Raziskovanje potenciala izvlečkov islandskih morskih alg, proizvedenih z vodno impulzno ekstrakcijo s pomočjo električnih polj za kozmetične aplikacije 2. del

Prosim kontaktirajteoscar.xiao@wecistanche.comza več informacij

2.5.4. Inhibicijska aktivnost hialuronidaze

Vsi izvlečki morskih alg so bili zelo visokiantihialuronidazaaktivnost (tabela 4), kar kaže primerljive rezultate z raztopinami taninske kisline (dobro znani zaviralec hialuronidaze). Natančneje, izvlečki A.esculenta so pokazali 100-odstotno inhibicijo za vse testirane metode. Poleg tega so izvlečki U. Lactuca pokazali aktivnosti, višje od 90 odstotkov inhibicije, pri čemer je bila inhibicija izvlečkov, proizvedena s PEF (96,8 odstotka) in kombinacijo PEF plus HW (97,3 odstotka), višja od inhibicije, ki jo je povzročila tradicionalna vroča voda. metoda 93,4 odstotka )(str<0.05). all="" p.palmaria="" extracts="" exhibited="" similar="" activities="" (p=""><0.05), the="" inhibition="" of="" the="" extracts="" produced="" by="" pef="" was="" (91.9="" %)="" and="" the="" combination="" of="" pef+="" hw="" (89.5%)="" and="" the="" traditional="" hot="" water="" method="">

Za več informacij kliknite tukaj

Tudi drugi avtorji so opisali antihialuronidazno delovanje različnih izvlečkov morskih alg, zlasti izvlečkov, bogatih sflorotaniniiz rjavih alg [73,74]. Vendar, kolikor nam je znano, je to prvič, da so poročali o inhibitornih aktivnostih P. palmitate in U.lactuca, proizvedenih s PEF, za zaviranje hialuronidaze.

Cistanche lahko izboljša imuniteto

Hialuronska kislina je glavna sestavina dermisa, kjer sodeluje pri obnavljanju tkiva, s staranjem se razgrajuje, kar povzroča gube in izgubo čvrstosti kože. V tem smislu zaviralci hialuronidaze povečajo raven hialuronske kisline v dermalnem zunajceličnem matriksu za izboljšanje videza staranja.kožo obraza[13]. Zato bi lahko rezultati te študije odprli nove poti za izkoriščanje naravnih inhibitorjev hialuronidaze iz virov alg s potencialno uporabo v kozmetičnih izdelkih.

Če povzamemo, zbrani podatki so nam omogočili zaključek, da so izvlečki A.esculenta pokazali na splošno boljše inhibitorne aktivnosti proti testiranim encimom kot P.palmaria in U. Lactuca. Tako je najbolj obetavna vrsta morskih alg z odličnimantiencimskodejavnosti, zato je bil izbran za nadaljnje študije v našem laboratoriju. Čeprav se zdi, da so surovi izvlečki iz A.esculenta dobri kandidati za poskuse in vitro, je treba izvesti nadaljnje študije, da se pojasni identiteta metabolitov, odgovornih za te biološke učinke.

2.6.Korelacije med kemičnimi spojinami in bioaktivnimi lastnostmi

Rezultati analize glavnih komponent (PCA) so pokazali, da je glavno ločevanje skupin opredeljeno s PC1 in PC2, ki predstavljata 71,9 odstotka oziroma 14,5 odstotka variance v podatkih (slika 2). Za izvlečke A.esculenta so bile značilne višje vsebnosti flavonoidov in fenolnih spojin, inhibitorni učinki na encime (kolagenazo, tirozinazo in elastazo) ter vrednosti DPPH in FRAP kot pri drugih vrstah, P. palmata in Ul. Lactuca. Po drugi strani je imela A.esculenta nižjo vsebnost ogljikovih hidratov, zlasti v primerjavi s P. palmitatom (ki se nahaja na nasprotni strani PC1). Razlike v podatkih vzdolž PC2 so bile v glavnem povezane z ABTS inhialuronidazazaviranje. Kot je razvidno iz lokacije na ploskvi, je imela P. palmata močnejšo korelacijo z ABTS, medtem ko je bila U. Lactuca bolj povezana zhialuronidazainhibicijski učinki v primerjavi s tema dvema vrstama.

Visoka in pomembna pozitivna korelacija med TPC, TFC, DPPH, FRAP in inhibitornimi učinki na kolagenazo, elastazo intirozinazaje bilo dokazano s Pearsonovo korelacijsko analizo (tabela 5).

Slika 2. Biplot analize glavnih komponent (PCA) faktorskih obremenitev (črni krogi) in rezultatov za izvlečke alg (P. palmata: rjave pike (zgoraj desno); U. Lactuca: zeleni trikotniki (večinoma zgoraj levo); A esculenta: modri kvadratki (spodnji del risbe).

To je bilo v skladu s prejšnjimi študijami, ki so poročale, da fenolne spojine (vključno s flavonoidi) največ prispevajo k antioksidativni aktivnosti različnih morskih trav [75-77]. Visoka antioksidativna aktivnost izvlečkov iz rjavih makroalg je bila povezana s posebno skupino polifenolov, florotanina, in njihovo edinstveno molekularno strukturo. Poročajo, da ima florotanis iz rjavih alg do osem med seboj povezanih fenolnih obročev, ki delujejo kot pasti za elektrone [78,79]. Pričakovalo se je, da bodo ABT korelirali s TPC, drugimi parametri antioksidantov. Možni razlogi so lahko, da metode temeljijo na različnih reakcijskih pogojih in da se reaktivnost razlikuje glede na čas in obseg komponent. Na primer, reagent ABTS reagira s širšim razponomantioksidantikot radikal DPPH [80]. Po drugi strani pa je ena od omenjenih omejitev za ABTS dolga reakcija in splošni reakcijski čas morda ne omogoča doseganja končne točke.

Rezultati kažejo, da obstaja visoka pozitivna korelacija TPC in TFC z inhibitorno aktivnostjo kolagenaze, elastaze in tirozinaze ({{0}}.93-0).99, medtem ko je odnos do inhibicije hialuronidaze ni bil tako močan (r=0,42 oziroma 0,54). To kaže, da so lahko druge sestavine prispevale k zaviralnemu učinku izvlečkov. Druge študije so poročale, da polisaharidi zavirajo hialuronidazo, na primer alginska kislina v rjavih algah [81,82]. Za oceno prispevka vsake kemične komponente so potrebne nadaljnje študije o kemični sestavi vrst makroalg za učinke izoliranih spojin na encim, saj je bil v tej študiji poudarek na surovih ekstraktih.

Ugotovitve so bile v skladu s prejšnjimi študijami, ki navajajo, da se kemična sestava in ravni bioaktivnosti izvlečkov med tremi linijami (rdeče, zelene in rjave alge) in med različnimi vrstami, ki pripadajo istemu deblu, močno razlikujejo in nanje vpliva starost. in vrsto tkiva. Poleg tega so sestava in značilnosti odvisne od številnih okoljskih dejavnikov, ki vplivajo na porazdelitev in rast makroalg. Na primer svetloba (UV-sevanje), temperatura, razpoložljivost hranil, izpostavljenost zraku, gibanje vode, izpostavljenost valovom in slanost. Temperatura je bila opisana kot dejavnik, ki ima najmočnejši učinek na tvorbo pigmenta in koncentracijo hranil, slanost in UV sevanje kot dejavnika, ki vplivata na koncentracijo TPC [83].

Porazdelitev različnih vrst makroalg se spreminja z globino vode. Položaji višje ob obali v plimnem ali obalnem pasu so bolj stresni, saj morajo vrste, ki tam rastejo, prenesti večkratne spremembe abiotskih dejavnikov zaradi sprememb plimovanja. Na primer, učinek sušenja zraka, visoko sončno obsevanje (ob oseki), spremembe v slanosti in temperaturi ter v pogojih nizkih temperatur zraka tudi zmrzovanje. Pod mejo nizke vode povečanje globine povzroči zelo hitro zmanjšanje intenzivnosti svetlobe in manjšo izpostavljenost sevanju.

Alge, ki rastejo v območju plimovanja, so manj občutljive na UV sevanje in si hitreje opomorejo od sončnega stresa. Medtem ko so alge, ki rastejo v sublitoralnem pasu, bolj občutljive na UV sevanje in se slabše obnovijo po sončnem stresu[84]. Vodni stolpec hkrati zagotavlja zaščito. V tej študiji je bila izpostavljenost sončni svetlobi verjetno močnejša za P. palmata v primerjavi z drugimi vrstami. Druge študije so pokazale, da je tvorba MAA neposredno povezana s sončno svetlobo [85], ki ščiti organizme pred UV-A in UV-B sevanjem. Poleg tega se je pokazalo, da se je specifična količina MAA zmanjšala z večanjem zbiralne globine. Znano je, da alge, kot je A.esculenta, rastejo v zgornjem sublitoralnem območju, vendar segajo tudi v najnižje medplimovanje tik nad nizkim vodnim znakom. To pomeni, da je vodni stolpec zagotovil močnejšo zaščito kot za P.palmata. Poleg tega so morfološke značilnosti drugačne, rezila A.esculenta so debelejša v primerjavi z drugima dvema vrstama. uporabniški vmesnik. Lactuca, ki raste predvsem v intertidalu in sublitoralu, je sposobna fotosintetizirati in rasti pri zelo nizkem obsevanju. Izpostavljenost UVB svetlobi naj bi pospešila okrevanje fotosintetskih parametrov U. Lactuca po negativnih učinkih UVA svetlobe. Je manjša, enostavnejša zgradba in krajša življenjska doba (3 mesece) kot A.esculenta (5-7 vear) in P. palmata, ki ima vsako leto novo rast.

Če povzamemo, lahko domnevamo, da so glavne razlike v lastnostih izvlečkov variacija v življenjski dobi, morfoloških značilnostih in pogojih rasti vrst alg.

3. Materiali in metode 3.1. Materiali

Islandske morske alge U.lactuca (zelene alge), A.esculenta (rjave alge) in P. palmitate (rdeče alge) so bile pridobljene iz islandskih modrih školjk in morskih alg, ki so bile nabrane v Breidafjordurju (zahodna Islandija). Po žetvi so bile morske alge posušene (do približno 90 odstotkov suhega materiala), zmlete in dostavljene vakuumsko zapakirane. Vzorce smo do uporabe hranili na suhem in temnem mestu pri sobni temperaturi.

Tirozinaza iz gob, L-3,4-dihidroksifenilalanin (L-DOPA), elastaza iz prašičje trebušne slinavke, askorbinska kislina, N-sukcinil-Ala-Ala-Ala-p-nitroanilid (AAAPVN), hialuronidaza iz goveji testisi, kvercetin, -tokoferol, taninska kislina, 2,2-difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH),24,6-tripiridil-s-triazin (TPTZ), Trolox, Folin-Ciocalteu reagent, galno kislino in komplet za kolorimetrični test aktivnosti kolagenaze (MAK293) so bili kupljeni pri Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, ZDA). Natrijeva sol hialuronske kisline je bila kupljena pri MakingCosmetics (Redmond, WA, ZDA). Vse druge uporabljene kemikalije in reagenti so bili analitske kakovosti in pridobljeni od VWR International, LLC. Za ekstrakcijo in pripravo raztopin na vodni osnovi je bila uporabljena deionizirana voda (ElixEssential, Merck, Darmstadt, Nemčija).

3.2. Eksperimentalno načrtovanje

Faktorska zasnova je bila uporabljena za vrednotenje učinkov islandskih vrst morskih alg (U.lactuca, A.esculenta, P. palmata) in ekstrakcijske obdelave (ekstrakcija z vročo vodo (HW, 95 stopinj C), ekstrakcija s pomočjo PEF (PEF) in kombinacija obe tehniki (PEF plus HW), na sestavo ekstrakta in bioaktivnost (tabela 6).Ekstrakcija je bila izvedena v treh izvodih za vsako skupino in vsaka ponovitev ekstrakta je bila analizirana v treh izvodih.

3.3. Ekstrakcija bioaktivnih snovi iz islandskih morskih alg

Izkoriščanje biomase makroalg na različnih ravneh je motiviralo znanstvenike, da raziščejo bolj okolju prijazne, učinkovite in stroškovno učinkovite tehnike ekstrakcije, ki temeljijo na pristopih zelene ekstrakcije. V tem delu je bila ekstrakcija s pomočjo PEF ocenjena kot nova in zelena metoda za proizvodnjo funkcionalnih ekstraktov, medtem ko je bila za primerjavo uporabljena tradicionalna ekstrakcija z vročo vodo. Poleg tega so preučevali učinek kombinacije obeh tehnik, PEF obdelave makroalg, ki ji sledi tradicionalna ekstrakcija z vročo vodo, na bioaktivno predelavo. Zaradi pričakovane elektroporacije, ki nastane v celičnih membranah po fizični obdelavi, bi lahko naslednja ekstrakcija z vročo vodo dodatno olajšala sproščanje znotrajceličnega materiala [86], kar bi povečalo izkoristek ekstrakcije. Po obdelavi je potreben čas, da materiali difundirajo iz celic [87,88], in v tem poskusu so suspenzije čakale čez noč, dokler se tekočina (ekstrakt) ne loči od pulpe.

Kar zadeva medij za ekstrakcijo, je bila za proizvodnjo izvlečkov morskih alg uporabljena destilirana voda, da bi presegli omejitve v zvezi z uporabo strupov in organskih topil. Voda se je izkazala za dobro topilo za ekstrakcijo več bioaktivnih spojin iz morskih alg [46,89-91] in je okolju prijazna. Poleg tega se voda običajno uporablja za ekstrakcijo s pomočjo PEF, saj je dober prevodnik za elektriko.

3.3.1. Postopki ekstrakcije

Za vsako ponovitev v vsaki skupini so bile morske alge (15 g) čez noč namočene pri sobni temperaturi (22 stopinj) v deionizirani vodi (300 ml). Nato je bila suspenzija obdelana s PEF (PEF), segreta (HW) ali tako obdelana s PEF in segreta (PEF plus HW). Suspenzije smo hranili čez noč v hladilniku, čemur je sledila filtracija z grobim (20 μm) filtrirnim papirjem. Nato so bili filtrati (izvlečki) shranjeni pri 4 stopinjah do njihove analize.

Ekstrakcija s pomočjo impulznega električnega polja je bila izvedena z uporabo impulznega generatorja, izdelanega v podjetju. Imel je kondenzator FuGHCK-200-2000 (Fu.G.Elektronik GmbH, Rosenheim, Nemčija) in iskrišče (18,5 kV OG75, Perkin-Elmer Optoelectronics, GMBH, Wiese-baden, Nemčija). Oprema PEF je ustvarila impulze eksponentnega upadanja s širino 0,96 us in amplitudo 18 kV. Obdelovalna komora iz pleksi stekla z dimenzijami (D × V × Š) 20 × 8 × 2, 5 cm, z najkrajšo razdaljo med ploščnimi elektrodami, je bila uporabljena za obdelavo suspenzij z električnim poljem 8 kV / cm pri 1, 2 Hz za 10 minut. HW-izvlečki so bili pripravljeni s segrevanjem suspenzije v čaši v termostatski vodni kopeli in vzdrževanjem pri 95 stopinjah 45 minut. Za kombinirano pulzno električno polje in obdelavo s segrevanjem smo suspenzije obdelali s PEF in jih nato dali v čašo, segreli v vodni kopeli in vzdrževali pri 95 stopinjah 45 minut.

3.3.2. Meritve prevodnosti, pH in temperature

Električno prevodnost in pH suspenzije morskih alg smo izmerili po namakanju in po ekstrakciji pri sobni temperaturi z uporabo pH-metra (Orion StarTM A215 pH/Conductivity Benchtop Meter, Thermo Scientific, Waltham, MA, ZDA), opremljenega s prevodnostjo. kombinirana elektroda senzorja in triode pH/ARC. Poleg tega so bile zabeležene temperaturne spremembe zaradi obdelav.

3.4. Spektralni profili izvlečkov morskih alg

Absorpcijski spekter UV-VIS različnih izvlečkov morskih alg je bil izmerjen v območju od 200 do 450 nm z dvojnim žarkom Thermo Scientific Evolution 350 UV-Vis spektrofotometra (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, ZDA) z 1 cm kvarčnimi kivetami. Za vsak izvleček morskih alg so bili izvedeni trije pregledi. 3.5. Določanje skupne vsebnosti polifenolov

Vsebnost skupnih fenolov (TPC) v izvlečkih morskih alg je bila določena z uporabo reagenta Folin-Ciocalteu po rahlo spremenjeni metodi, ki jo je opisal Zhang [92], z uporabo spektrofotometra Multiskan Sky Microplate (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, ZDA). 20 μL ekstrakta morskih alg ali serijske standardne raztopine smo zmešali s 100 μL reagenta Folin-Ciocalteu (10 odstotkov v destilirani vodi). Po 5 minutah smo dodali 80 μL 7,5-odstotne (o/w) raztopine natrijevega karbonata. Reakcijska zmes smo inkubirali pri sobni temperaturi in temi 30 minut. Absorbanco smo izmerili pri valovni dolžini 760 nm. Destilirano vodo smo uporabili kot slepo. Standardno krivuljo galne kisline smo uporabili za določitev skupne vsebnosti fenolov in jo izrazili kot ug ekvivalentov galne kisline. (GAE) na gram suhega materiala (ug GAE/g dw).

3.6. Določanje skupne vsebnosti flavonoidov

Skupna vsebnost flavonoidov (TFC) v izvlečkih morskih alg je bila določena z metodo, ki jo je opisal Kamtekar 【93】 in prilagojena 96-mikroploščam z jamicami. Na kratko, volumen 25 μL ekstrakta morskih alg ali serijske standardne raztopine smo zmešali z 100 μL natrijevega nitrita (0,375 odstotka w/v). Po 5 minutah smo mešanici dodali 25 μL aluminijevega klorida (3 odstotke w/v) in inkubirali 6 minut pri sobni temperaturi. Nato smo zmesi dodali 100 uL natrijevega hidroksida (2 % w/v) in premešali. Takoj smo izmerili absorbanco pri valovni dolžini 510 nm. Destilirana voda in etanol sta bila uporabljena kot slepa. Standardna krivulja kvercetina (raztopljenega v etanolu) je bila uporabljena za določitev celotne vsebnosti fenolov in izražena kot ug ekvivalentov kvercetina （QE） na gram suhega materiala （ug QE/g do）. 3.7. Določanje vsebnosti ogljikovih hidratov

Vsebnost prostih sladkorjev smo izmerili po metodi, opisani v [94], z manjšimi modifikacijami. 50 μL raztopine fenola (4 odstotki) in 250 μL žveplove kisline (96 odstotkov) smo dodali 100 μL vzorca ali standardne raztopine. Po 10 minutah inkubacije pri sobni temperaturi smo absorbanco zmesi odčitali pri 490 nm. Standardna krivulja glukoze je bila uporabljena za določitev skupne vsebnosti ogljikovih hidratov in izražena kot mg glukoznih ekvivalentov (GluE) na gram suhega materiala (mg GluE/g dw).

3.8. Antioksidativne lastnosti izvlečkov morskih alg

3.8.1.2,2 Difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH) test lovljenja prostih radikalov

Antioksidativna aktivnost (DPPH) izvlečkov morskih alg je bila določena po prej opisani metodologiji 【94】 z nekaterimi modifikacijami. Na kratko, 200 μL 10,825×10-5M raztopine DPPH smo dodali k 100 μL vzorca （1∶1 v metanolu） v 96-plošči z vdolbinicami. Enak volumen DPPH smo zmešali s 50 μL standarda in 50 μL metanola. Nato smo vzorce in standard inkubirali v temnem prostoru pri sobni temperaturi 30 minut. Absorbanco smo izmerili pri valovni dolžini 517 nm. Kot slepo smo uporabili destilirano vodo. Sposobnost čiščenja radikala DPPH je bila izračunana z uporabo naslednje enačbe:

pri čemer je kontrola A absorbanca kontrole (raztopina DPPH brez vzorca), vzorec A je absorbanca preskusnega vzorca (raztopina DPPH plus preskusni vzorec), slepi vzorec A je absorbanca samo vzorca (vzorec brez raztopine DPPH ) in ametanolni slepi vzorec je absorbanca samo metanola. Kot pozitivne kontrole so bili uporabljeni komercialni antioksidanti (askorbinska kislina, galna kislina in -tokoferol).

3.8.2. Test zmanjševanja antioksidativne moči železovih ionov (FRAP).

Aktivnost FRAP smo merili po metodi Benzie in Strain[95]. Na kratko, acetatni pufer (300 mM, pH 3,6), 2,4,6-tripiridil-s-triazin (TPTZ) 10 mM v 40 mM HCl in FeCl3·6H2O (20 mM) smo zmešali v razmerju 10:1:1, da dobimo delovni reagent FRAP. Reakcijsko zmes smo inkubirali pri 37 °C 10 minut. Vzorec A50 μL iz vsakega ekstrakta smo mešali s 150 μL delovne raztopine FRAP 8 minut pri sobni temperaturi. Absorpcija obarvanega produkta, Ferrous-TPTZ, je bila izmerjena pri valovni dolžini 593 nm. Vrednosti FRAP izvlečkov morskih alg so bile izražene kot μM ekvivalentov Troloxa （TE） na gram suhega materiala.

3.8.3.2,2 Test azino-bis(3-etilbenzotiazolin-6-sulfonske kisline) (ABTS)

Analiza je bila izvedena z uporabo protokola za razbarvanje ABTS [76] z nekaterimi modifikacijami. Kation radikala ABTS (ABTS plus) je bil proizveden z reakcijo ABTS (66 mg) z 10 mL raztopine kalijevega persulfata (2,45 mM). Zmes smo pustili v temi pri sobni temperaturi 12-16 h pred uporabo. Raztopino ABTS plus smo razredčili z vodo do absorbance 0,700 pri 734 nm. Reakcijsko zmes (200 ul) smo prenesli na mikroploščo, dodali 50 uL vzorca in nato 150 uL raztopine reagenta. Ploščo smo stresali 10 s pri srednji hitrosti in izmerili absorbanco pri 734 nm po 5 minutah inkubacije pri sobni temperaturi. Standardno krivuljo smo pripravili s prikazovanjem inhibicije A734nm standardov Trolox kot funkcije njihovih koncentracij. Vrednost Troloxove ekvivalentne antioksidativne kapacitete (TEAC) vzorcev je bila izračunana z uporabo enačbe, pridobljene iz linearne regresije standardne krivulje, ki je nadomestila vrednosti A734nm za vsak vzorec:

Antioksidativno delovanje je bilo izraženo v smislu koncentracije TEAC, umol/g suhe mase alg.

3.9. Protiencimske aktivnosti izvlečkov morskih alg 3.9.1. Test inhibicije kolagenaze

Za določanje inhibicije kolagenaze izvlečkov morskih alg smo uporabili kolorimetrični komplet za testiranje aktivnosti kolagenaze (MAK293), kupljen pri Sigma-Aldrich. Komplet je meril aktivnost kolagenaze z uporabo sintetičnega peptida (FALGPA), ki posnema strukturo kolagena. Postopek je bil izveden v skladu z navodili kompleta.

3.9.2. Test inhibicije elastaze

Zaviranje elastaze izvlečkov morskih alg so raziskali v puferski raztopini TRIS s spremenjeno metodo, kot je opisano prej 【96】. Na kratko, 100μL 0,1 M raztopine TRISpufra （pH8,0）, 25 μL elastaze（1 U/mL v TRISpufru） in 25 μL ekstraktov vzorcev smo zmešali in inkubirali 15 minut pri 30 C pred dodajanjem substrata za začetek reakcije. Po času inkubacije smo dodali 50 uL 2 mM raztopine AAAPVN. Nato smo 20 minut spremljali absorbanco pri 420 nm z uporabo bralnika mikroplošč pri konstantni temperaturi 30 C. Na koncu smo izračunali inhibicijo elastaze v odstotkih z uporabo enačbe:

kjer je kontrola Abs absorbanca testa z uporabo pufra namesto inhibitorja (vzorca), Absample pa absorbanca ekstraktov vzorca. Kvercetin je bil uporabljen kot pozitivna kontrola. Tris pufer je bil uporabljen kot slepi.

3.9.3. Test inhibicije tirozinaze

Test zaviranja tirozinaze je bil izveden v skladu z metodo, ki jo je prej opisal 【66】 z uporabo L-DOPA kot substrata. 20 μL vzorca, 10 μL raztopine gobove tirozinaze （50 U/mL v fosfatnem pufru） in 80 μL fosfatnega pufra （pH =6.8） smo zmešali na mikroplošči in predhodno inkubirali pri 37 stopinjah. za 5 min. Nato smo dodali 90 μL L-DOPA (2 mg/mL). Tvorbo dopakroma smo takoj spremljali 20 minut pri 475 nm v bralniku mikroplošč pri konstantni temperaturi 37 stopinj. Odstotek inhibicije encima tirozinaze smo izračunali z uporabo enačbe:

kjer je kontrola Abs absorbanca testa z uporabo pufra namesto inhibitorja (vzorca), vzorec Abs pa absorbanca ekstraktov vzorca. Kvercetin je bil uporabljen kot pozitivna kontrola. Fosfatni pufer je bil uporabljen kot slepi vzorec.

3.9.4. Test inhibicije hialuronidaze

Zaviralna aktivnost hialuronidaze je bila izmerjena, kot je predhodno opisal [66] z nekaj modifikacijami. Volumen 100 hialuronidaze tipa ulof-1-Sbovine testise（2100 U/mL）raztopljen v 0.1 M acetatni pufer (pH 3,5) smo zmešali s 100 μL ekstrakta in inkubirali pri 37 stopinjah 20 minut. Reakcijski zmesi smo dodali volumen 200 μL 6 mM kalcijevega klorida in nato zmes inkubirali pri 37 stopinjah 20 minut. To Ca2 plus aktivirano hialuronidazo smo obdelali z 250 μL natrijevega hialuronata（1,2 mg/mL）, raztopljenega v 0,1 M acetatnem pufru (pH 3,5) in nato inkubirali v vodni kopeli pri 37 stopinjah 40 minut. 50 μL 0,9 M natrijevega hidroksida in 100 μL 0,2 M natrijevega borata smo dodali reakcijski zmesi in nato inkubirali v vreli vodni kopeli 5 minut. Po ohlajanju na sobno temperaturo smo reakcijski zmesi dodali 250 μL raztopine p-dimetilaminobenzaldehvde （DAMB）. Raztopino DAMB smo pripravili z raztapljanjem 0,25 g DAMB v 21,88 ml 100-odstotne ocetne kisline in 3,12 ml 10N klorovodikove kisline. Kontrolni skupini smo namesto ekstrakta dali 100 μl 5-odstotne vode. Absorbanco smo izmerili pri valovni dolžini 585 nm po 45 minutah. Odstotek inhibicije encima je bil izračunan z uporabo naslednje enačbe:

kjer je kontrola Abs absorbanca testa z uporabo pufra namesto inhibitorja (vzorca), vzorec Abs pa absorbanca ekstraktov vzorca. Taninska kislina se uporablja kot referenčni standard.

3.10. Statistična analiza

Izračunano je bilo povprečje trojne analize vsakega izvlečka in uporabljeno za iskanje srednjih vrednosti in standardnih odstopanj za vsako skupino (n=3). Splošni linearni modeli (GLM) za fiksne faktorje so bili uporabljeni za ovrednotenje glavnih učinkov in dvosmernih interakcij eksperimentalnih dejavnikov (vrste in metode ekstrakcije) na merjene spremenljivke. Poleg tega sta bila uporabljena ANOVA in Tukey-Kramerjev test za identifikacijo pomembnih (str<0.05)differences between="" the="" groups.="" pearson="" correlation="" was="" used="" to="" evaluate="" the="" linear="" relationship="" between="" the="" variables.="" principal="" component="" analysis(pca)was="" used="" to="" detect="" structure="" in="" the="" relationship="" between="" measured="" variables="" and="" experimental="" factors.="" the="" pca="" reduces="" voluminous="" data="" to="" a="" small="" set="" of="" linear="" combinations="" of="" related="" variables="" (i.e.,="" factors)="" based="" on="" patterns="" of="" correlation="" among="" the="" original="" variables.="" the="" resulting="" linear="" attribute="" combinations="" can="" be="" used="" for="" profiling="" specific="" product="" characteristics="" based="" on="" the="" variables="" studied.="" all="" statistical="" analyses="" were="" performed="" using="" ncss="" 2020="" statistical="" software="" (2020)="" (ncss,="" llc.,="" kaysville,="" ut,="">

4. Sklepi

Rezultati tega prvega presejalnega poskusa so pokazali potencial treh islandskih vrst morskih alg z zagotavljanjem učinkovitih koristnih učinkov na več načinov. Zeleni pristop, razvit z uporabo vodnih impulznih električnih polj, je pokazal podobne rezultate kot tradicionalna ekstrakcija z vročo vodo, pri čemer je pokazal več prednosti, kot sta njegova netoplotna narava in krajši čas ekstrakcije (10 min v primerjavi s 45 min). Med tremi vrstami alg je rjava makroalga A.esculenta pokazala najvišjo vsebnost TPC in TFC, ki imata tudi največje antioksidativne sposobnosti. Poleg tega so vodni izvlečki A. esculenta pokazali boljše inhibitorne aktivnosti kot P. palmaria in U. Lactuca proti kolagenazi, elastazi, tirozinaza in hialuronidaza sta najbolj obetavni vrsti morskih alg z odličnimi antiencimskimi aktivnostmi za njuno uporabo pri beljenju kože, proti staranju in zdravju kože. Zanimivo je, da so izvlečki A. esculenta, proizvedeni z metodo PEF, pokazali 91-odstotno inhibicijo kolagenaze, večjo od inhibicijske aktivnosti, prikazane s tradicionalno ekstrakcijo z vročo vodo, in celo večjo od inhibitorja, ki ga zagotavlja komercialni komplet. Skratka, naša predhodna študija kaže, da so izvlečki na osnovi islandskih morskih alg, zlasti izvlečki iz rjave makroalge A.esculenta, proizvedeni z ekstrakcijo s pomočjo vodnega impulznega električnega polja, potencialne funkcionalne sestavine, ki bi jih lahko uporabili kot aktivne spojine za kozmetične in kozmetične formulacije. v bližnji prihodnosti.

Ta članek je izvleček iz Mar. Drugs 2021, 19, 662. https://doi.org/10.3390/md19120662 https://www.mdpi.com/journal/marinedrugs