Vrednotenje antioksidantov, belilnih lastnosti in lastnosti proti staranju hidrolizatov riževih beljakovin

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Hui-Ju Chen 1,2, Fan-Jhen Dai 2, Cheng-You Chen 3, Siao-Ling Fan 2, Ji-Hong Zheng 4, Yu-Chun Huang 2, Chi-Fai Chau 1, Yung-Sheng Lin 3, 4,5,* in Chin-Shuh Chen 1,*

Povzetek:Hidrolizati beljakovin rastlinskega izvora se lahko uporabljajo v prehrani. Riževi proteinski hidrolizati (RPH), odličen vir beljakovin, so pritegnili pozornost za razvoj kozmecevtike. Vendar pa je nekaj študij poročalo o potencialni uporabi RPH v analizi in ta študija jih je preučilaantioksidantaktivnosti in zaviralne aktivnosti encimov za odstranjevanje kože. Rezultati so pokazali, da so bile skupne koncentracije fenolov in flavonoidov 2.06 ± 0.13 mg ekvivalenta galne kisline/g RPH in 25,96 ± 0.52 µg ekvivalenta kvercetina/g RPH, oz. RPH so pokazali od odmerka odvisno aktivnost za lovljenje prostih radikalov iz 1,1-difenil-2-pikrilhidrazila [polovična največja inhibitorna koncentracija (IC50)=42.58 ± 2,1 mg/g RPH] in 2 ,20-azino-bis (3-etilbenzotiazolin-6-sulfonska kislina) (IC50=2.11 ± 0,88 mg/g RPH), od odmerka odvisna zmogljivost zmanjšanja (6,95 ± 1,40 mg ekvivalenta vitamina C/g RPH) in absorpcijsko kapaciteto kisikovih radikalov (473 µmol Trolox ekvivalenta/g RPH). Koncentracije raztopine RPH, potrebne za doseganje 50-odstotne inhibicije hialuronidaze intirozinazaaktivnosti so bile določene na 8,91 oziroma 107,6 mg/ml. Ta študija je pokazala, da imajo RPHantioksidantaktivnosti antihialuronidaze in antitirozinaze za prihodnje kozmetične aplikacije.

Ključne besede:hidrolizat riževih beljakovin;antioksidant; hialuronidaza;tirozinaza; kozmetični

cistanchebeljenjeučinekna kožo doantioksidacija

1. Uvod

Izpostavljenost ultravijoličnemu sevanju je odgovorna za fotostaranje (ali zunanje staranje); Nasprotno pa so reaktivne kisikove vrste, ki nastanejo v celičnem metabolizmu in poslabšanju bioloških funkcij, odgovorne za intrinzično staranje [1,2]. Predelana živila pogosto vsebujejo naravnoantioksidantikot so katehini, askorbinska kislina, tokoferoli, rožmarinska kislina in fenolni izvlečki iz različnih rastlin. Raziskave naravnih antioksidantov zdaj obravnavajo netradicionalne izvore. Naravnega izvoraantioksidantiso bolj zaželeni kot kemično proizvedeniantioksidantiker so poročali, da so nekateri sintetični antioksidanti rakotvorni [3]. Riž (Oryza sativa) je glavna prehrana ljudi po vsem svetu, zlasti tistih, ki živijo v Aziji. Letna proizvodnja riža na svetu znaša približno 741 milijonov ton [4]. V azijskih državah je riž domnevno vir 75 odstotkov energijskega vnosa več kot 2 milijard ljudi [5]. Ekstenzivna proizvodnja riža povzroči ustrezno količino proizvodnje stranskih proizvodov. Ostanki iz procesa proizvodnje riža vsebujejo večino beljakovin v zrnju (~60–85 odstotkov), vendar se zavržejo ali uporabijo za krmljenje živali [6–8]. Peptidi, pridobljeni iz različnih beljakovinskih hidrolizatov, naj bi delovali kot potencialniantioksidanti[9]. Naravne in nestrupene antioksidante je torej mogoče pridobiti iz hidrolizatov živilskih beljakovin. Številni znanstveniki so uporabili modele, bogate z lipidi, in poročali o beljakovinskih hidrolizatih ter mlečnih, zeinskih in sojinih beljakovinskih peptidih, ki imajo ključne antioksidativne lastnosti, vključno z lovljenjem prostih radikalov, zaviranjem peroksidacije lipidov v hrani in in vitro ter kelacijo prehodnih kovin [10– 12].

Hialuronska kislina (HA) pomaga pomladiti kožo, ker poveča viskoznost, zadržuje vlago in naredi zunajcelične tekočine manj prepustne. Zaradi svoje odlične sposobnosti zadrževanja vode HA poveča mladost, navlaženost in gladkost kože ter zmanjša stopnjo gub [13,14]. Na žalost se raven HA v koži s starostjo naravno zmanjšuje. Hialuronidaza je encim, ki uničuje HA, kar povzroča izgubo moči, prožnosti in vlažnosti kože, kar posledično vodi v staranje kože. Zato je mogoče gube zdraviti z zaviranjem hialuronidaze in vzdrževanjem vsebnosti HA v koži [15,16]. Encim, ki proizvaja melanintirozinazaključno prispeva k stopnji omejevanja hitrosti procesa, skozi katerega nastaja melanin. Zato se motnje pigmentacije običajno zdravijo, posvetlitev kože pa se doseže z zaviranjem ali znižanjemtirozinazaaktivnost [17,18].

V več študijah je bilo ugotovljeno, da imajo hidrolizati žitnih beljakovin in peptidi, ki jih je mogoče pridobiti iz njih, antioksidativne, antihipertenzivne in protitumorske učinke [19, 20]. Postopoma se priznavajo pozitivni prispevki peptidov in beljakovin, ki izvirajo iz hrane, k zdravju ljudi [21]. Potrošniki vedno bolj zahtevajo uporabo naravnih bioaktivnih spojin v kozmetični in zdravstveni industriji. Riževi proteinski hidrolizati (RPH) so pritegnili pozornost kot odličen vir beljakovin. Vendar je nekaj študij poročalo o karakterizaciji in funkcionalni analizi RPH. Zato je ta študija ocenila antioksidativno aktivnost in hialuronidazo tertirozinaza-inhibitorne aktivnosti RPH.

2. Rezultati in razprava

2.1. Skupna koncentracija fenolov (TPC) in skupna vsebnost flavonoidov (TFC)

Standard v testu TPC je bila galna kislina v več koncentracijah. Višja absorpcija je pokazala višji TPC. TPC vzorcev RPH je bil pridobljen z vnosom vrednosti optične absorbance vzorcev RPH v umeritveno krivuljo galne kisline. Z risanjem koncentracije RPH proti koncentraciji fenolov (slika 1a) smo dobili povprečno TPC 2.06 ± 0,13 mg GAE/g RPH. Po podobnem postopku smo dobili TFC 25,96 ± 0,52 µg QE/gRPH (slika 1b). Slika 1c nadalje navaja TPC in TFC vzorcev RPH. Razkriva, da je razmerje med TPC in TFC mogoče izraziti kot y=0.0121x plus 0,0659, kjer sta x in y TPC oziroma TFC.

TPC RPH je vključeval koncentracije fenolnih aminokislin in fenolnih spojin peptidov. Interakcija protein-fenolna spojina na splošno vključuje kovalentno in nekovalentno vez. Med encimsko hidrolizo se sproščajo fenolne spojine. Specifični encimi so morda najbolj sposobni uničiti proteinsko-polifenolne komplekse; posledica tega je sproščanje večjega števila fenolnih spojin in peptidov s fenolnimi skupinami, kot je tirozin [22]. Poročali so o močni korelaciji med skupno vsebnostjo polifenolov v žitih in njihovo biološko aktivnostjo. Za polifenole je dobro znano, da imajo močno antioksidativno delovanje [23]. Čeprav jih najdemo v manjši količini, lahko terpeni [24] ali seskviterpeni [25] v rižu prav tako prispevajo k antioksidativnim aktivnostim.

2.2. Delovanje antioksidantov

2.2.1. Aktivnost odstranjevanja prostih radikalov DPPH

Slika 2 prikazuje aktivnost lovljenja prostih radikalov DPPH v raztopini RPH. Ugotovljeno je bilo, da višja koncentracija raztopine povzroči večjo aktivnost. Polmaksimalna inhibitorna koncentracija (IC50), ki je koncentracija ekstrakta, pri kateri je mogoče odstraniti polovico vseh prostih radikalov DPPH, je bila 42,58 ± 2,1 mg/mL riževih peptidov.

2.2.2. Dejavnost odstranjevanja prostih radikalov ABTS

Dejavnost RPH ABTS pri lovljenju prostih radikalov, prikazana na sliki 3, je bila večja, ko je bila uporabljena večja koncentracija ekstrakta. IC50 je bil 2,11 ± 0,88 mg/mL riževih peptidov. Ta rezultat je pokazal, da imajo RPH močno aktivnost ABTS pri lovljenju prostih radikalov. Aminokisline, ki vsebujejo žveplo, vključno z Met in Cys, ter hidrofobne aminokisline, vključno z Ala, Val, Ile, Leu, Met, Cys, Tyr, Phe, Try in Pro, so lahko pomembni dejavniki v zvezi s prostimi radikali ABTS čistilna dejavnost.

V tej študiji je bila vrednost IC50 ABTS aktivnosti lovljenja prostih radikalov nižja od aktivnosti lovljenja prostih radikalov DPPH, kar se ujema z rezultati lupine in jedrca semen Jatropha curcas L. [28] ter semena in lupine žižole [29]. Ta ugotovitev se ujema tudi s poročilom o hidrolizatih beljakovin riževih otrobov s 43,98–66,25 µmol Trolox ekvivalenta/g vzorca in 403,28–430,12 µmol Trolox ekvivalenta/g vzorca za DPPH aktivnost odstranjevanja prostih radikalov oziroma aktivnost odstranjevanja prostih radikalov ABTS [27].

Eden od možnih razlogov je razlika v topnosti med prostim radikalom DPPH (topen v olju) in prostim radikalom ABTS (topen v olju/vodi) [30,31]. Na antioksidativni potencial hidrolizatov beljakovin riževih otrobov so vplivali njegov profil molekulske mase, aminokislinska sestava in hidrofobnost [32].

2.2.3. Zmogljivost zmanjšanja

Ugotovitve testa redukcijske zmogljivosti za RPH so predstavljene na sliki 4. Zmogljivost redukcije se je povečala s koncentracijo RPH. Zmogljivost redukcije je bila 6,95 ± 1,40 mg VCE/g RPH, kar kaže, da so RPH učinkovit antioksidant.

2.2.4. Zmogljivost absorpcije kisikovih radikalov (ORAC)

Test ORAC ima prednosti pred drugimi pristopi k določanju antioksidativne aktivnosti, vključno z uporabljenimi reaktanti, ki so peroksi radikali s podobnim mehanizmom reakcije in redoks potencialom kot fiziološki oksidanti; skupni naboj in protonsko stanje, s katerimaantioksidantireagirajo podobne tistim v človeškem telesu [33]. Metoda ORAC ima tudi biološki pomen za učinkovitost antioksidantov v človeškem telesu. Slika 5 prikazuje rezultate analize ORAC za RPH in standard Trolox v različnih koncentracijah. ORAC je bil izpeljan iz regresijske enačbe umeritvene krivulje, ki povezuje neto AUC s koncentracijo Troloxa. Rezultati so pokazali, da je RPH imel ORAC 473 µmol TE/g RPH.

Antioksidativne peptide ali aminokisline je mogoče pridobiti z encimsko hidrolizo beljakovin, kar ima za posledico visoko aktivnost proti oksidantom [34]. Za njihovo antioksidativno delovanje so odgovorni kelacija kovinskih ionov, zaviranje lipidne peroksidacije in lovljenje prostih radikalov biološko aktivnih peptidov. Proste radikale je mogoče ugasniti, izražanje proteinov in encimov, ki zmanjšujejo oksidativni stres, pa lahko uravnavajo antioksidativni peptidi. Antioksidativna učinkovitost beljakovinskih hidrolizatov in peptidov naj bi bila odvisna od zaporedja aminokislin in velikosti peptida, na kar vplivajo pogoji hidrolize, vir beljakovin in vrsta proteaze [35]. Po mnenju Adebiyi et al. [36], lahko največjo prebavljivo beljakovino riževih otrobov subtilizin razgradi na manjše koščke, kar povzroči večji izkoristek in vsebnost beljakovin. Na TPC in antioksidativno aktivnost hidrolizata lahko vpliva specifičnost encimov. Zato lahko na antioksidativno aktivnost peptida vplivajo značilnosti vira beljakovin, specifičnost encima in stopnja hidrolize [37].

Obstaja veliko poročil o uporabi proteaz (kot je alkalaza, komercialno ime asubtilizina A iz vrste Bacillus) za hidrolizo beljakovin rastlinskega izvora za pridobivanje antioksidantnih peptidov. V zvezi s tem so sojine beljakovine ena izmed beljakovin, o katerih se največ poroča [38]. Poleg tega najdemo tudi alkalazno hidrolizo beljakovin riževih otrobov. V optimalnih pogojih je alkalazna hidroliza lepljivih riževih otrobov proizvedla beljakovinske hidrolizate z vrednostjo IC50 0.87 ± 0,02 mg/mL pri lovljenju prostih radikalov DPPH [39]. V naši študiji je bila vrednost IC50 RPH 42,58 ± 2,1 mg/mL. Čeprav vrednost IC50 pri lovljenju prostih radikalov DPPH v tej študiji ni bila tako učinkovita kot pri beljakovini riževih otrobov, je bilo lovljenje prostih radikalov ABTS (IC50=2.11 mg/mL) učinkovitejše od hidrolizatov sojinih beljakovin, pridobljenih z alkalazno hidrolizo ( IC50=2.93 mg/mL) [40].

2.3. Inhibitorna aktivnost hialuronidaze

Proteolitični encim, hialuronidaza, se nahaja v dermisu in katalizira razgradnjo HA v zunajceličnem matriksu [41]. Ta študija je za primerjavo uporabila taninsko kislino kot pozitivno kontrolo. Slika 6 razkriva, da je imela taninska kislina večjo inhibicijo aktivnosti hialuronidaze; IC50 je bil 0.14 mg/mL, podobno vrednosti, ki so jo pridobili Nishida et al. (0,121 mg/mL; 71,1 mM) [42]. Nasprotno pa je bil za raztopino RPH izračunan IC50 8,91 mg/mL. Ta rezultat raztopine RPH je ustrezal naši prejšnji vrednosti IC50, 7,61 mg/mL [43]. Beljakovine, polisaharidi ter rastlinske in sintetične spojine so med vrstami spojin, v katerih so prisotni zaviralci hialuronidaze. Ti zaviralci pomagajo vzdrževati ravnotežje med sintezo in razgradnjo HA [44]. Nizka koncentracija HA v koži povzroča suhost in gube. Zato je zaviranje aktivnosti hialuronidaze pot, s katero je mogoče izboljšati morfologijo kože in upočasniti njeno staranje.

2.4. Inhibitorna aktivnost tirozinaze

Proteinski hidrolizati iz naravnih virov lahko zavirajoaktivnost tirozinaze. In vitro test inhibicije tirozinaze se običajno uporablja za oceno, kako sredstva za beljenje kože neposredno vplivajo na aktivnost tirozinaze [45]. S sodelovanjem v koraku, ki omejuje hitrost sinteze melanina, tirozinaza katalizira hidroksilacijo L-tirozina v L-DOPA in nato oksidacijo slednjega v o-dopakinon. Kadar je zaželeno preprečiti biosintezo melanina, je lahko ključna inhibicija aktivnosti L-tirozinaze. tukaj,tirozinazaje bil uporabljen za merjenje aktivnosti antitirozinaze RPH. Kot je prikazano na sliki 7, je koncentracija107,6 mg/ml dosegla 50-odstotno inhibicijo aktivnosti tirozinaze. Askorbinska kislina je pokazala visoko inhibitorno aktivnost tirozinaze (IC50=0.098 mg/mL), ki je bila podobna 0,102 mg/mL, ki jo je določil Seo et al. poročali [46].

Hidrolizati beljakovin riževih otrobov so bili zelo visokitirozinaza-inhibitorna aktivnost [47,48]. Inhibicijska aktivnost raztopine RPH za tirozinazo je lahko posledica aminokislinskih profilov peptidov. Schurink et al. opisali, da učinkovitatirozinaza-inhibitorni peptidi so sestavljeni iz ostankov arginina in fenilalanina [49]. Inhibitorno aktivnost tirozinaze lahko izboljšajo hidrofobni aminokislinski ostanki (npr. alanin), proizvodnjo melanina pa lahko zmoti alanin [50]. Poleg tega so Zhang et al. tudi poročali, da bi lahko hidrolizat riževih beljakovin zmanjšal vsebnost melanina in aktivnost tirozinaze v modelu celic, induciranih z UVB [51].

cistanche bodybuilding

2.5. Profili aminokislin in MW RPH

Vsebnost beljakovin v rižu po odstranitvi škroba v tej študiji je bila 23,56 masnega odstotka, stopnja hidrolize vzorca, hidroliziranega s proteazo, pa 9,36 odstotka. Tabela 1 podrobno prikazuje sestavo aminokislin v RPH. V vzorcu je vsakih 100 g vsebovalo 5,18 g aminokislin. Kar zadeva aminokislinske komponente, so bili RPH bogati z alaninom, levcinom, argininom, glutaminsko kislino in asparaginsko kislino. Vsakih 100 g vzorca je vsebovalo skupaj 1,73 g hidrofobnih aminokislin (alanin, valin, levcin, izolevcin, prolin, fenilalanin in cistein). Ta rezultat je bil popolnoma drugačen od našega prejšnjega poročila [43] v raztopini amilaze in njeni temperaturi obdelave za odstranitev škroba. Vsebnost hidrofobnih aminokislin je bila 1,90-krat višja od našega prejšnjega poročila. Nižja temperatura obdelave (60 ◦C) v tej študiji lahko prepreči denaturacijo beljakovin v velikih količinah, tako da se lahko aktivnost aminokislin bolje ohrani. Poleg tega je podoben zaključek pridobljen tudi iz druge glivične amilaze in glukoamilaze za saharificiranje škroba v belih riževih otrobih [52].

Raziskave so pokazale, da so hidrofobne aminokisline podobneantioksidantis povečanjem topnosti na osnovi lipidov v hidrolizatih beljakovin in peptidih iz različnih virov beljakovin, s čimer se spodbuja interakcija s prostimi radikali [38,53]. O nekaterih aminokislinah so poročali Chen et al. [54] na splošno bitiantioksidanti; omenjene kisline so vključevale triptofan, cistein, metionin, tirozin in histidin. V tej študiji so aromatske aminokisline (fenilalanin, tirozin in triptofan) vsebovale 0,53 g/100 g RPH. Zato so te aminokisline, ki izvirajo iz peptidov, verjetno odgovorne za antioksidativno aktivnost RPH.

Poleg tega imajo proteini, ki so hidrolizirani v krajše peptide, drugačno porazdelitev MW in nekatere hidrofobne skupine, zvite v notranjosti popolnih naravnih proteinskih molekul, so običajno izpostavljene vodni fazi. To je povezano s strukturno prerazporeditvijo beljakovinskih molekul in s tem s funkcionalnimi lastnostmi beljakovin [55, 56]. Podatki tricin-SDS-PAGE so pokazali, da je bila MW RPH v območju 5–35 kDa (slika 8a).

Slika 8b prikazuje relativno vsebnost različnih MW v RPH. Na splošno je bilo 45,24 odstotka vseh beljakovin v glavnem pasu (MW ≈ 2,4 kDa). Podobni rezultati so bili pridobljeni glede peptida hidrolizatov beljakovin riževih otrobov. Največjo antioksidativno aktivnost so dosegli Thamnarathip et al. [37] je bil tisti za peptide z MW=6–50 kDa. Poleg tega obstajajo razmerja med delovanjem proteinskih hidrolizatov in porazdelitvijo MW ter sestavo aminokislin [57]. To pojasnjuje antioksidativno aktivnost RPH, opaženih v tej študiji.

2.6. Test celične toksičnosti

Za prihodnje aplikacije je potrebna nizka toksičnost za celice. Za ovrednotenje citotoksičnosti in biokompatibilnosti RPH je bila z metodo MTT izmerjena viabilnost celic neobdelanih celic 264.7 v raztopini RPH. Kot je prikazano na sliki 9, je bila viabilnost celic nad 100 odstotkov pri zdravljenju s 25–2000 µg/mL RPH 24 ur in 48 ur. Rezultati kažejo na izjemno nizko citotoksičnost RPH. Zato se lahko RPH potencialno uporabljajo kot kozmetične aplikacije z zelo nizko citotoksičnostjo.

3. Materiali in metode

3.1. Reagenti

Železov(III) klorid, 2,20-azino-bis(3-etilbenzotiazolin-6-sulfonska kislina) (ABTS), troloks(6-hidroksi-2,5 ,7,8-tetrametilkroman-2-karboksilna kislina), l-3,4-dihidroksifenilalanin (L-DOPA), 1,1-difenil-2- pikrilhidrazil (DPPH) in trikloroocetno kislino smo pridobili pri Alfa Aesar (Tewksbury, MA, ZDA). 2,20-azobis(2-metilpropionamidin) dihidroklorid (AAPH), Folin–Ciocalteujev fenolni reagent, galna kislina, askorbinska kislina, gobetirozinazain natrijev fluorescein sta bila pridobljena pri Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, ZDA). Natrijev karbonat je bil pridobljen pri Riedel-de Haën (Seelze, Nemčija). Končno so bili kalijev fericianid, natrijev hidrogenfosfat in natrijev dihidrogenfosfat pridobljeni iz Showa Chemical (Tokio, Japonska).

3.2. Priprava RPH

RPH so bili pripravljeni, kot je opisano prej, le da je bila uporabljena glivična amilaza za saharificiranje škroba v riževi moki, pri čemer so se izognili poškodbam aminokislin, ki jih povzroča hidroliza bakterijske amilaze pri visokih temperaturah [43, 58]. Sto gramov riževe moke smo namočili v 1000 ml destilirane vode, ki je vsebovala 0,5 odstotka glivične amilaze (Genencor, NY, ZDA); zmes smo nato segrevali 24 ur na 60 ◦C ( pH 4,2), nato smo pustili, da se ohladi na sobno temperaturo. Centrifugiranje je bilo izvedeno 10 minut pri 1968 × g, da se odstrani preostali supernatant. Potem ko smo netopnemu delu dodali 20-kratno vodo in 2 ml 0,1-odstotne hidrolitične proteaze (Healthmate, Changhua, Tajvan), smo raztopino pretresli in inkubirali 4 ure pri 55 ◦C. Za vzdrževanje pH raztopine na optimalni ravni je bila uporabljena metoda pH-stat, nato pa je bilo izvedeno segrevanje na 85 ◦C za 10 minutno inaktivacijo encima. Preostalo netopno frakcijo smo odstranili s centrifugiranjem 15 minut pri 3075 × g. Liofilizacijo smo izvedli na supernatantu, ki smo ga nato pred uporabo shranili pri -20 ◦C.

3.3. Antioksidativne aktivnosti RPH

3.3.1. Skupna koncentracija fenolov (TPC)

Uporabljena je bila metoda Folin–Ciocalteu za odkrivanje TPC RPH [59]. Najprej smo 200 µL Folin–Ciocalteujevega fenolnega reagenta (0,3 M) enakomerno premešali skozi 5-minutno stresanje z 200 µL raztopine RPH in tej mešanici dodamo 400 µL deionizirane (DI) vode in 200 µL 10-odstotne (m/v) raztopine natrijevega karbonata. Mešano raztopino smo inkubirali 60 minut v temi pri sobni temperaturi. Nato smo centrifugirali 15 minut pri 3000 obratih na minuto. Za meritev je bilo uporabljenih 100 µL supernatanta. Za določitev TPC (enota: mg) ekvivalenta galne kisline (GAE) na gram suhega vzorca RPH (enota: mg GAE/g RPH) so bili podatki o optični absorbanci vneseni v standardno krivuljo, ki predstavlja galno kislino. Absorbanco smo pridobili pri 700 nm z uporabo spektrofotometra EpochMicroplate (BioTek, VT, ZDA).

3.3.2. Skupna vsebnost flavonoidov (TFC)

TFC je bil pridobljen po pristopu Wathonija et al. z manjšimi modifikacijami [60]. Najprej smo zmešali 500 µL vsakega vzorca in 2-odstotno (m/v) raztopino aluminijevega klorida. Reakcijsko raztopino smo temeljito premešali in pustili 10 minut ter ovrednotili absorbanco pri 415 nm. Rezultat je izražen v mikrogramih ekvivalenta kvercetina (QE) na gram suhega vzorca RPH (µg QE/g RPH).

cistanche bodybuilding

3.3.3. DPPH aktivnost odstranjevanja prostih radikalov

Najprej smo zmešali 198 µM raztopino etanola DPPH (50 µL) in raztopino RPH ali DI vodo (0,5 µL; vzorec oziroma kontrolo) in nato pustili stati 30 minut v temi pri sobni temperaturi. Nato je bila pridobljena absorbanca raztopine pri 517 nm. Relativno čistilno aktivnost smo izračunali z določitvijo razlike absorbance med vzorcem in kontrolo. Visoka aktivnost lovljenja prostih radikalov DPPH se odraža v nizki optični absorbanci. Pri oceni DPPH aktivnosti lovljenja prostih radikalov raztopine RPH je bil uporabljen standard vitamin C [61–63].

3.3.4. Dejavnost odstranjevanja prostih radikalov ABTS

Pristop, o katerem so poročali Wu et al. je bil uporabljen za oceno antioksidativne aktivnosti raztopine RPH [64]. Najprej smo 7 mM osnovne raztopine ABTS (250 µL) reagirali z 2,45 mM kalijevega persulfata (250 µL), da smo dobili kation prostih radikalov ABTS (ABTS• plus), pri čemer smo mešanico hranili 16 ur pri 4 ◦C v temi, preden je bil uporabljen. Po uravnoteženju v temi pri sobni temperaturi smo uporabili 0.1 M fiziološko raztopino s fosfatnim pufrom (PBS; pH 7,4) za razredčenje raztopine na 0,70 ± 0,02 absorbance pri 734 nm. Nato smo 180 µL razredčene raztopine ABTS dodali 20 µL Troloxa (pozitivna kontrola) ali raztopine RPH (vzorec). Zmes smo nato izpostavili 10-minutni inkubaciji pri sobni temperaturi. Ta študija je določila optično absorbanco pri 734 nm; nižja absorbanca je ustrezala večji ABTS aktivnosti lovljenja prostih radikalov. Standard, uporabljen za ocenjevanje aktivnosti RPHsolution ABTS za lovljenje prostih radikalov, je bil antioksidant Trolox.

3.3.5. Zmogljivost zmanjšanja

Za določitev skupne antioksidativne aktivnosti raztopine RPH je bil uporabljen preizkus antioksidativne moči, ki reducira železo. Kot so poročali Lin et al. [29] je bila raztopina RPH (200 µL) enakomerno zmešana z 1 odstotkom (w/v) K3Fe(CN)6 in 0,2 M PBS pufra (pH 6,6; 100 µL vsakega) Za segrevanje zmesi smo 20 minut uporabljali vodno kopel pri 50 °C; po odstranitvi zmesi iz kopeli smo jo hitro ohladili 3 minute. Nato smo izvedli dodatek 10 odstotkov (m/v) trikloroocetne kisline (100 µL) in 10-min centrifugiranje pri 3000 obratih na minuto. Temu je sledila ekstrakcija supernatanta (400 µL) in njegovo enakomerno mešanje z 0. 1 odstotek (m/v) FeCl3 (100 µL) in DI vode (400 µL). Fe4[Fe(CN)6]3 je bil pridobljen z 10-minutno reakcijo te mešanice v temi. Kasneje je večja optična absorbanca (merjena pri 700 nm) pokazala večjo redukcijsko zmogljivost. Standardni vitamin C je bil uporabljen za določitev vsebnosti ekvivalenta vitamina C (VCE) na gram RPH.

3.3.6. Zmogljivost absorpcije kisikovih radikalov (ORAC)

Ta študija je pridobila ORAC s spremembo predhodno opisane metode [65]. Po raztapljanju vzorca RPH v destilirani vodi smo raztopino RPH (50 µL) zmešali s fluoresceinom (10 µM) v 96- mikrotitrski plošči z vdolbinicami. Raztopino smo 15-min inkubirali pri 37 ◦C, čemur je sledil dodatek 50 µL AAPH (500 mM). Vsakih 5 minut in v skupno 120 minutah je bila zabeležena fluorescenca (λex in λem=485 oziroma 528 nm). Antioksidativna zmogljivost RPH je bila odkrita iz kinetike upadanja fluorescence z izračunom površine pod krivuljo (AUC ). Pri izračunu RPH ORAC je bil standard 15–250 µM Trolox. ORAC je naveden kot mikromoli ekvivalenta Troloxa (TE) na gram suhega vzorca RPH (µmol TE/g RPH).

3.4. Inhibitorna aktivnost hialuronidaze

Test inhibicije hialuronidaze je bil izveden z uporabo {{0}}mikroplošče z vdolbinicami in predhodno opisane metode z manjšimi spremembami [40]. N-acetilglukozamin se je sprostil z reakcijo hialuronidaze s substratom HA. V prisotnosti katerega koli inhibitorja je bilo sproščanje N-acetilglukozamina zmanjšano, pri čemer je bilo to sproščanje zaznano z pridobitvijo absorbance 600-nm. HA smo oborili s kislo raztopino albumina, sestavljeno iz 0.1 M acetatnega pufra (pH 3,9) in govejega serumskega albumina (1 mg/mL). Raztopino vzorca in 5 mg/ml hialuronidaze smo 20-min inkubirali pri 37 ◦C. Inkubacijski zmesi smo nato dodali HA (1{{20}}0 µL; 5,0 mg/mL v 0,1 M acetatnem pufru). Izvedena je bila nadaljnja inkubacija pri 37 ◦C 40 minut. Dodali smo 0,1 ml 0,4 M raztopine alkalnega borata, da smo zaustavili encimsko reakcijo.

3.5. Inhibitorna aktivnost tirozinaze

Ta študija je ovrednotila antitirozinazno aktivnost RPH z uporabo predhodno poročanega protokola s spremembami [66]. Raztopino encima (135 U/mL) smo pripravili z raztapljanjem tirozinaze v 20 mM fosfatnem pufru (pH 6,8). Poleg tega je bila za pripravo raztopine 1,25 mM L-DOPA uporabljena DIvoda. Nato smo 40 µL raztopin vzorcev RPH različnih koncentracij zmešali s 40 µL raztopine tirozinaze in 120 µL raztopine L-DOPA. 30 minut smo to mešanico vzdrževali pri 37 ◦C v testu inhibicije RPHtirozinazadejavnost. Za pridobitev absorbance 475-nm je bil uporabljen spektrofotometer (FLUOstar Omega MicroplateReader, BMG Labtech GmbH, Nemčija). Vse meritve so bile izvedene trikrat. Absorpcija ustrezne skupine, kotirozinazani bilo prisotno je bilo odšteto. Stopnja inhibicije encima je bila določena kot

3.6. Karakterizacija RPH

3.6.1. Profili aminokislin

Ta študija je odkrila aminokislinsko sestavo RPH. Najprej smo 24 ur in pri 115 ◦C uporabili 4 M metansulfonsko kislino za hidrolizo vzorcev v vakuumsko zaprtih epruvetah. Dva sistema za dostavo topil Waters 510 in analizator aminokislin (L 8900; Hitachi, Tokio, Japonska) sta bila uporabljena za derivatizirano ločevanje aminokislin na koloni aSpherisorb ODS2, ki meri 25 m. × 64,6 mm. Ta študija je uporabila naslednja topila: (a) natrijev acetat (0,14 M) in trietilamin (850 µL/L; pH 5,6) in (b) 60-odstotni acetonitril, za katerega je bil gradient 0 odstotkov 2 minuti; 0–42 odstotkov za 15,5 minut (konveksna krivulja); in 100 odstotkov za 4 minute. Dvojni vzorci so bili vzeti za merjenje aminokislinskih profilov pri 254 nm [67,68].

3.6.2. Molekulska masa (MW) beljakovin

V skladu s Schäggerjevo metodo [69] in pod redukcijskimi pogoji je ta študija dobila porazdelitev MW z elektroforezo tricin–natrijev dodecil sulfat (SDS)–poliakrilamidni gel (PAGE) z rahlimi spremembami. Pufer za vzorec (30 g/L SDS, 0.375 MTris-HCl, 0.125 g/L Coomassie Brilliant Blue G-250 in 75 g/ L glicerol; pH 7) je bil uporabljen za disperzijo liofiliziranega vzorca, pri čemer je bilo pred nalaganjem izvedeno centrifugiranje. Skupaj 20 µL 2-merkaptoetanola smo dodali 1 ml vzorca tricin-SDS-PAGE. Vzorec smo 90 s segrevali pri 100 ◦C. Vzorčno vdolbino smo naložili z vsakim vzorcem in neobarvanim proteinskim standardom širokega razpona (Bio-Rad Laboratories, Nemčija) z uporabo mikrobrizgalke. Nato je bila izvedena elektroforeza - najprej pri konstantnih 30 mV, dokler ni bil celoten vzorec vsebovan v gelu za zlaganje, nato pa do konca pri konstantnih 100 mV. Nato je bila za barvanje z gelom uporabljena 0,02-odstotna raztopina Coomassie Brilliant Blue R-250. Absolutno razbarvanje ozadja gelov smo izvedli s stresanjem gelov v 10-odstotni ocetni kislini čez noč. Nazadnje smo analizirali sliko gela, da smo identificirali proteinske trakove v stezah; ta analiza je bila izvedena v ImageJ (National Institutes of Health, Bethesda, MD, ZDA). Standardni markerji so bili uporabljeni za pridobitev umeritvene krivulje, iz katere je bila ocenjena MW. Na kratko, prvi korak je bil določiti dolžino migracije (Rf) vsakega pasu od vrha ločilnega gela. Ta drugi korak je bil izračun umeritvene krivulje z uporabo Rf in log (MW) za standardni marker z dano MW. Določanje MW je bilo izvedeno z uporabo Rf proteinskih trakov v RPH.

3.7. Test citotoksičnosti

Surove celice 264,7 smo gojili v Dulbeccovem modificiranem mediju Eagle (DMEM) z visoko vsebnostjo glukoze, ki je vseboval 10 odstotkov fetalnega govejega seruma (FBS), 4,5 g/l glukoze, 1-odstotno raztopino antibiotika (100 enot/ mL penicilina in 100 µg/mL streptomicina), 4 mM L-glutamina in 1,5 g/L natrijevega bikarbonata pri 37 ◦C in 5 odstotkih CO2. Toksičnost celic neobdelanih celic 264.7 za RPHs je bila izmerjena s testno metodo proliferacije 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5 difenil-tetrazolijevega bromida (MTT). . Približno 1 × 104 celic na vdolbinico smo nasadili v 96-plošče z vdolbinicami. Po 24 urah smo v celice dodali različne koncentracije RPH (0–2000 µg/mL). Po 24 in 48 urah inkubacije smo dodali 100 µL raztopine MTT (0,5 mg/mL). Pri pregledu pod mikroskopom so opazili modre kristale formazana. DMEM smo odstranili in dodali 100 µL dimetil sulfoksida (DMSO) na vdolbinico. Absorbanco smo izmerili z bralnikom mikrotitrskih plošč. Viabilnost celic (v odstotkih) je bila nato izračunana kot [A570 (obdelane celice) − A570 (ozadje)] / [A570 (neobdelane celice) − A570 (ozadje)] × 100 odstotkov [70].

3.8. Statistična analiza

Poročilo za vsak vzorec hidrolizata je bila povprečna vrednost treh neodvisnih ponovljenih poskusov in določitev. Rezultati, izraženi v povprečju ± standardni odklon (SD), so bili analizirani z enosmerno ANOVA in Duncanovim post hoc testom z uporabo StatisticalAnalysis System (različica 20.0; SPSS, Armonk, NY, ZDA). Vrednosti p < 0,05="" so="" veljale="" za="" statistično="">

4. Sklepi

Ta študija je preučevala funkcije RPH. Eksperimentalni rezultati so pokazali, da RPH vsebujejo fenolne spojine in flavonoide ter kažejo vrsto antioksidativnih aktivnosti, kot so aktivnosti odstranjevanja DPPH in ABTS, sposobnost redukcije in ORAC. Poleg tega so RPH učinkovito zaviranitirozinazain hialuronidazne aktivnosti. Proteaza je bila kritični dejavnik, ki je vplival na vzorce MW RPH. Analiza RPH kaže na njihov potencial za uporabo kot sestavine v kozmetiki.

cistanche bodybuilding

Reference

1. Ichihashi, M.; Ando, ​​H.; Yoshida, M.; Niki, Y.; Matsui, M. Fotostaranje kože. Anti-Aging Med. 2009, 6, 46–59. [CrossRef]

2. Kim, J.-S.; Kim, D.; Kim, H.-J.; Jang, A. Zaščitni učinek hidrolizatov želatine iz oslovske kože na fotostaranje fibroblastov človeške kože, ki ga povzroči UVB. Proces. Biochem. 2018, 67, 118–126. [CrossRef]

3. Carocho, M.; Ferreira, IC Pregled antioksidantov, prooksidantov in s tem povezane polemike: naravne in sintetične spojine, metodologije presejanja in analize ter prihodnje perspektive. Food Chem. Toxicol. 2013, 51, 15–25. [CrossRef]

4. Guo, X.; Zhang, J.; Ma, Y.; Tian, ​​S. Optimizacija omejene hidrolize beljakovin v ostankih riža in karakterizacija funkcionalnih lastnosti izdelkov. J. Food Proc. Ohranite. 2013, 37, 245–253. [CrossRef]

5. Park, H.-Y.; Lee, K.-W.; Choi, H.-D. Sestavine riževih otrobov: imunomodulacijske in terapevtske dejavnosti. Prehranska funkcija. 2017, 8,935–943. [CrossRef] [PubMed]

6. Zhou, K.; Canning, C.; Sun, S. Učinki hidrolizatov riževih beljakovin, pripravljenih z mikrobnimi proteazami in ultrafiltracijo na proste radikale in oksidacijo mesnih lipidov. LWT 2013, 50, 331–335. [CrossRef]

7. Piu', LD; Tassoni, A.; Serrazanetti, DI; Ferri, M.; Babini, E.; Tagliazucchi, D.; Gianotti, A. Izkoriščanje tekočega stranskega produkta industrije škroba za proizvodnjo bioaktivnih peptidov iz riževih hidroliziranih beljakovin. Food Chem. 2014, 155, 199–206. [CrossRef]

8. Ferri, M.; Graen-Heedfeld, J.; Bretz, K.; Guillon, F.; Michelini, E.; Calabretta, MM; Lamborghini, M.; Gruarin, N.; Roda, A.; Kraft, A.; et al. Peptidne frakcije, pridobljene iz riževih stranskih proizvodov z okolju prijaznim postopkom, kažejo in vitro bioaktivnosti, povezane z zdravjem. PLOS ONE 2017, 12, e0170954. [CrossRef]

9. Wen, C.; Zhang, J.; Zhang, H.; Duan, Y.; Ma, H. Antioksidantni peptidi, pridobljeni iz rastlinskih beljakovin: izolacija, identifikacija, mehanizem delovanja in uporaba v prehranskih sistemih: pregled. Trends Food Sci. Technol. 2020, 105, 308–322. [CrossRef]

10. Phelan, M.; Aherne, A.; FitzGerald, RJ; O'Brien, NM Bioaktivni peptidi, pridobljeni iz kazeina: biološki učinki, industrijska uporaba, varnostni vidiki in regulativni status. Int. Mlekarstvo J. 2009, 19, 643–654. [CrossRef]

11. Udenigwe, CC; Aluko, RE Bioaktivni peptidi, pridobljeni iz živilskih beljakovin: proizvodnja, predelava in potencialne koristi za zdravje. J.Food Sci. 2012, 77, 11–24. [CrossRef] [PubMed]

12. Fardet, A.; Rock, E. In vitro in in vivo antioksidativni potencial mleka, jogurtov, fermentiranega mleka in sirov: narativni pregled dokazov. Nutr. Res. Rev. 2018, 31, 52–70. [CrossRef]

13. Leach, JB; Kathryn, AB; Charles, WPJ; Christine, ES Fotozamreženi hidrogeli hialuronske kisline: naravni, biološko razgradljivi odri za inženiring tkiv. Biotehnologija. Bioeng. 2003, 82, 578–589. [CrossRef]

14. Jegasothy, SM; Zabolotniaja, V.; Bielfeldt, S. Učinkovitost nove topikalne nanohialuronske kisline pri ljudeh. J. Clin. Aesthet.Dermatol. 2014, 7, 27–29.

15. Ndlovu, G.; Fouche, G.; Tselanyane, M.; Cordier, W.; Steenkamp, ​​V. In vitro določitev potenciala proti staranju štirih južnoafriških zdravilnih rastlin. BMC dopolnilo. Altern. Med. 2013, 13, 304. [CrossRef]

16. Jiratchayamaethasakul, C.; Ding, Y.; Hwang, O.; Im, S.-T.; Jang, Y.; Myung, S.-W.; Lee, JM; Kim, H.-S.; Ko, S.-C.; Lee, S.-H. In vitro pregled inhibitornih in antioksidativnih aktivnosti elastaze, kolagenaze, hialuronidaze in tirozinaze 22 izvlečkov halofitnih rastlin za nove kozmetične izdelke. ribe. Aquat. Sci. 2020, 23, 1–9. [CrossRef]

17. Kang, M.; Park, S.-H.; Oh, JZ; Lee, SE; Yoo, JA; Nho, YH; Lee, S.; Han, BS; Cho, JY; Lee, J. Anti-melanogeni učinki resorcinola so posredovani z zatiranjem signalizacije cAMP in aktivacijo signalizacije p38 MAPK. Biosci. Biotehnologija. Biochem.2018, 82, 1188–1196. [CrossRef]

18. Čatatikun, M.; Yamauchi, T.; Yamasaki, K.; Aiba, S.; Chiabchalard, A. Antimelanogeni učinek listov Croton roxburghii in Crotonsublyratus v celicah B16F10, stimuliranih z -MSH. J. Tradicija. Dopolnjujejo. Med. 2019, 9, 66–72. [CrossRef] [PubMed]

19. Rizzello, CG; Nionelli, L.; Coda, R.; Gobbetti, M. Sinteza peptida Lunasin za preprečevanje raka z mlečnokislinskimi bakterijami med fermentacijo kislega testa. Nutr. Rak 2012, 64, 111–120. [CrossRef] [PubMed]

20. Rizzello, CG; Tagliazucchi, D.; Babini, E.; Rutella, GS; Saa, DLT; Gianotti, A. Bioaktivni peptidi iz matrik rastlinske hrane: Raziskovalni trendi in nove biotehnologije za sintezo in predelavo. J. Funk. Živila 2016, 27, 549–569. [CrossRef]

21. Coscueta, ER; Campos, DA; Osório, H.; Nerli, BB; Pintado, M. Encimska hidroliza sojinih beljakovin: orodje za proizvodnjo biofunkcionalnih živilskih sestavin. Food Chem. X 2019, 1, 100006. [CrossRef]

22. Aydemir, LY; Yemenicioglu, A. Ali so na beljakovine vezani fenolni antioksidanti v stročnicah nevidni del ledene gore? J. Plant. Biochem.Physiol. 2013, 1, 1–3. [CrossRef]

23. Huang, SH; Ng, LT Kvantifikacija vsebnosti polifenolov in bioaktivnih sestavin nekaterih komercialnih sort riža v Tajvanu. J. Food Compos. Analno 2012, 26, 122–127. [CrossRef]

24. Yoshitomi, K.; Taniguchi, S.; Tanaka, K.; Uji, Y.; Akimitsu, K.; Gomi, K. Riževa terpen sintaza 24 (OsTPS24) kodira monoterpen sintazo, odzivno na jasmonat, ki proizvaja antibakterijski terpinen proti riževemu patogenu. J. Plant. Physiol. 2016, 191,120–126. [CrossRef]

25. Kamolsukyeunyong, W.; Sukhaket, W.; Pitija, K.; Thorngkham, P.; Mahatheeranont, S.; Toojinda, T.; Vanavichit, A. RiceSesquiterpene igra pomembno vlogo pri antiksenozi proti Brown Planthopper v rižu. Rastline 2021, 10, 1049. [CrossRef][PubMed]

26. Liu, Y.; Wang, Z.; Li, H.; Liang, M.; Yang, L. In vitro antioksidativna aktivnost riževih beljakovin, na katero vpliva alkalna stopnja in prebava gastrointestinalne proteaze. J. Sci. Food Agric. 2016, 96, 4940–4950. [CrossRef] [PubMed]

27. Phongthai, S.; D'Amico, S.; Schoenlechner, R.; Homthawornchoo, W.; Rawdkuen, S. Frakcioniranje in antioksidativne lastnosti hidrolizatov beljakovin riževih otrobov, stimuliranih z in vitro gastrointestinalno prebavo. Food Chem. 2018, 240, 156–164. [CrossRef][PubMed]

28. Huang, S.-L.; Wang, W.-H.; Zhong, X.-Y.; Lin, C.-T.; Lin, W.-S.; Chang, M.-Y.; Lin, Y.-S. Antioksidativne lastnosti Jatropha curcas L. Seed Shell and Kernel Extracts. Appl. Sci. 2020, 10, 3279. [CrossRef]

29. Lin, Y.-S.; Lin, W.-S.; Tung, J.-W.; Cheng, Y.-C.; Chang, M.-Y.; Chen, C.-Y.; Huang, S.-L. Antioksidativne zmogljivosti sadnih semen žižule in lupine. Appl. Sci. 2020, 10, 6007. [CrossRef]

30. Šahi, Z.; Sayyed-Alangi, SZ; Najafian, L. Učinki vrste encima in časa postopka na stopnjo hidrolize, trakove elektroforeze in antioksidativne lastnosti hidroliziranih beljakovin, pridobljenih iz razmaščenega Bunium persicum Bioss. stiskalni kolač. Heliyon 2020, 6,e03365. [CrossRef] [PubMed]

31. Xie, H.; Huang, J.; Woo, MW; Hu, J.; Xiong, H.; Zhao, Q. Vpliv deaktivacije hladnega in vročega encima na strukturne in funkcionalne lastnosti hidrolizatov riževih beljakovin. Food Chem. 2021, 345, 128784. [CrossRef]

32. Rani, S.; Pooja, K.; Pal, GK Raziskovanje hidrolizatov in peptidov riževih beljakovin s posebnim poudarkom na antioksidativnem potencialu: računalniško izpeljani pristopi za določanje bioaktivnosti. Trends Food Sci. Technol. 2018, 80, 61–70. [CrossRef]

33. Bisby, RH; Brooke, R.; Navaratnam, S. Učinek antioksidativnega oksidacijskega potenciala v testu absorpcijske sposobnosti kisikovih radikalov (ORAC). Food Chem. 2008, 108, 1002–1007. [CrossRef]

34. Elias, RJ; Kellerby, SS; Decker, E. Antioksidativna aktivnost beljakovin in peptidov. Crit. Rev. Food Sci. Nutr. 2008, 48, 430–441 [CrossRef] [PubMed]

35. Mine, Y.; Li-Chan, E.; Jiang, B. (ur.) Bioaktivni proteini in peptidi kot funkcionalna živila in nutracevtiki; Wiley-Blackwell: Hoboken, NJ, ZDA, 2010; strani 29–42.

36. Adebiyi, AP; Adebiyi, AO; Yamashita, J.; Ogawa, T.; Muramoto, K. Čiščenje in karakterizacija antioksidativnih peptidov, pridobljenih iz hidrolizatov beljakovin riževih otrobov. EUR. Food Res. Technol. 2008, 228, 553–563. [CrossRef]

37. Thamnarathip, P.; Jangchud, K.; Nitisinprasert, S.; Vardhanabhuti, B. Identifikacija molekulske mase peptida iz hidrolizata beljakovin riževih otrobov z visoko antioksidativno aktivnostjo. J. Cereal Sci. 2016, 69, 329–335. [CrossRef]

38. Tacias-Pascacio, VG; Morellon-Sterling, R.; Siar, E.-H.; Tavano, O.; Berenguer-Murcia, Á.; Fernandez-Lafuente, R. Uporaba alkalaze pri proizvodnji bioaktivnih peptidov: pregled. Int. J. Biol. Macromol. 2020, 165, 2143–2196. [CrossRef] [PubMed]

39. Sarringkarin, W.; Laokuldilok, T. Optimizacija proizvodnih pogojev glutinoznega hidrolizata beljakovin riževih otrobov z antioksidativnimi lastnostmi. CMU J. Nat. Sci. 2017, 16, 1–18. [CrossRef]

40. Zhang, Q.; Tong, X.; Qi, B.; Wang, Z.; Li, Y.; Sui, X.; Jiang, L. Spremembe antioksidativne aktivnosti alkalazno hidroliziranega sojinega hidrolizata pri simulirani gastrointestinalni prebavi in ​​transepitelnem transportu. J. Funk. Živila 2018, 42, 298–305. [CrossRef]

41. Tu, PTB; Tawata, S. Antioksidativne, anti-aging in anti-melanogene lastnosti eteričnih olj iz dveh sort Alpinia zerumbet. Molekule 2015, 20, 16723–16740. [CrossRef]

42. Nishida, Y.; Sugahara, S.; Wada, K.; Toyohisa, D.; Tanaka, T.; Ono, M.; Yasuda, S. Inhibitorni učinki ekstrakta etil acetata iz čebulic Scilla scilloides na aktivnosti lipoksigenaze in hialuronidaze. Pharm. Biol. 2014, 52, 1351–1357. [CrossRef]

43. Chen, H.-J.; Dai, F.-J.; Fan, S.-L.; Huang, Y.-C.; Chau, C.-F.; Lin, Y.-S.; Chen, C.-S. Kinetika inhibicije hialuronidaze z riževim (Oryza sativa L.) proteinskim hidrolizatom. Appl. Sci. 2020, 10, 9087. [CrossRef]

44. Girish, K.; Kemparaju, K. Čarobno lepilo hialuronan in njegova radirka hialuronidaza: biološki pregled. Life Sci. 2007, 80, 1921–1943. [CrossRef] [PubMed]

45. Zolghadri, S.; Bahrami, A.; Khan, MTH; Munoz-Munoz, J.; Garcia-Molina, F.; Garcia-Canovas, F.; Saboury, AA Celovit pregled zaviralcev tirozinaze. J. Enzym. Inhib. Med. Chem. 2019, 34, 279–309. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Seo, EJ; Hong, ES; Choi, MH; Kim, KS; Lee, SJ Antioksidant in učinki beljenja kože izvlečkov Rhamnus yoshinoi. korejski J. Food Sci. Technol. 2010, 42, 750–754.

47. Ochiai, A.; Tanaka, S.; Tanaka, T.; Taniguchi, M. Protein riževih otrobov kot močan vir antimelanogenih peptidov z inhibitorno aktivnostjo tirozinaze. J. Nat. Prod. 2016, 79, 2545–2551. [CrossRef] [PubMed]

48. Kubglomsong, S.; Theerakulkait, C.; Reed, RL; Yang, L.; Maier, CS; Stevens, JF Izolacija in identifikacija peptidov, ki zavirajo tirozinazo in kelirajo baker, iz hidroliziranega albumina, pridobljenega iz riževih otrobov. J. Agric. Food Chem. 2018, 66, 8346–8354.[CrossRef]

49. Schurink, M.; van Berkel, WJ; Wichers, H.; Boeriu, CG Novi peptidi z inhibitorno aktivnostjo tirozinaze. Peptidi 2007, 28,485–495. [CrossRef]

50. Ishikawa, M.; Kawase, I.; Ishii, F. Kombinacija aminokislin zmanjša pigmentacijo v celicah melanoma B16F0. Biol. Pharm.Bull. 2007, 30, 677–681. [CrossRef] [PubMed]

51. Zhang, R.; Wei, Y.; Li, M.; Cai, M.; Gu, R.; Ma, Y.; Chen, L.; Wang, J. Učinki melanogeneze hidrolizata riževega proteina in njegovih značilnih peptidov Leu-Leu-Lys, Leu-Pro-Lys in pyroGlu-Lys na UVB-inducirane človeške epidermalne melanocitne celice. FoodFunct. 2020, 11, 8757–8767. [CrossRef]

52. Wang, Y.; Cai, D.; On, M.; Wang, Z.; Qin, P.; Tan, T. Odprta fermentacijska proizvodnja l-mlečne kisline z uporabo belih riževih otrobov s hkratno saharifikacijo in fermentacijo. Bioresour. Technol. 2015, 198, 664–672. [CrossRef] [PubMed]

53. Pan, M.; Jiang, TS; Pan, JL Antioksidativne aktivnosti hidrolizatov beljakovin oljne ogrščice. Prehranski bioproces. Technol. 2009, 4, 1144–1152.[CrossRef]

54. Chen, HM; Muramoto, K.; Yamauchi, F.; Nokihara, K. Antioksidativna aktivnost oblikovanih peptidov, ki temeljijo na antioksidativnem peptidu, izoliranem iz prebave sojinega proteina. J. Agric. Food Chem. 1996, 44, 2619–2623. [CrossRef]

55. Liu, Q.; Kong, B.; Xiong, YL; Xia, X. Antioksidativna aktivnost in funkcionalne lastnosti hidrolizata prašičjih plazemskih beljakovin, na katere vpliva stopnja hidrolize. Food Chem. 2010, 118, 403–410. [CrossRef]

56. Lemes, A.; Sala, L.; Rude, JDC; Braga, ARC; Egea, MB; Fernandes, KF Pregled najnovejših dosežkov na področju šifriranih bioaktivnih peptidov iz odpadkov, bogatih z beljakovinami. Int. J. Mol. Sci. 2016, 17, 950. [CrossRef] [PubMed]

57. Wang, J.-S.; Zhao, M.-M.; Zhao, Q.-Z.; Jiang, Y.-M. Antioksidativne lastnosti papainskih hidrolizatov pšeničnega glutena v različnih oksidacijskih sistemih. Food Chem. 2007, 101, 1658–1663. [CrossRef]

58. Gao, M.-T.; Kaneko, M.; Hirata, M.; Toorisaka, E.; Hano, T. Uporaba riževih otrobov kot vira hranil za fermentativno proizvodnjo mlečne kisline. Bioresour. Technol. 2008, 99, 3659–3664. [CrossRef] [PubMed]

59. Huang, WY; Lin, YR; Ho, RF; Liu, HY; Lin, YS Učinki vodnih raztopin na ekstrakcijo listov zelenega čaja. Sci. World J. 2013, 2013, 368350. [CrossRef]

60. Wathoni, N.; Shan, CY; Shan, WY; Rostinawati, T.; Indradi, RB; Pratiwi, R.; Muchtaridi, M. Karakterizacija in antioksidativna aktivnost pektina iz skorje indonezijskega mangostina (Garcinia mangostana L.). Heliyon 2019, 5, e02299. [CrossRef]

61. Tsai, C.-C.; Chan, C.-F.; Huang, W.-Y.; Lin, J.-S.; Chan, P.; Liu, H.-Y.; Lin, Y.-S. Uporaba supernatanta Lactobacillus rhamnosus SpentCulture v kozmetičnih aplikacijah za antioksidacijo, beljenje in zadrževanje vlage. Molecules 2013, 18, 14161–14171.[CrossRef]

62. Huang, W.-Y.; Lee, P.-C.; Hsu, J.-C.; Lin, Y.-R.; Chen, H.-J.; Lin, Y.-S. Učinki kakovosti vode na raztapljanje praškov ekstrakta Yerba Mate. Sci. Svet J. 2014, 2014, 1–6. [CrossRef] [PubMed]

63. Chan, C.-F.; Wu, C.-T.; Huang, W.-Y.; Lin, W.-S.; Wu, H.-W.; Huang, T.-K.; Chang, M.-Y.; Lin, Y.-S. Antioksidacija in zaviranje melanogeneze različnih izvlečkov Dendrobium tosaense. Molecules 2018, 23, 1810. [CrossRef] [PubMed]64. Wu, C.-T.; Agrawal, DC; Huang, W.-Y.; Hsu, H.-C.; Yang, S.-J.; Huang, S.-L.; Lin, Y.-S. Analiza funkcionalnosti porabljenih ekstraktov mlete kave, pridobljenih s hidrotermalno metodo. J. Chem. 2019, 2019, 1–8. [CrossRef]

65. Dorta, E.; Rodríguez-Rodríguez, EM; Jiménez-Quezada, A.; Fuentes-Lemus, E.; Speisky, H.; Lissi, E.; López-Alarcón, C. Uporaba testa absorpcijske zmogljivosti kisikovih radikalov (ORAC) za napovedovanje zmožnosti stranskih proizvodov manga (Mangifera indica L.) za zaviranje oksidacije mesnih beljakovin. Hrana Analno. Metode 2016, 10, 330–338. [CrossRef]

66. Lin, Y.-S.; Chen, H.-J.; Huang, J.-P.; Lee, P.-C.; Tsai, C.-R.; Hsu, T.-F.; Huang, W.-Y. Kinetika inhibitorne aktivnosti tirozinaze z uporabo izvlečkov listov Vitis vinifera. BioMed Res. Int. 2017, 2017, 5232680. [CrossRef] [PubMed]

67. Bidlingmeyer, BA; Cohen, SA; Tarvin, TL Hitra analiza aminokislin z uporabo derivatizacije pred kolono. J. Chromatogr. BBiomed. Sci. Appl. 1984, 336, 93–104. [CrossRef]

68. Asai, TT; Oikawa, F.; Yoshikawa, K.; Inoue, N.; Sato, K. Kolagenski peptidi, pridobljeni iz hrane, prolil-hidroksiprolin (Pro-Hyp) in hidroksiprolil-glicin (Hyp-Gly) izboljšajo rast primarno kultiviranih fibroblastov mišje kože z uporabo fetalnega govejega seruma brez hidroksiprolil peptida. Int. J. Mol. Sci. 2019, 21, 229. [CrossRef]

69. Schägger, H. Tricine–SDS–PAGE. Nat. Protoc. 2006, 1, 16–22. [CrossRef]

70. Diao, J.; Chi, Z.; Guo, Z.; Zhang, L. Proteinski hidrolizat fižola Mung modulira imunski odziv prek poti NF-kB v makrofagih RAW 264.7, stimuliranih z lipopolisaharidom. J. Food Sci. 2019, 84, 2652–2657.[CrossRef]