Imunsko pogojena ekspresija genov v ledvicah in vranici goslingov, okuženih z gosjim nefritičnim astrovirusom

Kontakttina.xiang@wecistanche.comza dodatne informacije.

POVZETEKGosi nefritični astrovirus (GNAstV) je bil prvič izoliran leta 2018, kar je povzročilo velike gospodarske izgube industriji gosi. O gostitelju pa je malo znanegaimunski odzivna okužbo z GNAstV. V tej študiji je bilo štirideset {{0}} dni starih gosk naključno razdeljenih v 2 skupini: okužbo in negativno kontrolno skupino. Vsaka goska v skupini z okužbo je bila izzvana z 0,5 ml GNAstV-JSHA intramuskularno, medtem ko je bila goska v skupini negativne kontrole cepljena z enako količino PBS. Histopatološke spremembe in lokacija virusa vvranicainledvicapregledali in izražanje imunsko povezanih genov določili s qPCR 7 in 14 dni po okužbi. Naši rezultati so pokazali, da je okužba z GNAstV povzročila degeneracijo in nekrozo vraničnih limfocitov in epitelijskih celic ledvic, te celice pa so bile pozitivne na virus. Poleg tega je okužba z GNAstV povzročila aktivacijo receptorjev za prepoznavanje vzorcev (RIG-I, MDA-5 in TLR3) in ključnih adapterskih molekul

(MyD88, MAVS in IRF7) v vranici in ledvicah ter povečali izražanje genov interferona v vranici in protivirusnih proteinov (MX1, OASL in IFITM3) v vranici in ledvicah. Poleg tega so bile ugotovljene visoke ravni izražanja interlevkina (IL)-1 in IL-8 v vranici ter iNOS v vranici in ledvicah. Ti rezultati so pokazali, da je okužba z GNAstV aktivirala gostiteljev prirojeni imunski odziv. Poleg tega je okužba z GNAstV povečala ravni izražanja CD8t, MHCI in MHCII, kar kaže, da je bil aktiviran adaptivni imunski odziv. Poleg tega je bil TGF- močno izražen v vranici in ledvicah, kar je lahko strategija imunske utaje GNAstV za povzročitev okužbe. Zanimivo je, da sta se ravni mRNA IL-1 in IL-6 v ledvicah znižali, kar lahko pomaga zmanjšati ledvične lezije. To je prva študija, ki poroča o spremembah v izražanju imunsko povezanih genov kot odziv na okužbo z GNAstV, naši rezultati pa zagotavljajo vpogled v virusno patogenezo.

Ključne besede: gosji nefritični astrovirus, imunski odziv, vranica, ledvica, gosling

Kliknite, če želite izvedeti prednosti stebla cistanche in pridobiti izkušnje s cistanche

UVOD

Od leta 2017 je več jat gosi doživelo resen izbruh protina pri 4- do 16-dnevnih goskah na vzhodu Kitajske, kar je povzročilo velike gospodarske izgube v industriji gosi. Okuženi goski so imeli zmanjšano telesno težo, otekle in blede ledvice, z belimi urati v sečevodih in razporeditvijo uratov na površini visceralnih organov in sklepne votline. Leta 2018 so iz okuženih gosi izolirali nov gosji astrovirus, s poskusi razmnoževanja na živalih pa so dokazali, da je glavni povzročitelj bolezni gosji putika. Ta virus se je genetsko razlikoval od znanega mam astrovirusa in astrovirusa. Oblikoval je ločen klas v skladu z aminokislinskim zaporedjem proteina ORF2 polne dolžine (kapsidnega proteina), ki je najbolj variabilna regija genoma. Zato je treba več pozornosti nameniti škodi, ki jo virus povzroča gosi. V tej študiji se novi gosji astrovirus imenuje gosji nefritični astrovirus (GNAstV).

Ker je GNAstV na novo nastajajoči virus, se je večina študij osredotočila na njegovo izolacijo, genetsko analizo in vzpostavitev diagnostičnih metod (Yuan et al., 2018; Wan et al., 2019; Yin et al., 2020). Vendar pa je malo znanega o imunskem odzivu gostitelja na okužbo z GNAstV. Gosji nefritični astrovirus povzroča predvsem poškodbe ledvic, jeter in vranice pri goskah, v ledvicah in vranici pa so odkrili večjo virusno obremenitev kot v drugih organih (Jin et al, 2018; Xu et al, 2019). Poškodbe vranice in visoka virusna obremenitev kažejo, da lahko virus poškoduje imunski odziv. Prirojeni imunski sistem igra pomembno vlogo med virusno okužbo, saj služi kot prva obrambna linija pred virusno invazijo (Chow J et al., 2015). Receptorji za prepoznavanje vzorcev (PRR) prepoznajo virusne nukleinske kisline in izzovejo prirojen odziv, vključno s proizvodnjo citokinov, kot so I-1, TNF-x in IFN, ter protivirusnih proteinov, kot so OASL, IFITM3 in MX1. Membransko vezan Toll-podobni receptor 3 (TLR3) in citosolni RIG-I podobni receptorji, ki večinoma vsebujejo RIG-1 in MDA-5, so najpomembnejši PRR, ki prepoznajo virusno RNA. Prirojeni imunski odziv inducira signalizacijo, da izzove adaptivni imunski odziv, ki nadzoruje virusno okužbo v naslednji fazi okužbe. Prilagodljivi imunski sistem vključuje odziv I, posredovan s protitelesi/B-celičnim odzivom, in celični odziv, ki zahtevata vključitev molekul CD3 plus, CD4 plus, CD8 plus in MHC razreda I in II. Trenutno mehanizmi, s katerimi GNAstV vpliva na prirojene in prilagodljive imunske odzive gostitelja, niso jasni. Kitajska je dom največje populacije gosi na svetu; zato je raziskovanje gosjega imunskega odziva na okužbo z GNAstV pomembno za pojasnitev mehanizma patogenosti in imunosti GNAstV ter za nadzor njegovega širjenja. V tej študiji so bili 2-dnevni goski okuženi z GNAstV. Nato so pregledali histopatološke spremembe in lokacijo virusa ter imunsko pogojeno izražanje genov v vranici in ledvicah.

MATERIALI IN METODE

Etična izjava

Vsi poskusi na živalih so bili izvedeni v skladu s smernicami za poskusne živali Ministrstva za znanost in tehnologijo (Peking, Kitajska) in jih je odobril Odbor za institucionalno oskrbo in uporabo živali kmetijske univerze Nanjing.

Virus

Izolat GNAstV-JSHA (pristopna št. GenBank MK125058) smo izolirali iz obolelih gosi s protinom (provinca Jiangsu, Kitajska) in hranili v našem laboratoriju. Titer GAstV-JSHA je bil 1 × 104.25 50 odstotkov infektivnega odmerka tkivne kulture (TCID50)/ml, kot je bilo ugotovljeno s titracijo na epitelnih celicah gosjih ledvic v skladu z metodo Reed & Muench.

Eksperiment na živalih

Vzorci vranice in ledvic so bili zbrani iz našega prejšnjega poskusa na živalih, ki je bil opisan v Xujevi študiji (Xuet al.,2019). Na kratko, 2-dnevno starih štirideset gosk brez okužbe z GNAstV so naključno razdelili v 2 skupini: okužbo in negativno kontrolno skupino. Vsak gosi v skupini z okužbo je bil izzvan z 0,5 ml GNAstV-JSHA z intramuskularno inokulacijo, medtem ko je bil gosi v skupini negativne kontrole cepljen z enako količino PBS.

Vse gosi so dnevno spremljali glede kliničnih znakov. 7 dni po okužbi (dpi) je bilo evtanaziranih 10 gosk iz vsake skupine in pregledane velike spremembe, nato pa so bile zbrane ledvice in vranica. Del teh težav je bil fiksiran v 10-odstotnem formaldehidu za histopatološko preiskavo, ostali so bili shranjeni pri -80 stopinjah za nadaljnje poskuse. Pri 14 dpi so bile preživele goske evtanazirane, tkiva pa zbrana in shranjena, kot je navedeno zgoraj.

Histopatološki pregled

Fiksne vzorce smo dehidrirali z vrsto alkoholov, zbistrili v ksilenu in vdelali v parafin. Nato so bili vzorci serijsko narezani na 4 μm odseke in obarvani s hematoksilinom in eozinom z rutinskimi metodami. Obarvane odseke smo pregledali s svetlobnim mikroskopom.

Zaznavanje lokacije virusa s hibridizacijo in situ

Metoda hibridizacije in situ (FISH) je bila izvedena po navodilih komercialnega kompleta ISH (Boster, Kitajska) z nekaterimi modifikacijami. Pred izvedbo ISH sta bili občutljivost in specifičnost vzorca testirani in optimizirani z nizom predobdelav. Na kratko, odseki deparafiniziranega tkiva so bili predhodno obdelani s HCl (0.2 M, 15 min) in proteinazo K （40 ug/mL, 20 min, 37 stopinj ）. Proteazo K smo inhibirali s fiksacijo v 4-odstotnem paraformaldehidu za 5 minut. Nato so bili izvedeni koraki hibridizacije in posthibridizacije. Sonde smo dodali hibridizacijskemu pufru pri koncentraciji 0.5-2 ug/mL; pufer, ki je vseboval sonde, je bil denaturiran pri 98 stopinjah 10 minut in takoj ohlajen na ledu. Približno 20 μL hibridizacijske mešanice smo s pipeto nanesli na odseke tkiva, prekrili s pokrovnimi stekelci, obdelanimi z dietilpirokarbonatom, in inkubirali 16 do 20 ur pri 42 stopinjah. Sonde, ki so se hibridizirale z virusno RNA, so odkrili z uporabo protitelesa proti DIG, konjugiranega na 3,3-N-diaminobenzidin tetrahidroklorid. Predmetna stekelca so obarvali z metilno zelenim in zapečatili z nevtralno gumo. Za izboljšanje občutljivosti je bila uporabljena proteinaza K za povečanje prepustnosti tkiva, da se olajša vstop sond v tkivo.

Analiza imunskih genov s kvantitativno PCR v realnem času

Celotna RNA je bila ekstrahirana z uporabo Trizola (Invitrogen, CA), reverzna transkripcija RNA pa je bila izvedena z uporabo kompleta HiScript Q RT SuperMix (Vazyme, Kitajska). Za kvantitativno PCR je bil uporabljen termocikler (AB7300; Life Technologies). Programska oprema Primer 5.0 je bila uporabljena za označevanje imunsko povezanih genov, kot je prikazano v tabeli 1. Izražanje ribonukleinske kisline je bilo normalizirano s kvantificiranjem GAPDH kot gospodinjskega gena. Relativne ravni transkripta so bile analizirane z metodo z uporabo 2-AACT

Statistična analiza

Razlike med kontrolno in eksperimentalno skupino smo analizirali s Studentovim t-testom. Rezultati so izraženi kot povprečje ± standardni odklon. p<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistical="" significance="" compared="" with="" the="" control="" group,="" and="">< 0.01="" was="" considered="" to="" indicate="" a="" high="" degree="" of="" significance="" compared="" with="" the="" control="">

REZULTATI

Klinične spremembe

Pri neinokulirani kontroli niso opazili smrti ali očitnih kliničnih znakov. Vendar pa je 5 od 20 okuženih gosi med poskusom poginilo, pri goskah, okuženih z GNAstV, pa so opazili zmanjšanje telesne teže. Pri obdukciji so bili organi v negativni kontrolni skupini videti normalni, vendar so pri mrtvih goskah odkrili razporeditev uratov na površini organov (jetra, srce in ledvice), žolčnih vrečkah in sklepni votlini. Poleg tega so pri vseh okuženih goskah opazili otekle in blede ledvice z belim uratom v sečevodih. Patološke spremembe so bile prikazane v naši prejšnji študiji (Xu et al..2019). Ti rezultati so pokazali, da smo uspešno vzpostavili živalski model okužbe z GNAstV pri goskah.

Histopatološke spremembe v ledvicah in vranici

Pri histopatološkem pregledu so bile ledvice in vranice negativnih kontrolnih gosk videti histološko normalne (sliki 1A in 1B). Vendar degeneracija in nekroza ledvičnih epitelijskih celic invnetnav ledvicah okuženih gosi so opazili celično infiltracijo (slika 1C). Poleg tega nekroza vranicelimfocitiin infiltracijo vnetnih celic so našli tudi v vranici (slika 1D).

Lokacija virusa v ledvicah in vranici

Lokacijo gosjega nefritičnega astrovirusa v ledvicah in vranici smo pregledali z uporabo ISH. Kot je prikazano na sliki 2, je bilo v citoplazmi epitelijskih celic ledvičnih tubulov odkritih več rjavih delcev, v glomerulih ledvic pa niso opazili nobenih rjavih delcev. V vraničnih limfocitih in makrofagnih celicah vranice so odkrili nekaj rjavih delcev. Ti rezultati kažejo, da lahko GNAstV okuži epitelijske celice ledvičnih tubulov in vranične limfocite.

Izražanje PRR in adapterskih molekul v vranici in ledvicah goslingov, okuženih z GNAstV Izražanje PRR(RIG-1, MDA-5 in TLR3) in ključnih adapterskih molekul (MAVS, MyD88 inIRF7) v vranici in ledvicah so določili s qPCR, kot je prikazano na sliki 3. Raven mRNA 3 PRR v vranici je bila znatno povečana v okuženi skupini pri 7 in 14 dpi v primerjavi z negativno kontrolno skupino (P<0.05). the="" rig-1="" and="" tlr3="" mrna="" levels="" in="" the="" kidneys="" were="" also="" increased="" in="" the="" infected="" group="" at="" 7="" and="" 14="" dpi="" compared="" with="" that="" in="" the="" negative="" control="">< 0.01).="" the="" mda-5="" mrna="" level="" was="" higher="" in="" the="" infected="" group="" at="" 14="" dpi,="" but="" no="" difference="" in="" mda-5="" mrna="" expression="" was="" observed="" between="" the="" infected="" and="" negative="" control="" groups="" at="" 7="" dpi(p="">0.05). V skladu s tem je bila ekspresija adapterskih molekul v okuženi skupini pri 7 in 14 dpi bistveno višja kot v kontrolni skupini (P<0.05). these="" results="" indicate="" that="" gnastv="" infection="" activates="" the="" host's="" innate="" immune="">

Izražanje citokinov v vranici in ledvicah goslingov, okuženih z GNAstV

Ekspresije citokina, IL-1, I-6, IL-8, Ⅱ-10, TGF-B in iNOS so bile določene s qPCR, kot je prikazano na sliki 4. V vranici so ravni mRNA IL-1B in TGF-B v skupini z okužbo pri 7 in 14dpi so bili očitno višji od tistih v negativni kontrolni skupini (P<0.01). furthermore,="" the="" i-8="" and="" inos="" mrna="" levels="" in="" the="" infection="" group="" at="" 14="" dpi="" were="" higher="">< 0.05).="" but="" no="" differences="" in="" the="" levels="" were="" observed="" between="" the="" infection="" and="" negative="" control="" groups="" at="" 7="" dpi(p=""> 0.05). Moreover, no difference in I-6 mRNA expression at 7 and 14 dpi was observed between the infection and control groups(P>0.05). V ledvicah so bile ravni mRNA I-1 pri 7 in 14 dpi in I-6 pri 7 dpi nižje v skupini z okužbo kot tiste v skupini z negativno kontrolo (P< 0.05),="" whereas="" the="" tgf-b="" and="" inos="" mrna="" levels="" at="" 7="" and="" 14="" dpi="" and="" the="" i-8="" mrna="" level="" at="" 14="" dpi="" were="" higher="" in="" the="" infection="" group="" than="" those="" in="" the="" negative="" control="" group=""><0.05). no="" difference="" in="" i-10="" expression="" was="" detected="" between="" the="" infection="" and="" control="" groups(p="">0.05).

Izražanje protivirusnih beljakovin v vranici in ledvicah goslingov, okuženih z GNAstV

Raven mRNA IFN-d. v vranici in izražanje protivirusnih proteinov (OASL, IFITM3.in MIX1) v ledvicah in vranici smo določili, kot je prikazano na sliki 5. V vranici so ravni mRNAIFN-2. OASL, IFITM3 in MX1 pri 7 in 14 dpi so bili bistveno višji v okuženi skupini kot tisti v negativni kontrolni skupini (P< 0.05).="" in="" the="" kidney,="" the="" mrna="" levels="" of="" oasl,="" ifitm3,="" and="" mx1="" at="" 14="" dpi="" were="" obviously="" higher="" in="" the="" infected="" group="" than="" in="" the="" negative="" control="" group=""><0.05); however,="" no="" significant="" differences="" in="" levels="" were="" observed="" between="" the="" infection="" and="" negative="" control="" group="" at="" 7="" dpi(p="">0.05).

Izražanje molekul CD4t, CD8 plus in MHC razreda in I v vranici gošč, okuženih z GNAstV

Izražanje genov, povezanih s predstavitvijo antigena (CD4', CD8', molekule MHC razreda I in II) v vranici je bilo določeno s qPCR, kot je prikazano na sliki 6. Ravni izražanja MHC I pri 7 in 14dpi so bili bistveno višji v okuženi skupini kot tisti v negativni kontrolni skupini (P < 0,05).="" stopnje="" izražanja="" mhc="" ii="" pri="" 14="" dpi="" so="" bile="" očitno="" višje="" v="" okuženi="" skupini="" kot="" tiste="" v="" negativni="" kontrolni="" skupini=""><0.05); however,="" no="" difference="" in="" levels="" was="" observed="" between="" the="" 2="" groups="" at="" 7="" dpi(p="">0.05). Ravni CD8 plus mRNA pri 7 in 14 dpi so bile bistveno višje v okuženi skupini kot tiste v negativni kontrolni skupini (P< 0.05).="" but="" no="" changes="" in="" cd4+mrna="" levels="" at="" 7="" and="" 14="" dpi="" were="" found="" between="" the="" 2="" groups="" (p="">0.05).

DISKUSIJA

Gosji nefritični astrovirus je na novo izoliran virus, ki lahko povzroči visceralni protin in pogin gosi, kar povzroči veliko škodo na gosjih jaretah. Do danes ni cepiv in terapevtskih sredstev za njegovo zdravljenje. Zato je treba raziskati imunski odziv gostitelja na virus, da bi razumeli njegovo patogenezo ter razvili cepiva in terapije. V tej študiji smo uspešno vzpostavili živalski model pri goskah z intramuskularno inokulacijo z GNAst V-JSHA. Lokacija virusa v vraničnih limfocitih in makrofagih ter nekroza vraničnih limfocitov kažejo, da lahko GNAstV okuži vranico in povzroči poškodbe imunskega sistema gostitelja. Vendar do zdaj ni bilo poročil o imunološkem odzivu gosk, okuženih z GNAstV. Poleg tega so opazili visok virusni titer v epitelijskih celicah ledvic. kar lahko prispeva k okvari ledvic in motnji izločanja sečne kisline.

Prirojeni imunski sistem je prva obrambna linija pred vsiljivim patogenom. V naši študiji je okužba z GNAstV povzročila povečanje TLR3. Ekspresija mRNA RIG-1 in MIDA-5 v vranici in ledvicah, kar kaže, da je bil aktiviran prirojeni imunski sistem, ki lahko prispeva k zaviranju virusne invazije, Povečana regulacija ključnih adapterskih molekul (MyD88 in IRF7) ) nadalje potrdil te rezultate. IFN nastane po aktivaciji PRR, ki ima ključno vlogo pri virusni supresiji z indukcijo več z IFN stimuliranih genov, katerih produkti imajo neposredno protivirusno aktivnost. V naši študiji sta se po okužbi z GNAstrV povečala izražanje IFN-z v vranici in izražanje protivirusnih proteinov (OASL, MX1 in IFITM3) v vranici in ledvicah. Povečana proizvodnja protivirusnih beljakovin je lahko koristna za zaviranje virusne invazije. V skladu s tem so naši rezultati pokazali, da TLR3.RIG-1. MDA-5 in IRF7 sta bila aktivirana med okužbo z GNAstV. Prejšnja študija je tudi pokazala, da vrsta sistema omejuje replikacijo človeškega astrovirusa in vitro in in vivo ter zagotavlja zaščito pred prepustnostjo pregrade, ki jo povzroči astrovirus (Marvin et al..2015). Vendar so bile ugotovitve za TLR3 in OASL drugačne od tistih za druge PRR in protivirusne proteine ​​v vranici, saj se je izražanje tako TLR3 kot OASL zmanjšalo pri 14 dpi v primerjavi s 7 dpi. To je lahko povezano z regulacijo negativnih povratnih informacij ali zmanjšanjem virusne obremenitve. V skladu s tem je lL-1B pri 14 dpi lahko posledica telesnih regulacijskih mehanizmov proti prekomerni tvorbi vnetnih citokinov. Zanimivo je, da je bila raven mRNA I-1 v ledvicah v okuženi skupini znižana. Nižja raven tega vnetnega citokina lahko pomaga ublažiti poškodbe ledvic. Prejšnje študije so poročale, da okužbe s človeškim astrovirusom in puranjim astrovirusom tipa 2 (TASt V-2) niso bile povezane z vnetjem in so povzročile le malo lezij v črevesnih resicah (Koci et al..2003; Sebire et al.2004), kar kaže da je to lahko značilnost okužbe z astrovirusom v epitelijskih celicah. I-6 je tudi vnetni citokin, ki inducira protivirusne učinke prek učinkovitega imunskega odziva, vendar je vključen tudi v procese, ki vodijo do poškodb ožilja,vnetježilne stene in tromboza. V naši študiji po okužbi z GNAstV v vranici niso ugotovili pomembne spremembe IL-6; to je lahko povezano z velikimi razlikami med posameznimi gosi. Vendar se je izražanje I{1}} zmanjšalo v ledvicah, podobno kot pri -1B; to lahko tudi pomaga ublažiti poškodbe ledvic. I-8 je posrednik, odgovoren za pridobivanje nevtrofilcev, ki sodelujejo pri lokalnem vnetnem infiltratu. V tej študiji je bil I-8 povečan v vranici in ledvicah in je tako morda prispeval k vnetju. IL-10 je protivnetni citokin, ki lahko zavre nastajanje vnetnih citokinov. V tej študiji je GNAstV povzročil očitno znižanje ravni IL-10 v vranici; to je lahko znak resnega vnetja vranice in eden od vzrokov za poškodbo vranice. Pokazalo se je tudi, da okužba z drugimi virusi, kot sta virus japonskega encefalitisa in virus Zika, povzroči zmanjšanje izražanja I-10 (Swarup et al. 2007; Abreu 2019), toda natančen mehanizem osnovno GNAstr Vinfection potrebuje nadaljnje študije. TGF- je imunosupresivni citokin. Tako povečanje ravni TGF-B v vranici in ledvicah kaže, da lahko okužba z GNAstV povzroči imunsko supresijo. Poleg tega so poročali, da je okužba s T AStV-2 povečala serumsko raven TGF- pri puranih (Koci et al. 2003). Pokazalo se je, da povečana proizvodnja TGF zavira imunski odziv in pospešuje replikacijo virusa (Letterio in Roberts, 1998). Zato lahko povečana proizvodnja TGF prispeva k replikaciji GNAstV z zaviranjem imunskega odziva gostitelja. iNOS je pomembna sestavina prirojenega imunskega odziva in ima ključno vlogo pri nadzoru virusnih okužb. V naši študiji so ugotovitve pokazale, da je okužba z GNAstV

očitno reguliran izraz INOS. Visoka proizvodnja iNOS lahko gostitelju omogoči, da se upre virusni okužbi. Naši rezultati so bili v skladu s tistimi iz prejšnjih študij, ki so pokazale, da okužba s TAStV-2 inducira proizvodnjo iNOS, kar omejuje replikacijo astrovirusa (Qureshi et al., 200l; Koci et al., 2004; Meyerhoff et al., 2012 ).

Prilagodljivi imunski sistem ima ključno vlogo pri obvladovanju virusnih okužb. V naši študiji je GNAstVinfection povečal raven mRNA MHC Ia, MHC Iix in CD8 plus, kar kaže, da so bili aktivirani humoralni in celični imunski odzivi. Prej so poročali, da okužba s človeškim astrovirusom sproži proizvodnjo protiteles, ki lahko nevtralizirajo virus (Kurtzand Lee, 1978). Vendar pa v študiji niso bile ugotovljene pomembne spremembe v ekspresiji CD4 in mRNA. Glede na to, da so celice CD4"T bistvene za zorenje celic B in specifičnost protiteles, je možno, da GNAst V ne bi mogel inducirati močnega humoralnega imunskega odziva. To lahko pojasni, zakaj pri 7 dpi ni bilo opaziti očitnega povečanja ekspresije MHC Ⅱa. Poleg tega , so se ravni mRNA CD8 in MHCIa pri 14 dpi zmanjšale v primerjavi s 7 dpi. To je lahko povezano z zmanjšanjem virusne obremenitve, kot je navedeno zgoraj. V tej študiji protitelesa GNAst V niso odkrili, ker ni na voljo komercialnega kompleta. Zato , je treba vlogo protiteles pri GNAstVinfection nadalje raziskati.

Za zaključek so naši podatki razkrili vzorce imunskega odziva v vranici in ledvicah gosi, okuženih z GNAst V. Pri okužbi z GNAst V so se aktivirali geni, povezani s prirojeno in adaptivno imunostjo. Vendar proizvodnja citokinov in protivirusnih beljakovin ni zaščitila gosičkov pred boleznijo. To je prva študija, ki poroča o spremembah v izražanju genov, povezanih z imunskim sistemom, kot odziv na GNAst Vinfection, kar lahko dodatno pomaga razjasniti molekularne mehanizme interakcij GNAstV gostitelja.