siJezik
Dom / znanje / Vsebine

znanje

Izboljšana antimelanogeneza in antioksidativni učinki polisaharida iz semen Cuscuta Chinensis Lam po encimski hidrolizi

Mar 30, 2023

Povzetek

Polisaharid Cuscuta chinensis (CPS) je bil ekstrahiran z vročo vodo in encimsko hidroliziran polisaharid C. chinensis (ECPS) je bil proizveden s postopkom encimske hidrolize mananaze. Namen te raziskave je bil raziskati antimelanogeno delovanje ECPS in CPS v celicah melanoma B16F10. In vitro antioksidativno aktivnost so ocenili z njihovo zmanjševalno močjo železovega železa in aktivnostmi DPPH, ki lovijo proste radikale. Porazdelitev molekulske mase polisaharidov je bila določena s pomočjo SEC-MALLS-RI. CPS je bil uspešno encimsko razgrajen z uporabo manoze in uteženi povprečni molekulski masi CPS in ECPS sta bili 434,6 kDa in 211,7 kDa. Rezultati testov biološke aktivnosti kažejo, da ima encimsko hidroliziran polisaharid boljše antimelanogeno delovanje in antioksidativni učinek kot prvotni polisaharid. ECPS je pokazal antimelanogeno delovanje z znižanjem izražanja tirozinaze, MITF in TRP-1 brez citotoksičnih učinkov v celicah melanoma B16F10. Skratka, ECPS ima potencial, da postane izdelek za beljenje kože. Glede na ustrezne študije,cistancheje navadno zelišče, ki je znano kot "čudežno zelišče, ki podaljšuje življenje". Njegova glavna sestavina je cistanozid, ki ima različne učinke, kot so antioksidativni, protivnetni in spodbujanje imunske funkcije. Mehanizem medcistancheinbeljenje koželeži v antioksidativnem učinku cistančnih glikozidov.Melaninv človeški koži nastaja z oksidacijo tirozina, ki jo kataliziratirozinaza, oksidacijska reakcija pa zahteva sodelovanje kisika, zato radikali brez kisika v telesu postanejo pomemben dejavnik, ki vpliva na proizvodnjo melanina. Cistanche vsebuje cistanozid, ki je antioksidant in lahko zmanjša nastajanje prostih radikalov v telesu.zaviranje proizvodnje melanina.

Ključne besede:Polisaharid Cuscuta chinensis; Antimelanogeno delovanje; Polisaharid za encimsko hidrolizo; Antioksidativno delovanje

Uvod 

Melanin je končni produkt transformacije L-tirozina, ki je glavni dejavnik barve las in kože ter ima ključno vlogo pri zaščiti pred poškodbami zaradi ultravijoličnega sevanja (1). Vendar pa je lahko kopičenje melanina vpleteno v nenormalno pigmentacijo in povzroči hiperpigmentacijo kože, melazmo, solarno melanozo in efelide (2). Biosinteza melanina vključuje zaporedje encimskih in oksidativnih reakcij, tirozinaza pa ima v procesu pomembno vlogo (3). Protein, povezan s tirozinazo (TRP-1), olajša tvorbo DHICA oksidaze v biosintezni poti melanina (4). Znotrajcelični transkripcijski faktor, povezan z mikroftalmijo (MITF), je pomembna transkripcija

regulator genov za biosintezo melanina. MITF sodeluje tudi pri uravnavanju pigmentacije, proliferacije in diferenciacije melanocitov (5). signalizacija receptorja a-MSH-melanokortina 1 se pojavi v melanogenih specifičnih encimih, vključno s TRP-1; tirozinazo uravnava tudi MITF (5). Številna sredstva za beljenje kože imajo antimelanogene učinke z uravnavanjem izražanja tirozinaze ali zaviralnimi učinki na aktivnost tirozinaze. Poleg tega na vsebnost melanina vplivata tudi znotrajcelična raven antioksidantov in proizvodnja prostih radikalov (6). Zato so inhibitorji tirozinaze in antioksidantne spojine pogosto izbrani kot sredstva za beljenje kože. Cuscuta chinensis Lam., ki se v kitajščini imenuje TuSiZi, je tradicionalna kitajska medicina, ki se na splošno uporablja kot funkcionalna hrana in je znano, da krepi sposobnost reproduktivnega sistema (7). V zadnjih letih so nekatera poročila pokazala njegovo uporabo za zdravljenje peg in vitiliga (8). Druga poročila so pokazala, da pozitivno vpliva na zaščito kože (9) in inducira zaviranje aktivnosti tirozinaze (10).

rou cong rong whitening

Kliknite Rou Cong Rong Prednosti za beljenje

Vprašaj za več:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Polisaharidi so glavne sestavine vodnega izvlečka C. chinensis Lam. semena, za katera velja, da delujejo proti apoptozi (11) in imunološko (12). Prejšnji rezultati analize so pokazali, da C. chinensis Lam. polisaharid je sestavljen iz fruktoze, manoze, ksiloze in arabinoze; manoza je glavna sestavina sladkorja (13). Mnogi raziskovalci so dokazali, da viskoznost (14), porazdelitev molekulske mase (Mw) (15) in delež monosaharidov (16) polisaharidov močno vplivajo na njihovo bioaktivnost. Poleg tega so nedavne raziskave pokazale, da imajo razgrajeni polisaharidi z nizko Mw večjo antioksidativno in zaviralno aktivnost tirozinaze kot prvotni polisaharid (17). Tako je proizvodnja polisaharida z nizko Mw iz C. chinensis Lam. seme je potrebno za izboljšanje njegove bioaktivnosti. Med različnimi procesi razgradnje so glavne prednosti encimske razgradnje specifičnost substrata, visoka selektivnost in blagi pogoji, pri katerih nastanejo hidrolizati z dobro definiranimi strukturami (18).

Na podlagi teh farmakoloških študij smo domnevali, da sta polisaharid C. chinensis (CPS) in encimsko hidroliziran polisaharid C. chinensis (ECPS) lahko učinkovita botanična zdravila za izboljšanje hiperpigmentacije. Manaza je bila uporabljena za pridobivanje nizke Mw ECPS iz semen. Poleg tega so ocenili antimelanogenezo in antioksidativno aktivnost polisaharidov z različno Mw ter raziskali razmerje med bioaktivnostjo in Mw polisaharidov.

Material in metode

Reagenti

Kemikalije za encimsko in antioksidativno delovanje smo nabavili pri Sigma Co. (ZDA). Vsi ostali reagenti in kemikalije so bili kupljeni pri Aladinu (Kitajska).

Priprava CPS in ECPS

Zdravilne snovi iz semen Cuscuta chinensis Lam je zagotovil Guang Dong Feng Chun Pharmaceutical CO., LTD (Kitajska). Približno 500 g suhih materialov smo zdrobili v prah in jih namakali s 1200 ml 80-odstotnega etanola 24 ur pri sobni temperaturi, da smo odstranili lipide, oligosaharide in obarvane materiale. Predobdelane vzorce smo infiltrirali s krpo, nato pa smo posušeni ostanek trikrat ekstrahirali s 3000 ml vode pri 90 stopinjah. Vodne ekstrakte smo ločili od ostanka s centrifugiranjem (4000 g 5 minut pri 22 stopinjah) in nato koncentrirali pri 70 stopinjah pod vakuumom; kondenzat smo oborili s 60 odstotnim etanolom pri 3 stopinjah 24 ur. Nazadnje smo oborino deproteinizirali z metodo Sevag, dializirali z membrano 3500 Da, liofilizirali in nato označili s polisaharidom C. chinensis (CPS).

Encimsko hidroliziran polisaharid C. chinensis (ECPS) je bil pridobljen s hidrolizo z manozo (0,1 odstotka v natrijevem acetatnem pufru) v razmerju manoza/substrat 5:1 (v/w) pri 60 stopinjah, pH 4,5 za 6 ur. Nato smo reakcijo katalize prekinili v vreli vodi 10 minut. Reakcijsko raztopino smo centrifugirali pri 10,000 g 15 minut (4 stopinje), supernatant pa zbrali za dializo pri 3 stopinjah 3 dni z membrano 3500 Da, da smo odstranili majhne molekularne snovi, in ga liofilizirali.

Vsebnost ogljikovih hidratov je bila testirana z metodo fenolne žveplove kisline z glukozo kot standardno snovjo umeritvene krivulje.

cistanche tubulosa

Meritev SEC-MALLS-RI

Za detekcijo uteženih povprečnih molekulskih mas so uporabili velikostno izključitveno kromatografijo (Waters, ZDA) v kombinaciji z večkotnim detektorjem laserskega sipanja svetlobe (Wyatt, ZDA) in detektorjem lomnega indeksa (Waters, ZDA) (SEC-MALLS-RI). polisaharidi. SEC-MALLS-RI smo izvedli s kolono Phenomenex Polysep-GFC-Linear (8 mm×3{{10}}0 mm); vzorce (2 mg/mL) smo raztopili z mobilno fazo, ki je sestavljena iz 0,1 M natrijevega klorida. Injekcijska prostornina je bila 100 ml, hitrost pa je bila nastavljena na 0,7 ml/min.

Test inhibicije gobove tirozinaze

Inhibicija gobove tirozinaze (19) je bila izvedena, kot je bilo prej opisano s spremembami. Na kratko, 25 mL kojične kisline (pozitivna kontrola) ali raztopine vzorcev (25 mL 10 mM L-tirozina, 25 mL 0.5 mM L-DOPA in 875 mL 50 mM raztopino fosfatnega pufra (pH 6,5). Nato smo dodali 38 mL 2100 U/mL gobje tirozinaze in mešali. Po 0.5-h inkubaciji pri 37 stopinjah smo absorbanco izmerili z bralnikom mikroplošč pri 475 nm (Thermo Fisher, ZDA). Odstotek inhibicije aktivnosti tirozinaze je bil izračunan po naslednji formuli: odstotek inhibicije tirozinaze=[(A-kontrola – A-vzorec) / A-kontrola] ×100, kjer A-kontrola predstavlja absorbanco pri 475 nm brez vzorec in A-vzorec predstavlja absorbanco pri 475 nm z vzorcem.

Celična kultura in test sposobnosti preživetja

Mišje celice melanoma B16F10 so bile kupljene pri Biochemistry and Cell Biology (Kitajska). Celice smo vzdrževali v Dulbeccovem modificiranem mediju Eagle (DMEM), dopolnjenem z 10 odstotki fetalnega govejega seruma (FBS), 100 mg/ml streptomicina in 100 i.e./ml penicilina pri 37 stopinjah v vlažnem okolju, ki vsebuje 5 odstotkov CO2. Celice so bile posejane na plošče s kulturo in dopolnjene z različnimi koncentracijami vzorcev in a-melanocite stimulirajočega hormona (a-MSH) 72 ur, da bi izmerili aktivnost znotrajcelične tirozinaze in kvantificirali vsebnost melanina.

Test 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolijevega bromida (MTT) je bil izveden za testiranje viabilnosti celic (20). Na kratko, 96-plošče z vdolbinicami so bile zasejane z mišjimi celicami melanoma B16F10. Volumen 50 ml 2 mg/ml MTT smo prenesli v vsako vdolbino po obdelavi s 100 ml različnih koncentracij vzorca 24 ur. Po 4- h inkubacije smo reakcijo prekinili in dodali dimetil sulfoksid, da raztopimo netopni nastali produkt. Absorbanco smo izmerili pri 590 nm z bralnikom mikroplošč.

Merjenje vsebnosti melanina

Določanje vsebnosti melanina smo izvedli z nekoliko spremenjeno metodo (21). Po izpiranju z ledenim PBS smo celice melanoma (2 × 104 celic na vdolbino) zasejali v 96-ploščo z vdolbinicami in inkubirali pri 37 stopinjah 48 ur. Nato smo v vsako vdolbinico dodali 100 ml NaOH (1N), da smo celice melanoma raztopili pri 80 stopinjah 30 minut. Lizat smo centrifugirali pri 15,000 g 15 minut (4 stopinje). Nato smo z bralnikom mikroplošč izmerili absorbanco pri 405 nm. Vsi poskusi so bili izvedeni v treh izvodih.

Test znotrajcelične aktivnosti tirozinaze

Test aktivnosti znotrajcelične tirozinaze je bil izveden v skladu s predhodno literaturo z manjšimi spremembami (22). Na kratko, celice melanoma so bile lizirane z liznim pufrom (1 mM PMSF, 1 odstotek Tritona X-100, 20 mM natrijevega fosfata) z zamrzovanjem-odmrzovanjem. Po centrifugiranju lizata pri 15,000 g 10 min (4 stopinje) je bila vsebnost beljakovin v supernatantu določena s testom bicinhoninske kisline (BCA). Supernatant proteina (10 mg) smo prenesli v 100 mL reakcijske zmesi (0,1 % L-DOPA in 0,1 M fosfatni pufer). Po 60 minutah inkubacije pri 37 stopinjah smo izmerili aktivnost tirozinaze z bralnikom mikroplošč pri 450 nm. Vsi poskusi so bili izvedeni v treh izvodih.

Železovo železo zmanjša moč

Preskus redukcijske moči železovega železa je bil izveden v skladu s predhodno objavljeno metodo z manjšimi spremembami (23). Različne koncentracije vzorcev (2 ml) ali Vc (pozitivna kontrola) so bile zmešane z 2 ml kalijevega fericianida (1 odstotek, m/v) in 2 ml fosfatnega pufra (0.2 M, pH 6,8). Po inkubaciji pri 50 stopinj 30 minut smo 2 mL trikloroocetne kisline (10 odstotkov, W/V) prenesli v reakcijsko mešanico in centrifugirali pri 4000 g 15 minut (22 stopinj). Supernatant (2 mL) smo zmešali z mešanico, ki je vsebovala 2 mL destilirane vode in 0,4 mL FeCl3 (0,1 odstotka, m/v). Po 10 minutah inkubacije pri 37 stopinjah smo absorbanco izmerili z čitalcem mikroplošč pri 700 nm.

Test aktivnosti lovljenja radikalov DPPH

Test aktivnosti odstranjevanja DPPH je bil izveden, kot je bilo predhodno opisano, z nekaterimi modifikacijami (24). Na kratko, 2 mL vzorca smo dodali k 2 mL 0.1 mM raztopine DPPH in vrtinčili. Po 30 minutah inkubacije v temi smo absorbanco izmerili z čitalcem mikroplošč pri 517 nm.

Analiza izražanja beljakovin z Western blotom

cistanche supplement whitening

Po 72-urnem zdravljenju z različnimi koncentracijami ECPS smo celice sprali s PBS in lizirali v pufru RIPA (150 mM NaCl v 50 mM pH 8.0 Tris-HCl). , 0.5 odstotkov natrijevega deoksiholata, 1,0 odstotka nedietnega P-40 in 0,1 odstotka natrijevega dodecil sulfata). Po centrifugiranju pri 10,000 g 25 minut (4 stopinje) smo zbrali supernatant lizatov. Proteine ​​smo izpostavili 12-odstotni SDS-PAGE in nato prenesli na poliviniliden difluoridno membrano. Blokiranje je bilo izvedeno v tris-pufrirani fiziološki raztopini s Tween-20 in 2-odstotnim posnetim mlekom v prahu (TBST) in nato inkubirano 12 ur pri 4 stopinjah. Primarna uporabljena protitelesa so bila: anti-aktin (1:5000), anti-TRP-1 (1:500), anti-tirozinaza (1:500) in anti-MITF (1:1000). Primarna protitelesa smo odstranili in membrane dvakrat očistili s TBST. Po tem smo membrane s sekundarnim protitelesom, konjugiranim s hrenovo peroksidazo (Santa Cruz, ZDA), inkubirali 60 minut pri sobni temperaturi. Proteinske trakove smo ponovno sprali s TBST in vizualizirali s kompletom ECL (Amersham Pharmacia Biotech, ZDA) z uporabo sistema za slikanje UVP (UVP, ZDA).

Statistična analiza

Vsi rezultati so navedeni kot povprečje ± SD in poskusi so bili ponovljeni trikrat. Primerjave med skupinami so bile ocenjene z uporabo ANOVA, ki ji je sledil Dunnettov test. Posamezne primerjave med dvema skupinama so bile narejene s Studentovim t-testom. Vse statistične analize so bile narejene s programsko opremo SPSS (različica 16.0). Po0.05 se običajno šteje za statistično pomembno.

Rezultati

Mw in skupni polisaharidi ECPS in CPS

Celotna vsebnost polisaharidov v ECPS in CPS, izmerjena s fenol-žveplovo kislino, je bila 89,17 oziroma 90,26 odstotka. Medtem sta bila Mw ECPS in CPS izmerjena s SEC-MALLS-RI. Mw ECPS je bila 211,7 kDa, kar je bilo nižje od CPS (434,6 kDa). Slika 1A prikazuje relativno intenzivnost (RI) za ECPS in CPS; po encimski hidrolizi z manozo je bil najvišji retencijski čas ECPS daljši kot pri CPS. Kot je prikazano na sliki 1B, so bili različni utežni deleži polisaharidov prikazani kot funkcija molske mase vzorcev. Porazdelitev molske mase polisaharidov se je z encimsko hidrolizo bistveno spremenila. Diferencialni utežni delež ECPS v regiji z nizko Mw se je povečal, kar je nakazovalo, da je bil CPS encimsko razgrajen v polisaharid z nizko Mw.

rou cong rong benefits

Antioksidativne aktivnosti polisaharidov

Sposobnosti DPPH za odstranjevanje prostih radikalov ECPS in CPS so prikazane na sliki 2A. Aktivnosti lovljenja prostih radikalov vzorcev polisaharidov in Vc so pokazale aktivnost, odvisno od odmerka. V trenutni študiji je bila sposobnost CPS za lovljenje prostih radikalov nižja kot pri ECPS. Vendar sta oba pokazala nižji učinek lovljenja prostih radikalov kot pozitivni vzorec. Vrednosti IC50 za ECPS in CPS so bile 0.39 oziroma 0.51 mg/mL. Kot je prikazano na sliki 2B, je mogoče celotno antioksidativno aktivnost oceniti s testiranjem moči redukcije železovega železa. Koncentracije so se gibale od 0,1 do 1 mg/mL; oba vzorca polisaharidov in Vc sta pokazala antioksidativno aktivnost na način, ki je odvisen od odmerka. Poleg tega je bila vrednost absorbance ECPS vedno višja od vrednosti CPS pri isti koncentraciji.

Vpliv ECPS in CPS na aktivnost gobove tirozinaze in sposobnost preživetja celic

Kot je prikazano na sliki 2C, je inhibitorna aktivnost polisaharidov (0.1B1 mg/mL) za tirozinazo predstavljala razmerje, odvisno od odmerka. Poleg tega je bil zaviralni učinek ECPS vedno večji kot pri enaki koncentraciji CPS. Test MTT je bil izveden za oceno citotoksičnih učinkov ECPS in CPS v celicah melanoma B16F10. Kot je prikazano na sliki 2D, ni bilo pomembnih sprememb v viabilnosti celic B16F10 z različnimi koncentracijami (0B320 mg/ml) ECPS in CPS. Na podlagi teh rezultatov smo uporabili ta območja koncentracije v

nadaljnje raziskave.

cistanche for sale

Vpliv ECPS in CPS na znotrajcelično aktivnost tirozinaze in vsebnost melanina

Za primerjavo učinkov ECPS in CPS na aktivnost znotrajcelične tirozinaze in melanogenezo v celičnem modelu melanoma B16F10, inhibitorno moč ECPS in CPS na vsebnost melanina in aktivnost tirozinaze v B16F1{{, stimuliranem z a-MSH Pregledanih je bilo 16}} celic. Kot je prikazano na sliki 3, sta bili vsebnost melanina in aktivnost tirozinaze v celicah B16F10 znatno povečani v primerjavi z nestimuliranimi celicami B16F10 (Po 0.01). Pri koncentracijah 40 mg/mL (ECPS) in 160 mg/mL (CPS) je bilo mogoče zvišanje vsebnosti melanina ublažiti na način, odvisen od odmerka (Po0,01 in Po0,05). Podobno je zdravljenje z ECPS (40 mg/mL) in CPS (160 mg/mL) zavrlo aktivnost tirozinaze celic B16F10 (Po 0,01 in Po 0,05). Poleg tega je ECPS pokazal večjo inhibitorno aktivnost tirozinaze na melanogenezo kot CPS. ECPS (160 in 320 mg/mL) je imel učinek proti melanogenezi, primerljiv s pozitivno kontrolo (kojična kislina), ki se pogosto uporablja kot bioaktivna spojina za beljenje kože.

how to take rou cong rong

Učinek ECPS na ravni beljakovin tirozinaze, MITF in TRP-1 v celicah B16F10

Kot je prikazano na sliki 4, je ECPS znatno zmanjšal ravni ekspresije beljakovin tirozinaze, MITF in TRP-1 v celicah B16F10 na način, ki je odvisen od odmerka (Po0.05 in Po0. 01). Ti rezultati kažejo, da je ECPS zaviral izražanje tirozinaze z znižanjem izražanja beljakovin TRP-1 in MITF.

Diskusija

Naravni polisaharidi iz C. chinensis so bili deležni pozornosti zaradi dobrih učinkov na zaviranje tirozinaze, lovljenje prostih radikalov in zaščito kože (25–27). Vendar pa je malo raziskav osredotočeno na antimelanogenezno aktivnost encimske modifikacije polisaharidov. Prejšnje raziskave so pokazale, da so polisaharidi, razgrajeni s postopkom encimske hidrolize, pokazali boljši učinek lovljenja prostih radikalov (28). Poleg tega so biološke aktivnosti polisaharidov tesno povezane z njihovo porazdelitvijo Mw. Teoretično so polisaharidi z nizko Mw bolj aktivni kot polisaharidi z visoko Mw zaradi njihove visoke penetracije v celične membrane (29, 30). Vendar pa antimelanogenezni učinek ECPS na celice B16F10 še ni bil raziskan. Polisaharid z nizko Mw je bil pripravljen z encimsko hidrolizo z manozo.

Oksidativni stres lahko povzroči prekomerno količino prostih radikalov in povzroči oksidativne poškodbe. Prejšnje študije so dokazale, da je kožna bolezen tesno povezana s kopičenjem prostih radikalov (31). Poleg tega ima presežek prostih radikalov ključno vlogo pri zaviranju melanogeneze celic melanoma in rasti melanocitov (32). Tirozinaza je večnamenski oksidacijski encim, ki vsebuje bron in je ključnega pomena pri spodbujanju biosinteze melanina (33). Pigmentacija kože in različne kožne bolezni pa so tesno povezane s kopičenjem melanina in povzročajo resen estetski problem (34).

Aktivne sestavine z antioksidativnimi in antitirozinaznimi sposobnostmi lahko ščitijo kožo in zavirajo melanogenezo (35). Naši rezultati so pokazali, da je nižja Mw encimsko modificiranih polisaharidov pokazala boljše antioksidativne in antitirozinazne aktivnosti kot originalni polisaharidi in vitro. Izboljšanje se pripisuje večji površini in boljši topnosti v vodi, kar je bilo skladno s prejšnjo študijo (17), ki je pokazala, da ima razgrajeni polisaharid iz Sargassum fusiforme boljše delovanje proti tirozinazi in antioksidativno delovanje kot prvotni polisaharid.

cistanche reddit whitening

Normalni melanociti ležijo na stičišču povrhnjice in dermisa kože in proizvajajo melanin, ki se prenese v keratinocite (36). V tej študiji so bile uporabljene mišje celice melanoma B16F10, ker imajo melanogene mehanizme, znano je, da imajo znotrajcelično tirozinazo in lahko tvorijo melanin, ki je povezan s stimulacijo a-MSH in melanogenezo (37). Aktivnost tirozinaze, vsebnost melanina in viabilnost celic so bili testi in vitro, uporabljeni za pregled antimelanogeneze v tej študiji. CPS in ECPS sta pokazala od odmerka odvisen zaviralni učinek na aktivnost tirozinaze in sintezo melanina v celicah B16F10. ECPS je pokazal močnejši učinek proti sintezi melanina in proti tirozinazi.
S tirozinazo sorodne beljakovine-1 (TRP-1) in tirozinaza igrata ključno vlogo pri biosintezi melanina in poteh melanogeneze (38). MITF je celični transkripcijski faktor gena za tirozinazo, ki sodeluje pri melanogenezi. Običajno aktivacija TRP-1 in tirozinaze poveča izražanje proteina MITF in povzroči povečanje sinteze melanina (39). Tako lahko sredstva za beljenje kože zavirajo signalno pot, ki sodeluje pri aktivaciji TYP-1 ali tirozinaze. Zato smo raziskali učinke ECPS na izražanje TRP-1, celične tirozinaze in proteina MITF, da bi preučili mehanizme, na katerih temelji zaviranje aktivnosti tirozinaze in melanogeneze. Rezultati Western blot testa so pokazali, da je ECPS zaviral ekspresijo TRP-1, tirozinaze in MITF v celicah B16F10 in nakazal, da je ECPS zmanjšal melanogenezo z znižanjem ekspresije tirozinaze, MITF in TRP-1 v celicah melanoma B16F10. Rezultat je bil iz prejšnje študije, ki je pokazala, da je vodni izvleček iz semen Cuscuta japonica znatno zaviral sintezo melanina, ki jo povzroča a-MSH, in aktivnost tirozinaze z zaviranjem fosforilacije p38 MAPK, zaviranjem ravni cAMP in posledično zmanjšanjem izražanja TRP in MITF (40). .
Če povzamemo, je imel encimsko modificiran polisaharid boljše antioksidativne in antimelanogene učinke kot prvotni polisaharid. Poleg tega je bil ta antimelanogeni učinek ECPS posredovan z zaviranjem izražanja TRP-1, tirozinaze in MITF v mišjih celicah B16F10. ECPS se lahko uporablja za uporabo na področju kozmetičnih in medicinskih izdelkov.

Zahvala

To delo je podprla Kitajska nacionalna naravoslovna fundacija (dotacija št. 81373640).

Reference

1. Riley PA. Melanogeneza in melanom. Raziskave pigmentnih celic 2003; 16: 548–552, doi: 10.1034/j.1600-0749. 2003.00069.x.
2. Ortonne JP, Bissett DL. Najnovejši vpogled v hiperpigmentacijo kože. J Investig Dermatol Symp Proc 2008; 13: 10–14, doi: 10.1038/jidsymp.2008.7.
3. Arung ET, Kuspradini H, Kusuma IW, Shimizu K, Kondo R. Validacija listov Eupatorium triplinerve Vahl, zelišča za nego kože iz vzhodnega Kalimantana, z uporabo testa biosinteze melanina. J Acupunct Meridian Stud 2012; 5: 87–92, doi: 10.1016/ j.jams.2012.01.003.
4. Kobayashi T, Urabe K, Winder A, Jiménez-Cervantes C, Imokawa G, Brewington T, et al. S tirozinazo povezan protein 1 (TRP1) deluje kot DHICA oksidaza pri biosintezi melanina. EMBO J 1994; 13: 5818–5825.
5. Costin GE, Hearing VJ. Pigmentacija človeške kože: melanociti spreminjajo barvo kože kot odziv na stres. FASEB J 2007; 21: 976–994, doi: 10.1096/fj.06-6649rev.
6. Galván I, Alonso-Alvarez C. Intracelularni antioksidant določa izražanje signala na osnovi melanina pri ptici. PLoS One 2008; 3: e3335, doi: 10.1371/journal.pone. 0003335.
7. Yang J, Wang Y, Bao Y, Guo J. Celotni flavoni iz auskultata semena obrnejo zmanjšanje ravni testosterona in izražanje gena androgenega receptorja pri miših s pomanjkanjem ledvic-janga. J Etnofarmakol 2008; 119: 166–171, doi: 10.1016/j.jep.2008.06.027.
8. Donnapee S, Li J, Yang X, Ge AH, Donkor PO, Gao XM, et al. Cuscuta chinensis Lam.: Sistematični pregled etnofarmakologije, fitokemije in farmakologije pomembnega tradicionalnega zeliščnega zdravila. J Etnofarmakol 2014; 157: 292–308, doi: 10.1016/j.jep.2014.09.032.
9. Nisa M, Akbar S, Tariq M, Hussain Z. Vpliv vodnega izvlečka Cuscuta chinensis na kožne papilome in karcinome, ki jih povzroča 7,12-dimetilbenz[a]antracen, pri miših. J Ethnophar macol 1986; 18: 21–31, doi: 10.1016/0378-8741(86)90040-1.
10. Wang TJ, An J, Chen XH, Deng QD, Yang L. Ocena učinka semen Cuscuta chinensis na melanogenezo: Primerjava frakcij vode in etanola in vitro in in vivo. J Etnofarmakol 2014; 154: 240–248, doi: 10.1016/j.jep. 2014.04.016.
11. Sun SL, Guo L, Ren YC, Wang B, Li RH, Qi YS, et al. Antiapoptozni učinek polisaharida, izoliranega iz semen Cuscuta chinensis Lam, na kardiomiocite pri starajočih se podganah. Mol Biol Rep 2014; 41: 6117–6124, doi: 10.1007/s11033- 014-3490-1.
12. Wang Z, Fang JN, Ge DL, Li XY. Kemijska karakterizacija in imunološke aktivnosti kislega polisaharida, izoliranega iz semen Cuscuta chinensis Lam. Acta Pharmacol Sin 2000; 21: 1136–1140.
13. Yang S, Xu X, Xu H, Xu S, Lin Q, Jia Z, et al. Čiščenje, karakterizacija in biološki učinek odpravljanja pomanjkanja ledvičnega janga polisaharidov iz mišičnega semena. Carbohydr Polym 2017; 175: 249–256, doi: 10.1016/j.carbpol. 2017.07.077.
14. Katayama S, Nishio T, Nishimura H, Saeki H. Imunomodulatorne lastnosti visoko viskoznega polisaharidnega ekstrakta iz alge Gagome (Kjellmaniella crassifolia). Rastlinska hrana Human Nutr 2012; 67: 76–81, doi: 10.1007/s11130-011- 0271-z.
15. Pengzhan Y, Ning L, Xiguang L, Gefei Z, Quanbin Z, Pengcheng L. Antihiperlipidemični učinki sulfatiranih polisaharidov različnih molekulskih mas iz Ulva pertusa (Chlorophyta). Pharmacol Res 2003; 48: 543–549, doi: 10.1016/ S1043-6618(03)00215-9.
16. Jiang Y, Qi X, Gao K, Liu W, Li N, Cheng N, et al. Razmerje med molekulsko maso, sestavo monosaharida in imunobiološko aktivnostjo polisaharidov Astragalus. Glycoconj J 2016; 33: 755–761, doi: 10.1007/ s10719-016-9669-z.
17. Chen BJ, Shi MJ, Cui S, Hao SX, Hider RC, Zhou T. Izboljšana antioksidativna in anti-tirozinazna aktivnost polisaharida iz Sargassum fusiforme z razgradnjo. Int J Biol Macromol 2016; 92: 715–722, doi: 10.1016/j.ijbiomac. 2016.07.082.
18. McCleary BV. Encimska modifikacija rastlinskih polisaharidov. Int J Biol Macromol 1986; 8: 349–354, doi: 10.1016/ 0141-8130(86)90054-1.
19. Baurin N, Arnoult E, Scior T, Do QT, Bernard P. Predhodni pregled nekaterih tropskih rastlin za aktivnost proti tirozinazi. J Ethnopharmacol 2002; 82: 155–158, doi: 10.1016/S0378- 8741(02)00174-5.
20. Mosmann T. Hitri kolorimetrični test za celično rast in preživetje: uporaba pri testih proliferacije in citotoksičnosti. J Immunol Methods 1983; 65: 55–63, doi: 10.1016/0022- 1759(83)90303-4.
21. Hosoi J, Abe E, Suda T, Kuroki T. Regulacija sinteze melanina v celicah mišjega melanoma B16 z 1 alfa, 25-dihidroksi vitaminom D3 in retinojsko kislino. Cancer Res 1985; 45: 1474–1478.
22. Wang HM, Chen CY, Wen ZH. Identifikacija inhibitorjev melanogeneze iz Cinnamomum subavenium s presejalnimi sistemi in vitro in in vivo z usmerjanjem na človeško tirozinazo. Exp Dermatol 2011; 20: 242–248, doi: 10.1111/j.1600-0625. 2010.01161.x.

23. Berker KI, Güc ¸lü K, Tor I˙, Apak R. Primerjalno vrednotenje testov antioksidativne zmogljivosti, ki znižujejo moč Fe(III) v prisotnosti fenantrolina, bat-ho-fenantrolina, tripiridiltriazina (FRAP) in fericianida reagenti. Talanta 2007; 72: 1157-1165, doi: 10.1016/j.talanta.2007.01.019.

24. Parejo I, Codina C, Petrakis C, Kefalas P. Vrednotenje čistilne aktivnosti, ocenjene s Co(II)/EDTA-inducirano luminolno kemiluminiscenco in DPPH ● (2,2-difenil-1 pikril hidroksil ) test prostih radikalov. J Pharmacol Toxicol Methods 2000; 44: 507–512, doi: 10.1016/S1056-8719(01)00110-1.

25. Rout S, Banerjee R. Lastnosti čiščenja prostih radikalov, anti-glikacije in inhibicije tirozinaze polisaharidne frakcije, izolirane iz skorje Punica granatum. Bioresour
Technol 2007; 98: 3159–3163, doi: 10.1016/j.biortech.2006. 10.011.
26. Yu P in Sun H. Čiščenje fukoidana iz polisaharida alg in njegove inhibitorne kinetike za tirozinazo. Polimeri ogljikovih hidratov 2014; 99: 278-283, doi: 10.1016/ j.carbpol.2013.08.033.
27. Wei X, Liu Y, Xiao J, Wang Y. Zaščitni učinki čajnih polisaharidov in polifenolov na kožo. J Agric Food Chem 2009; 57: 7757–7762, doi: 10.1021/jf901340f.
28. Xu J, Xu LL, Zhou QW, Hao SX, Zhou T, Xie HJ. Izboljšana in vitro antioksidativna aktivnost polisaharidov iz Enteromorpha prolifera z encimsko razgradnjo. J Food Biochem 2016; 40: 275–283, doi: 10.1111/jfbc.12218.
29. Zhou J, Hu N, Wu Yl, Pan Yj, Sun CR. Predhodne študije o kemijski karakterizaciji in antioksidativnih lastnostih kislih polisaharidov iz Sargassum fusiforme. J Zhejiang Univ Sci B 2008; 9: 721–727, doi: 10.1631/jus. B0820025.
30. Wu Q, Zheng C, Ning ZX, Yang B. Modifikacija polisaharidov z nizko molekulsko maso iz Tremella fuciformis in njihova antioksidativna aktivnost in vitro. Int J Mol Sci 2007; 8: 670–679, doi 10.3390/i8070670.
31. Yasui H, Sakurai H. Od starosti odvisna generacija reaktivnih kisikovih vrst v koži živih brezdlakih podgan, izpostavljenih UVA svetlobi. Exp Dermatol 2003; 12: 655–661, doi: 10.1034/ j.1600-0625.2003.00033.x.
32. Yamakoshi J, Otsuka F, Sano A, Tokutake S, Saito M, Kikuchi M, et al. Svetleči učinek na ultravijolično povzročeno pigmentacijo kože morskega prašička z oralnim dajanjem izvlečka grozdnih pečk, bogatega s proantocianidinom. Pigment Cell Res 2003; 16: 629–638, doi: 10.1046/j.1600-0749. 2003.00093.x.
33. Strothkamp KG, Jolley RL, Mason HS. Kvartarna struktura tirozinaze gob. Biochem Biophys Res Commun 1976; 70: 519–524, doi 10.1016/0006-291X(76)91077-9.
34. Parvez S, Kang M, Chung HS, Bae H. Naravni zaviralci tirozinaze: mehanizem in uporaba v industriji zdravja kože, kozmetiki in kmetijstvu. Phytother Res 2007; 21: 805–816, doi: 10.1002/ptr.2184.

35. Perluigi M, De Marco F, Foppoli C, Coccia R, Blarzino C, Luisa Marcante M, et al. Tirozinaza ščiti človeške melanocite pred spojinami, ki ustvarjajo ROS. Biochem Biophys Res Commun 2003; 305: 250–256, doi: 10.1016/S0006- 291X(03)00751-4.

36. Hirobe T. Kako sta urejena proliferacija in diferenciacija melanocitov? Pigment Cell Melanoma Res 2011; 24: 462–478, doi: 10.1111/j.1755-148X.2011.00845.x.
37. Buscà R, Ballotti R. Ciklični AMP ključni glasnik pri uravnavanju pigmentacije kože. Pigment Cell Res 2000; 13: 60–69, doi: 10.1034/j.1600-0749.2000.130203.x.
38. Slominski A, Tobin DJ, Shibahara S, Wortsman J. Pigmentacija melanina v koži sesalcev in njena hormonska regulacija. Physiol Rev 2004; 84: 1155–1228, doi: 10.1152/physrev. 00044.2003.
39. Shibahara S, Yasumoto KI, Amae S, Udono T, Watanabe KI, Saito H, et al. Regulacija izražanja genov, specifičnih za pigmentne celice, z MITF. Pigment Cell Res 2000; 13: 98-102, doi: 10.1034/j.1600-0749.13.s8.18.x.
40. Jang JY, Kim HN, Kim YR, Choi YH, Kim BW, Shin HK, et al. Vodna frakcija iz semen Cuscuta japonica zavira sintezo melanina z zaviranjem signalne poti p38 mitogen-aktivirane proteinske kinaze v celicah B16F10. J Etnofarmakol 2012; 141: 338–344, doi: 10.1016/j.jep. 2012.02.043.
Morda vam bo všeč tudi