pri bolj običajnih označevalcih metabolizma mineralov. Prejšnje študije so podobno pokazale omejeno postprandialno odstopanje fosfata7,57, razen ko so subjekti izpostavljeni velikim farmakološkim obremenitvam58,59. Pri zdravju je skupni telesni fosfat reguliran, tako da se neto črevesna absorpcija ujema z izločanjem z urinom8. Vendar ta odziv ni takojšen in lahko opazimo večurni zamik, preden pride do povečanja izločanja fosfata v urinu, tudi če se fosfatna obremenitev daje intravensko8. Namesto tega so živalski modeli dokazali, da drugi, ne-ledvični mehanizmi služijo za bolj akutno vzdrževanje serumskih ionskih koncentracij prek porazdelitve v kosti in druga tkiva 59–61. Verjetno je, da je tvorba CPM in CPP lahko pomembno dodatno začasno skladišče fosfata (in kalcija), ki lahko akutno ublaži lokalne mineralne obremenitve, na primer iz gastrointestinalnega sistema14. Fizikalno-kemijske lastnosti CPM in CPP pomenijo, da lahko potencialno velike količine sicer netopnih mineralov obstajajo v obtoku brez nevarnosti padavin, kar navidezno olajša varen transport mineralov v razsutem stanju do mest uporabe ali čiščenja.

Opazili smo prehodno povečanje serumskega fetuina-A v skupini s kronično ledvično boleznijo. V nasprotju s tem se je fetuin-A v kontrolah zdel stabilen, vendar pa je, ko so bile primerjave po parih ponovljene brez popravka za večkratne primerjave, pri kontrolah prišlo do znatnih povečanj po 30 in 60 minutah (dodatna tabela S8), kar kaže, da morda nismo imeli dovolj moči za odkrivanje osnovni učinek. Poleg tega, da gre za negativni reaktant akutne faze, z močno zavrtimi ravnmi kot odziv na akutno in kronično vnetje62, je malo znanega o drugih mehanizmih, ki neposredno uravnavajo jetrno sintezo in izločanje fetuina-A, poleg tega je premalo prejšnjih podatkov o dnevnem, ali akutne postprandialne variacije pri kateri koli vrsti. Glede na opažen porast fetuina-A v serumu po hranjenju, zlasti v skupini s kronično ledvično boleznijo, in zahtevano vlogo fetuina-A pri tvorbi CPM in CPP, je zanimivo razmisliti, ali je hranjenje mogoče "zaznati" prek še neznanega mehanizma, kar vodi do jetrnega sproščanja fetuina A, ki sovpada z dotokom mineralov iz črevesja. Dejansko so Uedono et al. je nedavno predlagal, da je CPP sam lahko sprožilec izražanja fetuina-A v gojenih hepatocitih63. Tako mehanizmi, ki nadzorujejo sproščanje fetuina-A in njihov odziv na nalaganje mineralov, zahtevajo nadaljnje preiskave.

T50 je funkcionalna ocena sposobnosti seruma, da se upre ex vivo tvorbi CPP-II, ki predstavlja sestavo različnih faktorjev kalcifikacije (vključno s kalcijem in fosfatom) in inhibicije (vključno s fetuinom-A, albuminom, magnezijem, citratom in bikarbonatom)40. Opazili smo zgodnje, a prehodno povečanje T50. To so opazili v obeh skupinah, toda v skupini s kronično ledvično boleznijo je vrh sovpadal s povečanjem serumskega fetuina-A. Poleg tega je bila med vsemi udeleženci sprememba T50 od izhodišča zelo tesno povezana s spremembo serumskega fetuina-A (dodatna slika S2), kar kaže, da je lahko fetuin-A glavni dejavnik, na katerem temeljijo opažene spremembe T50. Pravzaprav nismo našli ustreznih zgodnjih postprandialnih sprememb pri drugih znanih modulatorjih T50 (serumski fosfat, kalcij, bikarbonat, magnezij ali albumin), čeprav to ne izključuje bolj subtilnih sprememb v enem ali kombinaciji teh dejavnikov. . Na primer, pozitivna interakcija med skupinami je bila prisotna za serumski bikarbonat v skupini s kronično ledvično boleznijo pri 120 minutah, kar se je prekrivalo s povečanjem T50. Kar zadeva fetuin-A, je obstajala tudi korelacija med spremembo bikarbonata in T50 od izhodišča (dodatna slika S4), čeprav je bila ta razmeroma šibka v primerjavi s korelacijo s prvim (r=0.385 proti r=0.839). Kljub temu je "alkalna plima" po obroku priznan pojav in verjetno je, da je več dejavnikov prispevalo k opazovanim postprandialnim spremembam v T5064. Študijski obrok je vseboval tudi presenetljivo količino citrata (~16 mM), znanega močnega zaviralca tvorbe CPP, vendar, čeprav je prišlo do majhnega povečanja serumskega citrata v skupini s kronično ledvično boleznijo, ta sprememba ni sovpadala z opaženimi spremembami v T50, niti ni bilo nobene splošne korelacije med spremembo T50 in serumskega citrata v obeh skupinah. Drugi prej opisani modulatorji T50, kot sta pirofosfat in cink, v tej študiji niso bili izmerjeni. Čeprav so lahko ti ali drugi še neznani dejavniki prav tako prispevali k opazovanemu povečanju T50 po obroku, opažamo, da so na splošno potrebne precejšnje spremembe v koncentraciji teh majhnih anorganskih molekul, da bi pomembno vplivale na T5065. V nasprotju s postprandialnimi učinki na T50 je hidrodinamični polmer CPP-II v obeh skupinah ostal navidezno nespremenjen.

Cistanche kapsule

Medtem ko so postprandialne ekskurzije CPM opazili v obeh skupinah, so bile ravni CPM dosledno višje v skupini s kronično ledvično boleznijo na vsaki od časovnih točk, izrazi medsebojne interakcije med skupinami pa so pokazali, da je bil obseg postprandialnega odziva znatno večji. pri udeležencih s kronično ledvično boleznijo kot pri kontrolni skupini. V skladu s tem je bila v raziskovalni analizi močna korelacija med eGFR in CPM AUC ter največjo koncentracijo. Najvišje ravni CPM so se prav tako pojavljale pozneje v skupini s kronično ledvično boleznijo. Teoretično bi lahko te razlike kazale na povečano proizvodnjo CPM po prehranskem vnosu in/ali oslabljeno sposobnost čiščenja CPM pri tistih s kronično ledvično boleznijo. Slednje podpirajo nedavni podatki Koepperta et al., ki so uporabili dvofotonsko mikroskopijo v živo, da bi pokazali, da se CPM v obtoku pretežno očisti z glomerulno filtracijo pri miših29. Zato je razumna napoved lahko, da se zmožnost čiščenja CPM zmanjša, ko GFR upada. Vendar pa so pri kronični ledvični bolezni pogosto opažene tudi spremembe v drugih vidikih mineralne homeostaze, vključno s presnovo kosti 66 in zakasnjenim ledvičnim izločanjem akutnih fosfatnih obremenitev 7, 59, ki so morda prispevale k zvišanju ravni po obroku. Nedavni dokazi so postavili pod vprašaj dolgoletno predstavo, da kronična ledvična bolezen vpliva na neto črevesno absorpcijo fosfata57,67,68. Opazili pa smo, da je šest od 14 posameznikov v skupini s kronično ledvično boleznijo jemalo holekalciferol. Glede na potencial stimulativnih učinkov vitamina D na črevesno absorpcijo mineralov smo izvedli ad hoc raziskovalno analizo, da bi preverili, ali je uporaba prehranskega vitamina D vplivala na akutni odziv CPM, CPP-I in CPP-II na hranjenje (dodatne tabele). S9–S11). Razen ene same pozitivne interakcije med skupinami za čas za CPP-I po 30 minutah pri tistih, ki so jemali holekalciferol, vsi drugi izrazi interakcije in post hoc parne primerjave za CPM, CPP-I in CPP-II niso bili pomembni, kar kaže na to, da holekalciferol ni verjetno, da bi imela uporaba bistvenega vpliva na postprandialno kinetiko CPM/CPP. Medtem ko majhna velikost vzorca in možnost zmede lahko onemogočata dokončne zaključke, lahko pomanjkanje učinka odraža tudi prevlado absorpcije fosfata po paracelularni poti, ko je minerala veliko, kar ni aktivno regulirano z osjo vitamina D69.

V nasprotju s CPM niti pri CPP-I niti pri CPP-II nismo opazili močnega učinka na delovanje ledvic. Za razliko od CPM se krožeči CPP iz obtoka v prvi vrsti odstrani z neledvičnimi mehanizmi. Živalski modeli in modeli in vitro so nakazali hiter očistek CPP-I predvsem s sinusoidnimi endotelnimi celicami jeter28, CPP-II pa rezidenčnimi makrofagi jeter in vranice70. Verjetno je, da medtem ko so udeleženci v naši skupini s kronično ledvično boleznijo pokazali znake spremenjenega metabolizma CPM, so te diskretne poti očistka CPP zadostovale za vzdrževanje normalnih postprandialnih profilov CPP. Na podlagi prejšnjih študij smo pričakovali, da bo imela skupina bolnikov s kronično ledvično boleznijo opazno višje ravni CPP v primerjavi s kontrolnimi skupinami, čeprav so te študije vključevale bolnike z napredovalo kronično ledvično boleznijo, ki so bili odvisni od dialize33, ali so uporabljali starejšo in posredno metodo merjenja CPP20,23. Posamezniki z bolj napredovalo kronično ledvično boleznijo od tistih, ki so jih preučevali tukaj, lahko kažejo večje razlike v ravneh CPP na tešče in po obroku. Pomanjkanje ločevanja za CPP med našo kronično ledvično boleznijo in kontrolno skupino je lahko tudi posledica našega omejenega števila udeležencev, kar je prav tako omejilo našo zmožnost formalnega testiranja učinka stopnje kronične ledvične bolezni (dodatna slika S6). Dejansko je naša študija temeljila na preučevanju odzivov po obroku in ne na razlikah med skupinami. Opozoriti je treba, da se je CPP-I pri kontrolnih skupinah vrnil na ravni na tešče prej kot pri udeležencih s kronično ledvično boleznijo in pri udeležencih s kronično ledvično boleznijo je bila po 120 minutah pozitivna interakcija med skupinami za CPP-II. Obe ugotovitvi potencialno kažeta, da smo morda opazili izrazitejše učinke med skupinami v večji kohorti. K ničelnim ugotovitvam je morda prispevala tudi večja analitična nenatančnost meritev CPP na podlagi pretočne citometrije.

Poleg zagotavljanja novih vpogledov v fiziologijo metabolizma CPM in CPP ima naša študija tudi neposreden pomen za optimizacijo uporabe teh novih markerjev metabolizma mineralov v prihodnjih študijah. Medtem ko je vsaka od teh novih analiz obetavna v zgodnjem kliničnem delu, je le malo študij poročalo43 ali kontroliralo stanje na tešče/absorpcijo46,56. V tej študiji je imelo več posameznikov nezaznavne ravni CPP-I ali CPP-II v obdobju na tešče in v zgodnjem postprandialnem obdobju in ta močan učinek posta na serumski CPP je sam po sebi doslej neprijavljen in opazen vir financiranja. V nasprotju s tem pa so bile ravni CPM na tešče merljive in bistveno višje v skupini s kronično ledvično boleznijo kot v kontrolni skupini, kar nakazuje, da se dolgotrajno zvišanje CPM morda ne kaže nujno v povišanih ravneh CPP pri tistih s kronično ledvično boleznijo, ki ni odvisna od dialize.

Prejšnje epidemiološke študije so nakazovale povezave med povišanimi ravnmi CPM in CPP z vrsto nadomestnih označevalcev žilnih bolezni 21, 23, 24, pa tudi s kardiovaskularnimi dogodki 25 in umrljivostjo zaradi vseh vzrokov 22. Poleg tega so laboratorijske študije zagotovile verjetne mehanizme, s katerimi lahko CPP posreduje pri teh patoloških vaskularnih izidih 26–28. Čeprav so študije in vitro pokazale, da je veliko teh toksičnosti povzročenih na način, ki je odvisen od odmerka, če ima CPP normalno fiziološko vlogo pri zdravju, ni jasno, na kateri točki lahko ti delci postanejo škodljivi. Poznavanje učinka prehranskega vnosa na kinetiko CPP, kot je razkrito tukaj, se lahko izkaže za ključno za nadaljnje razumevanje tega procesa. Mejno koncentracijo za pojav patoloških učinkov CPM in CPP je mogoče (vsaj na začetku) doseči le v postprandialnem stanju in vivo. Če je tako, lahko dinamično testiranje postprandialnega odziva zagotovi dodatne priložnosti za ovrednotenje zgodnejših manifestacij nereguliranega metabolizma mineralov, pa tudi tveganja za povezano žilno bolezen. Druga pomembna možnost je, da se sestava in s tem intrinzična toksičnost CPP-I in CPP-II razlikujeta glede na zdravje in CKD45.

Cistanche dodatek

Omejitve

Zavedamo se, da ima ta študija več omejitev, vključno z omejenim številom bolnikov, kot smo že omenili. Predvsem smo uporabili tudi standardiziran obrok, ki smo ga dali po nočnem postu, zato ne moremo komentirati učinka spreminjanja sestave obroka ali učinka naslednjih obrokov, danih v preostalem delu dneva. Obrok smo izbrali na podlagi njegove komercialne razpoložljivosti, kar je omogočilo standardizacijo med udeleženci, in ker je predstavljal fiziološko pomembne prehranske obremenitve (tabela 1). Vendar pa je možno, da bi bila očitna nadaljnja ločitev med tistimi z normalnim in okvarjenim delovanjem ledvic, če bi bili udeleženci izzvani z večjimi mineralnimi obremenitvami. Podobno, glede na to, da smo posameznike opazovali le štiri ure po obroku, je mogoče zamisliti, da je kumulativni učinek naslednjih obrokov morda dodatno razlikoval skupine.

Blata ali urina nismo pridobili, zato ne moremo komentirati skupnih mineralov, absorbiranih ali izločenih med študijo. Predvidevamo, da so spremembe v vsaki meritvi, opaženi po hranjenju, neposredno povezane s prehranskim vnosom. To predpostavko posredno podpirajo podrobne slikovne študije, ki kažejo spajanje kalcijevih in fosfatnih ionov po zaužitju hrane57, pa tudi neposredni dokazi iz študij na živalih, ki kažejo, da akutno oralno dajanje miši s pufrsko raztopino fosfata povzroči serumske skoke CPM/CPP48. Kljub temu udeležencev nismo opazovali v pogojih podaljšanega posta, zato ne moremo dokončno pojasniti dnevnih nihanj v katerem koli od preučevanih parametrov, ki niso povezana s prehrano. Vendar smo imeli dva vzorca na tešče, katerih povprečje je bilo uporabljeno kot "čas 0", variabilnost med temi vzorci na tešče pa je bila trivialna v primerjavi z obsegom sprememb, opaženih v obdobju po obroku.

Uporabili smo metodo Bonferroni za upoštevanje več post hoc parnih primerjav med in znotraj skupin za vsak parameter. To je nedvomno konzervativen pristop in kolikor vemo, ga ni sprejela nobena druga podobna študija presnove mineralov po obroku. Ta pristop smo izbrali glede na veliko število časovnih točk in primerjav, ki smo jih opravili, ter sklepali, da je bolje, da se osredotočimo na najbolj robustne in pomembne signale. Vendar pa smo zaradi tega morda zamudili manjše, a potencialno pomembne učinke. Glede na verjetnost medsebojno odvisnih fiziološko povezanih sprememb nismo popravljali večkratnega testiranja različnih mineralnih parametrov.

Cistanche tubulosa

Zaključek

Naša študija je prvič razkrila, da prehranski vnos mineralov vodi do tvorbe CPM in CPP v krvi kot normalnega fiziološkega odziva na hranjenje. Te ugotovitve potrjujejo hipotezo, da tvorba CPM/CPP pomaga graditi postprandialne mineralne obremenitve, ki delujejo kot začasno krožeče skladišče velikih količin kalcijevih fosfatov, ki so na koncu namenjeni za uporabo/skladiščenje (npr. mineralni predhodnik za mineralizacijo kosti) ali izločanje. Opazili smo tudi višje ravni serumskega CPM na tešče in večji postprandialni odziv pri tistih z okvarjenim delovanjem ledvic, kar kaže na to, da je metabolizem CPM očitno spremenjen pri KLB. Analiza postprandialnega ravnanja s CPM/CPP lahko zagotovi nove vpoglede v mehanizme, ki povezujejo čezmerni vnos kalcija in fosfatov s hrano s povečanim tveganjem za srčno-žilne bolezni pri bolnikih z okvarjenim izločanjem mineralov. V širšem smislu te nove ugotovitve poudarjajo pomemben, a pogosto zanemarjen prispevek koloidne biokemije k mineralni homeostazi.

Reference

1. Magalhães, MCF, Marques, PAAP & Correia, RN Biomineralizacija – medicinski vidiki topnosti (ur. Königsberger, E. & Königsberger, L.). 71–123. (Wiley, 2006).

2. Holt, C., Lenton, S., Nylander, T., Sorensen, ES & Teixeira, SC Mineralizacija mehkih in trdih tkiv ter stabilnost biotekočin. J. Struct. Biol. 185, 383–396 (2014).

3. Reznikov, N., Steele, JAM, Fratzl, P. & Stevens, MM Vizija znanosti o materialih mineralizacije zunajceličnega matriksa. Nat. Rev. Mater. 1, 16041 (2016).

4. Smith, ER Vaskularna kalcifikacija pri uremiji: novodobni koncepti o problemu starosti. Metode Mol. Biol. 1397, 175–208 (2016).

5. Chen, J. et al. Kalcifikacija koronarne arterije in tveganje za srčno-žilne bolezni in smrt pri bolnikih s kronično ledvično boleznijo. JAMA kardiol. 2, 635–643 (2017).

6. Kestenbaum, BR et al. Incidenca in napredovanje koronarne kalcifikacije pri kronični ledvični bolezni: večetnična študija ateroskleroze. Kidney Int. 76, 991–998 (2009).

7. Isakova, T. et al. Postprandialni mineralni metabolizem in sekundarni hiperparatiroidizem v zgodnji kronični ledvični bolezni. J. Am. Soc. Nefrol. 19, 615–623 (2008).

8. Scanni, R., vonRotz, M., Jehle, S., Hunter, HN & Krapf, R. Človeški odziv na akutne enteralne in parenteralne obremenitve s fosfati. J. Am. Soc. Nefrol. 25, 2730–2739 (2014).

9. Pasch, A., Jahnen-Dechent, W. & Smith, ER Fosfat, kalcifikacija v krvi in ​​mineralni stres: Fiziološki mineralni puferski sistem v krvi in ​​njegova povezava s kardiovaskularnim tveganjem. Int. J. Nephrol. 2018, 9182078 (2018).

10. Jahnen-Dechent, W. et al. Blato v krvi: Vloga proteinsko-mineralnih kompleksov in zunajceličnih veziklov pri biomineralizaciji in kalcifikaciji. J. Struct. Biol. 212, 107577 (2020).

11. Schinke, T. et al. Serumski protein alfa2-HS glikoprotein/fetuin zavira tvorbo apatita in vitro in mineralizacijo celic kalvarije. Možna vloga pri mineralizaciji in homeostazi kalcija. J. Biol. Chem. 271, 20789–20796 (1996).

12. Heiss, A. et al. Strukturna osnova inhibicije kalcifikacije z alfa 2-HS glikoproteinom/fetuinom-A. Tvorba koloidnih kalciproteinskih delcev. J. Biol. Chem. 278, 13333–13341 (2003).

13. Cai, MM, Smith, ER & Holt, SG Vloga fetuina-A pri trgovanju in odlaganju mineralov. Bonekey Rep. 4, 672 (2015).

14. Smith, ER, Hewitson, TD & Jahnen-Dechent, W. Kalciproteinski delci: Mineral se slabo obnaša? Curr. Opin. Nefrol. hipertenzije. 29, 378–386 (2020).

15. Jahnen-Dechent, W., Schäfer, C., Ketteler, M. & McKee, MD Mineralni spremljevalci: Vloga fetuina-A in osteopontina pri zaviranju in regresiji patološke kalcifikacije. J. Mol. med. (Berl.) 86, 379–389 (2008).

16. Jahnen-Dechent, W. & Smith, ER Naravno zdravilo za fosfatne težave: delci kalciproteina uravnavajo sistemsko presnovo mineralov. Kidney Int. 97, 648–651 (2020).

17. Schafer, C. et al. Serumski protein alfa 2-Heremans-Schmidov glikoprotein/fetuin-A je sistemsko delujoč zaviralec ektopične kalcifikacije. J. Clin. Investirajte. 112, 357–366 (2003).

18. Herrmann, M. et al. Lumenalna kalcifikacija in mikrovaskulopatija pri miših s pomanjkanjem fetuina-A vodita do obolevnosti več organov. PLoS ONE 15, e0228503 (2020).

19. Heiss, A., Pipich, V., Jahnen-Dechent, W. & Schwahn, D. Fetuin-A je mineralni nosilni protein: Sipanje nevtronov pod majhnim kotom zagotavlja nov vpogled v Fetuin-A nadzorovano inhibicijo kalcifikacije. Biophys. J. 99, 3986–3995 (2010).

20. Smith, ER et al. Serumska koncentracija fetuina-A in delci kalciproteina, ki vsebujejo fetuin-A, pri bolnikih s kronično vnetno boleznijo in odpovedjo ledvic. Nefrologija (Carlton) 18, 215–221 (2013).

21. Smith, ER et al. Fosforilirani kalciproteinski delci, ki vsebujejo fetuin-A, so povezani s togostjo aorte in procikličnim okoljem pri bolnikih s kronično ledvično boleznijo pred dializo. Nefrol. Dial. Presaditev. 27, 1957–1966 (2012).

22. Smith, ER et al. Nagnjenost k kalcifikaciji v serumu napoveduje umrljivost zaradi vseh vzrokov pri kronični ledvični bolezni pred dializo. J. Am. Soc. Nefrol. 25, 339–348 (2014).

23. Hamano, T. et al. Kompleks fetuin-mineral odraža stres zunajkostne kalcifikacije pri kronični ledvični bolezni. J. Am. Soc. Nefrol. 21, 1998–2007 (2010).

24. Nakazato, J. et al. Povezava kalciproteinskih delcev, izmerjenih z novo metodo, s plakom koronarnih arterij pri bolnikih s koronarno arterijsko boleznijo: presečna študija. J. Cardiol. 74, 428–435 (2019).

25. Gatate, Y. et al. Srednjeročna napovedna vrednost kalciproteinskih delcev pri bolnikih na vzdrževalni hemodializi na podlagi testa gelske filtracije. Ateroskleroza 303, 46–52 (2020).

26. Cai, MMX, Smith, ER, Tan, SJ, Hewitson, TD & Holt, SG Vloga sekundarnih kalciproteinskih delcev v paradoksu mineralizacije kronične ledvične bolezni. Calcif. Tkivo. Int. 101, 570–580 (2017).

27. Aghagolzadeh, P. et al. Kalcifikacijo vaskularnih gladkih mišičnih celic inducirajo sekundarni delci kalciproteina in poveča faktor tumorske nekroze alfa. Ateroskleroza 251, 404–414 (2016).

28. Koppert, S. et al. Celični očistek in biološka aktivnost kalciproteinskih delcev sta odvisna od njihove zrelosti in kristaliničnosti. Spredaj. Immunol. 9, 1991 (2018).

29. Koeppert, S. et al. Živo slikanje očistka kalciproteinskih delcev in receptorsko posredovanega privzema: vloga kalciproteinskih monomerov. Spredaj. Celica. Dev. Biol. 9, 633925 (2021).

30. Shishkova, D. et al. Bioni kalcijevega fosfata povzročajo hiperplazijo intime v nepoškodovanih aortah normolipidemičnih podgan zaradi endotelijske poškodbe. Int. J. Mol. Sci. 20, 5728 (2019).

31. Kuro-o, M. Fosfatno osredotočena paradigma za patofiziologijo in terapijo kronične ledvične bolezni. Kidney Int. Suppl. 2011(3), 420–426 (2013).

32. Miura, Y. et al. Identifikacija in kvantifikacija kalciproteinskih delcev v plazmi z izrazitimi fizikalnimi lastnostmi pri bolnikih s kronično ledvično boleznijo. Sci. Rep. 8, 1256 (2018).

33. Smith, ER et al. Nov pretočni citometrični test na osnovi fluorescentne sonde za nanodelce, ki vsebujejo minerale, v serumu. Sci. Rep. 7, 5686 (2017).

34. Nakamura, K. et al. Vpliv lantanovega karbonata na kalciproteinske delce pri bolnikih na hemodializi. Clin. Exp. Nefrol. 24, 323–329 (2020).

35. Tiong, MK et al. Učinek dializatorja s srednjo mejo na uremične toksine, vezane na beljakovine, in markerje metabolizma mineralov pri bolnikih na hemodializi. Hemodial. Int. https://doi.org/10.1111/hdi.12924 (2021).

36. Tiong, MK, Smith, ER, Toussaint, ND, Al-Khayyat, HF & Holt, SG Zmanjšanje kalciproteinskih delcev pri odraslih, ki prejemajo infliksimab za kronično vnetno bolezen. JBMR Plus 5, e10497 (2021).

37. Smith, ER, Pan, FFM, Hewitson, TD, Toussaint, ND & Holt, SG Učinek sevelamerja na kalciproteinske delce pri bolnikih na hemodializi: Te sevelamer v primerjavi s kalcijem za zmanjšanje fetuin-A-vsebujočih kalciproteinskih delcev pri dializi (SCaRF) randomizirano kontrolirano preskušanje. Kidney Int. Rep. 5, 1432–1447 (2020).

38. Ruderman, I., Smith, ER, Toussaint, ND, Hewitson, TD & Holt, SG Longitudinalne spremembe presnove kosti in mineralov po prenehanju jemanja cinakalceta pri bolnikih na dializi s sekundarnim hiperparatiroidizmom. BMC Nephrol. 19, 113 (2018).

39. Bressendorf, I. et al. Učinek povečanja magnezija v dializatu na kalciproteinske delce, vnetje in kostne markerje: Post hoc analiza iz randomiziranega kontroliranega kliničnega preskušanja. Nefrol. Dial. Presaditev. 36, 713–721 (2021).

40. Pasch, A. et al. Test na osnovi nanodelcev meri celotno nagnjenost k kalcifikaciji v serumu. J. Am. Soc. Nefrol. 23, 1744–1752 (2012).

41. Eelderink, C. et al. Nagnjenost k kalcifikaciji v serumu in tveganje za srčno-žilno smrtnost in smrtnost zaradi vseh vzrokov v splošni populaciji: študija PREVENT. Arterioskler. Tromb. Vasc. Biol. 40, 1942–1951 (2020).

42. Bundy, JD et al. Nagnjenost k kalcifikaciji v serumu in kalcifikacija koronarnih arterij pri bolnikih s kronično ledvično boleznijo: študija Te CRIC (kohorta kronične ledvične insuficience). Am. J. Ledvica. Dis. 73, 806–814 (2019).

43. Bundy, JD et al. Nagnjenost k kalcifikaciji v serumu in klinični dogodki pri KLB. Clin. J. Am. Soc. Nefrol. 14, 1562–1571 (2019).

44. Pasch, A. et al. Nagnjenost k kalcifikaciji krvi, srčno-žilni dogodki in preživetje pri bolnikih na hemodializi v preskušanju EVOLVE. Clin. J. Am. Soc. Nefrol. 12, 315–322 (2017).

45. Smith, ER, Hewitson, TD, Hanssen, E. & Holt, SG Biokemijska transformacija kalciproteinskih delcev pri uremiji. Bone 110, 355–367 (2018).

46. ​​Chen, W. et al. Povezave velikosti delcev serumskega kalciproteina in časa transformacije z arterijsko kalcifikacijo, togostjo arterij in smrtnostjo pri bolnikih na hemodializi. Am. J. Kidney Dis. 77, 346–354 (2021).

47. Chen, W. et al. Bolniki z napredovalo kronično ledvično boleznijo in vaskularno kalcifikacijo imajo velik hidrodinamični radij sekundarnih kalciproteinskih delcev. Nefrol. Dial. Presaditev. 34, 992–1000 (2019).

48. Akiyama, KI et al. Delci kalciproteina uravnavajo izražanje rastnega faktorja fibroblastov-23 v osteoblastih. Kidney Int. 97, 702–712 (2020).

49. Smith, ER Kalciproteinski delci: mineralni biomarker, ki potrebuje boljše merjenje. Ateroskleroza 303, 43–45 (2020).

50. Smith, ER Te izolacija in kvantifikacija kalciproteinskih delcev, ki vsebujejo fetuin-A, iz bioloških tekočin. Metode Mol. Biol. 1397, 221–240 (2016).

51. Guo, Y., Logan, HL, Glueck, DH & Muller, KE Izbira velikosti vzorca za študije s ponavljajočimi se meritvami. BMC Med. Res. Metodol. 13, 100 (2013).

52. Liu, C., Cripe, TP & Kim, MO Statistična vprašanja v longitudinalni analizi podatkov za študije učinkovitosti zdravljenja v biomedicinskih znanostih. Mol. Ter. 18, 1724–1730 (2010).

53. Tobin, J. Ocena odnosov za omejene odvisne spremenljivke. Econometrica 26, 24–36 (1958).

54. Ter Meulen, KJ et al. Dializat citronske kisline izboljša nagnjenost k kalcifikaciji bolnikov na hemodializi: multicentrično prospektivno randomizirano navzkrižno preskušanje. PLoS ONE 14, e0225824 (2019).

55. Tiem, U. et al. Učinek terapije s fosfatnim vezivom s sukrofernim oksihidroksidom na nagnjenost k kalcifikaciji pri bolnikih s kronično hemodializo: randomizirano, kontrolirano, navzkrižno preskušanje. Clin. Kidney J. 14, 631–638 (2021).

56. Yamada, H. et al. Dnevna variabilnost serumskih ravni kalciproteinskih delcev in njihova povezava s parametri metabolizma mineralov: presečna pilotna študija. Nefrologija (Carlton) 23, 226–230 (2018).

57. Stremke, ER et al. Črevesno absorpcijo fosforja pri zmerni kronični ledvični bolezni in zdravih odraslih je bila določena z uporabo radioizotopnega sledilca. J. Am. Soc. Nefrol. 32, 2057–2069 (2021).

58. Volk, C. et al. Akutni učinki dodatka anorganskega fosforja na mineralno presnovo in kardiometabolične dejavnike tveganja pri zdravih osebah. J. Clin. Endocrinol. Metab. 107, e852–e864 (2022).

59. Turner, ME et al. Moteno toleranco za fosfate so odkrili z akutnim oralnim izzivom. J. Kostni rudar. Res. 33, 113–122 (2018).

60. Tomas, L. et al. Za akutno prilagoditev na peroralni ali intravenski fosfat je potreben obščitnični hormon. J. Am. Soc. Nefrol. 28, 903–914 (2017).

61. Zelt, JG et al. Akutno odlaganje mineralov v tkivih kot odziv na fosfatni impulz pri eksperimentalni kronični ledvični bolezni. J. Kostni rudar. Res. 34, 270–281 (2019).

62. Lebreton, JP et al. Serumska koncentracija človeškega glikoproteina alfa 2 HS med vnetnim procesom: dokaz, da je glikoprotein alfa 2 HS negativni reaktant akutne faze. J. Clin. Investirajte. 64, 1118–1129 (1979).

63. Uedono, H. et al. Učinki kalciproteinskih delcev, ki vsebujejo fetuin-A, na posttranslacijske modifikacije fetuina-A v celicah HepG2. Sci. Rep. 11, 7486 (2021).

64. Niv, Y. & Fraser, GM Pojav alkalne plime. J. Clin. Gastroenterol. 35, 5–8 (2002).

65. Smith, ER, Hewitson, TD & Holt, SG Diagnostični testi za vaskularno kalcifikacijo. Adv. Kronična ledvična dis. 26, 445–463 (2019).

66. Sprague, SM et al. Diagnostična natančnost markerjev kostne pregradnje in kostne histologije pri bolnikih s kronično ledvično boleznijo, zdravljenih z dializo. Am. J. Kidney Dis. 67, 559–566 (2016).

67. Vorland, CJ et al. Napredovanje ledvične bolezni ne zmanjša absorpcije fosforja v črevesju pri podganjem modelu kronične ledvične bolezni - mineralne kostne motnje. J. Kostni rudar. Res. 35, 333–342 (2020).

68. Marks, J. et al. Črevesna absorpcija fosfatov v modelu kronične odpovedi ledvic. Kidney Int. 72, 166–173 (2007).

69. Hill Gallant, KM & Vorland, CJ Črevesna absorpcija fosforja: nedavne ugotovitve v translacijskih in kliničnih raziskavah. Curr. Opin. Nefrol. hipertenzije. 30, 404–410 (2021).

70. Herrmann, M. et al. Očistek kalciproteinskih delcev, ki vsebujejo fetuin-A, posreduje čistilni receptor-A. Circ. Res. 111, 575–584 (2012).

71. Sanitarium Health Food Company. UP&GO™ okus vanilije. https://www.sanitarium.com.au/products/up-and-go/up-and-go/ vanilla-ice-favor (2021).

72. Avstralski vladni nacionalni svet za zdravje in medicinske raziskave. Referenčne vrednosti hranil za Avstralijo in Novo Zelandijo. https://www.nrv.gov.au/nutrients (2021).

Mark K.Tiong1,2, Michael MX Cai1, Nigel D.Toussaint1,2, Sven‑JeanTan1,2, Andreas Pasch3,4,5 & Edward R. Smith1,2

1 Oddelek za nefrologijo, bolnišnica Royal Melbourne, Grattan Street, Parkville, VIC 3052, Avstralija.

2 Oddelek za medicino (RMH), Univerza v Melbournu, Parkville, Avstralija.

3 Calciscon AG, Biel, Švica.

4 Lindenhofspital Bern, Bern, Švica.

5 Oddelek za fiziologijo in patofiziologijo, Univerza Johannesa Keplerja, Linz, Avstrija.