Interlevkini, kemokini in superdružina ligandov faktorja tumorske nekroze v patogenezi okužbe z virusom Zahodnega Nila

Povzetek: Virus Zahodnega Nila (WNV) je patogen, ki ga prenašajo komarji in lahko pri dovzetnih gostiteljih povzroči encefalitis in smrt. Citokini igrajo ključno vlogo pri vnetju in imunosti kot odziv na okužbo z WNV. Mišji modeli zagotavljajo dokaze, da nekateri citokini nudijo zaščito pred akutno okužbo z WNV in pomagajo pri očistku virusa, medtem ko imajo drugi večplastno vlogo pri nevropatogenezi WNV in imunsko posredovanih poškodbah tkiva. Namen tega članka je zagotoviti posodobljen pregled vzorcev izražanja citokinov v človeških in poskusnih živalskih modelih okužb z WNV. Tukaj opisujemo interlevkine, kemokine in ligande naddružine faktorja tumorske nekroze, povezane z okužbo in patogenezo WNV, ter opisujemo kompleksne vloge, ki jih igrajo pri posredovanju zaščite in patologije centralnega živčnega sistema med ali po odstranitvi virusa. Z razumevanjem vloge teh citokinov med nevroinvazivno okužbo z WNV lahko razvijemo možnosti zdravljenja, katerih cilj je modulacija teh imunskih molekul za zmanjšanje nevrovnetja in izboljšanje rezultatov bolnikov.

Ključne besede: virus Zahodnega Nila; citokini; interlevkini; kemokini; ligandi superdružine faktorja tumorske nekroze; model okužbe

Kitajska rastlina cistanche - protitumorska

1. Uvod

Virus Zahodnega Nila (WNV) je enoverižni virus RNA v pozitivnem smislu, ki pripada serokompleksu japonskega encefalitisa, rodu Flavivirus, družini Flaviviridae [1]. Njegov življenjski cikel vključuje predvsem ptice in komarje, medtem ko ljudje, konji in drugi vretenčarji veljajo za naključne gostitelje [2]. Genom WNV je preveden v en sam polipeptid in ko- ter posttranslacijsko procesiran v deset proteinov: tri strukturne (kapsida C, membranski prekurzor prM in ovojnica E), ki tvorijo virion; sedem nestrukturnih proteinov (NS1, NS2A, NS2B, NS3, NS4A, 2K, NS4B in NS5), vključenih v cikel replikacije virusa, izogibanje prirojeni imunosti gostitelja in patogenezo WNV [3]; in en peptid 2K, ki igra vlogo pri preurejanju citoplazemskih membran in Golgijevem prometu proteina NS4A [4]. Dovzetnost za WNV je med gostitelji zelo različna [5]. Večina okužb z virusom WNV pri ljudeh je asimptomatskih ali blagih in se kažejo z glavobolom, šibkostjo in/ali zvišano telesno temperaturo [6]. Vendar pa bo majhen odstotek bolnikov, okuženih z WNV (manj kot 1 % [7]), razvil nevroinvazivno bolezen, vključno z meningitisom, encefalitisom ali akutno mlahavo paralizo, pri katerih nastopi smrt v 10–30 % primerov [8, 9]. . Dolgoročne telesne in nevrokognitivne posledice, vključno s šibkostjo, utrujenostjo, mialgijo, izgubo spomina ali sluha, depresijo in motorično disfunkcijo, se lahko pojavijo tudi pri 30 do 60 % bolnikov, pri katerih se razvije klinična bolezen [9–11]. Čeprav se trenutno obravnava kot prednostna zoonotska bolezen za prebivalstvo ZDA [12], ni standardnih smernic za zdravljenje razen podporne oskrbe, niti ni na voljo zdravila ali cepiva, ki bi ga odobrila FDA za zdravljenje ali preprečevanje nevroinvazivne bolezni WNV, oziroma [8]. Za patogenezo WNV so značilne tri faze: (1) zgodnja faza okužbe kože in širjenje v lokalne odtočne bezgavke po ugrizu okuženega komarja, (2) širjenje virusa v periferne organe in (3) invazija osrednjih organov. živčni sistem (CNS) [13]. Za boj proti invaziji WNV gostitelj sesalec mobilizira tri obrambne linije: kožo in prirojeno imunost v zgodnji fazi, ki ji sledi prilagoditvena (humoralna in celična) imunost v poznejših fazah [13,14]. Citokini so signalni proteini, ki jih izražajo številne imunske in neimune celice sesalcev (slika 1). Njihova indukcija in regulacija sta tesno povezani z replikacijo WNV v zgodnji fazi okužbe [15–20]. Čeprav so vključeni v vse tri obrambne linije proti WNV, prispevajo tudi k imunsko posredovani poškodbi tkiva v možganih. Med temi citokini so interlevkini (IL), kemokini in ligandi superdružine faktorja tumorske nekroze (TNFSF) glavni akterji pri imunosti proti WNV, kar dokazuje profiliranje transkriptoma celic in tkiv, okuženih z WNV, z uporabo mikromrež DNA ali sekvenciranja RNA [21]. Več pregledov je osvetlilo njihovo vlogo pri flavivirusnih okužbah na splošno [22–24] in pri specifičnih flavivirusnih boleznih, vključno z virusoma denge [25,26] in zika [27]. Tesno povezani flavivirusi izzovejo različne imunomodulacijske profile pri svojih gostiteljih [28–30] in različno antagonizirajo protivirusne poti [31]; vendar se zdi, da ima patogeneza WNV edinstvene vidike v primerjavi z drugimi nevrotropnimi virusi [28,32], o katerih bomo razpravljali v tem pregledu. Zato je pomembno obravnavati vlogo citokinov v specifičnem kontekstu okužbe z WNV.

Slika 1. Celične tarče virusa Zahodnega Nila in ustrezen citokinski odziv pri sesalcih. Ilustracija je bila ustvarjena na Biorender.com. Okrajšave: BAFF: B-celični aktivacijski faktor; FasL: ligand Fas; TNF- : faktor tumorske nekroze - , TRAIL: ligand, ki inducira apoptozo, povezan s TNF.

Vse več je dokazov, da ima imunski odziv gostitelja, ki ga poganjajo citokini, ključno vlogo pri patogenezi WNV in izidu bolezni. Prvič, klinični podatki potrjujejo, da različni profili citokinov, odvisni od spola [33], zdravstvenega stanja [34] in človeških polimorfizmov v teh imunsko kodirajočih genih [35–37] korelirajo z različnimi izidi okužbe, kar spodbuja uporabo povezanih biomarkerjev za napovedovanje resnosti bolezni WNV v kliničnem okolju [33]. Drugič, uporaba citokinov kot agonistov ali blokiranje njihovih učinkov s farmacevtskimi ali genetskimi sredstvi v mišjih modelih je pokazala njihovo sposobnost, da popolnoma spremenijo fenotipe bolezni, povezanih z WNV [16,38–49]. Zato lahko izboljšano razumevanje udeležbe citokinov v patogenezi WNV ne le pomaga optimizirati diagnozo in prognozo, ampak tudi vodi raziskave o strategijah imunske modulacije za zdravljenje nevroloških bolezni, ki jih povzroča WNV. V tem pregledu povzemamo ugotovitve iz kliničnih študij in poskusov, izvedenih v zadnjih dveh desetletjih z uporabo modelov okužbe z WNV in vitro in in vivo za povzetek IL, kemokinov in ligandov TNFSF, ki sodelujejo pri okužbi z WNV, kažejo tiste, ki so znano pomembni pri Patogenezo WNV in opredeliti kandidate, ki potrebujejo nadaljnje raziskave, da bi prikrili njihovo ustreznost kot terapevtske tarče.

Prednosti cistanche tubulosa-Antitumor

2. Interlevkini (IL) pri okužbi z WNV

IL so proteini, ki modulirajo celično rast, diferenciacijo in aktivacijo med protivirusnim odzivom [50]. WNV inducira sproščanje vsaj 22 IL pri gostiteljih sesalcih (tabela S1). Do danes IL-1 , IL-6, IL-10, IL-12, IL-17A, IL-22 in IL{{ 9}} so neposredno raziskali (tabela 1), medtem ko je na voljo malo informacij o preostalih IL, ki sodelujejo pri imunskem odzivu na okužbo z WNV. Tabela 1. Povzetek interlevkinov, kemokinov, kemokinskih receptorjev in ligandov faktorja tumorske nekroze, ki se sprožijo po okužbi z virusom Zahodnega Nila (WNV), katere patogenezo so preučevali na modelih miši in vivo.

2.1. Družina interlevkinov-1

Trenutno 11 citokinov velja za člane družine IL-1: IL-1, IL-1, antagonist receptorja IL-1 [IL-1ra], IL-18, IL-33, IL-36 , IL-36 , IL-36 , IL-36ra, IL-37, in IL-38 [113,114]. Med njimi IL-1 [19,76,87,115], IL-1 [10,16,51–53,80,94,116], IL-1ra [16,29,77 ], IL-18 [117] in IL-33 [118] je znano, da se sproščajo kot odgovor na okužbo z WNV.

IL-1 je izjemno močan vnetni citokin, ki se sproži kot odziv na okužbo z WNV tako in vitro kot in vivo, na periferiji in v CŽS (tabela S1). Vlogo IL-1 pri okužbi z WNV so proučevali predvsem na mišjih modelih s pomanjkanjem IL-1R1 in nezmožnostjo odziva na IL-1, IL-1 ali IL{ {7}}ra [16,54,66,115]. Signalizacija IL-1R1 je miši zaščitila pred boleznijo in smrtnostjo WNV [16]. Med zgodnjim encefalitisom WNV je IL-1R1 nadzoroval replikacijo virusa in kasnejšo apoptozo znotraj nevronov [16,115]. Poleg tega je IL-1 nadziral infiltracijo levkocitov kot tudi T-celične odzive v osrednjem živčevju [54,66,115] in zaviral vnetje z znižanjem provnetnih citokinov, kot sta TNF- in IL-6 [16] in kemokini, kot sta CCL2 in CCL5 [16,51,54]. Intrakranialna injekcija WNV pri miših divjega tipa C57BL/6 je privedla do paradoksalnih rezultatov glede neposrednega učinka IL-1 na replikacijo virusa v možganih. Medtem ko v nekaterih študijah IL-1 ni neposredno vplival na replikacijo virusa v osrednjem živčevju [51,53,115], je bilo v drugi študiji ugotovljeno, da IL-1 posreduje pri virusni restrikciji, intrinzični osrednjem živčevju [16]. Razlike med temi študijami kljub uporabi istega modela okužbe je mogoče delno pojasniti z razlikami v virusnih sevih, uporabljenih za okužbo miši. Vzorci izražanja in vloge citokinov proti vnetnemu IL-1 in protivnetnemu IL-1ra med okužbo z WNV še vedno niso jasni. V človeških serumih je bila ekspresija IL-1ra različna pri z WNV okuženih predsimptomatskih in asimptomatskih darovalcih [29], vendar se je med akutno okužbo z WNV povečala [16,34]. Čeprav še nobena študija pri ljudeh ni poročala o regulaciji IL-1 med naravno okužbo z WNV, se modulacija IL-1 med okužbo z WNV razlikuje med študijami, ki uporabljajo eksperimentalne modele (tabela S1). IL-1 je ključni dejavnik pri zgodnji, akutni in hudi patogenezi WNV. Dejansko je IL-1 eden najzgodnejših citokinov, odkritih po piku okuženega komarja v mišjih modelih [22,62,119]. Poleg tega se te epidermalne dendritične celice (DC) in Langerhansove celice, posredovane s citokini, selijo iz povrhnjice v lokalne odtočne bezgavke [22,62,119]. V mišjih možganih so IL-1 izločali med akutno fazo, predvsem z infiltriranimi/rezidenčnimi makrofagi [54,63], in še kasneje med okrevanjem, predvsem z astrociti [63]. Trenutni dokazi kažejo, da ima IL-1 med boleznijo, ki jo povzroča WNV, dvojno vlogo, saj je zaščitna v akutni fazi in dolgoročno povzroča nevrološke posledice. Pri miših primanjkuje signaliziranja IL-1 in z apoptozo povezane pege podobne beljakovine, ki vsebujejo C-terminalno kaspazno rekrutacijsko domeno (ASC), ki inducira od kaspaze-1-odvisno vnetno aktivacijo in IL{{76} }, je bilo ugotovljeno, da poveča titer virusa WNV in resnost bolezni, zlasti v CŽS [16,51]. Poleg tega je bila pri ljudeh z anamnezo asimptomatske ali hude okužbe z WNV zmanjšana indukcija IL-1 v mononuklearnih celicah in makrofagih periferne krvi znak hude bolezni [94]. Pri krvodajalcih, ki so bili po rutinskem presejalnem pregledu krvi pozitivni na WNV RNA, je bil IL-1 v plazmi povečan šest mesecev po prvem darovanju krvi in ​​je bil v obratni korelaciji z obremenitvami WNV RNA [16]. Pri miših je taka trajna čezmerna ekspresija IL-1, ki jo sproži specifično NOD-podobno receptorsko pirin-vsebujoče proteine ​​3 (NLRP3), inflamasomska cepitev v astrocitih po obdobju okrevanja encefalitisa WNV [16,22,63,119], povzročilo pomanjkljivo prostorsko učenje in sinaptično okrevanje [53,63]. Tako se nepravilna aktivacija inflamasoma NLRP3 in izločanje IL-1 v možganih trenutno obravnava kot verjeten mehanizem za razvoj dolgotrajnih nevroloških posledic po okužbi z WNV [120]. IL-18 je tudi provnetni citokin, ki nastane po aktivaciji inflamasoma [121,122]. Okužba z WNV DC-jev, pridobljenih iz človeških primarnih monocitov, ali transformirane celične linije človeškega nevroblastoma (SK-N-SH, ATCC HTB-11™) ni povečala proizvodnje IL-18 [52,117]. Vendar je bil IL-18 povečan v vranici in pljučnem tkivu miši, okuženih z WNV [76]. IL-18 je predlagan za nadaljnjo imunopatogenezo DENV [123], vendar še niso bile izvedene nobene preiskave, ki bi to testirale med okužbo z WNV. Drugi član družine IL-1, IL-33, je bil povečan v vraničnih makrofagih miši, okuženih z WNV [118]. Signaliziranje IL-33 prek receptorja ST2 lahko sproži vnetne in protivnetne odzive [124,125]. Na splošno se pri virusnih okužbah IL-33 šteje za zaščitno sredstvo, saj poveča odziv celic CD8+ T [126] in ublaži virusni encefalitis z znižanjem izražanja iNOS v osrednjem živčevju [127].

Zato bi lahko s tem razumevanjem spodbujanje aktivnosti ali proizvodnje tega citokina med okužbo z WNV predstavljalo terapevtske prednosti. Potrebno je več dela za raziskovanje funkcij tega citokina v kontekstu okužbe z WNV.

Superman herbs cistanche—protivnetna

2.2. Družina interlevkina 6

IL-6 je pleiotropni citokin, vključen v številne biološke procese, vključno z imunskimi odzivi, hematopoezo, presnovo kosti in embrionalnim razvojem [128]. Je eden najpomembnejših citokinov med virusno okužbo [129] in študije z uporabo različnih eksperimentalnih modelov opisujejo spremembe IL-6 med okužbo z WNV (tabela S1). Študije človeških citokinov po okužbi z WNV zelo kažejo na pomembno vlogo IL-6. Akutna okužba pri ljudeh lahko povzroči visoko sintezo IL-6 v cerebrospinalni tekočini [130] in serumu [130,131] bolnikov z vročino WNV in nevroinvazivno boleznijo WNV. Poleg tega so bile v drugi študiji ravni IL-6 v serumu nižje pri zdravih viremičnih posameznikih v primerjavi z neokuženimi posamezniki pred in po serokonverziji IgM [124]. Poročali so o podaljšani ekspresiji IL-6 v serumu posameznikov, ki so po simptomatski okužbi z WNV doživeli hudo dolgotrajno utrujenost [132]; vendar še niso bile izvedene nobene študije, ki bi podprle vzročno povezavo med ravnmi IL-6 in resnostjo bolezni, povezane z WNV, pri ljudeh. Ena sama študija in vivo je raziskala vpletenost IL-6 v okužbo z WNV [67] in opisala, da so miši s pomanjkanjem IL-6- ob okužbi z WNV pokazale podobno stopnjo umrljivosti kot miši divjega tipa [67]. . Potrebno je nadaljnje delo, da se pojasni, ali je to posledica manjše vloge tega citokina pri okužbi z WNV ali posebnih eksperimentalnih pogojev, uporabljenih v tej študiji.

2.3. Družina interlevkina 17

Trenutno družino IL-17 predstavlja 6 vnetnih citokinov, in sicer IL-17A, IL-17B, IL-17C, IL-17D, IL{ {6}}E in IL-17F [133]. Med temi je IL-17A, provnetni citokin, povečan in vitro [43] in in vivo [43,76,85] po okužbi z WNV (tabela S1). Pri ljudeh so v odsotnosti simptomov pri posameznikih, okuženih z WNV, ugotovili povečane ravni IL-17 v primerjavi z ravnmi neokuženih krvodajalcev [29]. Nasprotno, zelo nizke ravni IL-17A v serumu in popolno odsotnost izražanja IL-17A v cerebrospinalni tekočini [130] so ugotovili tako pri bolnikih z vročino kot pri bolnikih z nevroinvazivnimi boleznimi. Pri štirih serološko potrjenih bolnikih z WNV s trdovratnimi simptomi po okužbi ni bilo mogoče zaznati povečanja IL-17 [125]. Te ugotovitve, ki kažejo na povezavo med izražanjem IL-17A in ugodnim izidom okužbe z WNV pri ljudeh, podpira ena študija in vivo pri miših, v kateri so ugotovili, da je IL-17A olajšal očistek WNV z indukcijo izražanje citotoksičnih mediatorskih genov in spodbujanje citotoksičnosti CD8+ celic T [43].

2.4. Družina interlevkina 12

Družina IL-12 vključuje štiri člane: IL-12, IL-23, IL-27 in IL-35 [134], med katerimi je IL{{6 }} in IL-23 se povečata in vivo po okužbi z WNV (tabela S1). IL-12 je sestavljen iz dveh kovalentno povezanih podenot, p40 in p35, ki nastaneta v kombinaciji z bioaktivnim IL-12p70 [134]. IL-23 prav tako obsega dve podenoti, p19 in p40, slednja pa si deli z IL-12 [134]. Trenutno nobena študija pri ljudeh ni poudarila sprememb IL-23 po okužbi z WNV, vendar so poročali, da je IL-12 močno izražen pri predsimptomatskih in asimptomatskih krvodajalcih, okuženih z WNV [29], in nespremenjen pri simptomatskih z WNV okuženih krvodajalci v zgodnji fazi okužbe [34]. Analize citokinov pri posameznikih, okuženih z WNV, so potrdile, da je lahko IL-12p70 prekomerno izražen v serumu mesece [132] in celo leta [135] po okužbi. Miši s pomanjkanjem posameznih podenot IL-12 (p35) IL-23 (p19) ali skupne podenote p40 so bile uporabljene za določitev specifične vloge vsakega citokina. Živali s pomanjkanjem IL-12p40 ali IL-23p19, ne pa tudi IL-12p35, so imele zmanjšano dovajanje levkocitov v možgane in večjo umrljivost, kar potrjuje pomen IL-23 pri zaščitni infiltraciji imunskih celic in homingu med akutno fazo okužbe [82].

Potrebnih je več raziskav, ki bodo osvetlile sodelovanje teh citokinov med fazo okrevanja po okužbi z WNV.

2.5. Družina interlevkina 10

Družina citokinov IL-10 vsebuje IL-10, IL-19, IL-20, IL-22, IL-24, IL{{6 }}, IL-28 in IL-29 [114], med katerimi je izražanje IL-10 in IL-22 regulirano navzgor v modelih okužbe z WNV (tabela S1). V plazmi akutnih, viremičnih [124], asimptomatskih krvodajalcev z diagnozo WNV [29] so odkrili povišane ravni IL-10. Vendar pa niso ugotovili pomembne razlike v IL-10 v vzorcih seruma [130,131] in cerebrospinalne tekočine [130] bolnikov z vročino WNV in nevroinvazivno boleznijo WNV [130]. Genetska ali farmakološka blokada signalizacije IL-10 je pripomogla k povečanju preživetja po smrtni okužbi z WNV pri miših [79], dodatne študije pa potrjujejo patogeno vlogo IL-10 pri akutni okužbi z WNV. Prvič, predhodna preobčutljivost na beljakovine v slini, dostavljene z večkratnimi ugrizi A. aegypti, je povzročila povečano izražanje IL-10, povezano z poslabšano boleznijo [136]. Drugič, pri miših, okuženih s sevom WNV, pridobljenim iz hrčka, je bila zmanjšana proizvodnja IL-10 povezana z nižjo pogostnostjo obstojnosti virusa v vranici v primerjavi z mišmi, okuženimi z WNV NY99- [78]. Edina študija, ki je preučevala IL-22, je opisala minimalen učinek na periferiji, vendar so bile miši s pomanjkanjem IL-22 bolj odporne na smrtonosno okužbo z WNV, IL-22 pa je spodbujal zgodnji vstop virusa -prenašanje nevtrofilcev v centralni živčni sistem z uravnavanjem kemotaksije (predvsem prek signalizacije Cxcr2) na krvno-možganski pregradi (BBB) ​​[42].

3. Kemokini pri okužbi z WNV

Kemokini so kemotaktični citokini, ki se vežejo na G protein sklopljene receptorje za usmerjanje gibanja celic med homeostazo in vnetjem [114]. Ti proteini so razdeljeni v štiri poddružine: C kemokin, CC kemokin, CXC kemokin in CX3C kemokin, na podlagi števila in položaja ohranjenih N-terminalnih cisteinskih ostankov [114]. Spremembe v izražanju kemokinov in njihovih receptorjev so opazili kot odziv na okužbo z WNV na modelih sesalcev (tabela S2). Študije, ki so se osredotočale na receptorje za kemokine, vključno s Ccr2, Ccr5, Ccr7, Cxcr2, Cxcr3, Cxcr4 in Cx3cr1 v modelih, okuženih z WNV, so pomagale opredeliti pomen kemokinov na način, specifičen za čas in organ (tabela 1). Vendar pa je vsak od teh receptorjev lahko vezan na več kemokinov in do danes obstaja malo poročil o sodelovanju kemokinov pri okužbi z WNV, vključno s CCL2, CCL7 in CXCL10 (tabela 1). Tako natančen pomen posameznih kemokinov med okužbo z WNV zahteva dodatne raziskave.

3.1. CC kemokini

3.1.1. CCL2, CCL7 in CCL12 (agonisti Ccr2)

Ccr2 in njegovi ligandi imajo pomembno vlogo pri mobilizaciji monocitov v vnetnih stanjih [137] in jih je mogoče inducirati po eksperimentalnih okužbah z WNV (tabela S2). Agonist Ccr2 CCL2 je močno izražen med okužbami z WNV pri ljudeh. Ekspresija gena CCL2 je povečana v možganskih tkivih bolnikov, ki podležejo encefalomielitisu WNV [56]. V skladu s tem je bila proizvodnja CCL2 znatno povečana v serumu bolnikov, okuženih z WNV [124], pri čemer so imeli moški krvodajalci višje ravni CCL2 kot krvodajalke v fazi po IgM [33]. Poleg tega je bilo zvišanje CCL2 v fazi serokonverzije IgM povezano z izboljšanimi izidi simptomov po okužbi z WNV [33, 34]. Med okužbo z WNV je aktivacija Ccr2 povzročila monocitozo, odvisno od CCL2 in CCL7, vendar ne od CCL12, in zaščitila miši pred smrtonosnim izzivom predvsem z uravnavanjem ravni monocitov v krvi [44]. CCL2-posreduje migracijo monocitov v okuženi dermis in drenažno bezgavko, pa tudi njihovo vrnitev iz krvi v kostni mozeg in njihovo diferenciacijo v DC v zgodnji fazi pri miših, okuženih z WNV [89]. CCL2 je posredoval tudi pri kopičenju vnetnih monocitov v možganih, njihova diferenciacija v mikroglijo pa je zmanjšala preživetje in tako igrala patogeno vlogo pri encefalitisu WNV [90]. Vendar pa je v drugi študiji z uporabo mišjih modelov CCL2 le delno sodeloval pri rekrutiranju monocitov in ni imel ključne vloge pri preživetju po smrtonosnem izzivu [45]. V nasprotju s tem je pomanjkanje CCL7 povzročilo povečano virusno obremenitev možganov, večjo umrljivost in zapoznelo migracijo nevtrofilcev in celic T CD8+ v CNS [45]. CCL7 se je znatno zmanjšal pri ljudeh s slabšim izidom v primerjavi s tistimi z boljšim izidom v fazi po IgM [34]. Medtem ko vloga CCL2 v patogenezi WNV ostaja nerešena, se zdi, da ima CCL7 ugodne učinke in izboljšuje izid okužbe z WNV.

3.1.2. CCL3, CCL4 in CCL5 (agonisti Ccr5)

CCR5 in njegova interakcija s kemokinskimi ligandi posredujeta kemotaktično aktivnost v levkocitih in sta vključena v hematopoezo in imunski odziv [138]. Kemokinov CCL3, 4 in 5, ki se vežejo na kemokinski receptor Ccr5, ni bilo mogoče odkriti v človeških serumih med zgodnjo in pozno fazo okužbe [34,124], vendar so bili močno inducirani v CNS miši po eksperimentalni okužbi z WNV (tabela S2). Pri ljudeh pomanjkanje Ccr5 ni povzročilo nagnjenosti k okužbi z WNV, vendar so lahko bolniki, ko so okuženi, še posebej dovzetni za zgodnje in pozne klinične manifestacije, če njihova funkcija Ccr5 manjka ali je blokirana [35,36,139]. V skladu s temi ugotovitvami študije na miših opisujejo, da je pomanjkanje Ccr5 povzročilo povečano simptomatsko bolezen in umrljivost po podkožni okužbi z WNV, čeprav Ccr5 ni bil potreben za celično posredovano imunost na periferiji [32,93]. Miši Ccr5-/-, okužene z WNV, so imele znatno zmanjšano sposobnost rekrutiranja protivirusnih mononuklearnih celic posebej v njihove z WNV okužene možgane, povečano prepustnost BBB in povišane ravni ligandov Ccr5 [32,93]. Posamezne vloge ligandov Ccr5 ostajajo nejasne, saj niso bili uporabljeni modeli in vivo za obravnavo njihovega prispevka k patogenezi WNV. Ena študija in vitro je opisala, da indukcija CCL5 kot odgovor na okužbo z WNV ni zadostovala za spodbujanje transmigracije levkocitov čez endotelijsko plast v modelu BBB, ki vsebuje endotelne celice in astrocite [140].

3.1.3. CCL19 in CCL21 (agonisti Ccr7)

Interakcije med Ccr7 in njegovimi sorodnimi ligandi so vključene v indukcijo vnetnih in T-celičnih odzivov [141]. Okužba z virusom WNV v mišjih modelih potrjuje, da bi lahko Ccr7 in liganda CCL19 in CCL21 povečali na ravni genov [64,76,110] in prispevali k odpornosti gostitelja proti virusu WNV. Kemokinski receptor Ccr7 je bil bistven za preživetje po smrtonosnem izzivu WNV pri miših [46]. Poleg tega je bil Ccr7 potreben za infiltracijo mieloidnih celic v bezgavke in je omejil njihov vstop v možgane, kar je pomagalo pri očistku virusa in zmanjšalo patološke učinke čezmerne proizvodnje citokinov [46].

3.2. CXC kemokini

3.2.1. CXCL1-3, CXCL6-8 (agonisti Cxcr2)

Cxcr2 igra neodvečno vlogo pri posredovanju trgovine z nevtrofilci, ki naj bi bili nosilci WNV v krvi [49]. Miši s pomanjkanjem Cxcr2 so imele podobno stopnjo smrtnosti kot miši divjega tipa, čeprav je bil njihov čas do smrti odložen [49]. Cxcr2 se veže na CXCL1, CXCL2, CXCL3, CXCL5, CXCL6, CXCL7 in CXCL8 [114], ki so vsi modulirani z okužbo z WNV (tabela S2). CXCL8 je povečan v z WNV okuženih primarnih človeških kulturah [88] in celičnih linijah [18,52,57,75,88,98] ter vzorcih možganov in hrbtenjače eksperimentalno okuženih opic Rhesus (Macaca mulatta) [77]. Geni, povezani s proizvodnjo in regulacijo CXCL8, so bili inducirani pri novozelandskih belih zajcih (Oryctolagus cuniculus) [68]. CXCL8 je v visokih ravneh odkrit tudi pri posameznikih, okuženih z WNV [131,135]. Poleg tega so imeli bolniki z resnejšimi simptomi v zgodnji fazi okužbe znatno višjo ekspresijo CXCL8 v serumu v primerjavi z WNV-negativnimi kontrolami [34]. Te ugotovitve kažejo na pomembno vlogo tega citokina v patogenezi naravnih okužb pri ljudeh. Vendar do danes nobena študija in vivo ni raziskala te ugotovitve. To je mogoče pojasniti s pomanjkanjem pravih homologov CXCL8 pri miših [142], ki so trenutno najpogosteje uporabljeni živalski modeli za proučevanje patogeneze WNV.

Za izogibanje tej težavi bo potrebna uporaba alternativnih modelov okužbe z WNV, ki imajo ortolog gena CXCL8, kot so zajci [70,143–146] in nečloveški primati [77,147].

Kaj počne cistanche—Anti- vnetna

3.2.2. CXCL9 in CXCL10 (ligandi Cxcr3)

Cxcr3 and its ligands are responsible for T-cell trafficking, activation, differentiation, and functions [48]. WNV natural infection in humans can induce high levels of CXCL9 [124] and CXCL10 [34,124,131,135] in the serum. Likewise, these chemokines were elevated following WNV infection in various experimental models (Table S2). Evidence from these models suggests that Cxcr3 signaling can have multifaced roles during WNV infection. In vitro, downregulation of neuronal CXCR3 signaling through TNF receptor 1 (TNFR1) decreased CXCL10 and resulted in apoptosis following WNV infection [99]. In vivo, Cxcr3 had no effect on WNV replication or clearance in peripheral lymphoid tissues [47]. However, CXCL10, but not CXCL9, and its cognate receptor Cxcr3 were required for survival after lethal WNV challenge and regulated the CD8+ T cells migration and clearing of WNV infection in the brain compared to control mice [47,48]. This can explain the evidence of both protective and deleterious effects of CXCL10 in humans. Higher susceptibility to WNV in blood donors was marked by lower levels of CXCL10/IP-10 during the post-IgM phase [33,34]. Importantly, analysis of autopsied neural tissues from humans with WNV encephalomyelitis revealed upregulation of the CXCL10-coding gene [56], and symptom development was positively correlated with CXCL10/IP-10 production during the earliest phase of the disease [34]. In later stages, significantly higher serum levels of CXCL10 were detected in patients with prolonged post-infection fatigue (>6 mesecev) po simptomatski okužbi z WNV [132]. Tako je za prehod CXCL10 iz spodbujanja zaščitnih imunskih odzivov na škodljive potrebne nadaljnje raziskave kot možen terapevtski cilj.

3.2.3. CXCL12 (ligand Cxcr4)

Cxcr4 je najpogosteje izražen kemokinski receptor in je vključen v celično migracijo, hematopoezo in navajanje celic [148]. Spremembe v izražanju Cxcr4 in njegovih kanoničnih ligandov CXCL12 je mogoče inducirati po eksperimentalni okužbi z WNV (tabela S2), medtem ko so njihovi vzorci izražanja pri bolnikih, okuženih z WNV, še vedno nejasni. Trenutni dokazi iz eksperimentalnih okužb kažejo, da CXCL12 daje prednost nevrospatogenezi WNV. Ekspresija CXCL12, ki je bila posredovana z IL-1 v mikrovaskulaturi osrednjega živčevja [54], je omejila vstop celic T na BBB in preprečila, da bi virusno specifične celice T CD{11}} očistile WNV znotraj parenhima osrednjega živčevja, kar ima za posledico povečano umrljivost pri mišjem modelu okužbe [100].

Cistanche deserticola - protivnetno

Kliknite tukaj za ogled izdelkov Cistanche

【Vprašajte za več】E-pošta:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

3.3. CX3C kemokini

Kemokin CX3CL1 in njegov receptor CX3CR1 lahko povzročita vnetne ali protivnetne odzive [149]. Njihovi kodirni geni so bili povečani in vivo po okužbi z WNV pri miših B6129PF2 in C57BL6/J [32] in opicah Rhesus [77] (tabela S2). Preiskava na mišjem modelu ni potrdila njihove vloge, ki pomaga pri preživetju proti okužbi z WNV [32].

4. Superdružina ligandov faktorja tumorske nekroze

Interakcije med ligandi TNFSF in njihovimi sorodnimi receptorji nadzirajo preživetje, proliferacijo, diferenciacijo in funkcije imunskih celic [111]. Med ligandi TNFSF so TNF- [72,99,103–105], ligand Fas (FasL) [39,76,110], ligand, ki inducira apoptozo, povezan s TNF (TRAIL) [69,109,110], CD40L [85,111], faktor aktivacije celic B (BAFF) [112], TNF povezan šibek induktor apoptoze (TWEAK) [85], OX40L [117] in član naddružine faktorja tumorske nekroze 14 (LIGHT) [76,150] so vpleteni v patogenezo WNV (tabela S3).

4.1. Faktor tumorske nekroze

TNF-, citokin s pro- in protivnetnimi lastnostmi [151], ima nedosledne vzorce izražanja po okužbi z WNV pri ljudeh. Analiza človeških serumov med vročino WNV in nevroinvazivno boleznijo WNV ni pokazala zaznavnih sprememb v ekspresiji TNF [131], drugi pa opisujejo znatno povečanje regulacije TNF pri bolnikih, okuženih z WNV, med akutno fazo [124,130] in celo dolgo po tem, ko je virus domnevno že uničil. očistil imunski sistem [125]. TNF- je bil znatno višji pri posameznikih z anamnezo okužbe z WNV in kasnejšim razvojem kronične ledvične bolezni v primerjavi z zdravimi posamezniki [135]. Glede na zadnja poročila o ljudeh skoraj vse študije, ki uporabljajo eksperimentalne modele, opisujejo povečan TNF- med okužbo z WNV (tabela S3). Študije, ki preučujejo pomen TNF- v patogenezi okužbe z WNV, kažejo, da ima ta citokin omejeno vlogo pri nadzoru okužbe z WNV v perifernih organih [38,104], brez soglasja glede signalne kaskade in prispevka k nadzoru WNV v CNS (tabela S3). ). Na primer, signalizacija TNF-receptorja 1 (TNF-R1) je bila predlagana nižje od Toll-podobnega receptorja (TLR) -3, saj je pomanjkanje TLR3 vodilo do oslabljene proizvodnje TNF-ja med okužbo z WNV v mikrogliji [67], vendar istega opažanja ni bilo pri DC, pridobljenih iz kostnega mozga [152]. Medtem ko je bila v eni študiji pri miših s pomanjkanjem TNF-R1 stopnja umrljivosti znatno višja kot pri miših divjega tipa po izzivu WNV [104], so v drugi študiji z uporabo istega modela opazili nasprotni pojav [67]. Prva študija je nakazovala, da interakcija TNF s TNF-R1 ščiti miši pred okužbo z WNV z uravnavanjem migracije vnetnih celic v možgane med akutno okužbo [104], medtem ko je druga predlagala, da bi TNF lahko bil odgovoren za zgodnjo nevroinvazijo WNV zaradi povečana prepustnost BBB [67]. Imunizacija miši s komponentami žlez slinavk je povzročila zgodnjo produkcijo TNF- po okužbi z WNV, kar je bilo usklajeno z zakasnitvijo okužbe CNS in znatno nižjimi možganskimi titri WNV v primerjavi z lažno imuniziranimi mišmi [153], kar kaže na zaščitno vlogo med encefalitisom WNV. Vendar pa je druga študija opisala višje ravni TNF-, ki so potrdile povečano patogenost nevroinvazivnih različic WNV v primerjavi z nenevroinvazivnimi različicami pri miših [73], TNF- pa je bil vpleten v nevrotoksičnost, ki jo povzroča WNV [52]. Potrebne so dodatne raziskave

4.2. TRAIL in FasL

TRAIL in FasL aktivirata apoptozo prek receptorjev smrti na celični površini [111]. Ti citokini so povečani na ravni genov z uporabo modelov in vivo, vključno z mišmi (tabela S3). Pri mišjih modelih TRAIL prispeva k razrešitvi bolezni [38], medtem ko vloga FasL ostaja nedosegljiva [28, 39]. Pri miših je genetska pomanjkljivost TRAIL povečala dovzetnost za smrtonosni izziv WNV, celice CD8+ T pa so imele težave pri čiščenju WNV iz nevronov [38]. Z WNV inducirana ekspresija Fas v nevronih, funkcionalni FasL je bil potreben za zaščito miši C57BL/6 s pomanjkanjem IFN pred smrtonosno okužbo z WNV, celice T CD8+ pa so uporabile FasL za omejitev okužbe z WNV v nevronih [39]. Vendar druga študija, pri kateri so uporabljali iste miši s pomanjkanjem bodisi Fas bodisi FasL, ni odkrila razlik v umrljivosti ali virusni obremenitvi možganov [28]. Nekonsistentne rezultate teh študij je mogoče pripisati razlikam v virusnih sevih (sev WNV 3000.0259 [39] v primerjavi s sevom WNV Sarafend [28]) kot tudi poti okužbe živali (tapala [39] v primerjavi z intravensko potjo [28]). .

4.3. CD40L

CD40L je modulator širokega spektra humoralnih in celičnih imunskih odzivov [111] in ga uravnava okužba z WNV v mišjih možganih [64]. Pri miših so bile interakcije CD40-CD40L potrebne za zaščito pred smrtonosnim izzivom WNV, učinkovito proizvodnjo protiteles s celicami B in migracijo celic T preko BBB [40]. Čeprav obstajajo dokazi, ki kažejo na vlogo CD40L pri okužbi z WNV, je potrebnih več raziskav.

4.4. BAFF

BAFF je potreben za preživetje in homeostazo perifernih B-celic in se poveča v mišjih nevtrofilcih in DC po izzivu WNV [112]. Signalizacija BAFF je bila bistvena za preživetje proti smrtonosni okužbi z WNV pri miših [41]. BAFF iz DC, ne nevtrofilcev, je pomagal vzdrževati ali spodbujati humoralne odzive B-celic na WNV, saj so bili odzivi protiteles, specifičnih za WNV, zmanjšani pri miših brez izražanja BAFF na DC [112]. Poleg tega so bile miši s pomanjkanjem receptorja BAFF dovzetne za okužbo z WNV, vendar so lahko razvile trajno zaščitno imunost, ko so bile zdravljene z imunskimi serumi miši divjega tipa s protitelesi proti WNV [41].

rastlina cistanche krepi imunski sistem

5. Sklepi

Karakterizacija citokinov predstavlja velik napredek v našem razumevanju splošne regulacije imunskih odzivov, ki jih poganja WNV. Citokinsko signaliziranje IL-1, IL-23, IL-17A, CCL7, CXCL10, TRAIL, CD40L in BAFF ščiti pred akutno okužbo z WNV pri miših; IL-10 in IL-22 pomagata pri patogenosti WNV; IL-6 in IL-12 med okužbo nista imela očitnega učinka; in vloge CCL2, TNF- in FasL ostajajo nedosegljive. Določitev natančne funkcije določenega citokina je lahko izziv in poudarja najpomembnejša sporočila iz tega pregleda: Prvič, biološki kontekst, kot je celični vir, tarča, faza imunskega odziva in prisotnost ali odsotnost drugih citokinov vpliva na njihov vzorec izražanja in delovanje. Eksperimentalni pogoji, ki se med študijami razlikujejo, kot so virusni sevi ali prehodi, laboratorijske preiskovalne tehnike in časovne točke zbiranja vzorcev, lahko prav tako pojasnijo nedosledne, včasih paradoksalne rezultate glede vloge citokinov med okužbo z WNV. Drugič, izidi okužbe z WNV niso odvisni le od očistka virusa, temveč tudi od obsega vnetnega odziva, ki ga poganjajo citokini. Okužbe z virusom WNV pri ljudeh in laboratorijskih živalih dokazujejo, da so lahko protivnetni citokini, kot so IL-1, TNF-, IL-12p70, CXCL10 in IL-6, kronično povišani po WNV je počiščen. To kaže, da mora učinkovito zdravljenje proti nevroinvazivni bolezni WNV vključevati protivnetna zdravila za zdravljenje poslabšanega vnetnega odziva med akutno fazo in za preprečevanje dolgoročnih nevroloških posledic, saj so ti citokini povezani s poškodbo nevronov pri več nevrodegenerativnih boleznih [154] . Prihodnje študije so ključne za razumevanje, kako lahko regulacija teh citokinov izboljša potek bolezni. To je mogoče doseči s preučevanjem obstoječih zdravil ali majhnih molekul proti prej omenjenim citokinom, pa tudi z razvojem novih terapevtikov, ki motijo ​​te poti citokinov. Nazadnje ta pregled poudarja potrebo po dodatnih raziskavah teh citokinov ob upoštevanju biološkega pomena, ki ga ohranjajo, kar bo pomagalo identificirati imunomodulatorne terapevtske cilje proti nevroinvazivni bolezni WNV. Na primer, za preučevanje CXCL8 je treba razviti alternativne modele okužbe, ki jih do danes ovira pomanjkanje pravih homologov pri podganah in miših. Za razumevanje njihovega prispevka k imunopatogenezi okužbe z WNV je potrebno več dela, namenjenega razčlenjevanju vlog pomembnih citokinov, prikazanih v kliničnih študijah na ljudeh, kot so IL-15, CCL8, CCL11, CCL13 in CCL20.

Reference

1. Chambers, TJ; Hahn, CS; Galler, R.; Rice, CM Flavivirus Genome Organisation, Expression, and Replication. Annu. Rev. Microbiol. 1990, 44, 649–688. [CrossRef]

2. McLean, RG; Ubico, SR; Docherty, DE; Hansen, WR; Sileo, L.; McNamara, TS Prenos virusa Zahodnega Nila in ekologija pri pticah. Ann. NY Acad. Sci. 2001, 951, 54–57. [CrossRef] [PubMed]

3. Chen, S.; Wu, Z.; Wang, M.; Cheng, A. Prirojena imunska utaja, ki jo posredujejo nestrukturni proteini Flaviviridae. Virusi 2017, 9, 291. [CrossRef] [PubMed]

4. Roosendaal, J.; Westaway, EG; Kromih, A.; Mackenzie, JM. Regulirane cepitve na stičiščih NS4A-2K-NS4B virusa Zahodnega Nila igrajo pomembno vlogo pri preurejanju citoplazemskih membran in Golgijevem prometu proteina NS4A. J. Virol. 2006, 80, 4623–4632. [CrossRef]

5. Samuel, CE Genetska spremenljivost gostitelja in dovzetnost za virus Zahodnega Nila. Proc. Natl. Akad. Sci. ZDA 2002, 99, 11555–11557. [CrossRef] [PubMed]

6. Bai, F.; Ashley Thompson, E.; Vig, PJS; Arturo Leis, A. Trenutno razumevanje kliničnih manifestacij virusa Zahodnega Nila, imunskih odzivov, nevroinvazije in imunoterapevtskih posledic. Patogeni 2019, 8, 193. [CrossRef] [PubMed]

7. Petersen, LR; Brault, AC; Nasci, RS; Nalezljiva, Z.; Storitve, H.; Collins, F. Virus Zahodnega Nila: Pregled literature. JAMA 2013, 310, 308–315. [CrossRef]

8. Alli, A.; Ortiz, JF; Atoot, A.; Atoot, A.; Millhouse, PW Obvladovanje encefalitisa Zahodnega Nila: občasen zaplet virusa Zahodnega Nila. Cureus 2021, 13, e13183. [CrossRef]

9. Ouhoumanne, N.; Lowe, AM; Fortin, A.; Kairy, D.; Vibien, A.; K-Lensch, J.; Tannenbaum, TN; Milord, F. Obolevnost, smrtnost in dolgoročne posledice virusne bolezni Zahodnega Nila v Québecu. Epidemiol. Okužiti. 2018, 146, 867–874. [CrossRef]

10. Fulton, CDM; Beasley, DWC; Bente, DA; Dineley, KT Dolgoročne nevrološke spremembe, povzročene z virusom Zahodnega Nila: Primerjava bolnikov in modelov glodalcev. Obnašanje možganov. Imun. Zdravje 2020, 7, 100105. [CrossRef]

11. Weatherhead, JE; Miller, VE; Garcia, MN; Hasbun, R.; Salazar, L.; Dimačkie, MM; Murray, KO Dolgoročni nevrološki izidi pri bolnikih, okuženih z virusom Zahodnega Nila: opazovalna študija. Am. J. Trop. med. Hyg. 2015, 92, 1006–1012. [CrossRef] [PubMed]

12. Tebaš, P.; Spitsin, S.; Barrett, JS; Tuluc, F.; Elci, O.; Korelitz, JJ; Wagner, W.; Winters, A.; Kim, D.; Catalano, R.; et al. Zmanjšanje topnega CD163, snovi P, programirane smrti 1 in markerjev vnetja: Faza 1B preskušanja aprepitanta pri-1-okuženih odraslih odraslih. AIDS 2015, 29, 931–939. [CrossRef] [PubMed]

13. Suthar, MS; Diamond, MS; Gale, M., Jr. Okužba z virusom Zahodnega Nila in imunost. Nat. Rev. Microbiol. 2013, 11, 115–128. [CrossRef]

14. Shrestha, B.; Diamond, MS Vloga CD{1}} T celic pri nadzoru okužbe z virusom Zahodnega Nila. J. Virol. 2004, 78, 8312–8321. [CrossRef] [PubMed]

15. Zimmerman, MG; Bowen, JR; McDonald, CE; Pulendran, B.; Suthar, MS Okužba z virusom Zahodnega Nila blokira vnetni odziv in T-celično kostimulatorno zmogljivost dendritičnih celic, pridobljenih iz človeških monocitov. J. Virol. 2019, 93, e00664-19. [CrossRef]

16. Ramos, HJ; Lanteri, MC; Blahnik, G.; Negaš, A.; Suthar, MS; Brasil, MM; Sodhi, K.; Treuting, PM; Busch, poslanec; Norris, PJ; et al. Signalizacija IL-1 spodbuja intrinzični imunski nadzor centralnega živčnega sistema nad okužbo z virusom Zahodnega Nila. Patog PLoS. 2012, 8, e1003039. [CrossRef]

17. Martina, ČEBELA; Koraka, P.; van den Doel, P.; Rimmelzwaan, GF; Haagmans, BL; Osterhaus, ADME DC-SIGN poveča okužbo celic z glikoziliranim virusom Zahodnega Nila in vitro in replikacija virusa v človeških dendritičnih celicah povzroči nastajanje IFN- in TNF-. Virus Res. 2008, 135, 64–71. [CrossRef]

18. Kong, K.; Wang, X.; Anderson, J.; Fikrig, E.; Montgomery, RR West Nile Virus oslabi aktivacijo primarnih človeških makrofagov. Virusni imunol. 2008, 21, 78–82. [CrossRef]

19. Kumar, M.; Roe, K.; O'Connell, M.; Nerurkar, VR Indukcija odziva imunskih celic, specifičnih za virus, omejuje replikacijo virusa in hude bolezni pri miših, okuženih z nesmrtonosnim sevom Eg101 virusa Zahodnega Nila. J. Neuroinflflamm. 2015, 12, 178. [CrossRef]

20. Cheeran, MCJ; Hu, S.; Sheng, WS; Rashid, A.; Peterson, PK; Lokensgard, JR Diferencialni odzivi človeških možganskih celic na okužbo z virusom Zahodnega Nila. J. NeuroVirol. 2005, 11, 512–524. [CrossRef]

21. Kosch, R.; Delarocque, J.; Klaus, P.; Becker, SC; Jung, K. Profili izražanja genov v nevroloških tkivih med okužbo z virusom Zahodnega Nila: kritična meta-analiza. BMC Genom. 2018, 19, 530. [CrossRef] [PubMed]

22. Hassert, M.; Brien, JD; Pinto, AK Časovna vloga citokinov pri zaščiti in patogenezi flavivirusov. Curr. Clin. Microbiol. Rep. 2019, 6, 25–33. [CrossRef]

23. Pan, Y.; Cai, W.; Cheng, A.; Wang, M.; Yin, Z.; Jia, R. Flavivirusi: prirojena imunost, aktivacija inflammasoma, vnetna celična smrt in citokini. Spredaj. Immunol. 2022, 13, 829433. [CrossRef]

25. Bardina, SV; Lim, JK Vloga kemokinov v patogenezi nevrotropnih flavivirusov. Immunol. Res. 2012, 54, 121–132. [CrossRef]

25. Lee, YH; Leong, WY; Wilder-Smith, A. Označevalci resnosti denga: sistematični pregled citokinov in kemokinov. J. Gen. Virol. 2016, 97, 3103–3119. [CrossRef]

26. Kuczera, D.; Assolini, JP; Tomiotto-Pellissier, F.; Pavanelli, WR; Silveira, GF Poudarki za imunopatogenezo denge: od protiteles odvisna izboljšava, Cytokine Storm in Beyond. J. Interferon Cytokine Res. 2018, 38, 69–80. [CrossRef]

27. Maucourant, C.; Queiroz, GAN; Samri, A.; Grassi, MFR; Yssel, H.; Vieillard, V. Virus Zika v očesu citokinske nevihte. EUR. Cytokine Netw. 2019, 30, 74–81. [CrossRef] [PubMed]

28. Wang, Y.; Lobigs, M.; Lee, EVA; Müllbacher, A. Eksocitoza in Fas posredovani citolitični mehanizmi zagotavljajo zaščito pred encefalitisom, ki ga povzroča virus Zahodnega Nila, pri miših. Immunol. Cell Biol. 2004, 82, 170–173. [CrossRef]

29. Fares-Gusmao, R.; Rocha, BC; Sippert, E.; Lanteri, MC; Áñez, G.; Rios, M. Diferencialni vzorec topnih imunskih markerjev pri asimptomatskih okužbah z virusom denga, Zahodnega Nila in Zika. Sci. Rep. 2019, 9, 17172. [CrossRef]

30. Clark, DC; Brault, AC; Hunsperger, E. Prispevek modelov glodalcev k patološki oceni flavivirusnih okužb centralnega živčnega sistema. Arh. Virol. 2015, 157, 1423–1440. [CrossRef]

31. Zimmerman, MG; Bowen, JR; McDonald, CE; Young, E.; Barič, RS; Pulendran, B.; Suthar, MS STAT5: Tarča antagonizma nevrotropnih flavivirusov. J. Virol. 2019, 93, e00665-19. [CrossRef] [PubMed]

32. Steklo, WG; Lim, JK; Kolera, R.; Pletnev, AG; Gao, JL; Murphy, PM Chemokine Receptor CCR5 spodbuja promet levkocitov v možgane in preživetje pri okužbi z virusom Zahodnega Nila. J. Exp. med. 2005, 202, 1087–1098. [CrossRef] [PubMed]

33. Hoffman, KW; Lee, JJ; Foster, GA; Krysztof, D.; Stramer, SL; Lim, JK. Spolne razlike v proizvodnji citokinov po okužbi z virusom Zahodnega Nila: Posledice za manifestacijo simptomov. Patog. Dis. 2019, 77, ftz016. [CrossRef] [PubMed]

34. Hoffman, KW; Sachs, D.; Bardina, SV; Michlmayr, D.; Rodriguez, CA; Sum, J.; Foster, GA; Krysztof, D.; Stramer, SL; Lim, JK. Razlike v zgodnji tvorbi citokinov so povezane z razvojem večjega števila simptomov po okužbi z virusom Zahodnega Nila. J. Infect. Dis. 2016, 214, 634–643. [CrossRef]

35. Lim, JK; Louie, CY; Glaser, C.; Jean, C.; Johnson, B.; Johnson, H.; McDermott, DH; Murphy, PM Genetska pomanjkljivost kemokinskega receptorja CCR5 je močan dejavnik tveganja za simptomatsko okužbo z virusom Zahodnega Nila: Meta-analiza 4 kohort v epidemiji v ZDA. J. Infect. Dis. 2008, 197, 262–265. [CrossRef]

36. Steklo, WG; Mcdermott, DH; Lim, JK; Lekhong, S.; Yu, SF; Frank, WA; Pape, J.; Cheshier, RC; Murphy, PM Pomanjkanje CCR5 poveča tveganje za simptomatsko okužbo z virusom Zahodnega Nila. J. Exp. med. 2006, 203, 35–40. [CrossRef]

38. Rituparna, D.; Kerry, G.; Charles, M.; Feng, Q.; Lin, L.; Yan, S.; Ruth, RM; Mark, L.; Richard, B. Povezava med aleli zaviralnega faktorja migracije makrofagov (MIF) z visoko ekspresijo in encefalitisom virusa Zahodnega Nila. Citokin 2016, 78, 51–54. [CrossRef]

38. Shrestha, B.; Pinto, AK; Green, S.; Bosch, I.; Diamond, MS CD8+ T celice uporabljajo TRAIL za omejevanje patogeneze virusa Zahodnega Nila z nadzorovanjem okužbe v nevronih. J. Virol. 2012, 86, 8937–8948. [CrossRef] [PubMed]

39. Shrestha, B.; Diamond, interakcije z ligandom MS Fas prispevajo k nadzoru okužbe z virusom Zahodnega Nila v centralnem živčnem sistemu, posredovanem s CD8 + T-celicami. J. Virol. 2007, 81, 11749–11757. [CrossRef]

40. Sitati, E.; McCandless, EE; Klein, RS; Diamond, MS CD40-Interakcije liganda CD40 spodbujajo trgovanje s celicami CD{3}} T v možgane in zaščito pred encefalitisom virusa Zahodnega Nila. J. Virol. 2007, 81, 9801–9811. [CrossRef]

42. Giordano, D.; Draves, KE; Young, LB; Roe, K.; Bryan, MA; Dresch, C.; Richner, JM; Diamond, MS; Gale, M.; Clark, EA Zaščita miši s pomanjkanjem zrelih celic B pred okužbo z virusom Zahodnega Nila s pasivno in aktivno imunizacijo. Patog PLoS. 2017, 13, e1006743. [CrossRef] [PubMed]

42. Wang, P.; Bai, F.; Zenewicz, LA; Dai, J.; Gate, D.; Cheng, G.; Yang, L.; Qian, F.; Yuan, X.; Montgomery, RR; et al. Signalizacija IL-22 prispeva k patogenezi encefalitisa Zahodnega Nila. PLoS ONE 2012, 7, e44153. [CrossRef] [PubMed]

43. Acharya, D.; Wang, P.; Paul, A.; Dai, J.; Gate, D.; Lowery, J.; Stokić, D.; Leis, A.; Flavell, R.; Mesto, T.; et al. Interlevkin-17A spodbuja citotoksičnost celic CD8+ T za olajšanje očistka virusa Zahodnega Nila. J. Virol. 2017, 91, e01529-16. [CrossRef] [PubMed]

44. Lim, JK; Obara, CJ; Rivollier, A.; Pletnev, AG; Kelsall, BL; Murphy, PM Kemokinski receptor CCR2 je kritičen za kopičenje in preživetje monocitov pri encefalitisu virusa Zahodnega Nila. J. Immunol. 2011, 186, 471–478. [CrossRef]

46. ​​Bardina, SV; Michlmay, D.; Hoffman, KW; Obara, CJ; Sum, J.; Charo, IF; Lu, W.; Pletnev, AG; Lim, JK Diferencialne vloge kemokinov CCL2 in CCL7 pri monocitozi in migraciji levkocitov med okužbo z virusom Zahodnega Nila. Physiol. Obnašaj se. 2015, 195, 4306–4318. [CrossRef]

47. Bardina, SV; Brown, JA; Michlmayr, D.; Hoffman, KW Chemokine Receptor Ccr7 omejuje smrtonosni encefalitis virusa Zahodnega Nila. J. Virol. 2017, 91, e02409-16. [CrossRef] [PubMed]

47. Klein, RS; Lin, E.; Zhang, B.; Luster, AD; Tollett, J.; Samuel, MA; Engle, M.; Diamond, MS Neuronal CXCL10 usmerja rekrutacijo CD8 + T-celic in nadzor encefalitisa virusa Zahodnega Nila. J. Virol. 2005, 79, 11457–11466. [CrossRef] [PubMed]

48. Zhang, B.; Chan, YK; Lu, B.; Diamond, MS; Klein, RS. CXCR3 posreduje pri prometu s protivirusnimi T-celicami, specifičnim za regijo, v centralnem živčnem sistemu med encefalitisom virusa Zahodnega Nila. J. Immunol. 2008, 180, 2641–2649. [CrossRef]

49. Bai, F.; Kong, K.; Dai, J.; Qian, F.; Zhang, L.; Brown, CR; Fikrig, E.; Montgomery, RR Paradoksalna vloga nevtrofilcev v patogenezi virusa Zahodnega Nila. J. Infect. Dis. 2010, 8031, 1804–1812. [CrossRef]

50. Brocker, C.; Carpenter, C.; Nebert, DW; Vasiliou, V. Evolucijska divergenca in funkcije družine gena za humano acil-CoA tioesterazo (ACOT). Hum. Genom. 2010, 4, 411–420. [CrossRef]

52. Kumar, M.; Roe, K.; Orillo, B.; Muruve, DA; Nerurkar, VR; Gale, M.; Verma, S. Infflammasome Adapter Protein Apoptosis Associated Speck-Like Protein Containing CARD (ASC) je ključnega pomena za imunski odziv in preživetje pri encefalitisu virusa Zahodnega Nila. J. Virol. 2013, 87, 3655–3667. [CrossRef] [PubMed]

52. Kumar, M.; Verma, S.; Nerurkar, VR Provnetni citokini, pridobljeni iz celic SK-N-SH, okuženih z virusom Zahodnega Nila (WNV), posredujejo nevrovnetne označevalce in nevronsko smrt. J. Neuroinflflamm. 2010, 7, 73. [CrossRef]

53. Soung, AL; Davé, VA; Garber, C.; Tycksen, ED; Vollmer, LL; Klein, RS IL-1 Reprogramiranje odraslih nevralnih izvornih celic omejuje nevrokognitivno okrevanje po virusnem encefalitisu z vzdrževanjem proinflfllamatornega stanja. Obnašanje možganov. Imun. 2022, 99, 383–396. [CrossRef]

54. Durrant, DM; Daniels, BP; Klein, RS IL-1R1 signalizacija uravnava CXCL12-posredovano lokalizacijo celic T in njihovo usodo v osrednjem živčevju med encefalitisom virusa Zahodnega Nila. J. Immunol. 2014, 193, 4095–4106. [CrossRef] [PubMed]

55. Riccetti, S.; Sinigaglia, A.; Desole, G.; Nowotny, N.; Trevisan, M.; Barzon, L. Modeliranje patogenosti virusa Zahodnega Nila in virusa Usutu v človeških živčnih izvornih celicah. Virusi 2020, 12, 882. [CrossRef] [PubMed]

56. van Marle, G.; Antony, J.; Ostermann, H.; Dunham, C.; Hunt, T.; Halliday, W.; Maingat, F.; Urbanowski, dr.med.; Hobman, T.; Peeling, J.; et al. Nevrovnetje, povzročeno z virusom Zahodnega Nila: glialna okužba in nevrovirulenca, posredovana s kapsidnimi beljakovinami. J. Virol. 2007, 81, 10933–10949. [CrossRef]

57. Qian, F.; Chung, L.; Zheng, W.; Bruno, V.; Aleksander, RP; Wang, Z.; Wang, X.; Kurscheid, S.; Zhao, H.; Fikrig, E.; et al. Identifikacija genov, ki so kritični za odpornost proti okužbi z virusom Zahodnega Nila z uporabo analize RNA-Seq. Virusi 2013, 5, 1664–1681. [CrossRef]

58. Yao, Y.; Strauss-Albee, DM; Zhou, JQ; Malawista, A.; Garcia, MN; Murray, KO; Blish, CA; Montgomery, RR Odziv naravnih celic ubijalk na virus Zahodnega Nila pri mladih in starih posameznikih z ali brez predhodne okužbe. PLoS ONE 2017, 12, e0172625. [CrossRef]

59. Aarreberg, LD; Wilkins, C.; Ramos, HJ; Green, R.; Davis, MA; Chow, K.; Gale, M. Signalizacija interlevkina-1 v dendritičnih celicah inducira odzive protivirusnega interferona. mBio 2018, 9, e00342-18. [CrossRef]

60. Uddin, MJ; Suen, WW; Bosco-Lauth, A.; Hartwig, AE; Hall, RA; Bowen, RA; Bielefeldt-Ohmann, H. Kinetika transkriptov izbranih citokinov in Toll-podobnih receptorjev v mononuklearnih celicah konjske periferne krvi, povzročenih z virusom Zahodnega Nila. vet. Res. 2016, 47, 61. [CrossRef]

61. Bielefeldt-Ohmann, H.; Bosco-lauth, A.; Hartwig, A.; Uddin, MJ; Barcelon, J.; Suen, WW; Wang, W.; Hall, RA; Bowen, RA Karakterizacija mikrobne patogeneze nesmrtonosne okužbe z virusom zahodnega Nila (WNV) pri konjih: subklinična patologija in prirojeni imunski odziv. Microb. Patog. 2017, 103, 71–79. [CrossRef] [PubMed]

62. Byrne, SN; Halliday, GM; Johnston, LJ; King, NJC Interlevkin-1, ne pa faktor tumorske nekroze, je vpleten v migracijo Langerhansovih celic, ki jo povzroči virus Zahodnega Nila, iz kože pri miših C57BL/6. J. Raziskovanje. Dermatol. 2001, 117, 702–709. [CrossRef] [PubMed]

63. Garber, C.; Vasek, MJ; Vollmer, LL; Sonce, T.; Jiang, X.; Klein, RS Astrociti zmanjšajo nevrogenezo odraslih med z virusom povzročeno spominsko disfunkcijo prek interlevkina-1. Nat. Immunol. 2018, 19, 151–161. [CrossRef] [PubMed]

64. Kumar, M.; Nerurkar, VR Integrirana analiza mikroRNA in njihovih tarč, povezanih z boleznijo, v možganih miši, okuženih z virusom Zahodnega Nila. Virologija 2014, 452–453, 143–151. [CrossRef]

65. Lim, SM; van den Ham, HJ; Oduber, M.; Martina, E.; Zaaraoui-Boutahar, F.; Roose, JM; van IJcken, WFJ; Osterhaus, ADME; Andeweg, AC; Koraka, P.; et al. Transkriptomske analize razkrivajo diferencialno gensko izražanje imunskih poti in poti celične smrti v možganih miši, okuženih z virusom Zahodnega Nila in virusom Chikungunya. Spredaj. Microbiol. 2017, 8, 1556. [CrossRef]

66. Xiea, G.; Weltea, T.; Wanga, J.; Whitemanb, MC; Wickerb, JA; Saxenaa, V.; Conga, Y.; Barretta, ADT; Wang, T. Mutantni sev virusa Zahodnega Nila NS4B-P38G inducira prilagodljivo imunost preko TLR7-MyD88-odvisnih in neodvisnih signalnih poti. Vaccine 2013, 31, 4143–4151. [CrossRef]

67. Wang, T.; Mesto, T.; Alexopoulou, L.; Anderson, JF; Fikrig, E.; Flavell, RA Tollu podoben receptor 3 posreduje pri vstopu virusa Zahodnega Nila v možgane, kar povzroči smrtonosni encefalitis. Nat. med. 2004, 10, 1366–1373. [CrossRef]

68. Suen, WW; Uddin, MJ; Prow, NA; Bowen, RA; Hall, RA; Bielefeldt-Ohmann, H. Tkivno specifičen transkripcijski profil citokinskih in kemokinskih genov, povezanih z nadzorom flavivirusa in nesmrtonosno nevropatogenezo pri kuncih. Virologija 2016, 494, 1–14. [CrossRef] 69. Quick, ED; Leser, JS; Clarke, P.; Tyler, KL Aktivacija intrinzičnih imunskih odzivov in mikroglialne fagocitoze v ex vivo modelu kulture rezine hrbtenjače okužbe z virusom Zahodnega Nila. J. Virol. 2014, 88, 13005–13014. [CrossRef]

70. Uddin, MJ; Suen, WW; Prow, NA; Hall, RA; Bielefeldt-Ohmann, H. Izziv virusa zahodnega Nila spreminja transkripcijske profile prirojenih imunskih genov v mononuklearnih celicah periferne krvi kuncev. Spredaj. vet. Sci. 2015, 2, 76. [CrossRef]

71. Shirato, K.; Miyoshi, H.; Kariwa, H.; Takashima, I. Kinetika vnetnih citokinov v mišjih peritonealnih makrofagih, okuženih z glikoziliranim ali neglikoziliranim virusom Zahodnega Nila z ovojnico. Virus Res. 2006, 121, 11–16. [CrossRef] [PubMed]

72. Saxenaa, V.; Weltea, T.; Baob, X.; Xiea, G.; Wanga, J.; Higgsc, S.; Tešd, RB; Wang, T. Sev virusa Zahodnega Nila, pridobljen iz hrčka, je močno oslabljen in inducira diferencialni proinflamatorni citokinski odziv v dveh mišjih celičnih linijah. Virus Res. 2013, 167, 179–187. [CrossRef] [PubMed]

74. Sapkal, GN; Harini, S.; Ayachit, VM; Fulmali, PV; Mahamuni, SA; Bondre, podpredsednik; Gore, MM Nevtralizacijska različica pobega virusa Zahodnega Nila, povezana s spremenjeno periferno patogenostjo in diferencialnim citokinskim profilom. Virus Res. 2011, 158, 130–139. [CrossRef] [PubMed] 74. Fang, H.; Welte, T.; Zheng, X.; Chang, G.-JJ; Holbrook, MR; Soong, L.; Wang, T. δd T celice spodbujajo zorenje dendritičnih celic med okužbo z virusom Zahodnega Nila. FEMS Immunol. med. Microbiol. 2010, 59, 71–80. [CrossRef] [PubMed]

75. Garcia, M.; Alout, H.; Diop, F.; Damour, A.; Bengue, M.; Weill, M.; Missé, D.; Lévêque, N.; Bodet, C. Prirojeni imunski odziv primarnih človeških keratinocitov na okužbo z virusom Zahodnega Nila in njegovo modulacijo s slino komarjev. Spredaj. Celica. Okužiti. Microbiol. 2018, 8, 387. [CrossRef]

76. Peña, J.; Plante, JA; Carillo, AC; Roberts, KK; Smith, JK; Juelich, TL; Beasley, DWC; Freiberg, AN; Labute, MX; Naraghi Arani, P. Multipleksirano digitalno MRNA profiliranje vnetnega odziva v švicarskem Websterjevem mišjem modelu Zahodnega Nila. PLoS Negl. Trop. Dis. 2014, 8, e3216. [CrossRef]

78. Maximova, OA; Sturdevant, DE; Kash, JC; Kanakabandi, K.; Xiao, Y.; Minai, M.; Moore, IN; Taubenberger, J.; Martens, C.; Cohen, JI; et al. Virusna okužba centralnega živčnega sistema prekine imunsko-nevralno-sinaptično os z indukcijo pleiotropne genske regulacije gostiteljskih odzivov. Elife 2021, 10, e62273. [CrossRef]

79. Saxena, V.; Xie, G.; Li, B.; Farris, T.; Welte, T.; Gong, B.; Boor, P.; Wu, P.; Tang, SJ; Teš, R.; et al. Izolat virusa Zahodnega Nila, pridobljen iz hrčka, povzroči dolgotrajno okužbo ledvic pri miših. PLoS Negl. Trop. Dis. 2013, 7, e2275. [CrossRef]

79. Bai, F.; Mesto, T.; Qian, F.; Wang, P.; Kamanaka, M.; Connolly, TM; Gate, D.; Montgomery, RR; Flavell, RA; Fikrig, E. IL-10 Signalna blokada nadzoruje okužbo z virusom Zahodnega Nila pri miših. Patog PLoS. 2009, 5, e1000610. [CrossRef]

80. Xie, G.; Luo, H.; Tian, ​​B.; Mann, B.; Bao, X.; Mcbride, J.; Teš, R.; Barrett, AD; Wang, T. Mutantni sev virusa Zahodnega Nila NS4B-P38G inducira intrinzične prirojene citokinske odzive celic v človeških monocitnih in makrofagnih celicah. Vaccine 2015, 33, 869–878. [CrossRef]

81. Graham, JB; Swarts, JL; Wilkins, C.; Thomas, S.; Green, R.; Sekine, A.; Voss, KM; Ireton, RC; Mooney, M.; Choonoo, G.; et al. Mišji model kronične bolezni virusa Zahodnega Nila. Patog PLoS. 2016, 12, e1005996. [CrossRef] [PubMed]

82. Mesto, T.; Bai, F.; Wang, T.; Kaplan, A.; Qian, F.; Montgomery, R.; Anderson, J.; Flavell, RA; Fikrig, E. Tollu podoben receptor 7 blaži smrtonosni encefalitis Zahodnega Nila prek interlevkina 23-odvisne imunske celične infiltracije in hominga. Imuniteta 2009, 30, 242–253. [CrossRef] [PubMed]

83. Welte, T.; Reagan, K.; Fang, H.; Machain-Williams, C.; Zheng, X.; Mendell, N.; Chang, GJJ; Wu, P.; Blair, CD; Wang, T. Toll-like Receptor 7-induced Immune Response to Cutaneous West Nile Virus Infection. J. Gen. Virol. 2009, 90, 2660–2668. [CrossRef] [PubMed]

84. Luo, H.; Winkelmann, ER; Zhu, S.; Ru, W.; Mays, E.; Silvas, JA; Vollmer, LL; Gao, J.; Peng, BH; Bopp, NE; et al. Peli1 olajša razmnoževanje virusa in spodbuja nevroinflamacijo med okužbo z virusom Zahodnega Nila. J. Clin. Raziskati. 2018, 128, 4980–4991. [CrossRef]

85. Clarke, P.; Leser, JS; Bowen, RA; Tylera, KL Transkripcijske spremembe v možganih, ki jih povzroči virus, vključujejo diferencialno izražanje genov, povezanih z interferonom, apoptozo, receptorjem interlevkina 17 A in signaliziranjem glutamata ter za flavivirus specifično uravnavanje TRNA sintetaz. mBio 2014, 5, e00902-14. [CrossRef]

86. Bourgeois, MA; Denslow, ND; Seino, KS; Barber, DS; Dolga analiza izražanja genov MT v talamusu in možganih konj, eksperimentalno okuženih z virusom Zahodnega Nila. PLoS ONE 2011, 6, e24371. [CrossRef]

87. Garcia-Tapia, D.; Hassett, DE; Mitchell, WJ, Jr.; Johnson, GC; Kleiboeker, SB Encefalitis virusa Zahodnega Nila: Zaporedni histopatološki in imunološki dogodki v mišjem modelu okužbe. J. NeuroVirol. 2007, 13, 130–138. [CrossRef]

88. Munoz-Erazo, L.; Natoli, R.; Provis, JM; Madigan, MC; Jonatan, N.; King, C. Analiza mikromrež genske ekspresije v pigmentnem epiteliju človeške mrežnice, okuženem z virusom Zahodnega Nila. Mol. Vis. 2012, 18, 730–743.

89. Davison, AM; King, NJC. Pospešena diferenciacija dendritičnih celic iz selitvenih monocitov kostnega mozga Ly6C Lo pri zgodnji dermalni okužbi z virusom West Nile. J. Immunol. 2011, 186, 2382–2396. [CrossRef]

90. Getts, DR; Terry, RL; Getts, MT; Marcus, M.; Rana, S.; Shrestha, B.; Radford, J.; van Rooijen, N.; Campbell, IL; King, NJC Ly6c+ "vnetni monociti" so mikroglialni prekurzorji, ki se na patogeni način rekrutirajo pri encefalitisu virusa Zahodnega Nila. J. Exp. med. 2008, 205, 2319–2337. [CrossRef]

92. Michlmayr, D.; McKimmie, CS; Pingen, M.; Haxton, B.; Mansfifield, K.; Johnson, N.; Fooks, AR; Graham, GJ Opredelitev kemokinske osnove za rekrutacijo levkocitov med virusnim encefalitisom. J. Virol. 2014, 88, 9553–9567. [CrossRef]

92. Vidaña, B.; Johnson, N.; Fooks, AR; Sánchez-Cordón, PJ; Hicks, DJ; Nuñez, A. Širjenje virusa Zahodnega Nila in diferencialni odziv kemokinov v centralnem živčnem sistemu miši: vloga v patogenih mehanizmih encefalitisa. Transbound. Emerg. Dis. 2020, 67, 799–810. [CrossRef] [PubMed]

93. Durrant, DM; Daniels, BP; Pasieka, T.; Dorsey, D.; Klein, RS CCR5 omejuje kortikalno virusno obremenitev med okužbo centralnega živčnega sistema z virusom Zahodnega Nila. J. Neuroinflflamm. 2015, 12, 233. [CrossRef] [PubMed]

94. Qian, F.; Goel, G.; Meng, H.; Wang, X.; Ti, F.; Devine, L.; Raddassi, K.; Garcia, MN; Murray, KO; Bolen, CR; et al. Sistemska imunologija razkriva označevalce dovzetnosti za okužbo z virusom Zahodnega Nila. Clin. Cepivo Immunol. 2015, 22, 6–16. [CrossRef] [PubMed]

95. Suthar, MS; Brasil, MM; Blahnik, G.; McMillan, A.; Ramos, HJ; Proll, SC; Belisle, SE; Katze, MG; Gale, M. Sistemski biološki pristop razkriva, da tkivni tropizem do virusa Zahodnega Nila uravnavajo protivirusni geni in prirojeni imunski celični procesi. Patog PLoS. 2013, 9, e1003168. [CrossRef]