Izvleček listov Glochidion Littorale izkazuje nevroprotektivne učinke pri Caenorhabditis Elegans prek aktivacije DAF-16

Za več informacij se obrnite na e-poštotina.xiang@wecistanche.com 
Povzetek:Številne rastline, ki se uporabljajo v ljudski medicini na Tajskem in v vzhodni Aziji, pritegnejo zanimanje zaradi visoke bioaktivnosti njihovih izvlečkov. Namen te študije je bil pregledati užitne izvlečke listov 20 rastlin, najdenih na Tajskem, in raziskati potencialne nevroprotektivne učinke najbolj bioaktivnega vzorca. Vsebnost skupnih fenolov in flavonoidov ter aktivnost lovljenja radikalov 2,2-difenil-1-pikrilhidrazil so določili za vseh 20 izvlečkov listov. Na podlagi teh testov je bil ekstrakt listov Glochidionlittorale (GLE), ki je pokazal visoko vrednost pri vseh testiranih parametrih, uporabljen v nadaljnjih poskusih za oceno njegovih učinkov na nevrodegeneracijo priCaenorhabditis elegans. Zdravljenje z GLE je izboljšalo oksidativni stres, ki ga povzroča H2O2-, z zmanjšanjem kopičenja reaktivnih kisikovih vrst in zaščito črvov pred nevrodegeneracijo, ki jo povzroča 1-metil-4-fenilpiridinij. Opaženi nevroprotektivni učinki so lahko povezani z aktivacijo transkripcijskega faktorja DAF-16. Karakterizacija tega ekstrakta z LC-MS je identificirala več fenolnih spojin, vključno z miricetinom, kumstrinom, klorogensko kislino in hesperidinom, ki lahko igrajo ključno vlogo prinevroprotekcija. Ta študija poroča o novi nevroprotektivni aktivnosti GLE, ki se lahko uporablja za razvoj zdravljenja nevrodegenerativnih bolezni, kot je Parkinsonov sindrom.

Ključne besede: Caenorhabditis elegans; ekstrakt listov;nevroprotekcija; antioksidativno delovanje; DAF-16

1. Uvod 

Nevrodegenerativne motnje, vključno z Alzheimerjevo boleznijo in Parkinsonovo boleznijo (PB), predstavljajo velike zdravstvene in finančne skrbi za svetovne zdravstvene organizacije [1]. Čeprav se je človeška življenjska doba v zadnjih nekaj desetletjih v industrializiranih državah povečala, se je povečala tudi razširjenost bolezni, povezanih s staranjem. Pričakuje se, da se bo pojavnost motenj s poznim nastopom, kot so nevrološke motnje, v naslednjih nekaj desetletjih hitro povečala. Zato je ključno spodbujati študije in izvajati klinična preskušanja spojin, ki bi lahko imele potencial za zdravljenje, preprečevanje ali vsaj odložitev pojava nevrodegenerativnih bolezni [2]. Ena od značilnih značilnosti PD je progresivna izguba dopaminergičnih (DA) nevronov v substanti nigra [3]. V patogenezi PD ima povečana proizvodnja reaktivnih kisikovih vrst (ROS) ključno vlogo pri izgubi celic DA [4]. Zato zmanjšanje oksidativnega stresa velja za obetaven terapevtski pristop pri zdravljenju PD [5]. 1-metil-4-fenilpiridinij (MPP plus), ki zavira aktivnost mitohondrijskega kompleksa I, lahko povzroči PD podobne simptome pri ljudeh in živalskih modelih [6].

UporabaCaenorhabditis eleganskot in vivo model zagotavlja določene prednosti pri preučevanju PD [7]. Ogorčica je preprosta, poceni in ima kratek življenjski cikel. Podpira študije, ki vključujejo obsežne analize. Poleg tega je bila nevronska mreža C. elegans popolnoma preslikana. Vsebuje 8 nevronov DA in homologne gene, povezane s PD [8]. Nevrodegeneracijo, ki posnema simptome Parkinsonove bolezni, lahko povzročimo pri C. elegans z zdravljenjem z nevrotoksini, kot je MPP plus [9].
Naravne antioksidativne spojine predstavljajo privlačne vire za razvoj zdravil za zdravljenje nevrodegenerativnih bolezni zaradi nevroprotektivnih učinkov na živalskih modelih in nizke toksičnosti [3]. Znano je, da so polifenoli med najpogostejšimi antioksidanti v človeški prehrani [10]. Ugotovljeno je bilo tudi, da so oksidativni procesi vpleteni v številne patologije, vključno z nevrodegeneracijo, rakom, sladkorno boleznijo, srčno-žilnimi in protivnetnimi boleznimi. Zato bi lahko iskanje polifenolov, ki izkazujejo antioksidativne lastnosti iz naravnih virov, prispevalo k preprečevanju ali zdravljenju teh patologij. Ta študija se je osredotočila na izvlečke iz užitnih listov rastlin, najdenih na Tajskem. Večino sort, ki se na široko gojijo v severni in južni Tajski, so uporabljali kot ljudsko zdravilo proti splošnim poškodbam in boleznim; vendar je malo poročil o njihovih nevroprotektivnih učinkih.
V tej študiji smo najprej pregledali izvlečke užitnih listov 20 rastlin, gojenih na Tajskem, in ocenili njihovo vsebnost fenolov in flavonoidov ter njihovo 2,2-difenil-1- pikrilhidrazil (DPPH) aktivnost lovljenja radikalov. Učinke Glochidion littorale leaf extract (GLE), ki je pokazal visoko vrednost pri vseh testiranih parametrih, smo ocenili na C. elegans z nevrodegeneracijo. Poleg tega so bile preučene možne poti, vključene v nevroprotektivni učinek GLE, skupaj z identifikacijo glavnih sestavin v GLE.
Ker je znano, da ima transkripcijski faktor DAF-16 ključno vlogo pri uravnavanju oksidativnega stresa [11], so domnevali, da lahko GLE cilja na DAF-16. Sev C. elegans CF1038, ki je mutantni sev DAF-16 z izgubo funkcije, je bil uporabljen za določitev stopnje preživetja črvov, zdravljenih z in brez GLE. Pri oksidativnem stresu, ki ga povzroča H2O2-, zdravljenje z GLE ni povečalo stopnje preživetja transgenih črvov (slika 1C).

2. Rezultati

2.1. Preverjanje listov tajske rastline

Surovi izvlečki užitnih listov iz rastlin, gojenih na Tajskem, so bili pripravljeni z ultrazvokom. Ekstrakti listov 20 rastlin so bili pregledani glede njihove vsebnosti fenolov in flavonoidov ter antioksidativne aktivnosti z DPPH testom za lovljenje radikalov. Za nekaj testiranih vzorcev, kot sta Glochidion sphaerogynum in Mentha piperita, je bilo ugotovljeno, da imajo visoko aktivnost lovljenja radikalov z nizko vsebnostjo fenolov in flavonoidov, medtem ko so nekateri vzorci, kot sta Clinacanthus nutans in Ocimum × citriodorum, pokazali nasprotni trend (tabela 1 ). Izvleček listov G. littorale je pokazal visoko aktivnost lovljenja radikalov DPPH ter visoko vsebnost fenolov in flavonoidov. Zato so bile biološke aktivnosti, povezane z G. littorale, dodatno raziskane.

2.2. GLE izboljšana odpornost proti oksidativnemu stresu prek DAF-16 v C. Elegans

Raziskovali so vpliv GLE na preživetje črvov N2 pod oksidativnim stresom. Zdravljenje s H2O2 (5 mM) je povzročilo 75-odstotno smrt v kontrolni skupini, medtem ko je bilo sočasno zdravljenje s 50 µg/mL in višjimi koncentracijami GLE povezano z visoko stopnjo preživetja (slika 1A). Med testiranimi koncentracijami GLE sta bili 100 µg/mL in 200 µg/mL povezani z najvišjo stopnjo preživetja (82,0 odstotka oziroma 88,2 odstotka). Zato sta bili ti dve koncentraciji uporabljeni v naslednjih poskusih. Za ovrednotenje antioksidativnega učinka GLE in vivo so bile znotrajcelične ravni ROS izmerjene v ogorčicah divjega tipa z uporabo 2',7'-diklorodihidroflfluorescein diacetata (H2DCF-DA), dobro znane fluorescenčne sonde za odkrivanje znotrajcelične proizvodnje ROS. Opazili so znatno zmanjšanje intenzivnosti fluorescence v skupinah, zdravljenih z GLE, v primerjavi z nezdravljeno skupino (slika 1B), kar potrjuje antioksidativno lastnost GLE.

2.3. Zdravljenje z GLE je zmanjšalo smrtnost nevrotoksičnosti DA, ki jo povzroča MPP plus prek DAF-16 pri C. Elegans. C. elegans ima 8 nevronov DA [8]. Selektivna degeneracija teh nevronov DA je bila ocenjena po izpostavljenosti MPP plus. Zdravljenje črvov divjega tipa N2 z 0.75 mM MPP plus je povzročilo izjemno zmanjšanje preživetja (slika 2). Vendar pa je sočasno zdravljenje z GLE znatno povečalo preživetje črvov. Raziskovali so učinek zdravljenja z GLE na mutirane črve daf-16. Kot je prikazano na sliki 3 in tabeli 2, zdravljenje z GLE ni povečalo preživetja teh črvov po izpostavljenosti MPP plus v primerjavi s tistim v kontrolni skupini. Ti rezultati kažejo, da je DAF-16 morda potreben za posredovanje nevroprotektivnega učinka GLE pri C. elegans. Nato smo uporabili mutantni sev DAF-2 z izgubo funkcije, CB1370, da bi ugotovili, ali je DAF-2 vključen v opažene nevroprotektivne učinke. Kot je prikazano na sliki 4 in tabeli 3, sta se mediana in največje preživetje znatno povečala pri mutantnih črvih daf-2, zdravljenih z GLE.

2.4. Učinki GLE na lokalizacijo DAF-16

Dokazano je, da je aktivacija DAF-16 regulirana z njegovo kopičenjem v jedru [12]. Nato smo raziskali, ali lahko GLE inducira jedrsko kopičenje DAF-16 v transgenem sevu TJ356, ki izraža fuzijski protein DAF-16::GFP. Rezultati so pokazali, da se je po 48 urah inkubacije s 100 µg/mL GLE intenzivnost zelene fluorescence DAF-16 v jedru znatno povečala v primerjavi z nezdravljeno skupino (slika 5).

2.5. Fitokemična karakterizacija v GLE

LC-MS je bila izvedena za profiliranje fitokemikalij v GLE, njeni rezultati pa so predstavljeni na sliki6. Kromatografske vrhove smo identificirali s primerjavo podatkov MS z bazami podatkov na podlagi iskanja m/z vrednosti vrhov molekularnih ionov v pozitivni način [M plus H]plus. Posledično so miricetin, kumstrin, klorogensko kislino in hesperidin odkrili kot glavne spojine (tabela4).

3. Razprava

Rastlinski izvlečki so bogat vir naravnih bioaktivnih spojin. Številne študije so ocenjevale rastlinske izvlečke, ki se uporabljajo v državah jugovzhodne Azije, vključno s Tajsko, kjer so ti izvlečki sestavine ljudske medicine [13,14]. V tej študiji so pregledali izvlečke 20 užitnih rastlinskih listov s Tajske in G. littorale je bil izbran za nadaljnjo preiskavo, ker je pokazal visoko vsebnost fenola, vsebnost flavonoidov in aktivnost odstranjevanja radikalov. Več študij je preučevalo različne vrste rodu Glochidion [15–19]; vendar je malo raziskav o funkcionalnih lastnostih in sestavinah G. littorale. Naši podatki so pokazali, da GLE ščiti C. elegans pred oksidativnim stresom, ki ga povzroča H2O2-, z zmanjšanjem znotrajceličnega kopičenja ROS. To je lahko posledica visoke vsebnosti fenolnih spojin, kot so flavonoidi, za katere je znano, da imajo močno antioksidativno delovanje [20]. Te ugotovitve so podobne tistim, ki so jih dobili Duangjan et al. (2019), ki je pokazal, da lahko izvlečki listov G. zeylanicum zaščitijo C. elegans pred oksidativnim stresom [21]. Inzulinu/insulinu podobna signalna pot (IIS) uravnava rast, odzivnost na stres in dolgo življenjsko dobo pri C. elegans [22, 23]. Ugotovili smo, da je bil daf-16 null mutant C. elegans, zdravljen z GLE, dovzeten za oksidativni stres. Ta rezultat nakazuje, da je antioksidativni učinek GLE pri zmanjševanju oksidativnega stresa pri ogorčicah morda vključen ne le v aktivnost odstranjevanja radikalov, ampak tudi v regulacijo transkripcijskega faktorja DAF-16.

Proučevali so zaščitne učinke GLE proti toksičnosti, ki jo povzroča MPP plus pri C. elegans. DA nevroni v ogorčicah prevzamejo MPP plus predvsem preko transporterjev DA z visoko afiniteto, kar je podobno opaziti pri sesalcih. Kopičenje MPP plus znotraj nevronov inaktivira mitohondrijski kompleks I dihalne verige in povzroči celično smrt [24–27]. Ugotovljeno je bilo, da je zdravljenje z GLE znatno zmanjšalo smrtnost, povezano z zdravljenjem z MPP plus pri divjih črvih. Pot IIS modulirajo insulinu podobni peptidi prek receptorja DAF-2 v C. elegans [28]. V normalnih pogojih pot IIS zavira fosforilacijo DAF-16 in preprečuje njegovo jedrsko translokacijo. Pri ničelnih mutantih daf-2 je skupina, zdravljena z GLE, preživela dlje kot kontrolna skupina. Nasprotno pa niso opazili nobene razlike v preživetju med kontrolno skupino in skupino, zdravljeno z GLE, ki je vsebovala daf-16 ničelne mutirane črve. Znano je, da znižano regulirano signaliziranje DAF-2 olajša vstop DAF-16 v jedro, kjer lahko poveča izražanje ciljnih genov ter nadzoruje odpornost na stres in dolgoživost [29]. To lahko pojasni, zakaj so mutirani črvi daf-2, zdravljeni z GLE, pokazali relativno višje preživetje. Poleg tega so z uporabo transgenega TJ356 DAF-16::GFPC opazili povečano jedrsko kopičenje DAF-16 v črvih, zdravljenih z GLE. elegans. Kumulativno so ti rezultati pokazali, da je GLE morda pokazal nevroprotektivne učinke prek aktivacije DAF-16.

4.3. Skupna vsebnost fenolov Za določitev skupne vsebnosti fenolov je bila uporabljena metoda Folin-Ciocalteu. Na kratko, 11,4 µL ekstrakta (1 mg/mL) smo zmešali z 227,3 µL 2-odstotne (m/v) raztopine Na2CO3 in nato zmes pustili stati pri sobni temperaturi 2 minuti. Po dodatku 11,4 µL 10-odstotnega (v/v) reagenta Folin-Ciocalteu. Inkubacijo v temi smo izvajali 30 minut. Nato smo izmerili absorbanco pri 750 nm z uporabo bralnika mikroplošč (Nivo 3F Multimode Plate Reader, PerkinElmer, Waltham, MA, ZDA). Galna kislina je bila uporabljena kot standard za umeritveno krivuljo. Celotna vsebnost fenolov je bila izražena kot ekvivalent galne kisline (mg ekvivalenta galne kisline/g rastlinskega ekstrakta).

4.4. Skupna vsebnost flavonoidov Za merjenje skupne vsebnosti flavonoidov je bila uporabljena kolorimetrična metoda aluminijevega klorida. Na kratko, 25 µL ekstrakta (2 mg/mL) smo zmešali s 7,5 µL 5-odstotne (m/v) raztopine NaNO2 in 152,5 µL destilirane vode. Po 6 minutah smo dodali 15 µL 10 odstotkov (w/v) raztopine AlCl3 in pustili stati 5 minut. Nato smo mešanici dodali 50 µL 1 M raztopine NaOH. Nato smo mešanico inkubirali v temi 15 minut in izmerili absorbanco pri 510 nm z uporabo bralnika mikroplošč. Celotna vsebnost flavonoidov je bila izračunana z ustvarjanjem umeritvene krivulje z uporabo kvercetina kot standarda, rezultati pa so bili izraženi kot ekvivalent kvercetina (mg ekvivalenta kvercetina/g rastlinskega ekstrakta). 4.5. Aktivnost lovljenja prostih radikalov Zmogljivost lovljenja prostih radikalov je bila ocenjena s testi DPPH [32]. Na kratko, 100 µL ekstrakta (1 mg/mL) smo zmešali s 100 µL raztopine DPPH. Po 30 minutah smo izmerili absorbanco pri 517 nm z uporabo bralnika mikroplošč. Rezultate smo izrazili kot odstotek inhibicije radikalov DPPH.

4.10. Jedrska lokalizacija DAF-16Transgenski C. elegans TJ356, ki izraža fuzijski protein DAF-16-GFP, je bil uporabljen za preučevanje znotrajcelične porazdelitve DAF-16. Nematode stopnje L1 smo 48 ur tretirali z GLE pri 2{{30}} ◦C. Črve smo nato prenesli na 2-odstotno agarozno blazinico na stekelcu in anestezirali z dodajanjem ene kapljice (približno 20 µL) 25 µM natrijevega azida na agarozno blazinico. Ekspresijo GFP smo pregledali s fluorescenčno mikroskopijo (EVOSflfl; Advanced Microscopy Group, Bothell, WA, ZDA). Povprečno intenzivnost fluorescence DAF-16 v jedrih smo analizirali s programsko opremo Image J (National Institutes of Health, Bethesda, MD, ZDA). 4.11. Fitokemično profiliranje z uporabo LC-MS. Izvleček listov je bil analiziran z uporabo LCMS-8040 (Shimadzu). Masni spektri so bili pridobljeni v območju m/z 50–1000 z uporabo načina skeniranja Q3. Raztopino smo vbrizgali na Inertsil ODS-3 (250 × 2,1 mm, 5 µm, GL Sciences, Tokio, Japonska) pri temperaturi kolone pri 40 ◦C z uporabo gradienta (A) 0,1 odstotka mravljinčne kisline in (B ) acetonitril/voda (80/20), ki vsebuje 0,1 odstotka mravljinčne kisline. Uporabljen je bil naslednji gradient s hitrostjo pretoka 0,2 ml/min: 0–100 odstotkov B (0–45 minut), 100 odstotkov B (45–50 minut) in 0 odstotkov B (50–60 minut). Spojine so bile domnevno identificirane s primerjanjem eksperimentalnih vrednosti m/z s knjižnico teoretično izračunanih vrednosti m/z v zbirkah podatkov, vključno z zbirko podatkov o človeškem metabolomu in zbirko podatkov METLIN. 4.12. Podatki statistične analize so bili izraženi kot povprečje ± standardni odklon za vsako skupino. Pomembna razlika med obema skupinama je bila ocenjena s t-testom, medtem ko je bila razlika med tremi in več skupinami ocenjena z enosmerno ANOVA, ki ji je sledil Tukeyjev post-hoc primerjalni test. Statistična značilnost je bila nastavljena na p < 0,001="" in="" p="">< 0,0001.="" za="" teste="" življenjske="" dobe="" je="" bilo="" preživetje="" c.="" elegans="" narisano="" s="" kaplan–meierjevimi="" krivuljami="" preživetja="" in="" analizirano="" s="" testi="" log-rank="" z="" uporabo="" programske="" opreme="" graphpad="" prism="" (različica="" 9.01;="" programska="" oprema="" graphpad,="" san="" diego,="" ca,="">

Abdel Fawaz Bagoudou 1, Yifeng Zheng 2, Masahiro Nakabayashi 2, Saroat Rawdkuen 3, Hyun-Young Park 4, Dhiraj A. Vattem 4,5, Kenji Sato 6, Soichiro Nakamura 1 in Shigeru Katayama 1,2,*

1 Visoka šola za medicino, znanost in tehnologijo, Univerza Shinshu, 8304 Minamiminowa, Kamiina, Nagano 399-4598, Japonska;

2Inštitut za biomedicinske znanosti, Univerza Shinshu, 8304 Minamiminowa, Kamiina, Nagano 399-4598, Japonska;

3 School of Agro-Industry, Mae Fah Luang University, 333 Moo 1, Thasud, Muang, Chiang Rai 57100, Tajska;saroat@mfu.ac.th

4 Edison Biotechnology Institute, Konneker Research Laboratories, Ohio University, Athens, OH 45701, ZDA;

5 College of Health Sciences & Professions, Ohio University, Athens, OH 45701, ZDA

6 Podiplomska šola za kmetijstvo, Kyoto University, Kyoto 606-8502, Japonska;

Avtorski prispevki:

Avtorski prispevki: Konceptualizacija, SR, DAV in SK; preiskava, AFB, YZ, MN, SR, H.-YP, DAV in KS; pisanje—priprava izvirnega osnutka, AFB; pisanje—pregledovanje in urejanje, SK; nadzor, SN Vsi avtorji so prebrali in se strinjajo z objavljeno verzijo rokopisa.
Financiranje: Ta raziskava ni prejela zunanjega financiranja.
Izjava institucionalnega nadzornega odbora: Ni primerno.
Izjava o informiranem soglasju: Ni primerno.
Izjava o dostopnosti podatkov: Podatki so na voljo pri ustreznem avtorju na razumno zahtevo.
Nasprotje interesov: Avtorji izjavljajo, da ni navzkrižja interesov.
Razpoložljivost vzorcev: Vzorci spojin niso na voljo pri avtorjih

Reference

1 Pohl, F.; Lin, PKT Potencialna uporaba rastlinskih naravnih proizvodov in rastlinskih izvlečkov z antioksidativnimi lastnostmi za preprečevanje/zdravljenje nevrodegenerativnih bolezni: in vitro, in vivo in klinična preskušanja. Molecules 2018, 23, 3283. [CrossRef] [PubMed]

2. Kim, GH; Kim, JE; Rhie, SJ; Yoon, S. Vloga oksidativnega stresa pri nevrodegenerativnih boleznih. Exp. Neurobiol. 2015, 24, 325–340. [CrossRef] [PubMed]

3. Lu, X.-l.; Yao, X.-l.; Liu, Z.; Zhang, H.; Li, W.; Li, Z.; Wang, G.-L.; Pang, J.; Lin, Y.; Xu, Z. Zaščitni učinki ksiloketala B proti nevrotoksičnosti, ki jo povzroča MPP plus, v celicah Caenorhabditis elegans in PC12. Brain Res. 2010, 1332, 110–119. [CrossRef]

4. Trimer, PA; Bennett, JP, Jr. Kibridni model občasne Parkinsonove bolezni. Exp. Neurol. 2009, 218, 320–325. [CrossRef]

5. Cheon, S.-M.; Jang, I.; Lee, MH; Kim, DK; Jeon, H.; Cha, DS Sorbus alnifolia ščiti dopaminergično nevrodegeneracijo pri Caenorhabditis elegans. Pharm. Biol. 2016, 55, 481–486. [CrossRef]

6. Schmidt, N.; Ferger, B. Nevrokemične ugotovitve v MPTP modelu Parkinsonove bolezni. J. Neural Transm. 2001, 108, 1263–1282. [CrossRef] [PubMed]

7. Harrington, A.; Yacoubian, TA; Slone, SR; Caldwell, K.; Caldwell, G. Funkcionalna analiza VPS41-posredovane nevroprotekcije pri Caenorhabditis elegans in modelih Parkinsonove bolezni pri sesalcih. J. Neurosci. 2012, 32, 2142–2153. [CrossRef] [PubMed]

8. Fu, R.-H.; Harn, H.-J.; Liu, S.-P.; Chen, C.-S.; Chang, W.-L.; Chen, Y.-M.; Huang, J.-E.; Li, R.-J.; Tsai, S.-Y.; Hung, H.-S.; et al. n-butilideneftalid ščiti pred degeneracijo dopaminergičnih nevronov in kopičenjem -sinukleina v Caenorhabditis elegans modelih Parkinsonove bolezni. PLOS ONE 2014, 9, e85305. [CrossRef]

9. Jadiya, P.; Khan, A.; Sammi, SR; Kaur, S.; Mir, SS; Nazir, A. Protiparkinsonski učinki Bacopa monnieri: Vpogled v transgene in farmakološke Caenorhabditis elegans modele Parkinsonove bolezni. Biochem. Biophys. Res. Komun. 2011, 413, 605–610. [CrossRef] 10. Andrade, JMDM; Fasolo, D. Polifenolni antioksidanti iz naravnih virov in prispevek k krepitvi zdravja. V Polifenoli v zdravju in boleznih ljudi; Elsevier BV: Amsterdam, Nizozemska, 2014; strani 253–265.

11. Hsu, A.-L.; Murphy, CT; Kenyon, C. Regulacija staranja in s starostjo povezanih bolezni z DAF-16 in faktorjem toplotnega šoka. Znanost 2003, 300, 1142–1145. [CrossRef]

12. Henderson, ST; Johnson, TE daf-16 združuje razvojne in okoljske vložke za posredovanje staranja pri ogorčici Caenorhabditis elegans. Curr. Biol. 2001, 11, 1975–1980. [CrossRef]

13. Hutadilok-Towatana, N.; Chaiyamutti, P.; Panthong, K.; Mahabusarakam, W.; Rukachaisirikul, V. Antioksidativne in aktivnosti odstranjevanja prostih radikalov nekaterih rastlin, ki se uporabljajo v tajski ljudski medicini. Pharm. Biol. 2006, 44, 221–228. [CrossRef]

14. Stewart, P.; Boonsiri, P.; Puthong, S.; Rojpibulstit, P. Antioksidativna aktivnost in ultrastrukturne spremembe v celičnih linijah raka želodca, ki jih povzročajo severovzhodni tajski užitni ljudski rastlinski izvlečki. BMC dopolnilo. Altern. Med. 2013, 13, 60. [CrossRef]

15. Hui, W.; Lee, W.; Ng, K.; Chan, C. Pojav triterpenoidov in steroidov v treh vrstah Glochidion. Fitokemija 1970, 9, 1099–1102. [CrossRef]

16. Takeda, Y.; Mima, C.; Masuda, T.; Hirata, E.; Takushi, A.; Otsuka, H. Glochidioboside, glukozid (7S, 8R) -dihydrodeh ydrodiconiferyl alkohola iz listov glochidia obovatum. Fitokemija 1998, 49, 2137–2139. [CrossRef]

17. Zhang, X.; Chen, J.; Gao, K. Kemične sestavine iz Glochidion wrightii Benth. Biochem. Syst. Ecol. 2012, 45, 7–11. [CrossRef]

18. Tian, ​​J.-M.; Fu, X.-Y.; Zhang, Q.; On, H.-P.; Gao, J.-M.; Hao, X.-J. Kemične sestavine iz Glochidion assamicum. Biochem. Syst. Ecol. 2013, 48, 288–292. [CrossRef]

19. Kongkachuichai, R.; Charoensiri, R.; Yakoh, K.; Kringkasemsee, A.; Insung, P. Vrednost hranil in vsebnost antioksidantov v avtohtoni zelenjavi iz južne Tajske. Food Chem. 2015, 173, 838–846. [CrossRef]

20. Pietta, P.-G. Flavonoidi kot antioksidanti. J. Nat. Prod. 2000, 63, 1035–1042. [CrossRef] [PubMed]

21. Duangjan, C.; Rangsinth, P.; Gu, X.; Zhang, S.; Wink, M.; Tencomnao, T. Glochidion zeylanicum izvlečki listov kažejo lastnosti podaljševanja življenjske dobe in odpornosti na oksidativni stres pri Caenorhabditis elegans prek signalnih poti DAF-16/FoxO in SKN-1/Nrf-2. Fitomedicina 2019, 64, 153061. [CrossRef]

22. Jensen, VL; Gallo, M.; Riddle, DL Cilji DAF-16, vključeni v dolgoživost in nastanek dauerja pri odraslih Caenorhabditis elegans. Exp. Gerontol. 2006, 41, 922–927. [CrossRef] [PubMed]

23. Daitoku, H.; Fukamizu, A. Transkripcijski faktorji FOXO v regulativnih omrežjih dolgoživosti. J. Biochem. 2007, 141, 769–774. [CrossRef]

24. Lakso, M.; Vartiainen, S.; Moilanen, A.-M.; Sirviö, J.; Thomas, JH; Nass, R.; Blakely, RD; Wong, G. Dopaminergična nevronska izguba in motorični primanjkljaji pri Caenorhabditis elegans, ki prekomerno izražajo človeški -sinuklein. J. Neurochem. 2004, 86, 165–172. [CrossRef] [PubMed]

25. Nass, R.; Dvorana, DH; Miller, DM; Blakely, RD Degeneracija dopaminskih nevronov pri Caenorhabditis elegans, povzročena z nevrotoksinom. Proc. Natl. Akad. Sci. ZDA 2002, 99, 3264–3269. [CrossRef]

26. Wang, Y.-M.; Pu, P.; Le, W.-D. Izčrpavanje ATP je glavni vzrok smrti nevronov, povzročene z MPP in dopaminom, in smrtnosti črvov pri -sinuklein transgeni C. elegans. Neurosci. Bik. 2007, 23, 329–335. [CrossRef]

27. Braungart, E.; Gerlach, M.; Riederer, P.; Baumeister, R.; Hoener, M. Caenorhabditis elegans MPP plus model Parkinsonove bolezni za visoko zmogljive preglede zdravil. Nevrodegener. Dis. 2004, 1, 175–183. [CrossRef]

28. Panowski, SH; Dillin, A. Signali mladosti: Endokrina regulacija staranja pri Caenorhabditis elegans. Trendi Endocrinol. Metab. 2009, 20, 259–264. [CrossRef]