Izvleček Herba Cistanche poveča mitohondrijsko generiranje ATP v srcih podgan in celicah H9c2
Mar 04, 2022
Kontakt: Audrey Huaudrey.hu@wecistanche.com
Hoi Yan Leung & Kam Ming Ko
Za citiranje tega članka: Hoi Yan Leung & Kam Ming Ko (2008) Herba Cistanche Extract Enhances Mitochondrial ATP Generation in Rat Hearts and H9c2 Cells, Pharmaceutical Biology, 46:6, 418-424, DOI: 10.1080/13880200802055883
Povzetek
Da bi raziskali farmakološko osnovo "Yang-poživljajočega" delovanja Herba Cistanche [posušena cela rastlina Cistanche deserticola YC Ma (Orobanchaceae)] v kitajski medicini, so bili učinki metanolnega izvlečka Herba Cistanche na mitohondrijsko sposobnost generiranja ATP pregledali z uporabo ex vivo modela podganjega srca in in situ celičnega testa H9c2. Zdravljenje z izvlečkom Herba Cistanche je pri podganah povečalo miokardno mitohondrijsko sposobnost generiranja ATP na način, ki je odvisen od odmerka, kar je bilo ocenjeno z meritvami in vitro. Stimulacija zmogljivosti za ustvarjanje ATP je bila povezana z vzporednim izboljšanjem transporta mitohondrijskih elektronov, ki ga podpira piruvat, ne pa tudi sukcinat. Zdravljenje z zdravilom Herba Cistanche je povečalo tudi aktivnosti miokardialnih mitohondrijskih kompleksov I in kompleksa III, pri čemer je bil obseg stimulacije aktivnosti kompleksa I večji. Zdravljenje z zdravilom Herba Cistanche je povzročilo od odmerka in časa odvisno povečanje zmogljivosti mitohondrijskega generiranja ATP v celicah H9c2. Rezultati kažejo, da lahko zdravljenje z zdravilom Herba Cistanche poveča nastajanje mitohondrijskega ATP v srcih podgan ex vivo in celicah H9c2 in situ, po možnosti s povečanjem oksidativne fosforilacije.
Ključne besede:ATP, Cistanche deserticola, celice H9c2, srce, mitohondriji.
Uvod
"Yang poživljanje", ki uteleša splošno izboljšanje delovanja telesa v kitajski medicini, vključuje uporabo energije pri poganjanju različnih biokemičnih procesov. V zvezi s tem ATP, ki je univerzalna valuta energije pri delovanju celic, nastaja predvsem z oksidativno fosforilacijo v mitohondrijih. Domnevali smo, da imajo "Yang poživljajoča" zelišča sposobnost povečanja mitohondrijske generacijske zmogljivosti ATP (Ko et al., 2004). To potrjuje naša nedavna ugotovitev, da bi kitajska tonificirajoča zelišča, ki poživljajo Jang, ne pa hranijo Jin, lahko povečala zmogljivost miokardnega ustvarjanja ATP v mišjih srcih ex vivo (Ko et al., 2006). Herba Cistanche, posušena cela parazitska rastlina (brez cvetov) Cistanche deserticola YC Ma (Orobanchaceae), je v tradicionalni kitajski medicini uvrščena med »jang-poživljajoče« tonificirajoče zelišče (Chen, 1998) in se zdi najbolj priljubljena. sestavina v številnih kitajskih patentnih formulacijah, ki se uporabljajo za poživljanje Janga. Na Kitajskem in Japonskem se Herba Cistanche pogosto uporablja za zdravljenje številnih simptomov pomanjkanja Yang. Farmakološke študije so pokazale, da lahko Herba Cistanche lovi proste radikale (Xiong et al., 1996), ima pomirjevalne učinke (Lu, 1998), preprečuje staranje (Lee et al., 1990), deluje antinociceptivno in protivnetno (Lin et al., 2002). ) in izboljšanje imunske funkcije (Wu et al., 2005). Glavna aktivna sestavina Herba Cistanche so feniletanoidni glikozidi (Ouyang et al., 2003), za katere je bilo ugotovljeno, da imajo antibakterijske, protistresne in antioksidativne lastnosti (Xiong et al., 1998), pa tudi anti-apoptotične učinke na gojene nevronov (Tian & Pu, 2005). V trenutni študiji, da bi raziskali farmakološko osnovo Yang-poživljajočega delovanja Herba Cistanche, so preučevali učinke zdravljenja z Herbo Cistanche na zmogljivost generiranja ATP v mitohondrijih, izoliranih iz src podgan ex vivo in gojenih kardiomiocitov H9c2 in situ. Da bi raziskali biokemični mehanizem, ki je podlaga za povečanje proizvodnje ATP, so bili učinki zdravljenja z Herbo Cistanche na prenos mitohondrijskih elektronov in kompleksne aktivnosti I–IV preučeni tudi v srcih podgan.
Izvleček Cistanche deserticola
Materiali in metode
Kemikalije, celične kulture in rastlinski materiali ATP, ADP in 3-[4,5-dimetiltiozo-2-il]-2,5-difeniltetrazolijev bromid ( MTT) so bili kupljeni pri Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, ZDA). Raztopina luciferaze (ATPlite) je bila pridobljena pri PerkinElmer (Boston, MA, ZDA). Dulbeccov spremenjeni Eagleov medij (DMEM) in fetalni goveji serum (FBS) sta bila kupljena pri GIBCO BRL Life Technologies (Grand Island, NY, ZDA). Celična linija H9c2 je bila kupljena pri ATTC (Rockville, MD, ZDA). Herba Cistanche je dobavil lokalni trgovec z zelišči (Lee Hoong Kee). Pristnost zelišča je potrdil dobavitelj, vzorec vavčerja (HKUSTY00301) pa je bil deponiran na Oddelku za biokemijo Hongkonške univerze za znanost in tehnologijo (HKUST).
Ekstrakcija zelišč
Herba Cistanche (100 g) smo narezali na majhne koščke in nato ekstrahirali s segrevanjem pod refluksom v 300 ml metanola.
pri 65°C 2 uri. Postopek smo dvakrat ponovili. Zbrani ekstrakt smo posušili z uparjenjem topila pod znižanim tlakom in dobili metanolni ekstrakt Herba Cistanche z dobitkom 39 odstotkov (m/m). Kemijska analiza je pokazala, da je metanolni izvleček Herba Cistanche vseboval skupne saponine, skupne flavonoide, skupne lignane in polisaharide v koncentracijah 1,62 odstotka (m/m), 0.08 odstotkov, 0,15 odstotkov oziroma 75,6 odstotka.
Nega živali
Odrasle samce podgan Sprague-Dawley (8–10 tednov; 250–300 g) so vzdrževali v 12--urnem ciklu temno/svetlo v prostoru z nadzorovano zračnostjo/vlažnostjo pri približno 22 °C in dovoljevali hrano in vodo ad libitum v zavodih za varstvo živali
na HKUST. Eksperimentalne protokole je odobril Odbor za raziskovalno prakso pri HKUST.
Zdravljenje z zdravili
Živali so bile naključno razdeljene v skupine, v vsaki je bilo pet do šest živali. V zdravljenih skupinah so podgane intragastrično dobivale metanolni izvleček Herba Cistanche (raztopljen/suspendiran v vodi) v naraščajočih dnevnih odmerkih ({{0}}.031–0,5 g/kg) 3 dni. Kontrolne živali so prejemale samo vodo. Štiriindvajset ur po zadnjem odmerku je bilo srce pridobljeno iz živali, anesteziranih s fenobarbitalom, in izpostavljeno biokemični analizi.
Priprava mitohondrijskih frakcij in merjenje zmogljivosti generiranja ATP (ATP-GC) ex vivo
Vzorce srčnega levega prekata smo izrezali in splaknili z ledeno mrzlim izotoničnim pufrom (0.32 M saharoza, 1 mM EDTA, 50 mM Tris/HCl, pH 7,4). Srčne mitohondrijske frakcije smo pripravili z diferencialnim centrifugiranjem v izotoničnem pufru pri 4 °C. 10-odstotni (m/v) srčni homogenat smo pripravili s homogenizacijo mletega ventrikularnega tkiva s homogenizatorjem iz teflonskega stekla pri 4000 obratih na minuto za 20–30 popolnih gibov. Homogenat centrifugiramo pri 600 g 10 minut, da odstranimo jedra in celične ostanke. Supernatant smo nato centrifugirali pri 8000 g 30 minut, da smo usedli mitohondrije (Evan, 1992). Pelete smo resuspendirali v 1 mL izotoničnega pufra in rekonstituirali mitohondrijske frakcije. Mitohondrijski ATP-GC nezdravljenih živali smo merili po metodi Leunga et al. (2005).
Merjenje transporta mitohondrijskih elektronov
Merjenje transporta elektronov v izoliranih mitohondrijih, ki temelji na redukciji MTT, je bilo izvedeno, kot so opisali Cohen et al. (1997). Mitohondrije smo pripravili pri koncentraciji beljakovin 1 mg/mL z inkubacijskim pufrom (250 mM saharoza, 50 mM HEPES, 10 mM KH2PO4, 2 mM MgCl2, 1 mM EGTA, pH 7,4) . Alikvot (40 µL) mitohondrijev smo zmešali s 100 µL vsakega od 15 mM piruvata ali 0,5 mM sukcinata in 0,42 mg/mL MTT. Reakcijsko zmes smo inkubirali pri 37 °C 10 minut z nežnim stresanjem. Po inkubaciji smo reakcijsko mešanico zaključili z dodatkom 100 µL pufra za lizo (10 odstotkov, m/v, natrijevega dodecil sulfata in 45 odstotkov dimetilformamida, naravnanega na pH 4,7 z ledocetno kislino). Po 5-minutnem stanju smo odčitali absorbanco reakcijske mešanice z bralnikom mikrotitrskih plošč (Bio-Rad, Hercules, CA, ZDA) in poročali kot razliko med 570 nm in 630 nm. Podatki so bili izraženi kot odstotek povprečne vrednosti kontrolne (tj. Herba Cistanche–nezdravljena) skupine.
Kultura celic
Celice H9c2, stalna celična linija, pridobljena iz srčnih mioblasti (Hescheler et al., 1991), so bile gojene kot enoplastne v DMEM, dopolnjenem z 10 odstotki (v/v) FBS. Medij je vseboval glukozo (4,5 g/L) in glutamin (4,5 mM), dopolnjen z NaHCO3 (17 mM), penicilinom (100 IE/mL) in streptomicinom (100 µg/mL). Vse celice so bile gojene v atmosferi 5 odstotkov (v/v) CO2 v zraku pri 37 °C. Gojišče smo vsake 2 ali 3 dni zamenjali s svežim. Zalogo celic smo gojili v 75 cm2 kulturni bučki in razdelili pred sotočjem v subkultivacijskem razmerju 1:10. Za test ATP-GC smo celice H9c2 zasejali z gostoto 2.5 104 celic/vdolbino v 24-ploščo z vdolbinicami. Po pritrditvi celic smo v medij nanesli izvleček Herba Cistanche (raztopljen v fiziološki raztopini s fosfatnim pufrom; PBS) in celice inkubirali daljša obdobja (2–16 h). Kontrolnim (neobdelanim) celicam smo dali samo PBS.
Merjenje ATP-GC in situ
Po navedenih obdobjih inkubacije z ekstraktom Herba Cistanche pri naraščajočih koncentracijah (5{{10}}–300 µg/mL) je bil izveden test ATP-GC. Medij smo odsesali in celice obdelali z digitoninom (50 µg/mL) v inkubacijskem pufru (120 mM KCl, 5 mM KH2PO4, 2 mM EGTA, 10 mM HEPES, 0,1 mM MgCl2, 0,5 % BSA, pH 7,4) 3 časa. min pri 37◦C. Po aspiraciji digitonina smo celicam dodali glutamat (5 mM), malat (5 mM) in ADP (60 µM) za mitohondrijsko generiranje ATP, ki smo ga spremljali v naraščajočih časovnih intervalih v razponu od 0 do 15 minut. Reakcijo smo zaključili z dodatkom 60 µL perklorne kisline (30 odstotkov, w/v) in reakcijske zmesi nato centrifugirali pri 600 g 10 minut pri 4 °C. Alikvot (120 µL) supernatanta smo zmešali z 90 µL 1,4 M KHCO3 za nevtralizacijo. Mešanice smo ponovno centrifugirali pri 600 g pri 4 °C in v supernatantih smo izmerili vsebnost ATP, kot je opisano prej. ATP-GC neobdelanih celic je bil ocenjen z izračunom površine pod krivuljo grafa (AUC1), ki prikazuje ustvarjen ATP (nmol/mg proteina) glede na čas (0–15 min) in izraža v poljubnih enotah. Za celice, obdelane s Herba Cistanche, so bile vrednosti AUC1 naraščajočih inkubacijskih časov (3, 5, 7, 10 in 15 min) normalizirane na ustrezno srednjo kontrolno vrednost iz netretiranih vzorcev in izražene kot odstotek kontrole. Nato je bila izračunana površina pod krivuljo (AUC2) grafa, ki prikazuje odstotne kontrolne vrednosti glede na inkubacijski čas (3–15 min) in izražena v poljubnih enotah. Podatki skupin, zdravljenih z Herba Cistanche, so bili izraženi kot odstotek kontrole iz enačbe:
[AUC2(HerbaCistanche − zdravljena)/AUC2(nezdravljena)]×100 odstotkov.
Meritve aktivnosti kompleksa I–IV in citrat sintaze
Aktivnosti kompleksa I–III mitohondrijske transportne verige elektronov (ETC) so bile izmerjene s spektrofotometričnimi metodami z uporabo substratov, specifičnih za kompleks (NADH za kompleks I, sukcinat za kompleks II in decilubikinol za kompleks III), kot je opisano (Grad & Lemire, 2004; Hsu et. sod., 2005; Mark in sod., 2001). Aktivnost kompleksa IV je bila izmerjena z uporabo kompleta za testiranje citokrom c-oksidaze podjetja Sigma. Aktivnost mitohondrijske citrat sintaze smo merili po metodi Srere (1969).
Analiza beljakovin
Koncentracije beljakovin mitohondrijskih frakcij in celičnih lizatov so bile določene s kompletom za testiranje beljakovin BioRad z uporabo govejega serumskega albumina kot standarda ({{0}}.038–0.600 mg/mL).
Statistična analiza
Vsi podatki so bili izraženi kot povprečna standardna napaka povprečja (SEM). Analizirani so bili z enosmerno analizo variance (ANOVA). Post hoc večkratne primerjave so bile narejene z LSD. vrednosti P<0.05 were="" regarded="" as="" statistically="">
Rezultati
Učinki zdravljenja z zdravilom Herba Cistanche na miokardni mitohondrijski ATP-GC pri podganah
Kot je prikazano na sliki 1, je zdravljenje z izvlečkom Herba Cistanche v odmerkih do 0,5 g/kg povečalo miokardni mitohondrijski ATP-GC pri podganah na način, odvisen od odmerka, pri čemer je bila stopnja stimulacije 89 odstotkov v odmerku 0.5 g/kg.
Učinki zdravljenja z zdravilom Herba Cistanche na transport mitohondrijskih elektronov v srcih podgan
Obseg transporta elektronov v izoliranih mitohondrijih je bil izmerjen s spremljanjem zmanjšanja MTT. Substrat, uporabljen za analizo, je bil piruvat ali sukcinat. Kot je prikazano na sliki 2a, je zdravljenje z zdravilom Herba Cistanche odvisno od odmerka povečalo obseg mitohondrijskega prenosa elektronov, ki ga podpira piruvat v podganjih srcih, pri čemer je bila optimalna stimulacija opazna pri odmerkih 0,5 g/kg. Vendar pa v srcih podgan, zdravljenih z Herba Cistanche, niso odkrili nobenih pomembnih sprememb v obsegu transporta mitohondrijskega elektrona, ki ga podpira sukcinat (slika 2b).
Učinki zdravljenja Herba Cistanche na aktivnosti mitohondrijskega respiratornega kompleksa v srcih podgan
Kot je prikazano na sliki 3, je zdravljenje z zdravilom Herba Cistanche pri optimalnem odmerku 0,5 g/kg znatno povečalo aktivnosti kompleksa I (34 odstotkov) in kompleksa III (22 odstotkov) v srcih podgan. Zdravljenje z Herba Cistanche ni vplivalo na aktivnost citrat sintaze, ključnega encima za cikel trikarboksilne kisline (slika 3). Western blot analiza je pokazala, da zdravljenje z Herba Cistanche ni vplivalo na ravni beljakovin kompleksa I in III (podatki niso prikazani).
Časovni potek sprememb, ki jih povzroča Herba Cistanche v mitohondrijskem ATP-GC v celicah H9c2
Spremembe v ATP-GC so bile preučene v celicah, obdelanih s Herba Cistanche (50 in 150 µg/mL), po 2 do 16 urah inkubacije. Kot je prikazano na sliki 4, je zdravljenje z zdravilom Herba Cistanche povečalo ATP-GC na časovno odvisen in dvofazen način v celicah H9c2, z največjo stimulacijo (44 odstotkov oziroma 89 odstotkov), ki je bila opazna po 8 urah inkubacije za obe koncentraciji zdravila. ATP-GC se je nato vrnil na neobdelane kontrolne vrednosti, ko je bil čas inkubacije podaljšan na 16 ur. Do zgodnejšega začetka stimulacije je prišlo, ko so bile celice obdelane z višjo koncentracijo (150 µg/mL) izvlečka Herba Cistanche.
Odvisnost od koncentracije Herba
Cistanche inducirano povečanje ATP-GC v celicah H9c2
Celice H9c2 so bile 4 ure obdelane z naraščajočimi koncentracijami (50–300 µg/mL) izvlečka Herba Cistanche. Slika 5 prikazuje, da je zdravljenje z zdravilom Herba Cistanche povečalo ATP-GC na način, ki je odvisen od koncentracije, pri čemer je bila največja stimulacija (82 odstotkov) opazna pri koncentraciji 300 µg/mL.
Izvleček Cistanche poveča proizvodnjo ATP
Diskusija
Povečana regulacija celičnih aktivnosti za izboljšanje telesne funkcije, kot so mišična kontrakcija in imunski odzivi z Yang poživitvijo, zahteva povečanje porabe ATP, ki je nato podprta z mitohondrijsko oksidativno fosforilacijo. V trenutni študiji je bilo ugotovljeno, da zdravljenje z zdravilom Herba Cistanche odvisno od odmerka poveča sposobnost generiranja mitohondrijskega ATP ex vivo v srcih podgan. Ta ugotovitev je skladna z našo prejšnjo ugotovitvijo, da je med kitajskimi tonificirajočimi zelišči, ki poživljajo Yang, zdravljenje z Herba Cistanche povzročilo relativno večji obseg stimulacije mitohondrijske generacije ATP v mišjih srcih (Ko et al., 2006). Povečanje mitohondrijske generacije ATP je bilo vzporedno s povečanjem transporta mitohondrijskih elektronov, ki ga poganja piruvat, ne pa sukcinat, kot je ocenjeno z zmanjšanjem MTT. Rezultati, dobljeni s kinetičnimi meritvami mitohondrijskega kompleksa I–IV, so pokazali, da so bile aktivnosti obeh kompleksov I in III povečane v srcih, zdravljenih z Herba Cistanche, pri čemer je bil obseg stimulacije aktivnosti kompleksa I večji kot pri kompleksu III. Ker aktivnost citrat sintaze, ključnega encima cikla trikarboksilne kisline, ni bila prizadeta, je mogoče povečanje mitohondrijske tvorbe ATP z zdravljenjem z zdravilom Herba Cistanche pripisati predvsem stimulaciji aktivnosti kompleksa I in/ali III. Večino potreb srca po ATP izpolnjujejo mitohondriji, ki so skoraj v celoti odvisni od oksidacije maščobne kisline in glukoze, povezane s kompleksom I (NADH) (Stanley et al., 1997; Taegtmeyer, 1998). Kompleks I, ki kaže manjšo aktivnost kot drugi respiratorni kompleksi, velja za pomemben dejavnik pri regulaciji oksidativne fosforilacije. Tako ima lahko stimulacija ali inhibicija aktivnosti kompleksa I velik vpliv na srčno energijo. Čeprav Western blot analiza ni razkrila nobenih sprememb v ravni beljakovin teh dveh kompleksov (podatki niso prikazani), je lahko povečana encimska aktivnost posledica sprememb statusa proteinskih tiolov in/ali lipidnega okolja (Davey et al., 1998; Paradies et al., 2004).
Izvleček Herba Cistanchebi lahko povzročil učinek povečanja proizvodnje ATP v gojenih celicah H9c2 in situ. Relativno zgodnji začetek stimulativnega delovanja, ki ga povzroči zdravljenje z zdravilom Herba Cistanche, zlasti pri visokih odmerkih, je skladen z opažanjem iz študij ex vivo, ki so pokazale, da je malo verjetno, da je sinteza proteinov kompleksa I in III vključena v povečanje proizvodnje ATP. ukrepanje. Dokaz povečanja nastajanja ATP in situ, ki ga povzroči Herba Cistanche, podpira idejo, da lahko povečanje zmožnosti nastajanja ATP v mitohondrijih, ocenjeno z meritvijo ex vivo, zgolj odraža vzporedni učinek, ki ga povzroči zdravljenje z zdravili in vivo. Merjenje nastajanja ATP v izoliranih mitohondrijih in kultiviranih celicah z uporabo malata in glutamata kot substrata je posredno merilo mitohondrijskega dihanja v stanju 3 (Chen et al., 2003). Z uporabo istega bioluminiscenčnega testa ATP se je stopnja mitohondrijskega nastajanja ATP v različnih tkivih nezdravljenih podgan, kot so prej poročali v našem laboratoriju (Leung et al., 2005), dobro ujemala z nedavno objavljenimi podatki (Drew & Leeuwenburgh, 2003). ). Zmogljivost generiranja ATP je bila ocenjena z dvostopenjsko integracijo časovno odvisnih sprememb ravni ATP v testih ex vivo in in situ. Opaženi stimulativni učinek, ki ga povzroči zdravilo, je bil zato povečan zaradi primerjave. Povečanje zmogljivosti generiranja ATP z zdravljenjem z zdravilom Herba Cistanche v mitohondrijih srca podgan ex vivo je potekalo vzporedno s stimulacijo generiranja ATP v celicah H9c2 in situ. Glede na prisotnost aktivnosti za povečanje proizvodnje ATP v kitajskih tonificirajočih zeliščih, ki poživljajo Yang, vključno z Herbo Cistanche, v mišjih srcih ex vivo (Ko et al., 2006), rezultati kažejo, da je merjenje zmogljivosti za ustvarjanje ATP v celicah H9c2 v situ se lahko uporablja kot farmakološki test za kitajska tonificirajoča zelišča ali zeliščno formulo, ki poživlja Jang.
Skratka, zdravljenje z izvlečkom Herba Cistanche bi lahko povečalo sposobnost generiranja mitohondrijskega ATP v srcih podgan ex vivo in v celicah H9c2 in situ. Ugotovitve podpirajo našo domnevo, da farmakološka osnova Yang-invigoration vključuje izboljšanje telesnih funkcij s spodbujanjem mitohondrijske proizvodnje ATP.
Izvleček Herba Cistanche poveča sposobnost mitohondrijskega ustvarjanja ATP
Reference
Chen P (1998): Krepilna zelišča. Napredna serija TCM. Peking, Kitajska, Science Press, str. 233–320.
Chen Q, Vazquez EJ, Moghaddas S, Hoppel CL, Lesnefsky EJ (2003): Proizvodnja reaktivnih kisikovih vrst v mitohondrijih: osrednja vloga kompleksa III. J Biol Chem 278: 36027–36031.
Cohen G, Farooqui R, Kesler N (1997): Parkinsonova bolezen: Nova povezava med monoaminooksidazo in mitohondrijskim pretokom elektronov. Proc Natl Acad Sci USA 94: 4890–4894.
Davey GP, Peuchen S, Clark JB (1998): Energetski pragovi v možganskih mitohondrijih. Možna vpletenost v nevrodegeneracijo. J Biol Chem 273: 12753–12757.
Drew B, Leeuwenburgh C (2003): Metoda za merjenje proizvodnje ATP v izoliranih mitohondrijih: proizvodnja ATP v mitohondrijih možganov in jeter podgan Fischer-344 z omejitvijo starosti in kalorij. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol 285: R1259–R1267.
Evan WH (1992): Izolacija in karakterizacija membran in celičnih organelov. V: Rickwood D, ur. Preparativno centrifugiranje: praktičen pristop. New York, Oxford University Press, str. 223–270.
Grad LI, Lemire BD (2004): Mutacije mitohondrijskega kompleksa I pri Caenorhabditis elegans povzročajo pomanjkanje citokrom c-oksidaze, oksidativni stres in laktacidozo, ki se odziva na vitamine. Humana mol genetika 13: 303–314.
Hescheler J, Meyer R, Plant S, Krautwurst D, Rosenthal W, Schultz G (1991): Morfološka, biokemična in elektrofiziološka karakterizacija linije klonskih celic (H9c2) iz podganjega srca. Circ Res 69: 1476–1486.
Hsu M, Srinivas B, Kumar J, Subramanian R, Andersen J (2005): Izčrpavanje glutationa, ki ima za posledico selektivno inhibicijo mitohondrijskega kompleksa I v dopaminergičnih celicah, poteka preko poti, posredovane z NO, ki ne vključuje peroksinitrita: Posledice za Parkinsonovo bolezen. J Neurochem 92: 1091–1103.
Ko KM, Leon TYY, Mak DHF, Chiu PY, Du Y, Poon MKT (2006): Značilno farmakološko delovanje "Yang-poživljajočih" kitajskih tonizirajočih zelišč: Povečanje zmogljivosti generiranja ATP miokarda. Fitomedicina 13: 636–642.
Ko KM, Mak DH, Chiu PY, Poon MKT (2004): Farmakološke osnove "Yang-poživljanja" v kitajski medicini. Trendi Pharmacol Sci 25: 3–6.
Lee CJ, Chuan S, Lee SL (1990): Študija o učinku Cistanche deserticola Ma proti staranju. Shanghai J Trad Chin Med 11: 22–23.
Lei L, Song ZH, Tu PF, Li YZ, Wu LJ, Chen FK (2001): Regulacija presnove feniletanoidnih glikozidov iz Herba cistanches v prebavilih psov. Yao Xue Xue Bao 36: 432–435
Leung HY, Chiu PY, Poon MKT, Ko KM (2005): Yang-poživljajoča kitajska zeliščna formula krepi mitohondrijsko funkcionalno sposobnost in antioksidativno sposobnost v različnih tkivih samcev in samic podgan. Rejuven Res 8: 238–247.
Lin LW, Hsieh MT, Tsai FH, Wang WH, Wu CR (2002): Antinociceptivno in protivnetno delovanje, ki ga povzroča Cistanche deserticola pri glodavcih. J Ethnopharmacol 83: 177–182.
Lu MC (1998): Študije o sedativnem učinku Cistanche deserticola. J Ethnopharmacol 59: 161–165.
Mark A, Birch M, Douglass MT (2001): Analiza aktivnosti mitohondrijskega dihalnega kompleksa v mitohondrijih, izoliranih iz človeških celic in tkiv. Meth Cell Biol 65: 97–117.
Ouyang J, Wang X, Zhao B, Yuan X, Wang Y (2003): Učinki elementov redkih zemelj na rast celic Cistanche deserticola in proizvodnjo feniletanoidnih glikozidov. J Biotech 102: 129–134.
Paradies G, Petrosillo G, Pistolese M, Di Venosa N, Federici A, Ruggiero FM (2004): Zmanjšanje aktivnosti mitohondrijskega kompleksa I v ishemičnem/reperfuziranem srcu podgan: Vpletenost reaktivnih kisikovih vrst in kardiolipina. Circ Res 94: 53–59.
Srere PA (1969): Citratna sintaza. Cikel citronske kisline. Meth Enzymol 13: 3–11.
Stanley WC, Lopaschuk GD, Hall JL, McCormack JG (1997): Regulacija miokardnega metabolizma ogljikovih hidratov v normalnih in ishemičnih pogojih. Potencial za farmakološke posege. Cardiovasc Res 33: 243–257.
Taegtmeyer H (1998): Presnova energetskega substrata kot tarča za farmakoterapijo pri ishemični in reperfuzirani srčni mišici. Srce Metab 1: 5–9.
Tian XF, Pu XP (2005): Feniletanoidni glikozidi iz Cistanches salsa zavirajo apoptozo, ki jo povzroča 1-metil-4- fenilpiridinijev ion v nevronih. J Ethnopharmacol 97: 59–63.
Wu XM, Gao XM, Tsim KW, Tu PF (2005): Arabinogalaktan, izoliran iz stebel Cistanche deserticola, inducira proliferacijo gojenih limfocitov. Int J Biol Macromol 37: 278–282.
Xiong Q, Hase K, Tezuka Y, Tani T, Namba T, Kadota S (1998): Hepatoprotektivna aktivnost feniletanoidov iz Cistanche deserticola. Planta Med 64: 120–125.
Xiong Q, Kadota S, Tani T, Namba T (1996): Antioksidativni učinki feniletanoidov iz Cistanche deserticola. Biol Pharm Bull 19: 1580–1585.
