Proizvodnja lipaze z Yarrowia Lipolytica pri fermentaciji v trdnem stanju z uporabo stranskih proizvodov amazonskega sadja in sojine moke kot substrata 2. del

2.5. Hidroliza ribjega olja

Lipaze so bile uporabljene pri hidrolizi maščobnih kislin za koncentriranje polinenasičenih maščobnih kislin (PUFA) [44, 45]. Glavna prednost uporabe lipaz pri proizvodnji večkrat nenasičenih maščobnih kislin je specifičnost encima in reakcije, ki potekajo pri zmernih temperaturnih pogojih, kar daje prednost ohranjanju strukture PUFA [44]. Uporaba lipaz ima prednost pred kemičnimi metodami, saj zagotavljajo gliceride z nizkim izkoristkom in čistostjo [46]. Vloga lipaz pri selektivni hidrolizi nasičenih maščobnih kislin (SFA) in enkrat nenasičenih maščobnih kislin (MUFA) iz triacilglicerolov (TAG) je proizvodnja gliceridov, bogatih s PUFA. Načelo te metode je sterična ovira, ki jo povzroča molekularna konfiguracija dvojnih vezi ogljik-cis v PUFA, ki povzročajo zvijanje verig maščobnih kislin. Tako encimsko aktivna mesta nimajo dostopa do estrskih vezi teh maščobnih kislin z njihovimi glicerolnimi okostji [47, 48]. Z vnosom maščobnih kislin v prehrano so povezane številne koristi, kot so razvoj otroka, preprečevanje bolezni srca in ožilja, raka ter različnih duševnih motenj (depresija, motnja pozornosti, hiperaktivnost), poleg protivnetnega potenciala in potencialne hipertenzije nadzor [49].

Glikozid cistanche lahko tudi poveča aktivnost SOD v srčnem in jetrnem tkivu ter znatno zmanjša vsebnost lipofuscina in MDA v vsakem tkivu, učinkovito lovi različne reaktivne kisikove radikale (OH-, H₂O₂ itd.) in ščiti pred povzročeno poškodbo DNK z OH-radikali. Cistanche feniletanoidni glikozidi imajo močno sposobnost lovljenja prostih radikalov, večjo redukcijsko sposobnost kot vitamin C, izboljšajo aktivnost SOD v suspenziji semenčic, zmanjšajo vsebnost MDA in imajo določen zaščitni učinek na delovanje membrane semenčic. Cistanche polisaharidi lahko povečajo aktivnost SOD in GSH-Px v eritrocitih in pljučnem tkivu eksperimentalno starajočih se miši, ki jih povzroča D-galaktoza, pa tudi zmanjšajo vsebnost MDA in kolagena v pljučih in plazmi ter povečajo vsebnost elastina. dober čistilni učinek na DPPH, podaljša čas hipoksije pri starajočih miših, izboljša aktivnost SOD v serumu in upočasni fiziološko degeneracijo pljuč pri eksperimentalno starajočih se miših. Pri celični morfološki degeneraciji so poskusi pokazali, da ima Cistanche dobro antioksidativno sposobnost in ima potencial, da postane zdravilo za preprečevanje in zdravljenje bolezni staranja kože. Hkrati ima ehinakozid v Cistanche pomembno sposobnost čiščenja prostih radikalov DPPH in ima sposobnost čiščenja reaktivnih kisikovih vrst ter preprečuje razgradnjo kolagena, ki jo povzročijo prosti radikali, ima pa tudi dober učinek popravljanja na poškodbe anionov prostih radikalov timina.

Kliknite na Cistanche Tubulosa

【Za več informacij:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Proizvodnja encimskih ekstraktov za uporabo v procesih, kot je hidroliza, je lahko draga naloga. Tako lahko raziskovanje surovin, ki znižujejo stroške proizvodnje, predstavlja zanimivo alternativo. Uporaba trdnega biokatalizatorja je zaželena, ker se ta trdni biokatalizator lahko ponovno uporabi v encimskih reakcijah, poleg tega pa ima odlično stabilnost pri shranjevanju pri sobni temperaturi, brez stroškov hlajenja in enostaven transport [41]. Ni poročil o uporabi trdnega biokatalizatorja iz Yarrowie lipolytice za proizvodnjo PUFA z encimsko hidrolizo ribjega olja. Tako so proučevali uporabo surovega encimskega ekstrakta in trdnega biokatalizatorja, proizvedenega z uporabo oljne pogače andiroba in sojine moke (50:50), da bi ocenili potencialno uporabo encimov pri hidrolizi ribjega olja za nadaljnjo proizvodnjo polinenasičenih maščobnih kislin v ustreznem postopku (Slika 6). Možno je opaziti visoko stopnjo hidrolize (DH) v krajših reakcijskih časih z uporabo trdnega biokatalizatorja (63, 70,8, 72,5 in 74,7 odstotka) kot encimskega ekstrakta (47,5, 61,5, 66,5 in 74,8 odstotka) po 24, 48, 72 h in 144 h.

Postopek encimske hidrolize se nenehno uporablja za pridobivanje koncentriranih večkrat nenasičenih maščobnih kislin. Gao et al. [50] so uporabili lipazo pri hidrolizi olja polenovke, vsebnosti EPA in DHA pa so se izboljšale 324--krat oziroma 198--krat. Aarthi et al. [20] so uporabili koncentrirano lipazo (1000 U/mL) pri hidrolizi ribjih olj in tudi ugotovili stopnjo hidrolize nad 60 odstotkov po 72 urah. V tem delu so bile boljše stopnje hidrolize dosežene z uporabo surovega encimskega ekstrakta lipaze (tj. brez čiščenja) pri primerjavi istega časa hidrolize. Drugi avtorji so preučevali hidrolizo olja jeter Musteleus mustelus in olja tjulnjeve maščobe, pri čemer so poročali o 75-odstotni oziroma 70-odstotni hidrolizi po 24 oziroma 9 urah reakcije [25, 26].

Martins et al. [51] so za hidrolizo ribjega olja uporabili komercialno lipazo iz Burkholderia cepacia (Amano) in po 48 urah reakcije pridobili 55,6 odstotka DHA v primerjavi z največjo izračunano vsebnostjo. V našem delu smo v preliminarni študiji dobili 70,8 odstotka hidrolize po 48 urah reakcije z uporabo trdnega biokatalizatorja.

Doslej so takšne ugotovitve nakazale možnost preživetja uporabe stranskih produktov za proizvodnjo lipaze pri fermentaciji v trdnem stanju kot način ublažitve okoljske škode, vrednotenja stranskih proizvodov in stroškovne učinkovitosti. Poleg tega rezultati kažejo potencialno uporabo encima lipaze pri hidrolizi ribjega olja za nadaljnjo proizvodnjo polinenasičenih maščobnih kislin v ustreznem postopku.

Kljub temu, da je veliko poceni agroindustrijskih stranskih proizvodov, sta določitev in standardizacija sestave, poleg ocene stroškov za pridobivanje encimskega ekstrakta in trdnega biokatalizatorja iz nizkocenovnih agroindustrijskih stranskih proizvodov še vedno izziv, vendar zelo odvisno od vrste stranskega proizvoda, sezonskosti in ustvarjene količine, kot tudi od uporabljenega postopka in geografske lokacije, med drugim. Tako je treba med drugim premagati vprašanja, kot so kompleksnost verige in njeni logistični stroški, uporaba zapletenih in dragih procesov, visoka poraba energije in regulativna vprašanja. V tem smislu mora predelava stranskih proizvodov premagati več ovir, preden postane ekonomsko upravičena, vključno s potrebo po predelavi velikih količin surovin, zmogljivostjo za predelavo heterogenih surovin, integrirano logistiko z različnimi predelovalnimi industrijami in možnostjo integracije. procesu v predelovalni enoti, ki med drugim omogoča ustvarjanje sestavin visoke vrednosti [52–55].

3. Materiali in metode

3.1. Material

Sojino moko smo kupili pri Caramuru Alimentos (Goiás, Brazilija). Oljno pogačo Andiroba, proizvedeno iz ekstrakcije olja, je zagotovilo podjetje Beraca Ingredientes Naturais (Pará, Brazilija). Oba substrata sta bila standardizirana glede granulometrije (<1.18 mm) and properly stored under refrigeration in polypropylene packages until use. The fish oil was purchased from Mundo dos Óleos, and according to the manufacturer, it is extracted by cold pressing and filtration, obtained from raw material with guaranteed origin. All other chemicals used were of analytical grade and used as received without any further purification, being obtained from Tedia (acetone), Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA, glucose, azocasein, agar, yeast extract, ethanol, methanol), Vetec (Tween 80), Oxoid (peptone), Isofar (sodium hydroxide, gum Arabic), and Precision Plus Protein Kaleidoscope—Bio-rad (molecular mass markers, kDa).

3.2. Pogoji gojenja mikroorganizmov in inokuluma

Yarrowia lipolytica IMUFRJ50682, izolirana iz estuarija v zalivu Guanabara, Rio de Janeiro, Brazilija [56], je bila gojena pri 28 ◦C v mediju YPD-agar (m/v: ekstrakt kvasa 1 odstotek; pepton 2 odstotka; glukoza 2 odstotka ; agar, 3 odstotke). Celice smo gojili v tekočem mediju, ki je vseboval 1-odstotni ekstrakt kvasa (m/v), 2-odstotni pepton (m/v) in 2-odstotno glukozo (m/v) 72 ur, 160 vrt./min pri 28 ◦C.

3.3. Karakterizacija kmetijsko-industrijskih stranskih proizvodov

Fizikalno-kemijska sestava sojine moke in oljne pogače andiroba je bila določena glede na vlago, beljakovine, ogljikove hidrate, pepel, ekstrakt etra, vsebnost netopnih in topnih vlaknin po metodologiji, ki jo je objavilo Združenje uradnih analitičnih kemikov (AOAC). ) [57]. Poleg tega, ker na proizvodnjo lipaze z Y. lipolytica vpliva prezračevanje [58], je bila poroznost plasti v SSF ovrednotena v skladu z enačbo (1), kjer je ε poroznost (izražena v m3 zraka·m−3 postelje); ρdrysolid je navidezna gostota suhega vzorca (kg·m−3 ); in ρwetsolid je gostota vzorca po dodatku vode (kg·m−3 ) [58].

3.4. Proizvodnja lipaze s SSF

Trdno matriko, ki je vsebovala sojino moko in oljne pogače andiroba, smo pripravili pred inokulacijo v pladnjevem reaktorju z različnimi deleži substrata in jo avtoklavirali pri 121 ◦C 20 min. Fiksni procesni parametri, uporabljeni za proizvodnjo lipaze, so bili vlaga 55 odstotkov in koncentracija inokuluma 0,71 mg suhe biomase/g substrata [24]. Reaktorji so bili inkubirani v komori za biokemično porabo kisika (BPK) pri 28 ◦C in žrtvovani vzorci (tj. en reaktor v obliki pladnja za čas vzorčenja) so bili odvzeti med celotno fermentacijo za analizo.

SSF je bil ocenjen z različnimi kombinacijami oljne pogače andiroba in sojine moke ({{0}}:1{{10}}0; 25:75; 50:50; 75 :25 in 100:0) ob različnih časih (0, 12, 24, 32 in 48 h). Nato smo ovrednotili dodajanje trdne matrike, ki je vsebovala oljne pogače andiroba in sojino moko (50:50), z dodajanjem 1,5 (odstotka m/v) sojinega olja skozi čas (0, 12, 14, 20, 24, 28, 48, in 72 h), da dosežemo povečanje lipolitične aktivnosti. Poleg tega je bila testirana prisotnost Tween 80 (0,001 odstotka m/v) v fermentacijskem mediju, ki vsebuje 1,5 (odstotka m/v) sojinega olja. Fermentacijo smo spremljali z določanjem aktivnosti lipaze in proteaze ter vlage in pH (opisano v podpoglavju "3.6. Analitske določitve").

3.5. Encimska ekstrakcija in proizvodnja trdnega biokatalizatorja

Encimsko ekstrakcijo smo izvedli z dodajanjem 50 mL 50 mM kalijevega fosfatnega pufra pH 7,0 v bioreaktorjih, čemur je sledila inkubacija pri 37 ◦C, 200 rpm, 20 minut. Nato smo fermentirani material, suspendiran v pufru, stisnili s stiskalnico s pogledom in centrifugirali pri 3000 obratih na minuto 5 minut. Trdni biokatalizator je bil pridobljen z liofilizacijo celotne mase, pridobljene na koncu procesa fermentacije 72 ur in shranjen pri sobni temperaturi 7 mesecev, da se preveri encimska stabilnost.

3.6. Analitične določitve

3.6.1. Aktivnost lipaze

Aktivnost lipaze je bila izvedena z uporabo metode, ki so jo predlagali Freire et al. [59]. Reakcijski medij smo emulgirali v homogenizatorju Ultra Turrax (IKA) z uporabo 5 odstotkov (m/v) oljčnega olja in 5 odstotkov (m/v) arabskega gumija v 100 mM fosfatnem pufru (pH 7.0). Encimski ekstrakt (1 mL) ali 0,5 g trdnega biokatalizatorja smo dodali 19 mL reakcijske mešanice in inkubirali 20 minut, 200 rpm pri 37 ◦C. Reakcijo smo prekinili z dodatkom 20 mL raztopine aceton-etanol in proste maščobne kisline titrirali v avtomatskem titratorju (Metrohm 916-Ti-Touch) z 0,04 mol/L raztopino NaOH. Ena enota aktivnosti lipaze (U) je bila definirana kot količina encima, ki proizvede 1 µmol maščobne kisline na minuto v pogojih testa.

3.6.2. Proteazna aktivnost

Aktivnost proteaze je bila kvantificirana po metodologiji Charneyja in Tomarelija [60]. Encimski ekstrakt (0.5 mL) je bil dodan v 0.5 mL 0.5 odstotkov (w/v) raztopine azokazeina, pripravljene s 50 mM acetatnim pufrom (pH), in inkubiran pri 32 ◦C 40 min. Reakcijo smo ustavili z dodatkom 0,5 mL 15-odstotne (m/v) raztopine trikloroocetne kisline in vzorce centrifugirali pri 3000 obratih na minuto 15 minut. Supernatant (100 µL) je bil dodan v 96-mikrotitrsko ploščo, ki je vsebovala 100 µL 5 M kalijevega hidroksida, in absorbanca pri 428 nm je bila izmerjena v bralniku mikrotitrskih plošč (SpectraMax, Molecular Devices). Ena enota aktivnosti je bila opredeljena kot količina encima, ki lahko spodbuja enotno povečanje absorbance na minuto.

3.6.3. Vsebnost vlage in pH

Vsebnost vlage je bila nadzorovana s tehtnico z analizatorjem vlage (AND MX-50). pH smo izmerili na pH-metru (TECNAL, model TR-107 PT100, Brazilija).

3.7. SDS-STRAN

Elektroforezo smo izvedli po metodi, ki jo je navedel Laemmli [61] v poliakrilamidnem gelu (5 % zlaganje, 15 % ločevanje, debelina 0.75 mm). Vzorci so bili zmešani v razmerju (1:4) iz kombinacije oljne pogače andirobe in soje (50:50) s pufrom vzorca, ki je vseboval -merkaptoetanol, segrevali pri 95 ◦C 5 minut in nanesli na gel. Elektroforezo smo izvajali pri 150 V 30 minut (Bio-Rad, Hercules, CA, ZDA), gel pa smo razkrili s Coomassie Blue R-250. Uporabljen je bil standardni proteinski marker (Bio-rad, Hercules, CA, ZDA) z molekulsko maso v razponu od 10 do 250 kDa.

3.8. Hidroliza ribjega olja: možna uporaba

Stopnjo hidrolize (DH) ribjega olja smo izmerili s stehtanjem 1 g ribjega olja in dodajanjem 25 ml fosfatnega pufra pH 7.0, da bi preverili potencialno uporabo encima pri hidrolizi ribjega olja. Nato smo 5 mL encimskega ekstrakta (37 U) v rjavih bučkah mešali 168 ur. Reakcijo smo zaustavili z 20 mL acetona in proste maščobne kisline titrirali v avtomatskem titratorju z 0,1 M metanolnim KOH. Slepi reakcijski vzorec smo dobili z dodatkom encima šele ob koncu reakcije.

Stopnja hidrolize (DH) je bila izračunana v skladu z enačbo (2):

kjer je As kislost vzorca; Aa je kislost iz avtohidrolize; Si je indeks umiljenja.

3.9. Statistična analiza

Vsi poskusi so bili ponovljeni trikrat. Pri vsaki ponovitvi so bile analize izvedene v treh izvodih. Rezultati so ustrezali povprečju ± standardnemu odklonu. Podatki so bili analizirani z enosmerno analizo variance (ANOVA), medtem ko je bil Tukeyjev test (p < 0,05) uporabljen za testiranje razlik med povprečji z uporabo Sisvar 5.6.

4. Sklepi

Fermentacijski medij, dobljen po mešanju oljnih pogač andirobe in sojine moke, je bil zelo učinkovit pri proizvodnji lipaze. Izbrana fermentacijska matrica je bila mešanica oljne pogače andiroba in sojine moke v razmerju 50:50, ki je proizvedla 63,70 U·g -1 lipolitične aktivnosti. Največja lipolitična aktivnost je bila dosežena (82,52 U·g -1) po uporabi oljne pogače andirobe in sojine moke v razmerju 50:50 po dodatku Tween 80 (0,001 odstotka) in sojinega olja (1,5 odstotka). V elektroforetski analizi so bili odkriti pasovi proteinov, o katerih so v literaturi že poročali kot YL Lip2 (37 in 40 kDa). Prejšnja uporaba lipaze pri hidrolizi olja je zagotavljala do 63 odstotkov hidrolize po 24 urah. Ta študija je pokazala, da je možno proizvesti lipazo z uporabo stranskih produktov iz amazonske regije v kombinaciji s sojino moko in jo uporabiti pri hidrolizi ribjega olja za nadaljnjo proizvodnjo večkrat nenasičenih maščobnih kislin v ustreznem postopku.

Avtorski prispevki:Konceptualizacija, BDR, ACL in MAZC; Metodologija, ASSC, JCSS, FVdN, CECdS, BDR, ACL in MAZC; Formalna analiza, ASSC, JCSS in FVdN; Preiskava, ASSC, JCSS in FVdN; Viri, ASSC, JCSS in FVdN; Urejanje podatkov, ASSC, JCSS in FVdN; Pisanje—priprava izvirnega osnutka, ASSC, JCSS, FVdN in CECdS; Pisanje—pregledovanje in urejanje, BDR, CECdS, ACL in MAZC; Nadzor, BDR, CECdSACL in MAZC; Projektna administracija, BDR, ACL in MAZC; Pridobivanje sredstev, BDR, ACL in MAZC Vsi avtorji so prebrali in se strinjali z objavljeno različico rokopisa.

Zahvala: Avtorji priznavajo Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior—Brasil (CAPES—finančna koda 001); Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico (CNPq); in Fundação Carlos Chagas Filho de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro (FAPERJ).

Reference

1. Serra, JL; Rodrigues, AMdC; Freitas, RA; Meirelles, AJdA; Darnet, SH; Silva, LHMd Alternativni viri olj in maščob iz amazonskih rastlin: maščobne kisline, metilna orodja, skupni karotenoidi in kemična sestava. Food Res. Int. 2019, 116, 12–19. [CrossRef] [PubMed]

2. Penido, C.; Conte, FP; Chagas, MS; Rodrigues, CA; Pereira, JF; Henriques, MG Protivnetni učinki naravnih tetranortriterpenoidov, izoliranih iz Carapa guianensis Aublet, na artritis, ki ga povzroča zimozan pri miših. vnetje. Res. 2006, 55, 457–464. [CrossRef] [PubMed]

3. Penido, C.; Costa, KA; Pennaforte, RJ; Costa, MF; Pereira, JF; Siani, AC; Henriques, MG Protialergijski učinki naravnih tetranortriterpenoidov, izoliranih iz Carapa guianensis Aublet, na z alergenom povzročeno vaskularno prepustnost in hiperalgezijo. vnetje. Res. 2005, 54, 295–303. [CrossRef]

4. Santos, KIP; Benjamim, JKF; Costa, KAD; Reis, AS; Souza Pinheiro, WB; Santos, AS Metabolomične tehnike, uporabljene pri preiskavi fenolnih kislin iz kmetijsko-industrijskega stranskega proizvoda Carapa guianensis Aubl. Arabec. J. Chem. 2021, 14, 103421. [CrossRef]

5. Lourenço, JNP; Ferreira, LMM; Martins, GC; Nascimento, DG Produção, Biometria de Frutos e Sementes e Extração do Óleo de Andiroba (Carapa Guianensis Aublet; Sob Manejo Comunitário em Parintins, AM: Brasília, Brazilija, 2017; str. 36.

6. Organsko, S. Óleo de Andiroba.

7. Conab. Boletim da Sociobiodiversidade; Conab: Brasília, Brazilija, 2017; 1. zvezek, str. 67.

8. Souza, CR; Lima, RMB; Azevedo, CP; Rossi, LMB Andiroba (Carapa guianensis Aubl.); Embrapa Amazônia Ocidental: Brasilia, Brazilija, 2006; 21p.

9. Oliveira, F.; Souza, CE; Peclat, VROL; Salgado, JM; Ribeiro, BD; Coelho, MAZ; Venâncio, A.; Belo, I. Optimizacija proizvodnje lipaze z Aspergillus ibericus iz oljnih pogač in njena uporaba v reakcijah esterifikacije. Hrana Bioprod. Proces. 2017, 102, 268–277. [CrossRef]

10. Pandey, A. Fermentacija v trdnem stanju. Biochem. inž. J. 2003, 13, 81–84. [CrossRef]

11. Martínez, O.; Sánchez, A.; Pisava, X.; Barrena, R. Izboljšanje bioproizvodnje aromatičnih spojin z dodano vrednostjo s trdno fermentacijo sladkornega trsa in melase sladkorne pese: Operativne strategije in povečevanje procesa. Bioresour. Technol. 2018, 263, 136–144. [CrossRef] [PubMed]

12. Ano, T.; Jin, GY; Mizumoto, S.; Rahman, MS; Okuno, K.; Shoda, M. Fermentacija v trdnem stanju lipopeptidnega antibiotika iturin A z uporabo novega sistema fermentacijskega reaktorja v trdnem stanju. J. Okolje. Sci. 2009, 21 (Dodatek S1), S162–S165. [CrossRef]

13. Vandenberghe, LPS; Karp, SG; Oliveira, PZ; Carvalho, JC; Rodrigues, C.; Soccol, CR, poglavje 18—Fermentacija v trdnem stanju za proizvodnjo organskih kislin. V Trenutni razvoj biotehnologije in bioinženiringa; Pandey, A., Larroche, C., Soccol, CR, ur.; Elsevier: Amsterdam, Nizozemska, 2018; str. 415–434.

14. Sala, A.; Vittone, S.; Barrena, R.; Sánchez, A.; Artola, A. Skeniranje kmetijsko-industrijskih odpadkov kot substratov za proizvodnjo glivičnih biopesticidov: uporaba Beauveria bassiana in Trichoderma harzianum pri fermentaciji v trdnem stanju. J. Okolje. Upravitelj 2021, 295, 113113. [CrossRef] [PubMed]

15. Banat, IM; Carboué, Q.; Saucedo-Castañeda, G.; de Jesús Cázares-Marinero, J. Biosurfaktanti: Zelena generacija posebnih kemikalij in potencialna proizvodnja s tehnologijo fermentacije v trdnem stanju (SSF). Bioresour. Technol. 2021, 320, 124222. [CrossRef] [PubMed]

16. Pereira, AS; Sant'Ana, GCF; Amaral, PFF Mango kmetijsko-industrijski odpadki za proizvodnjo lipaze iz Yarrowia lipolytica in potencial fermentirane trdne snovi kot biokatalizatorja. Hrana Bioprod. Proces. 2019, 115, 68–77. [CrossRef]

17. Brígida, AIS; Amaral, PFF; Coelho, MAZ; Gonçalves, LRB Lipaza iz Yarrowia lipolytica: Proizvodnja, karakterizacija in uporaba kot industrijski biokatalizator. J. Mol. Catal. B Encim. 2014, 101, 148–158. [CrossRef]

18. Treichel, H.; Oliveira, D.; Mazutti, MA; Di Luccio, M.; Oliveira, JV Pregled proizvodnje mikrobnih lipaz. Food Bioprocess Technol. 2010, 3, 182–196. [CrossRef]

19. Mehta, A.; Guleria, S.; Sharma, R.; Gupta, R. 6—Lipaze in njihova uporaba s poudarkom na prehrambeni industriji. V mikrobni biotehnologiji v hrani in zdravju; Ray, RC, ur.; Academic Press: Cambridge, MA, ZDA, 2021; strani 143–164.

20. Aarthy, M.; Saravanan, P.; Ayyadurai, N.; Gowthaman, MK; Kamini, NR Dvostopenjski postopek za proizvodnjo koncentratov polinenasičenih maščobnih kislin omega 3- iz sardelnega olja z uporabo Cryptococcus sp. MTCC 5455 lipaza. J. Mol. Catal. B Encim. 2016, 125, 25–33. [CrossRef]

21. Nascimento, FV; Castro, AM; Secchi, AR; Coelho, MAZ Vpogled v dodajanje medijev pri fermentaciji sojinih luščin v trdnem stanju z Yarrowia lipolytica: Vpliv na proizvodnjo lipaze v bioreaktorjih s pladnjem in izolirano polnjeno plastjo. Biochem. inž. J. 2021, 166, 107866. [CrossRef]

22. Prodaja, JCS; Castro, AM; Ribeiro, BD; Coelho, MAZ Dodatek olupkov lubenic kot ojačevalec proizvodnje lipaze in esteraze z Yarrowia lipolytica pri fermentaciji v trdnem stanju in njihova potencialna uporaba kot biokatalizatorjev v reakcijah depolimerizacije poli(etilen tereftalata) (PET). Biokatal. Biotransformacija. 2020, 38, 457–468. [CrossRef]

23. Aguieiras, EKG; de Barros, DSN; Fernandez-Lafuente, R.; Freire, DMG Proizvodnja lipaz v moki bombaževega semena in uporaba fermentirane trdne snovi kot biokatalizatorja v reakcijah zaestrenja in transesterifikacije. Obnovi. Energija 2019, 130, 574–581. [CrossRef]

24. Souza, CEC; Farias, MA; Ribeiro, BD; Coelho, MAZ Dodajanje vrednosti agroindustrijskim soproizvodom iz ekstrakcije oljne repice in sojinega olja s proizvodnjo lipaze z uporabo Yarrowie lipolytice pri fermentaciji v trdnem stanju. Valorizacija odpadne biomase 2017, 8, 1163–1176. [CrossRef]

25. On, H.; Li, Y.; Zhang, L.; Ding, Z.; Shi, G. Razumevanje in uporaba regulacije dušika Bacillus: perspektiva sintetične biologije. J. Adv. Res. 2022; v tisku. [CrossRef]

26. Almeida, AF; Taulk-Tornisielo, SM; Carmona, EC Vpliv virov ogljika in dušika na proizvodnjo lipaze z novo izoliranim sevom Candida Viswanathan. Ann. Microbiol. 2013, 63, 1225–1234. [CrossRef]

27. Salihu, A.; Alam, MZ; AbdulKarim, MI; Salleh, HM Proizvodnja lipaze: vpogled v uporabo obnovljivih kmetijskih ostankov. Resour. Ohranjanje Reciklirajte. 2012, 58, 36–44. [CrossRef]

28. Liu, X.; Ju, X.; On, A.; Xia, J.; On, J.; Deng, Y.; Xu, N.; Qiu, Z.; Wang, X.; Zhao, P. Fermentacija v enem loncu za proizvodnjo eritritola iz zrn destilarne s so-gojenjem Yarrowia lipolytica in Trichoderma reesei. Bioresour. Technol. 2022, 351, 127053. [CrossRef] [PubMed]

29. Wang, W.; Wei, H.; Alahuhta, M.; Chen, X.; Hyman, D.; Johnson, DK; Zhang, M.; Himmel, ME Heterologna ekspresija encimov ksilanaze v lipogenem kvasu Yarrowia lipolytica. PLoS ONE 2014, 9, e111443. [CrossRef] [PubMed]

30. Nascimento, FVd; Lemes, AC; Castro, AMd; Secchi, AR; Zarur Coelho, mag. Perspektiva časovne evolucije proizvodnje lipaze z Yarrowia lipolytica pri fermentaciji v trdnem stanju. Procesi 2022, 10, 381. [CrossRef]

32. Mandari, V.; Nema, A.; Devarai, SK Zaporedna optimizacija in obsežna proizvodnja lipaze z uporabo mešanice treh substratov iz Aspergillus niger MTCC 872 s fermentacijo v trdnem stanju. Process Biochem. 2020, 89, 46–54. [CrossRef]

32. Mala, JG; Edwinoliver, NG; Kamini, NR; Puvanakrishnan, R. Fermentacija mešanega substrata v trdnem stanju za proizvodnjo in ekstrakcijo lipaze iz Aspergillus niger MTCC 2594. J. Gen. Appl. Microbiol. 2007, 53, 247–253. [CrossRef]

33. Barth, G.; Gaillardin, C. Yarrowia lipolytica. V Nekonvencionalne kvasovke v biotehnologiji; Wolf, K., ur.; Springer: New York, NY, ZDA, 1996; strani 313–388.

34. Moftah, OA; Grbavˇci´c, S.; Žuža, M.; Lukovi´c, N.; Bezbradica, D.; Kneževi´c-Jugovi´c, Z. Dodajanje vrednosti oljni pogači kot odpadku iz oljnopredelovalne industrije: Proizvodnja lipaze in proteaze s Candido, ki se uporablja pri fermentaciji v trdnem stanju. Appl. Biochem. Biotehnologija. 2012, 166, 348–364. [CrossRef]

35. Contesini, FJ; da Silva, VC; Maciel, RF; de Lima, RJ; Barros, FF; de Oliveira Carvalho, P. Analiza odzivne površine za proizvodnjo enantioselektivne lipaze iz Aspergillus niger s fermentacijo v trdnem stanju. J. Microbiol. 2009, 47, 563–571. [CrossRef]

36. Rigo, E.; Ninow, JL; Di Luccio, M.; Oliveira, JV; Polloni, AE; Remonatto, D.; Arbter, F.; Vardanega, R.; Oliveira, D.; Treichel, H. Proizvodnja lipaze s trdno fermentacijo sojine moke z različnimi dodatki. LWT Food Sci. Technol. 2010, 43, 1132–1137. [CrossRef]

37. Sun, SY; Xu, Y. Fermentacija v trdnem stanju za proizvodnjo "celocelične sintetične lipaze" iz Rhizopus chinensis in identifikacija funkcionalnega encima. Process Biochem. 2008, 43, 219–224. [CrossRef]

38. Farias, MA; Valoni, EA; Castro, AM; Coelho, Proizvodnja lipaze MAZ z Yarrowia Lipolytica pri fermentaciji v trdnem stanju z uporabo različnih kmetijsko-industrijskih ostankov. Chem. inž. Trans. 2014, 38, 301–306.

39. Sidhu, P.; Sharma, R.; Soni, SK; Gupta, JK Proizvodnja zunajcelične alkalne lipaze z novim termofilnim Bacillus sp. Folia Microbiol. 1998, 43, 51–54. [CrossRef]

40. Corzo, G.; Revah, S. Proizvodnja in značilnosti lipaze iz Yarrowia lipolytica 681. Bioresour. Technol. 1999, 70, 173–180. [CrossRef]

41. Souza, CEC; Ribeiro, BD; Coelho, MAZ Karakterizacija in uporaba lipaze Yarrowia lipolytica, pridobljene s fermentacijo v trdnem stanju pri sintezi različnih estrov, ki se uporabljajo v živilski industriji. Appl. Biochem. Biotehnologija. 2019, 189, 933–959. [CrossRef]

42. Fickers, P.; Fudalej, F.; Dall, MTL; Casaregola, S.; Gaillardin, C.; Thonart, P.; Nicaud, JM Identifikacija in karakterizacija genov LIP7 in LIP8, ki kodirajo dve ekstracelularni triacilglicerol lipazi v kvasovki Yarrowia lipolytica. Gljivični genet. Biol. 2005, 42, 264–274. [CrossRef]

43. Cheng, Y.-H.; Hsiao, FS-H.; Wen, C.-M.; Wu, C.-Y.; Dybus, A.; Yu, Y.-H. Mešana fermentacija sojine moke s proteazo in probiotiki ter njeni učinki na rast in imunski odziv pri pitovnih piščancih. J. Appl. Anim. Res. 2019, 47, 339–348. [CrossRef]

44. Chakraborty, K.; Paul Raj, R. Selektivna obogatitev n-3 polinenasičenih maščobnih kislin z dolžino acilne verige C18–C20 iz sardelnega olja z uporabo lipaze Pseudomonas fluorescens MTCC 2421. Food Chem. 2009, 114, 142–150. [CrossRef]

45. Zarai, Z.; Eddehech, A.; Rigano, F.; Oteri, M.; Micalizzi, G.; Dugo, P.; Mondello, L.; Cacciola, F. Karakterizacija monoacilglicerolov in diacilglicerolov, bogatih s polinenasičenimi maščobnimi kislinami, proizvedenih s hidrolizo jetrnega olja Musteleus mustelus, ki jo katalizira imobilizirana bakterijska lipaza. J. Chromatogr. 2020, 1613, 460692. [CrossRef]

46. ​​Yang, J.; Pesem, X.; Wang, L.; Cui, Q. Celovita analiza presnovnih sprememb v Schizochytrium sp. sevi z različno vsebnostjo DHA. J. Chromatogr. B 2020, 1160, 122193. [CrossRef]

47. Jang, Z.; Jin, W.; Cheng, X.; Dong, Z.; Chang, M.; Wang, X. Encimska obogatitev n-3 večkrat nenasičenih gliceridov maščobnih kislin s selektivno hidrolizo. Food Chem. 2021, 346, 128743. [CrossRef]

48. Okada, T.; Morrissey, MT Proizvodnja n-3 polinenasičenih koncentratov maščobnih kislin iz sardelnega olja z imobilizirano lipazo Candida rugosa. J. Food Sci. 2008, 73, C146–C150. [CrossRef]

49. Riediger, ND; Othman, RA; Suh, M.; Moghadasian, MH Sistemski pregled vlog n-3 maščobnih kislin pri zdravju in boleznih. J. Am. Dieta. Izr. 2009, 109, 668–679. [CrossRef] [PubMed]

50. Gao, K.; Chu, W.; Sonce, J.; Mao, X. Identifikacija alkalne lipaze, ki je sposobna boljše obogatitve EPA kot DHA zaradi selektivnosti maščobnih kislin in regioselektivnosti. Food Chem. 2020, 330, 127225. [CrossRef]

51. Martins, PA; Trobo-Maseda, L.; Lima, FA; de Morais Júnior, WG; De Marco, JL; Salum, TFC; Guisán, JM Proizvodnja omega-3 s hidrolizo ribjega olja z uporabo lipaze iz Burkholderia gladioli BRM58833, imobilizirane in stabilizirane s tehnikami po imobilizaciji. Biochem. Biophys. Rep. 2022, 29, 101193. [CrossRef] [PubMed]

52. Lemes, AC; Egea, MB; Oliveira Filho, JGd; Gautério, GV; Ribeiro, BD; Coelho, MAZ Biološki pristopi za ekstrakcijo bioaktivnih spojin iz kmetijsko-industrijskih stranskih proizvodov: pregled. Spredaj. Bioeng. Biotehnologija. 2022, 9, 1–18. [CrossRef] [PubMed]

53. Lemes, AC; Sala, L.; Rude, JDC; Braga, ARC; Egea, MB; Fernandes, KF Pregled najnovejših dosežkov na področju šifriranih bioaktivnih peptidov iz odpadkov, bogatih z beljakovinami. Int. J. Mol. Sci. 2016, 17, 950. [CrossRef]

54. Lemes, AC; Coelho, MAZ; Gautério, GV; Paula, LC; Filho, JGdO; Egea, MB Poglavje 11—Industrijski odpadki in stranski proizvodi: vir funkcionalne hrane, prehranskih dopolnil in biopolimerov. V biopolimerih v nutricevtikih in funkcionalnih živilih; Kraljevo kemijsko društvo: London, Združeno kraljestvo, 2023; strani 329–360.

55. Pintado, ME; Teixeira, JA Valorização de subprodutos da indústria alimentar: Obtenção de ingredientes de valor acrescentado. Bol. Biotecnol. 2015, 1, 10–12.

56. Hagler, AN; Mendonça-Hagler, LC Kvasovke iz morskih in estuarijskih voda z različnimi stopnjami onesnaženosti v državi Rio de Janeiro, Brazilija. Appl. Okolje. Microbiol. 1981, 41, 173–178. [CrossRef]

57. AOAC. Uradne metode analize AOAC International; Združenje uradnih analitičnih kemikov: Washington, DC, ZDA, 1995.

58. Castro, AMd; Castilho, LdR; Freire, DMG Karakterizacija ostankov babassuja, oljne repice, ricinusovega semena in sončničnih ostankov za uporabo kot surovine za fermentacijske procese. Ind. pridelki Prod. 2016, 83, 140–148. [CrossRef]

59. Freire, DM; Teles, EM; Bon, EP; Sant' Anna, GL, Jr. Proizvodnja lipaze s Penicilliumom je omejena v namiznem fermentorju: Učinek prehrane z ogljikom in dušikom, mešanje in prezračevanje. Appl. Biochem. Biotehnologija. 1997, 63–65, 409–421. [CrossRef]

60. Charney, J.; Tomarelli, RM. Kolorimetrična metoda za določanje proteolitične aktivnosti duodenalnega soka. J. Biol. Chem. 1947, 171, 501–505. [CrossRef] [PubMed]

61. Laemmli, UK Cepitev strukturnih proteinov med sestavljanjem glave bakteriofaga T4. Narava 1970, 227, 680–685. [CrossRef] [PubMed]

Zavrnitev odgovornosti/opomba založnika:Izjave, mnenja in podatki v vseh publikacijah so izključno last posameznih avtorjev in sodelavcev in ne MDPI in/ali urednikov. MDPI in/ali urednik(-i) zavračajo odgovornost za kakršne koli poškodbe ljudi ali premoženja, ki so posledica kakršnih koli idej, metod, navodil ali izdelkov, navedenih v vsebini.

【Za več informacij:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】