Eksperimentalna študija zaščitnega učinka predhodnega zdravljenja s Cistanche glikozidi na ledvično ishemijo-reperfuzijsko poškodbo

za več informacij:ali.ma@wecistanche.com

Zhu Jun, Zhao Ximin

(Oddelek za kirurgijo, okrožna bolnišnica Baoshan integrirane tradicionalne kitajske in zahodne medicine, Šanghaj 201900)

【Povzetek】Cilj Vzpostaviti model oživljanja hemoragičnega šoka pri podganah in opazovati zaščitni učinekCistancheskupni glikozidi (CTG) na ledvično ishemijo-reperfuzijsko poškodbo. Metode Podgane SD so bile naključno razdeljene v 3 skupine: skupina za lažno operacijo, eksperimentalna skupina (skupina za oživljanje s šokom), skupina za zdravljenje s CTG, 10 podgan v vsaki skupini. Eksperimentalna skupina in skupina za zdravljenje s CTG sta vzpostavili modele ledvične ishemije in reperfuzije. Podganam v zdravljeni skupini so intraperitonealno injicirali CTG 400 mg/kg, poskusni skupini in skupini za lažno operacijo pa fiziološko raztopino. Vsebnost miokarda v krvi, vsebnost dušika sečnine in cistatin C vsake skupine so odkrili za določitev delovanja ledvic, analizo pretočne citometrije smo uporabili za odkrivanje stopnje apoptoze ledvičnih celic; encimski imunski test (ELISA) je bil uporabljen za odkrivanje povezave X-kromosoma pri podganahledvicatkivno izražanje X-vezanega inhibitorja apoptoznega proteina (XIAP). Rezultati Če primerjamo skupino, ki je prejemala CTG, z eksperimentalno skupino, so bili Cr, BUN in cistatin C v krvi znatno znižani (P<0.01), renal="" cell="" apoptosis="" was="" reduced=""><0.05), ctg="" can="" significantly="" increase="" the="" expression="" of="" xiap=""><0.05). conclusion="" the="" total="" glycosides="" of="">cistancheimajo zaščitni učinek na ledvično ishemijo-reperfuzijsko poškodbo pri podganah, kar je lahko povezano s spodbujanjem izražanja XIAP.

[Ključne besede] ledvice; ishemično-reperfuzijska poškodba; skupni glikozidi cistanche; kromosomsko vezan inhibitor proteina apoptoze; apoptoza; podgana

[Klasifikacijska številka kitajske knjižnice] R692 [Koda za označevanje dokumenta] A [Številka artikla] 1008 -0392 (2015) 02-0037 -04

Klikni za Cistanche EKSTRAKTNI PRAŠEK za ledvice

Ishemijsko-reperfuzijska (I/R) poškodba je pogost patofiziološki pojav okvare ledvic v procesu hemoragičnega šoka, hude travme,ledvicapresaditev inledvicaoperacija tumorja. Študije so pokazale, da je apoptoza pomemben del poškodbe ledvične funkcije, ki jo povzroči poškodba I/R (1). X-vezani zaviralec apoptoznega proteina (XIAP) je eden najmočnejših do sedaj najdenih endogenih zaviralcev apoptoze (2). Obstaja malo študij o antiapoptotičnem učinku XIAP v ledvičnem tkivu po poškodbi I/R.Cistancheskupni glikozidi (CTG) je feniletanoidna spojina skupnih glikozidov, ekstrahirana izCistanche, ki ima različne biološke funkcije. Obstaja malo študij o njegovi zaščiti ledvic po poškodbi I/R. . Ta študija je vzpostavila model oživljanja zaradi hemoragičnega šoka pri podganah in vzpostavila model sistemske I/R poškodbe za raziskovanje zaščitnega učinka skupnih glikozidov mesne kile naledvicapred poškodbo I/R in raziščite njen možni mehanizem.

1Materiali in metode

1.1 Živali in združevanje

Obstaja 30 čistih in zdravih podganjih samcev, ki jih je zagotovil Eksperimentalni center Šanghajske univerze za tradicionalno kitajsko medicino, tehtajo (320 ± 30) g. Naključno razdeljeni v 3 skupine: skupina za navidezno operacijo, eksperimentalna skupina (skupina za oživljanje s šokom), skupina CTG, vsaka po 10 podgan.

1.2 Glavni reagenti in instrumenti

Skupni glikozidi lepljivega riža (številka serije: 20081516) so bili kupljeni pri Zhejiang Hangzhou Xinghui Tianli Pharmaceutical Co., Ltd.; natrijev pentobarbital, Hoechst 33258 in propionil jodid sta bila kupljena pri Sigmi, ZDA; mišji X kromosom vezan zaviralec apoptoze Protein Assay Kit (XIAP) in ELISA Kit sta bila kupljena pri Shanghai Kemin Biotechnology Co., Ltd.; čitalec mikroplošč je bil kupljen pri Thermo Company, ZDA; večparametrski fiziološki detektor je bil kupljen pri Nihon Kohden Company, Japonska; pretočni citometer BDFACSAria je bil kupljen pri Becton, ZDA -Dickinson Company; Troakar 24G je bil kupljen pri Shandong Jierui Medical Devices Company.

1.3 Eksperimentalna metoda

1.3.1 Priprava živalskega modela Podgane SD so bile tešče 12 ur pred poskusom in anestezirane z intraperitonealno injekcijo natrijevega pentobarbitala (50 mg/kg).

Podgano smo fiksirali v ležečem položaju, naredili 3 cm velik rez v levem spodnjem delu trebuha, ločili femoralno arterijo, vstavili troakar 24G in priključili večparametrski fiziološki detektor. Povprečni krvni tlak podgane je bil izmerjen kot (113 ± 15) mmHg, 20 ml heparinske brizge. Krvni tlak je bil znižan na 40 mmHg (l mmHg=0. 133 kPa) s trosmerno napravo za kemično povezavo. Šteje se, da se je šok začel, krvni tlak pa se vzdržuje 90 minut. Volumen izpuščene krvi je bil (13 ± 3) ml, nato pa avtologna kri v brizgi. Počasna reinfuzija traja približno 30 minut, krvni tlak pa se vrne na več kot 90 odstotkov osnovne vrednosti in oživljanje ocenimo kot uspešno (3). . Troakar smo izvlekli, femoralno arterijo podvezali in rez zašili. Ko so se podgane zbudile, so jih vrnili v kletko na opazovanje, kjer so lahko jedle in pile. 24 ur po oživljanju smo uporabili intraperitonealno injekcijo natrijevega pentobarbitala (50 mg/kg) za anestezijo, laparotomijo, 5 ml krvi smo zbrali iz spodnje vene cave, podgane smo takoj žrtvovali in vzeli levo in desno ledvico za uporaba.

1.3.2 Metode zdravljenja Skupina, ki je bila zdravljena s CTG, je dobila CTG 2 uri pred krvavitvijo podgan in injicirana v trebušno votlino v odmerku 400 mg/kg. Eksperimentalni skupini so 2 uri pred krvavitvijo intraperitonealno injicirali 3 ml fiziološke raztopine; skupina za navidezno operacijo je bila podvržena le anesteziji, laparotomiji in ločitvi femoralne arterije, namestitvi troakarja in šivanju reza, vendar brez krvavitve ali oživljanja. Ostali so bili enaki eksperimentalni skupini.

1. 4 indikatorji in metode odkrivanja

1.4.1 Določanje vsebnosti BUN, Cr in cistatina C v krvi Cistatin C je endogeni marker sprememb v hitrosti glomerularne filtracije. Pri okvarjenem delovanju ledvic se hitrost glomerularne filtracije zmanjša, koncentracija cistatina C v krvi se lahko poveča za 10-krat, diagnostična natančnost cistatina C pa je bistveno boljša kot pri serumski mišični zastrupitvi. Vsebnost BUN, Cr in cistatina C v krvi smo oddali na določitev v laboratorij naše bolnišnice.

1.4.2 Določitev stopnje apoptoze celic Za odkrivanje stopnje apoptoze ledvičnih celic smo uporabili pretočno citometrijo. Vzemite ledvico in jo sesekljajte z rezilom, dodajte malo PBS in jo prenesite v epruveto. Dodamo 0,3 odstotka tripsina za prebavo v vodni kopeli 37 P, inkubiramo 20 min, ko vsebina v epruveti postane motna, dodamo 2-krat PBS, da zaustavimo razgradnjo, filtriramo z najlonsko mrežico 300 mesh, zavrzite nečistoče in centrifugirajte v nizkotemperaturni centrifugi. Polmer centrifuge 8 cm, 12,000 vrt/min, centrifugirajte 5 minut, zavrzite supernatant, nastavite koncentracijo celic na 1 ~ 1,5 x 106/ml, vzemite 0,4 ml zgornje celične suspenzije in dodajte 1,2 ml Hoechst 33258 (10 pil/ml), temno 37 t: inkubiramo v vodni kopeli, epruveto zapremo, po 5 minutah speremo s PBS, radij centrifuge 8 cm, 12 000 vrt/min, centrifugiramo 5 minut , zavrzite supernatant, ponovno sperite na enak način. Dodamo 0,4 ml PI, obarvamo 5 minut in zaznamo odstotek normalnih, nekrotičnih in apoptotičnih celic v ledvicah. Glede na afiniteto obeh barvil različnih tipov celic je znano, da so le celice, obarvane s PI, mrtve celice, samo celice, obarvane Hoechst 33258, so apoptotične celice in nobena od njih ni obarvana normalna živa celica.

1.4.3 Encimski imunski test (ELISA) za odkrivanje izražanja XIAP v tkivih ledvic podgan Vzemite vsako skupino ledvic in sveža tkiva ledvic obdelajte s tkivnim lizatom. Centrifugirajte v nizkotemperaturni centrifugi pri 12 000 vrt/min 5 minut. Vzemite supernatant in delajte v skladu z navodili kompleta XIAP ELISA Kit. Šanghajska univerza Jiaotong Fenghe Technology Co., Ltd. je odgovorna za testiranje.

1.5 Statistična obdelava

Eksperimentalni podatki vsake skupine so predstavljeni s prstjo Yuan in SPSS 17. Za statistično analizo je uporabljena programska oprema 0. p<0.05 indicates="" that="" the="" difference="" is="" statistically="">

Cistanche lahko izboljša spolno funkcijo

2 rezultata

Vrednosti indeksov ledvične funkcije Cr, BUN in cistatin C so bile statistično značilne (F<0.01); the="" experimental="" group="" was="" significantly="" higher="" than="" the="" sham="" operation="" group="" (p=""><0.01), indicating="" that="" the="" rat="" the="" kidney="" i/r="" model="" was="" successfully="" prepared;="" compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" values="" of="" cr,="" bun="" and="" cystatin="" c="" in="" the="" ctg="" group="" were="" significantly="" reduced=""><0.01). renal="" cell="" apoptosis="" rate:="" in="" the="" sham-operated="" group,="" only="" a="" few="" cells="" in="" the="" kidney="" tissue="" experienced="" apoptosis.="" apoptotic="" cells="" accounted="" for="" 0.42%="" ±="" 0.08%,="" and="" the="" experimental="" group="" had="" a="" significant="" increase="" in="" apoptosis,="" accounting="" for="" 18.="" 22%="" ±="" 5.="" 32%="" (p=""><0.01). compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" ctg="" group="" showed="" apoptosis="" the="" number="" decreased="" to="" 12.71%="" ±="" 3.81%="">< 0.01).="" the="" effect="" of="" ctg="" on="" the="" expression="" of="" xiap="" in="" i/r="" injured="" renal="" tissue:="" the="" sham="" operation="" group="" only="" had="" weak="" xiap="" expression,="" while="" the="" experimental="" group="" xiap="" expression="" increased="" significantly,="">< 0.01).="" compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" ctg="" group="" can="" significantly="" increase="" the="" expression="" of="" xiap="" (f=""><0.05), see="" table="">

Tabela 1 Vrednosti indeksov delovanja ledvic Cr, BUN in cistatin-C pri podganah v vsaki skupini Tab. 1 Indeksi delovanja ledvic v treh skupinah

V primerjavi s skupino za lažno operacijo, *P<0.01; compared="" with="" the="" experimental="" group,=""><0.05><>

Mehanizem ishemično-reperfuzijske poškodbe ledvic je zelo zapleten. To je patološki proces, ki se pojavi na več načinov pod vplivom različnih dejavnikov, kot so preobremenitev s kalcijevimi ioni, poškodbe zaradi peroksidacije lipidov, celična apoptoza in nekroza, med katerimi je od kaspaze odvisna celična apoptoza ena glavnih oblik epitelijskih celic ledvičnih tubulov. poškodbe zaradi I/R poškodbe ledvic (4). Družina inhibitorjev apoptoznih proteinov (IAP) je edini do sedaj najden endogeni inhibitor kaspaze v celicah sesalcev, ki lahko učinkovito prepreči pojav celične apoptoze. XIAP je član z najmočnejšim zaviralnim učinkom na kaspazo v družini IAP. Lahko zavira celično apoptozo, ki jo povzročajo različni patološki dražljaji, in ima zaščitni učinek na poškodovane organe (5).

Trenutno je večina metod za vzpostavitev živalskih modelov ledvične I/R poškodbe odstranitev ene ledvice in vpenjanje druge strani ledvičnega peclja ali ledvične arterije ⑹ za simulacijo stanja presaditve ledvice. Ta študija uporablja model hemoragičnega šoka/oživljanja, ki je bližje patofiziološkemu procesu sistemske ishemije-reperfuzije, ki se pojavi pri kliničnem travmatičnem šoku. V tem poskusu so ravni BUN, Cr in cistatina C v krvi pri podganah SD. Znatno izboljšanje, hudo okvarjeno delovanje ledvic, idealen živalski model za preučevanje I/R poškodbe ledvic.

CTG je pomembna zdravilna sestavina tradicionalne kitajske medicine mesna pasta. Pasta iz jajčevcev, ki je po naravi topla, sladka in slana, se vrača v meridian ledvic in debelega črevesa in je bila prvotno vsebovana v Shennongovi Materia Medica. "Ben Sutra": glavnih pet porodov in sedem poškodb, neguje sredino, neguje pet notranjih organov, krepi jin, neguje esenco in qi;Cistanchese v moji državi uporablja že dva tisoč let. V preteklosti se uvršča na 1. mesto v formulah za povečanje moči in na 2. mesto v hranilnih formulah za ginsengom. Študije so pokazale, daCistanchelahkoizboljša spolno funkcijo, uravnava nevroendokrino, inizboljšati imunsko delovanje. , Antioksidanti, spodbujajo metabolizem materialov, ščitijo ishemični miokard in druge funkcije. Kot glavna zdravilna sestavina mesne družinske kaše ima CTG številne funkcije. Raziskave na modelih cerebralne ishemije-reperfuzije so pokazale, da lahko CTG zmanjša ekscitatorne aminokisline v možganskem tkivu po ishemiji-reperfuziji in zaščiti možgansko tkivo SD podgan (7). CTG imaantioksidativni učinekna tkivih miši in ima določen zaščitni učinek na akutno možgansko hipoksijo pri miših in poškodbo srčne mišice pri miših (9). CTG lahko bistveno izboljša nevrovedenjeParkinsonova bolezenmodelne miši in zavirajo zmanjšanje števila dopaminskih nevronov v črni substanci (9). S povečanjem aktivnosti encimov za lovljenje prostih radikalov, preprečevanjem peroksidacije lipidov, zaviranjem odlaganja B-amiloidnega peptida v možganih in zaviranjem apoptoze možganskih celic CTG bistveno izboljša učenjeAlzheimerjeva bolezenmiši, ki jih povzroča B-amiloidni peptid Sposobnost spomina w. Ta študija je pokazala, da se je po uporabi predhodne obdelave s CTG vsebnost BUN, Cr in cistatina C v krvi pri podganah znatno zmanjšala, zmanjšala pa se je tudi poškodba ledvic. CTG je povečal protein XIAP, ki zavira apoptozo, v I/R poškodovanem ledvičnem tkivu in blokiral apoptozo celic. Pojav smrti ima zaščitni učinek na poškodbo ledvic.