Povišan topni CD163 napoveduje poslabšanje ledvične funkcije pri lupusnem nefritisu: kohortna študija na vzhodni Kitajski

Za več informacij. stiktina.xiang@wecistanche.com

Povzetek

Cilj: Ta študija je preučevala povezavo med diferenciacijskim antigenom 163 topnega čistilnega receptorja (sCD163) ter resnostjo in prognozopoškodba ledvicpri lupusnem nefritisu (LN).

Metode: Serumske ravni sCDI63 pri 12I vzhodnokitajskih bolnikih z LN, ki so bili podvrženi biopsiji ledvic, so bile določene z encimsko vezanimi imunskimi testi. Zbrani so bili klinični podatki in izračunana je bila stopnja glomerularne filtracije in rezultat aktivnosti lupusa. Izvedena je bila patološka klasifikacija in ocenjeni ledvični patološki rezultati z indeksom aktivnosti (Al) in kroničnim indeksom (Cl). Za ovrednotenje prognoze so bile narisane Kaplan-Meierjeve krivulje preživetja. Rezultati: Rezultati patološke klasifikacije, Al in CI v skupini z visokim sCD163 so bili povečani. Ravni sCD163 so bile v pozitivni korelaciji s serumskim kreatininom, dušikom sečnine v krvi, rezultati Al in rezultati CI ter v negativni korelaciji z ocenjeno hitrostjo glomerularne filtracije. Kaplan-Meierjeva analiza preživetja je pokazala, da je bila incidenca ledvičnih končnih dogodkov povečana v skupini z visokim sCDI63 v primerjavi s skupino z normalnim sCD163. Zaključek: raven sCD163 v serumu je v korelaciji z resnostjo LN in je pomemben pokazatelj slabe ledvične prognoze pri bolnikih z LN.

Ključne besede:Topni CDI63, lupusni nefritis, ledvična poškodba, makrofag, avtoimunski, serumski marker

Kliknite, če želite izvedeti več o koristih cistanche za Reddit in o učinkih na delovanje ledvic

Uvod

Sistemski eritematozni lupus (SLE) jeavtoimunskibolezni vezivnega tkiva, ki pogosto zajamejo kožo, sklepe, kri, krvne žile inledvice. Lupusni nefritis (LN) je najpomembnejša manifestacija pri 50 do 70 odstotkih bolnikov s SLE, 25 odstotkov bolnikov z LN pa sčasoma razvije končno ledvično odpoved (ESRD). Sodelujejo imunske celice in njihove izločene topne efektorske molekule. pri razvoju LN in adaptivne imunosti, ki jo posreduje Blimfocitiin limfociti T igrajo pomembno vlogo.2 Kot kritična komponenta prirojene in adaptivne imunosti imajo makrofagi več imunskih funkcij, kot so predstavitev antigena, fagocitoza in proizvodnja citokinov. Moteno regulirano izražanje površinskih markerjev makrofagov, proizvodnja citokinov, fagocitoza in čiščenje celičnih ostankov spodbujajo nenormalno aktivacijo in proliferacijo limfocitov, kar vodi v razvoj avtoantigenih invnetnaodzivi. Tako je pomembna vloga makrofagov v LN pritegnila vse večjo pozornost.3 Antigen za diferenciacijo čistilnih receptorjev 163 (CD163) je enoverižni transmembranski glikoprotein, ki spada v prvo podskupino naddružine B čistilnih receptorjev, z molekulsko maso približno 130 kDa.sCD163 je prisoten v serumu in drugih tkivnih tekočinah in je specifičen marker aktivacije makrofagov. Izražanje sCD163 in hem oksidaze je povečano pri sistemskih vnetnih odzivih, kar je lahko povezano z začetkom izločanja slapa protivnetnih faktorjev.4 Serumske koncentracije sCD163 v periferni krvi odražajo resnost bolezni pri avtoimunskih boleznih, kot je revmatoidni artritis, sistemska skleroza in polimiozitis/dermatomiozitis.5-7 Poleg tega se število in pogostnost CD163-pozitivnih celic (makrofagov M2) običajno povečata pri akutnem poststreptokoknem glomerulonefritisu, kar kaže na resnost endotelne poškodbe je lahko povezana z razliko v fenotipih infiltriranih vnetnih celic. Analize korelacije med sCD163 in aktivnostjo bolezni SLE so dale nedosledne rezultate - in obstaja malo sorodnih študij. Ta študija je analizirala klinične značilnosti, laboratorijske parametre in ledvično patologijo bolnikov z LN ter raziskala pomen med sCD163 in ledvično poškodbo za identifikacijo novih serumskih markerjev za diagnozo in vrednotenje LN, s čimer je zagotovila teoretično osnovo za nove terapevtske cilje pri LN .

Materiali in metode

Preučevana populacija

Patients with LN who underwent renal biopsy from 1 January 2014 to 1 June 2018 at tertiary hospitals (Affiliated Hospital of Nantong University, Affiliated Hospital of Jiangnan University, and Nanjing Medical University Affiliated Wuxi Second Hospital)in Eastern China were selected as the study subjects, and healthy individuals were selected as the control group. All patients with LN were scored on the Disease Activity Index using the 2000 revision of the SLE Disease Activity Index(SLEDAI). Participants were followed-up until the occurrence of a renal endpoint event or the study termination date(1 January 2019). Renal endpoints in this study were defined as the occurrence of ESRD, estimated glomerular filtration rate (eGFR)reduction >50-odstotno ali večje ali enako 2-kratnemu povečanju serumskega kreatinina (SCr). Merila za vključitev so bila naslednja: (1) bolniki so izpolnjevali diagnostična merila za SLE in LN2 in (2) dokončna diagnoza LN z biopsijo ledvic. Uporabljena so bila naslednja merila za izključitev: (1) bolniki z drugimi avtoimunskimi boleznimi, kot je skleroderma ali polimiozitis/dermatomiozitis, (2) bolniki s kroničnimi okužbami in hudimi okužbami v zadnjih 3 mesecih, (3) bolniki s hudimi boleznimi dihalnega, krvožilnega, hematološkega in endokrinega sistema ter (4) bolniki z malignimi tumorji. Študijo so odobrili ustrezni etični odbori treh bolnišnic (pridružena bolnišnica univerze Nantong, pridružena bolnišnica univerze Jiangnan in druga bolnišnica Wuxi pridružene medicinske univerze Nanjing; 2013-K030) in vsi bolniki ali njihove družine so bili v celoti informirani in podpisani obrazci za informirano soglasje pred izvedbo študije.

Biokemijske analize

Vsi preiskovanci so morali postiti vsaj 8 ur, odvzeli so jim 3 do 4 ml krvi in ​​jih poslali v bolnišnični laboratorij. SCr, dušik sečnine v krvi (BUN), komplement C3, komplement C4 in imunoglobulini (g A, Ig M, Ig G) so bili testirani z avtomatskim biokemičnim analizatorjem (Hitachi 7600, Hitachi, Tokio, Japonska). Poleg tega so 24-urne beljakovine v urinu kvantificirali z imunoturbidimetrijo. Avtoprotitelesa [anti-Smith (anti-Sm), anti-dvoverižna DNA（anti-dsDNA）, antigen A (anti-SSA), povezan s Sjogrenovim sindromom, antigen B (proti-Sjogrenov sindrom) SSB), anti-ribonukleoprotein (anti-RNP)] so bili izmerjeni z uporabo ameriškega avtomatskega imunskega analizatorja Delrin BN-II.

Formula za spremembo prehrane pri bolezni ledvic13 je bila uporabljena za izračun eGFR, kot sledi: eGFR=186×SCr-1.154×Starost-020×(0.742 pri ženskah ). Rezultati so bili izraženi kot mL·min-1（1,73m²）-1.

Odvzeti so bili vzorci krvi z antikoagulantom etilendiamintetraocetne kisline, serum pa je bil ločen s centrifugiranjem in shranjen pri -20 stopinjah. Za odkrivanje sCD163 je bil izveden encimski imunski test (ELISA) z uporabo kompleta ELISA za humani topni CD163 (My Biosource, San Diego, CA, ZDA) v skladu z navodili proizvajalca. Območje zaznavanja tega kompleta je od 1,56 do 100 ng/mL.

Histološka analiza

Vsi vključeni bolniki so bili podvrženi ultrazvočno vodeni biopsiji ledvic za patološki pregled. Patološka klasifikacija LN je bila izvedena z uporabo 2003 kriterijev Mednarodnega združenja za nefrologijo/Društva za ledvično patologijo (ISN/RPS), indeks aktivnosti (AI) in indeks kroničnosti (CI) pa sta bila ocenjeno.14 AI vključuje kapilarno endotelijsko hiperplazijo, fibrilarnemu podobno nekrozo, jedrsko fragmentacijo, celične polmesece, hialino trombozo/platinaste spremembe ušes, levkocitno infiltracijo in/ali infiltracijo intersticijske vnetne celice; CI vključuje glomerulosklerozo, fibrilarne polmesece, intersticijsko fibrozo in atrofijo ledvičnih tubulov. Vsaka lezija je bila ocenjena z 0 do 3. AI je bil od 0 do 24 točk, CI pa od 0 do 12 točk.

Statistične metode

Običajno porazdeljene mere so kot povprečje ± standardno izraženo odstopanje (SD), t-testi so bili uporabljeni za skupinske primerjave, Pearsonova analiza pa je bila uporabljena za korelacije. Nenormalno porazdeljeni podatki so izraženi kot mediana in kvartili [P50(P25, P75)], z Mann-Whitneyjevim U testom za skupinske primerjave in Spearmanovo analizo za korelacije. Podatki o štetju so bili izraženi kot frekvence in stopnje, primerjave stopenj pa so bile narejene z uporabo kockastega testa. Kaplan-Meierjeva metoda je bila uporabljena za risanje krivulj preživetja za analizo ledvičnega preživetja, test log-rank pa je bil uporabljen za primerjavo stopenj preživetja. Za obdelavo podatkov je bila uporabljena IBM SPSS Statistics for Windows, različica 19.0 (IBM Corp., Armonk, NY, ZDA) in P<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">

Rezultati

Primerjava serumskega sCDl63 med obema skupinama

V tej študiji smo definirali izmerjeno vrednost, ki je višja od povprečja plus 2SD zdravih kontrolnih oseb (69,7 ng/mL), kot visoko raven sCD163 v serumu in razdelili 121 bolnikov z LN v skupino z normalnim sCD163 (72 bolnikov) in visoko sCD163 skupina (49 bolnikov). Serumske ravni sCD163 so bile izmerjene z ELISA pri vseh bolnikih z LN in 20 zdravih kontrolnih osebah. Ravni sCD163 v skupini LN so bile višje od tistih v kontrolni skupini (67,04±18,70 oziroma 34,98±17,49ng/mL), razlika pa je bila statistično pomembna (P<0.001)(figure>

Značilnosti pacienta

Klinični podatki bolnikov z latinskim v skupini z normalnim sCD163 in skupini z visokim sCD163 so prikazani v tabeli 1. Vsi udeleženci so bili stari med 21 in 54 let. Razlike v starosti in spolu med obema skupinama niso bile statistično značilne. V primerjavi z bolniki z LN v skupini z normalnim sCD163 so imeli bolniki v skupini z visokim sCD163 znatno povišane 24-urne ravni beljakovin v urinu, SCr in BUN (vsi P<0.05) and="" decreased=""><0.001). the="" sledai="" scores="" and="" positivity="" rates="" of="" c3,="" c4,="" iga,="" igm,="" igg,="" anti-dsdna,="" anti-sm,="" anti-ssa,="" anti-ssb,="" and="" anti-rnp="" were="" not="" statistically="" different="" between="" the="" two="">

V skupini z visokim sCD163 je bila izhodiščna stopnja zdravljenja z glukokortikoidi 100 odstotkov, izhodiščna stopnja imunosupresivnega zdravljenja pa 95,91 odstotka, vključno z 69,39 odstotka, ki so prejemali ciklofosfamid, in 53,06 odstotka, ki so prejemali hidroksiklorokin. Poleg tega je 48,98 odstotka bolnikov na začetku uporabljalo en imunosupresiv, 46,94 odstotka jih je uporabljalo dva imunosupresiva in 1,63 odstotka tri ali več imunosupresivov. V skupini z normalnim sCD163 je bila izhodiščna stopnja zdravljenja z glukokortikoidi 100 odstotkov, izhodiščna stopnja imunosupresivnega zdravljenja pa 93,88 odstotka, vključno s 65,31 odstotka, ki so prejemali ciklofosfamid, in 55,10 odstotka, ki so prejemali hidroksiklorokin. Poleg tega je bilo 53,06 odstotka bolnikov zdravljenih z enim imunosupresivom, 42.86 odstotkov z imunosupresivi in ​​dva 2,65 odstotka s tremi ali več imunosupresivi. Med obema skupinama ni bilo pomembne razlike v izhodiščnih stopnjah.

Ledvične patološke stopnje

Ledvična patološka klasifikacija vseh bolnikov z LN je bila pridobljena z ledvično biopsijo in glede na patološko klasifikacijo LN, ki jo je določil ISN/RPS leta 2018, je bilo 14 bolnikov z LN razdeljenih v šest stopenj: blaga lezija stopnje (I), mezenterična hiperplazija stopnje (II), žariščno segmentne stopnje (III), difuzne hiperplazije stopnje (IV), membranske stopnje (V) in skleroze stopnje (VI). Ker je bilo število primerov LN z V plus III (trije primeri) in V plus IV (dva primera) v tej študiji majhno, sta bili obe stopnji razvrščeni kot stopnja V. Porazdelitev stopenj I, Ⅱ, III, IV in Vin skupina z visokim sCD163 in skupina z normalnim sCD163 sta prikazani na sliki 2. Bolniki z LN v skupini z visokim sCD163 so imeli višjo stopnjo patološke klasifikacije v primerjavi s tistimi v skupini z normalnim sCD163 in razlika je bila statistično pomembna (vrednost Mann-Whitney U{ {8}}, P=0.007).

Ocene ledvične patologije

Rezultati AI in CI ledvičnih lezij pri bolnikih z LN so bili analizirani s polkvantitativno metodo. AI je bil ocenjen s 0 na 24 točk, CI pa s 0 -12 točk. Rezultati AI in CI pri bolnikih z visokimi ravnmi sCD163 so bili višji v primerjavi s tistimi pri bolnikih z normalnimi ravnmi sCD163. Razlika je bila statistično pomembna (vsi P<0.05), as="" shown="" in="" figure="">

Korelacija med serumskim sCDI63 in parametri indeksa ledvične poškodbe pri bolnikih z LN

Poškodbo ledvic so ocenili s SCr, BUN, eGFR in patološkimi indikatorji, vključno s patološko stopnjo in rezultatom ledvične patologije. Korelacijska analiza je pokazala, da so ravni sCD163 pri bolnikih z LN pozitivno korelirale s SCr(r=0).521, P<0.01),bun (r=""><0.01),ai (r=""><0.01) and="" ci(r="0.611,"><0.01) and="" negatively="" correlated="" with="" egfr="" (r=""><0.01), as="" shown="" in="" figure="">

sCD163 kot napovedni marker ledvičnih končnih dogodkov

Renal endpoints in this study were defined as the occurrence of ESRD, eGFR reduction >50% or >2--kratno povečanje SCr. Po povprečnem spremljanju 25 (10,34) mesecev je pri osmih bolnikih prišlo do 2--kratnega povečanja SCr, pri treh bolnikih pa se je razvila ESRD. Krivulji ledvičnega preživetja bolnikov v skupini z visokim sCD163 in skupini z normalnim sCD163 sta prikazani na sliki 5. Stopnja ledvičnega preživetja bolnikov v skupini z visokim sCD163 je bila nižja kot v skupini z normalnim sCD163 (85,71 odstotka proti 94,44 odstotka, P=0.017) (slika 5).

Diskusija

Transmembranski glikoprotein CD163, čistilni receptor, izražen v monocitih in makrofagih, je serumski marker makrofagov M2. In vivo CD163 obstaja v dveh oblikah: transmembranska makromolekula na mononuklearnih/makrofagnih membranah [membranski himerni CD163 (mCD163)] in sCD163 v kri ali druge tkivne tekočine.sCD163 je produkt izločanja mCD163. Na izražanje CD163 vpliva več dejavnikov. Na primer, interlevkin6 (IL6), IL10 in glukokortikoidi stimulirajo izražanje CD163, medtem ko faktor tumorske nekroze-a, interferon-y (IFN-y) in trombocitni faktor 4 zavirajo izražanje CD163. Med akutnimi in kroničnimi vnetnimi odzivi se CD163 izloči s površine aktiviranih makrofagov in sprosti v periferno kri v topni obliki. Tako je serumski sCD163 marker aktivacije makrofagov.

V tej študiji je bil serumski sCD163 izmerjen v vzorcih periferne krvi z ELISA in ugotovljeno je bilo, da je znatno višji pri bolnikih z LN kot pri zdravih kontrolnih osebah, kar je skladno s študijama Nakayame et al.9 in Zizzo et al.10 Nedavne študije16 . Poročal sem ne le o znatno povišanih serumskih nivojih sCD163 pri bolnikih s SLE, ampak tudi o znatno povečanem kožnem in ledvičnem CD163 ter infiltraciji makrofagov, raziskovalci pa so predlagali, da bi CD163 lahko bil vpleten v patogenezo SLE. Ugotovili smo, da je bil serumski sCD163 znatno povišan pri bolnikih z LN, kar kaže, da je aktivacija makrofagov vključena v razvoj LN in da lahko sCD163 deluje kot vnetni mediator v imunopatogenem procesu LN. Makrofagi lahko sodelujejo pri patogenezi LN prek naslednjih mehanizmov. Prvič, makrofagi izražajo specifične markerje na svoji površini, prepoznajo okoliško okolje in se odzivajo na endogene in eksogene dražljaje, da vplivajo na imunski odziv in sodelujejo pri patogenezi LN. Drugič, neregulirano izločanje citokinov nenormalno aktivira in poveča adaptivni imunski odziv. Makrofagi spodbujajo aktivacijo celic T in B in so glavni vir teh citokinov, kot sta IL-6 in IL-10, ki stimulirajo proizvodnjo IgG in IFN-1, s čimer inducirajo celice B diferenciacijo v plazmatke, ki izločajo protitelesa. Poleg tega aktivacijski faktor B-celic v glavnem izhaja iz makrofagov in spodbuja preživetje in proliferacijo celic B. Tretjič, funkcionalne okvare fagocitoze makrofagov in očistka patogenov ter apoptotične in nekrotične celice lahko zagotovijo avtoantigene za razvoj LN. Izrazito oslabljen očistek makrofagov pri bolnikih z LN je lahko povezan z zmanjšano ekspresijo CD44 na površini makrofagov, zmanjšano diferenciacijo CD34 in hematopoetskih matičnih celic v zrele makrofage ter zmanjšano raven komplementa. Tako ima disfunkcija makrofagov vse pomembnejšo vlogo v patogenezi LN, specifični mehanizmi pa zahtevajo nadaljnje preiskave. Naša študija je pokazala, da so imeli bolniki z LN v skupini z visokim sCD163 povišani SCr in BUN ter znižan eGFR v primerjavi s tistimi v skupini z normalnim sCD163. Poleg tega smo ugotovili, da je pri osmih bolnikih prišlo do 2-kratnega povečanja SCr, pri treh bolnikih pa se je razvila ESRD. Ti rezultati razkrivajo, da ravni sCD163 v serumu odražajo resnost poškodbe ledvic pri LN, kar kaže, da je serumski sCD163 morda potreben za oceno resnosti poškodbe ledvic pri LN. Beljakovine v urinu ne odražajo le prisotnosti glomerulnih lezij pri bolnikih z LN, ampak imajo tudi neposreden toksični učinek na ledvične mezangialne celice in tubule, kar vodi do kopičenja zunajceličnega matriksa in poslabšanja ledvične poškodbe. Ugotovili smo, da je bila 24--urna raven beljakovin v urinu v skupini z visokim sCD163 znatno povečana v primerjavi s tisto v skupini z normalnim sCD163. Rezultat SLEDAI se običajno uporablja v klinikah za ocenjevanje aktivnosti bolezni SLE in s postopnim povečevanjem rezultata SLEDAI stopnja aktivnosti lupusa postaja vse bolj intenzivna.14 Nismo našli statistično značilne razlike v rezultatih SLEDAI med visoko skupino sCD163 in skupino s običajna skupina sCD163. To je morda zato, ker je v merilih točkovanja SLEDAI vključenih več dejavnikov, ledvični dejavniki pa predstavljajo majhen delež. Rezultati naše študije so bili podobni tistim Nakayame et al.9 Nasprotno pa so Zizzo et al.10 ugotovili, da je serumski sCD163 pozitivno povezan z rezultati SLEDAI pri 40 bolnikih s SLE. Aktivirani makrofagi, ki izražajo CD163(M2), so najpogostejši podtip makrofagov v biopsijah ledvic pri bolnikih z LN. Študije2 so pokazale, da so ravni sCD163 v urinu povišane pri bolnikih z aktivnim LN in so povezane z ledvičnimi rezultati SLEDAI. Zmanjšanje ravni sCD163 v urinu po zdravljenju lahko pomaga spremljati odziv na terapijo pri LN. Kot specifično protitelo za SLE so povečani titri protiteles proti dsDNA povezani z aktivnostjo LN, protitelesa proti dsDNA pa se lahko uporabljajo kot neodvisen dejavnik tveganja za LN. Protitelesa proti RNP so znak mešane bolezni vezivnega tkiva in so tesno povezana z različnimi kliničnimi simptomi avtoimunskih bolezni, kot so SLE, Sjogrenov sindrom in sistemska skleroza.14 Ugotovili smo, da je imela skupina z visokim sCD163 povečano stopnjo pozitivnosti protiteles proti dsDNA in zmanjšano stopnjo pozitivnosti protiteles proti RNP v primerjavi z normalno skupino sCD163, razlika med obema ni bila statistično pomembna. Te ugotovitve kažejo, da ima visoka raven sCD163 minimalen učinek na pozitivno stopnjo avtoprotiteles in da imata lahko neodvisni vlogi pri spodbujanju napredovanja LN.

Patološka klasifikacija LN in rezultati ledvične patologije so pomembni za diagnozo, zdravljenje in prognozo. AI v rezultatu ledvične patologije je tesno povezan s kliničnimi manifestacijami in običajno odraža stopnjo akutne vnetne poškodbe ledvičnih tkiv. CI je sorazmeren prognozi in predstavlja stopnjo kronične okvare ledvic. Kohortna študija 1814 kitajskih bolnikov z LN je opredelila patološko tipizacijo pri ledvični biopsiji kot neodvisen dejavnik tveganja za ESRD. 26 V tej študiji smo analizirali ledvične patološke podatke 121 bolnikov z LN in ugotovili, da patološka klasifikacija, rezultati AI in CI rezultati bolnikov v skupini z visokim sCD163 so bili bistveno drugačni od tistih v skupini z normalnim sCD163, nadaljnja analiza pa je pokazala, da obstaja korelacija med serumskim sCD163 ter rezultati AI in CI. Ta rezultat nadalje kaže, da so povišane serumske ravni sCD163 lahko povezane z resnostjo ledvične poškodbe in slabo prognozo pri bolnikih z LN.

Skratka, sCD163 lahko sodeluje v imunopatološkem procesu LN kot vnetni mediator. Serumske ravni sCD163 so v korelaciji z resnostjo LN in so pomemben pokazatelj slabe ledvične prognoze pri bolnikih z LN, kar kaže, da je aktivacija makrofagov vključena v razvoj LN. Serumski sCD163 kaže potencial kot učinkovit biološki marker za diagnozo LN, diferencialno diagnozo in oceno prognoze ter zagotavlja nov terapevtski cilj za zmanjšanje obolevnosti in izboljšanje prognoze.