Kako učinkovito boj proti raku jeter? Cistanche Deserticola aktivna sestavina fenilethanoid glikozidi za pomoč pri reševanju problema

Abstrakten

Ozadje:Cistanche tubulosa(Schenk) R. Wight je tradicionalno kitajsko zdravilo, ki parazitizira korenine rastline Tamarix in se uporablja za zdravljenje moška impotenca, sterilnost, šibkost telesa in kot tonik. Vendar pa je njegov antitumorni učinek na hepatocelularni karcinom še vedno neuhvaljiv. Tukaj smo preiskali antitumorni učinek C.tubulosafenilethanoidGlikozidi(CTPG) na hepatocelularnih celicah hepatocelularnega karcinoma H22 in vitro in in vivo ter njegovih mehanizmih.

Metode: morfologijo, sposobnost preživetja, apoptozo, celični cikel in mitohontrijsko membransko potencial (Δ bom) celic H22 so analizirali z obrnjeno mikroskopijo, MTT testom in citometrijo pretoka. Izraz in aktivacija beljakovin v apoptozi so zaznali z zahodnim blotom. Antitumorni učinek in vivo je bil ocenjen v tumorski miškini model, vzpostavljen z moškimi Kunming mišmi.

Rezultati: zdravljenje s CTPG je znatno zatrlo rast celic H22 na odmerek in časovno odvisen način, kar je bilo povezano s povečano apoptozo in zastojem celičnih ciklov v fazah G0/G1 in G2/M. Poleg tega so kromosomsko kondenzacijo opazili v celicah H22, zdravljenih s CTPG. Zdravljenje z zdravilom CTPG je znatno povečalo razmerje Med zdravilom Bax/ Bcl-2, zmanjšanim Δ- om in povečalo sproščanje citokroma c. Ravni razčlenjene kaskade-8 in kaspaze-9 v eksternih in intrinsičnih signalnih poteh so se bistveno povečale, da so se zaporedno aktivirali kaskada-7 in -3 za izpiranje PARP. Končno, CTPG zavira rast H22 celic pri miših in izboljšala stopnjo preživetja tumorskih miši.

Zaključki: Ti rezultati kažejo, da je CTPG zaviral rast celic H22 skozi tako eksternična kot tudi intrinsic apoptosis poti.

Ključne besede:Cistanchetubulosa,FenilethanoidGlikozidi, Apoptoza, Signalna pot, Tumor miška model

Stik:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Cistanche deserticola ima veliko učinkov, kliknite tukaj, da veste več

Ozadje

Rak na jetrih se je uvrstil na šesto mesto po incidenci raka in četrti po vsem svetu. Poleg tega se je uvrstila na četrto mesto po incidenci raka in prva za umrljivost raka v državah z nizkim sociodemografskim indeksom [1]. Na Kitajskem je rak jeter tretji vodilni vzrok smrti, povezane z rakom v 2015 [2]. Več kot 90 % primarnih jetrnih rakov je hepatocelularni karcinom (HCC) na svetu [3]. Trenutno je jetrna resekcija glavna možnost za zdravljenje HCC. Vendar pa je manj kot 30 % bolnikov s HCC izvabilo merila kurativne resekcije jeter, skupna 5-letna stopnja preživetja pa je zaradi visoke stopnje ponovitve še vedno kar 35-50% zaradi visoke stopnje ponovitve [4, 5]. Razpoložljivost možnosti zdravljenja za bolnike z vmesnim do napredovalim HCC je zelo omejena. Sorafenib, molekularno usmerjeno zdravilo, je FDA odobrila kot prvo vrsto zdravljenja za napredno HCC. Vendar pa sorafenib samo podaljša približno 3 mesece preživetja, stopnja odziva pa je manjša od 4 % [6, 7]. Nujno je razviti nova zdravila ali strategije proti HCC. Tradicionalna kitajska medicina (TCM) sama ali v kombinaciji z drugimi strategijami je bila uporabljena za zdravljenje HCC in pokazala klinične koristi, vključno s podaljšanim časom preživetja, izboljšano kakovostjo življenja, zmanjšanimi neželenimi učinki in tako naprej [8, 9].Cistanche, vrsta TCM, ima različne biološke funkcije, kot so anti-oksidacija, proti vnetju, proti staranju in nevrozaščite [10, 11].FenilethanoidGlikozidiso bile obravnavane kot glavne aktivne sestavineCistanche, ki imajo različne dejavnosti, vključno z antioksidacijo, proti vnetjem, hepatoprotecijo in nevrozaščito [12–15]. Naša skupina je poročala, da je cistanche tubulosafenilethanoidGlikozidi(CTPG) lahko povzroči apoptozo v celicah melanoma B16-F10 in zavira rast tumorjev pri miših [16]. V tej študiji smo merili antitumorni učinek CTPG na celice HCC H22 tako in vitro kot in vivo in preiskali njegove mehanizme. Ugotovili smo, da je CTPG inducirali apoptozo v celicah H22 skozi tako eksternična in intrinsic signaling poti in zatrl rast H22 tumorjev pri miših.

Metode

Vrstica celice

Celice hepatocelularnega karcinoma miške H22 so dobile iz Xinjiang key laboratorija za biološke vire in gensko inženiring, Xinjiang University (Urumqi, Xinjiang, China) i kulturan u RPMI 1640 medium (Gibco) dopolnjen s 100 U/ml penicilina i 100 μg/ml streptomicina, te 10% toplotno inaktiviran fetalni goveji serum (Gibco) na 37 °C u vlažnoj atmosferi od 5% CO2.

MTT

CTPG je bil kupljen pri Hetian Dichen Biotech Co., Ltd. (Hetian, Xinjiang, Kitajska) in glavne spojine CTPG so bile kvalificirane in količinsko določene z visoko zmogljivostjo tekoče kromatografije [16]. Sposobnost preživetja celic je bila ocenjena s 3- (4, 5-dimetiltiazol-2-il)-2, 5-difeniltetrazolijev bromid (MTT) (Sigma, St. Louis, MO, ZDA) assay. Celice H22 so bile inokulrane v 96-dobro ploščo z gostoto 2 × 104 celic v 100 μl srednje na dobro in kulturene pri 37 °C. Po 24 h so celice zdravili z različnimi koncentracijami CTPG (0, 100, 200, 300 in 400 μg/ml) ali 0,3 % DMSO (enako kot pri 400 μg/ml CTPG) za 24, 48 oziroma 72 h. Po centrifugacijo pri 1000 vrt/min 7 min so supernatant zavrgli in vsakemu dobro dodali 100 μl raztopine MTT (5 mg/ml v PBS). Plošče so bile inkubatorne pri 37 °C za 4 h in 100 μl DMSO so dodali, da so raztoplili oblikovane formazanske kristale. Vrednosti OD490 je zaznal 96-dobro mikroplate bralnik (Bio-Rad Laboratories, CA, ZDA). Sposobnost preživetja celic je bila izračunana po formuli: Sposobnost preživetja celic (%) = (ODtreated/ODuntreated) × 100%.

Odkrivanje apoptoze

Celice H22 so zdravili z različnimi koncentracijami CTPG (0, 100, 200, 300, i 400 μg/ml) ali 0,3% DMSO za 24 h, a nato obogaten s Annexin VFITC/Propidium jodidom (PI) Kompletom za detekcijo apoptoze (YEASEN, Kina) po navodilu proizvajalca. Vzorci so bili analizirani s citometrijo pretoka (BD FACSCalibur, ZDA).

Odkrivanje mitohontrijskega membranskega potenciala

Celice H22 so zdravili z različnimi koncentracijami CTPG (0, 200 in 400 μg/ml) 24 h, nato pa 20 min pri 37 °C oblili z membransko prepustno obarvano JC-1 (Beyotime, Kitajska). Po dvakratnem umivanju s puferjem JC-1 so bili vzorci ponovno na voljo s 300 μl blažilnika JC-1 in analizirani s citometrijo pretoka (BD FACSCalibur, ZDA).

Analiza celičnih ciklov

Celice H22 so bile inokulirane v 60 mm kulturnih posodah in zdravljene z različnimi koncentracijami CTPG (0, 100, 200, 300 in 400 μg/ml) ali 0,3% DMSO za 24 h. Vse celice so bile zbrane in dvakrat napihnjene s PBS. Celice so bile fiksne v 70% ledeno-hladnem etanolu pri − 20 °C za 2 h in dvakrat umiti s PBS, nato pa ponovno suspendirani v 300 μl Propidium jodid/RNase odbojnik za obarvanje (BD Biosciences). Po 10 min pri sobni temperaturi so vzorce zbirali s citometrijo pretoka (BD FACSCalibur, ZDA), porazdelitev celičnih ciklov pa so analizirali s programsko opremo ModFit LT 3.0.

Hoechst 33.258 madež

Morfološke spremembe jedrnih celic H22 so analizirali z membransko prežemajočem DNA-vezavnim obarvanjem Hoechst 33.258 obarvanja. Celice H22 so bile sejane v 6-dobro ploščo v koncentraciji 1 × 105 celic/no v 2 ml mediju. Po 60%~ 70% sotočju so celice zdravili s CTPG (0, 100, 200, 300 in 400 μg/ml) 24 h. Celice so bile zbrane in fiksne s 4% ledeno hladnim Paraformaldehidom pri 4 °C 10 min. Po umivanju s PBS so bile celice 10 min obmagane s hoechstom 33.258 (Beyotime, Kitajska) pri 4 °C. Vzorce so opazovali z obrnjenim fluorescenčnim mikroskopom (Nikon Eclipse Ti-E, Japonska).

Zahodni blot

Anti-caspase-3, anti-cleaved caspase-3, Anti-Bcl-2 in anti-Bax so bili kupljeni pri Beyotime Biotech Co., Ltd. (Šanghaj, Kitajska). Protikaspaza-7, Anti-cleaved-caspase-7, anti-caspase-8, anti-cleaved-caspase-8, anti-caspase-9, anti-caspase-9, anti-PARP, anti-cleaved PARP, anti-mouse IgG-HRP, and anti-rabbit IgG-HRP were purchased from Cell Signaling Technology. Anti-β-actin je bil kupljen od Beijing ComWin Biotech Co, Ltd. (Peking, Kitajska).

Celice H22 so zdravili z različnimi koncentracijami CTPG (0, 100, 200, 300 in 400 μg/ml) ali 0,3 % DMSO za 24 h. Celice so bile zbrane in lysed z Cell Lysis Rešitev RIPA (Beijing ComWin Biotech Co, Ltd) za 30 min na ledu. Vzorci so bili vzmeteni (12.000 g za 15 min pri 4 °C) za zbiranje supernanatantov, koncentracije beljakovin pa so merili s kompletom BCA (Thermo Fisher Scientific, ZDA). Enaka količina beljakovin v vsakem vzorcu je bila izolirana za 12 % SDS-PAGE in prenesena na membrane PVDF (Biosharp, Kitajska). Po zaviranju z TBST puferjem je bilo 5 % nefatnega mleka, membrane inkubirana z ustreznimi primarnimi protitelesi in sekundarnimi protitelesi, ki so bila konjugirana s hrensko peroksidazo (HRP). Po pomivanju z TBST so ciljne beljakovine zaznali z ECL kompletom za analizo (Beyotime, Kitajska).

Izjava o živalih in etiki

6-8 tednov star moški Kunming miši so bili kupljeni v Animal Laboratory Center, Xinjiang Medical University (Urumqi, Xinjiang, Kitajska). Miši so se hranile v standardnem temperaturno nadzorovanem objektu za živali v svetlobnem ciklu univerze Xinjiang. Vse študije na živalih so bile izvedene v skladu s smernicami Odbora za nego in uporabo živali Univerze Xinjiang. Protokol je odobril Odbor za etiko poskusov na živalih v xinjiangskem ključnem laboratoriju za biološke vire in gensko inženirstvo (BRGE-AE001), Univerzi Xinjiang.

Študija tumorske miške

Za indukcijo tumorskih mišjih modelov so moške Kunming miši subkutano injicirali 1 × 106 H22 celic v 100 μl PBS v desni bok. Po 3 dneh so bile miši naključno razdeljene v 3 skupine (7 miši/ skupina). Skupini Control so vbrizgali 0,1 ml DMSO subkutano okoli tumorja. CTPG-200 in CTPG- 400 skupin so subkutano injicirali z 200 ali 400 mg/kg CTPG v 0,1 ml DMSO okoli tumorja. Miši so se zdravile vsake 2 dni do 21 dni. Velikost tumorja so merili s kalibracijami do 25 dni, volumen tumorja pa so izračunali po formuli: volumen tumorja (mm3 ) = (dolžina× širina2 )/2. Po 25 dneh so do konca te študije vsak dan spremljali preživetje tumorskih miši.

Statistična analiza

Statistični pomen je bil izračunan z enosedno analizo variance med skupinami zdravljenja in nadzora. Vsi podatki so bili izraženi kot ± standardnega odstopanja (S.D.). p< 0.05="" was="" considered="" statistically="">

Rezultati

CTPG je zmanjšal sposobnost preživetja celic H22 in vitro

Za raziskovanje antitumornega učinka CTPG na HCC so celice H22 zdravili z različnimi koncentracijami CTPG (0, 100, 200, 300 in 400 μg/ml) in vitro. Po 24 h so morfologijo celic H22 opazili z obrnjenim mikroskopom. Ugotovili smo, da se je morfologija celic H22 dramatično spremenila s CTPG zdravljenjem. S povečanjem koncentracije CTPG so celice postale majhne in okrogle, število celic pa je bilo tudi zelo zmanjšano (slika 1a). Analiza MTT je bila uporabljena za analizo sposobnosti preživetja celic H22 po zdravljenju s CTPG 24, 48 oziroma 72 h. CTPG je pomembno zmanjšal sposobnost preživetja celic H22 na odmeren in časovno odvisen način (slika 1b). CTPG pri 300 μg/ml je prispel z najboljšo stopnjo zaviranja (slika 1c). Vrednosti IC50 CTPG za celice H22 so 236 μg/ml pri 24 h in 169,8 μg/ml pri 48 h.

CTPG inducirali apoptozo v celicah H22

Za preiskavo, ali je zmanjšana sposobnost preživetja celic H22 posredovana z indukcijo apoptoze, so H22 celice zdravili z različnimi koncentracijami CTPG (0, 100, 200, 300 in 400 μg/ml) za 24 h in mazali s PI in Prilogo V. Rezultati citometrije pretoka so pokazali, da je CTPG pomembno inducirali apoptozo celic H22 (vključno z zgodnjo in pozno apoptozo) na odmerek odvisen način (slika 2a). Čeprav je visok odmerek CTPG tudi znatno povečal nekrozo celic H22, ima nekroza manjšo vlogo pri zaviranju rasti celic H22 zaradi manjšega deleža (8,3 %) v primerjavi z rastjo apoptoze (52,6 %). Poleg tega so bile po zdravljenju s CTPG izolirane skupne beljakovine celic H22, izraze antiaoptotskega B celične limfoma 2 (Bcl-2) in proaoptotične beljakovine X (Bax), povezane z BCL-2, pa so zaznali z zahodnim blotom. Podatki o skeniranju v sivkah so pokazali, da so bile ravni izraza Bax in Bcl-2 povečane in se zmanjšale. Razmerje med Baxom in Bcl-2 je bilo znatno povečano (slika 2b). Ti rezultati kažejo, da CTPG povzroči apoptozo v celicah H22.

CTPG povzroči kromosomsko kondenzacijo in zastoj celičnih ciklov v celicah H22

Poročali so, da lahko poškodbe DNK in zastoj celičnih celic, ki jih povzročajo zdravila, zavirajo rast tumorskih celic in povzročijo apoptozo v tumorskih celicah [17, 18]. Za odkrivanje morfologije jeder v celicah H22 po zdravljenju s CTPG za 24 h so H22 celice obmagli z Hoechst 33.342 in opazili z obrnjeno fluorescentno mikroskopijo. Celice, ki so se zdravile s CTPG, so pokazale od odmerka odvisno povečanje svetlo zgostitvenega kromatina jeder, nezdravljene celice pa so pokazale homogeno obrnjena jedra (slika 3a). Porazdelitev celičnih ciklov v celicah H22 je bila po zdravljenju s CTPG 24 h nadalje analizirana z pi madežem. Kot je prikazano na slikah 3b, je zdravljenje s CTPG znatno povečalo delež celic G0/G1- in G2/M faze ter znatno zmanjšalo delež celic S-faze, kar kaže, da je CTPG pri celicah H22 induciral aretacijo G0/G1 in G2/Mphase. Visok odmerek CTPG je prav tako znatno povečal delež sub G1 celic.

CTPG se je zmanjšal mitohondrijski membranski potencial in povečal sproščanje citokroma c

pri indukciji apoptoze pomembno vlogo pri indukciji apoptoze [19, 20]. Spremembe mitohontrijskega membranskega potenciala (Δ bom) lahko spremljamo z obarvanjem JC-1 zaradi agregata JC-1 (rdeča fluorescenca) lahko razpade v monomer (zelena fluorescenca) z zmanjšanjem Δ bom [21]. Po zdravljenju s CTPG 24 h so celice H22 obmagale z JC- 1. Podatki o citometriji pretoka so pokazali, da sta se rdeča fluorescenca v kanalu FL-2 in zelena fluorescenca v kanalu FL-1 po zdravljenju s CTPG znatno zmanjšali in povečali. Delež celic PE− FITC+ se je znatno povečal (slika 4a), kar kaže na to, da je CTPG zmanjšal Δom v celicah H22. To je v skladu s povečanim razmerjem med Baxom in Bcl-2. Zato smo opazili, da se je sproščanje citokroma c ob zdravljenju s CTPG bistveno povečalo (slika 4b). Ti rezultati so kazali, da lahko CTPG delno povzroči apoptozo v celicah H22 preko mitohondrialno odvisnih (intrinzična) pot.

CTPG je aktiviral pot kaskade in preprečil popravilo DNK

Nato je bila analizirana aktivacija kaskade, ki jo je induciran CTPG preko ekstrinsičnih in intrinsic signalnih poti. Po zdravljenju s CTPG za 24 h so bile skupne beljakovine izolirane iz celic H22, ravni pro in razčlenjenih kaskad pa je zaznal zahodni blot. V primerjavi z nezdravljenim ali DMSO nadzorom je zdravljenje STPG bistveno urejeno ne le raven razčlenjene kaskade-8 (ekstrinsic pathway), ampak tudi raven razčlenjene kaskade-9 (intrinsic pathway) (slika 5). Zaporedno, aktivirana kaskada-8 in -9 se je raztegnil navzdol- protikaspase-3 in -7, ki sta bila opažena na sl. 5. Aktivirana kaskada-3 je izvlekel encim za popravilo DNK polimeraze (ADP-riboze) (PARP), da se prepreči popravilo DNK in kopičijo poškodbe DNK, kot so opazili pri figu. 3a.

Ti rezultati so kazali, da je CTPG inducirali apoptozo v celicah H22 tako skozi eksternična kot intirinsična signalna pot.

CTPG zavira rast H22 HCC in vivo in izboljšuje stopnjo preživetja tumorskih miši

Končno je bil antitumorni učinek CTPG na HCC ovrednoten v modelu tumorske miške, ki je bil ugotovljen s subkutanim injiciranjem celic H22. Po 3 dneh injiciranja celic H22 so tumorske miši 8-krat zdravili s CTPG. Telesno težo miši in velikosti tumorjev so spremljali v indicirano časovnih točkah. Kot je prikazano na slikah 6a, telesna teža miši v vsaki skupini nima pomembne razlike, kar kaže, da izbrani odmerki CTPG niso očitni neželeni učinki. Zanimivo je, da je bila rast tumorja pri miših, zdravljenih z 200 mg/kg in 400 mg/kg CTPG, znatno zavirana (slika 6b). Poleg tega sta dva odmerka zdravljenja s CTPG zelo izboljšala preživetje tumorskih miši (3/7, 3/7) v primerjavi s kontrolno skupino (0/7) na koncu poskusa (slika 6b). Ugotovili smo tudi, da je CTPG bistveno povečala razmnoževanje splenocitih, izoliranih iz moških Kunming miši na odmeren način (slika 6c), kar kaže, da ima CTPG imunostimulativni učinek.

Razpravo

Zdravilo TCM se uporablja za zdravljenje različnih bolezni, vključno z rakom, dolgo zgodovino. Poročali so, da lahko TCM povzroči apoptozo pri različnih vrstah tumorskih celic prek ekstrinzičnih (s smrtnim receptorjem posredovanih) in intrinzičnih (od mitohondrija odvisnih) signalnih poti za delovanje protitumornih učinkov [22–25]. Dve poti lahko aktivirata kaskado-8 oziroma -9 [24, 26]. Tu smo ugotovili, da je CTPG bistveno zatrl rast celic H22 z indukcijo apoptoze in zastojem celičnih ciklov. Ravni razčlenjene kaskade-8 in -9 so bile z zdravljenjem CTPG bistveno urejene, kar kaže, da so bile pri indukciji apoptoze vključene tako ekstinzična kot tudi intrinična signalizacija. Naša prejšnja študija je pokazala, da je CTPG inducirali apoptozo v celicah melanoma B16-F10 po poti, odvisni od mitohondrije, ki je povečala raven narezane kaskade-9, ne pa tudi kaspaze-8 [16]. CTPG lahko aktivira različne signalne poti v različnih vrstah tumorskih celic.

Mitohontrijsko integriteto membrane tesno uravnavajo člani družine beljakovin BCL-2, vključno z Baxom in Bcl-2 [27, 28]. Razmerje med Baxom in Bcl-2 ima ključno vlogo pri poti apoptoze, odvisne od mitohondrije [29]. V celicah H22, ki so jih zdravili s CTPG, je bilo razmerje Bax/Bcl-2 bistveno urejeno, kar lahko povzroči zmanjšanje Δ- om in sproščanje citokroma c, opaženega v tej študiji. Zato je bil pro-caspase-9 raztesnjen in aktiviran. In na koncu so pobudniki aktivne kaskade-8 in -9 aktivirali izvršilca kaskade-3, da so izklopila PARP, da bi preprečili popravilo DNK. Ti rezultati skupaj kažejo, da je CTPG inducirali apoptozo v celicah H22 skozi tako eksternična kot intirinsična signalna pot.

V modelu tumorske miške je CTPG bistveno zatrl rast H22 HCC in močno izboljšal preživetje tumorskih miši. Zanimivo je, da je CTPG, odvisno od odmerka, spodbujal razmnoževanje splenocit iz Kunming miši, kar je v skladu z našo prejšnjo študijo [16].

Ti rezultati kažejo, da bi CTPG lahko zaviral rast H22 HCC pri miših z neposrednim antitumornim učinkom in posredno imunsko povečanje.

Sklepi

CTPG je zaviral rast celic H22 tako in vitro kot in vivo ter inducirali apoptozo v celicah H22 skozi tako ekstinzična kot intirinsična signalna pot. Ti podatki so kazali, da je CTPG morda potencialni kandidat za zdravljenje HCC.

Okrajšave

Bax: Z BCL-2 povezaniM X beljakovinami; Bcl-2: limfom B celic 2; CTPG: Cistanche tubulosa fenilethanoid glikozidi; HCC: hepatocelularni karcinom; HRP: hren peroksidaza; MTT: 3-(4, 5-dimetiltiazol-2-il)-2, 5- difeniltetrazolijev bromid; PARP: encim za popravilo DNK poli (ADP-riboza) polimeraze; TCM: tradicionalna kitajska medicina; Mitohondrialni membranski potencial.

Financiranja

To delo so podprli projekt uvajanja talentov na visoki ravni v avtonomno regijo Xinjiang Uygur J.L., donacija kitajske nacionalne naravoslovne fundacije (31460241) J.L., in doktorski start-up sklad Univerze Xinjiang (BS160261 do X.W. in BS150236 za Y.L.).

Razpoložljivost podatkov in materialov

Surovi podatki za to študijo so na voljo na razumno zahtevo ustreznemu avtorju.

Prispevki avtorjev

JL in JL sta projektirala poskuse. PY, JL, AA in YY so izvedli poskuse. LX, XW in YL so analizirali podatke. PY, JL in JL so napisali rokopis. Vsi avtorji so prispevali in odobrili končni rokopis.

Odobritev etike

Študijo na živalih je odobril Odbor za etiko poskusov na živalih v xinjiangskem ključnem laboratoriju za biološke vire in gensko inženirstvo univerze Xinjiang.

Protiteleni interesi

Avtorji izjavljajo, da nimajo nobenih protitemnih interesov.

Opomba založnika

Springer Nature ostaja nevtralen glede jurisdikcijskih zahtevkov v objavljenih zemljevidih in institucionalnih pripadnosti.

Podrobnosti o avtorju

1 Xinjiang Key Laboratory of Bioological Resources and Genetic Engineering, College of Life Science and Technology, Xinjiang University, 666 Shengli Road, Urumqi, Xinjiang 830046, China.

2 College of Life Science, Xinjiang Normal University, 102 Xinyi Road, Urumqi 830054, Xinjiang, Kitajska.

3 Povezani tumor bolnišnica Xinjiang Medical University, Urumqi 830011, Kitajska.