Dolgoročno spremljanje imunosti, specifične za Mycoplasma Hyopneumoniae, pri cepljenih prašičih

Povzetek

Mycoplasma hypopnea mobile je glavni povzročitelj enzootske pljučnice pri prašičih. Za zmanjšanje gospodarskih izgub, ki jih povzroča ta bolezen, se običajno izvaja mobilno cepljenje proti M. hypopnea. Vendar obstojnost imunosti, povzročene s cepivom proti M. hyopneumoniae, zlasti celično posredovane imunosti, do trenutka zakola še ni bila raziskana. Zato je na dveh komercialnih farmah 25 prašičev (n=50) prejelo komercialni bakterin intramuskularno pri starosti 16 dni. Vsak mesec je bila analizirana prisotnost protiteles v serumu, specifičnih za M. hyopneumoniae, in s testi odpoklica ocenjena proizvodnja TNF-, IFN- in IL-17A z različnimi podskupinami celic T v krvi. V obeh rejah je bila predvidena naravna okužba z M. hyopneumoniae. Vendar pa so proučevani prašiči ostali negativni na M. hyopneumoniae skoraj celotno preskušanje. Serokonverzije po cepljenju niso opazili in vsi prašiči so postali seronegativni pri dveh mesecih starosti. Kinetika frekvenc podskupine celic T je bila na obeh farmah podobna. V krvi prašičev z obeh farm so pri starosti enega meseca našli mobilno specifične citokine, ki proizvajajo citokine, T-celice Mycoplasma hypopnea, vendar se je njihovo število s starostjo znatno zmanjšalo. Po drugi strani pa so opazili proliferacijo celic T po in vitro stimulaciji z M. hyopneumoniae do konca obdobja pitanja. Poleg tega razlike v humoralnem in celično posredovanem imunskem odzivu po cepljenju proti M. hyopneumoniae niso opazili med prašiči z materinimi protitelesi in brez njih. Ta študija dokumentira dolgoročne imunske odzive mobilnega cepiva proti M. hipopneji pri prašičih pitancih v terenskih razmerah. Upravičene so nadaljnje raziskave, da bi raziskali vpliv naravne okužbe na te odzive.

koristi cistanche za moške - krepitev imunskega sistema

Kliknite tukaj za ogled izdelkov Cistanche Enhance Imunity

【Vprašajte za več】 E-pošta:cindy.xue@wecistanche.com/Whats App: 0086 18599088692/Wechat: 18599088692

Ključne besede

Mycoplasma hyopneumoniae, prašiči, longitudinalna študija, imunost povzročena s cepivom, celično posredovana imunost

Uvod

Eden najpomembnejših respiratornih patogenov pri prašičih je Mycoplasma hyopneumoniae (M. hyopneumoniae). Je glavni povzročitelj enzootske pljučnice, ki je endemično prisotna na večini farm in je odgovorna za znatne gospodarske izgube v proizvodnji prašičev po vsem svetu [1, 2]. Cepljenje je najpogosteje uporabljena praksa upravljanja za nadzor M. hyopneumoniae, saj lahko zmanjša klinične znake in izgube učinkovitosti ter zmanjša stroške zdravljenja [3]. Cilj cepljenja proti M. hyopneumoniae je povečati za patogen specifične imunske odzive, ki se hitro in učinkovito odzovejo na naravno okužbo z M. hyopneumoniae. Večina komercialno dostopnih cepiv proti M. hyopneumoniae za prašiče je registriranih za dajanje med enim in tremi tedni starosti [4]. Začetek imunosti, specifične za M. hypopnea mobile, se giblje od enega do štirih tednov in je namenjen zaščiti pred okužbami v celotnem obdobju pitanja, do zakola [4]. Na splošno cepljenje ali okužba prašičev sproži diferenciacijo spominskih B celic in CD4+CD8+ T celic, kar zagotavlja hiter protitelesni in celično posredovani imunski odziv po drugem stiku s patogenom [5]. . Cepljenje proti M. hyopneumoniae lahko povzroči serokonverzijo in povečanje specifičnih protiteles M. hyopneumoniae lokalno v dihalih [6–9]. Pri cepljenih živalih so opazili višje ravni limfocitov, ki proizvajajo IFN- -, skupaj z večjo stopnjo proliferacije limfocitov po in vitro stimulaciji z M. hyopneumoniae v primerjavi z necepljenimi živalmi [9–11]. Poleg tega so po cepljenju proti M. hyopneumoniae odkrili polifunkcionalne celice CD4+CD8− in CD4−CD8+ T, ki proizvajajo INF- in TNF- [12]. Vendar pa ni povsem jasno, kako dolgo traja imunost, specifična za M. hypopnea mobile, ki jo povzroči cepivo. V večini študij učinkovitosti cepiva proti M. hyopneumoniae prašiče že nekaj tednov po cepljenju izzovejo, da raziščejo kašelj, imunske parametre, obremenitev s patogeni in pljučne lezije [13–16]. Ko so preučevali dolgoročno učinkovitost, večinoma v terenskih preskušanjih, so pogosto preučevali le proizvodne parametre in pljučne lezije ob zakolu, imunski parametri pa niso bili ali pa so bili le slabo raziskani [17–20]. Kolikor nam je znano, s cepivom povzročena celična imunost, ki jo povzroči M. hyopneumoniae od trenutka cepljenja do zakola v terenskih razmerah, še ni bila raziskana. Poleg cepljenja pujskov je cepljenje plemenskih mladic proti bakteriji M. hyopneumoniae pogosta praksa privajanja [21]. Po cepljenju plemenskih živali so prisotne CD4+CD8+, specifične za Mycoplasma hyopneumoniae, ki proizvaja citokine, in polifunkcionalne celice CD4−CD8− T [22]. Pujski, ki sesajo kolostrum iz imuniziranih svinj, imajo v krvi visoko raven M. hyopneumoniae specifičnih materinskih protiteles (MDA) in celično posredovano imunost, ki lahko traja do odstavitve ali celo dlje [7, 22, 23]. Ko so pujski cepljeni proti M. hyopneumoniae v prisotnosti (visokih ravni) MDA, serokonverzija pogosto manjka [24–26]. Vendar pa je bil odziv proliferacije limfocitov po stimulaciji in vitro bistveno večji pri pujskih, cepljenih z M. hyopneumoniae, v primerjavi z necepljenimi pujski, ne glede na ravni MDA [26]. Čeprav so ti avtorji pokazali, da je bila celično posredovana imunost pripravljena na cepljenje proti M. hyopneumoniae v prisotnosti visokih ravni MDA, je potrebna nadaljnja diferenciacija podskupin celic T in njihove proizvodnje citokinov, da bi dobili boljši vpogled v te celično posredovane imunske odzive. in sčasoma vpliv naravne okužbe na te odzive. Cilj te študije je bil raziskati humoralne in celično posredovane imunske odzive po cepljenju proti M. hyopneumoniae pri prašičih na dveh komercialnih farmah. V ta namen so spremljali serumska protitelesa ter proliferacijo in proizvodnjo citokinov v različnih podskupinah celic T od trenutka cepljenja pri starosti 16 dni do starosti za zakol. Raziskovali so tudi potencialni vpliv maternalne imunosti, specifične za M. hyopneumoniae, na humoralne in celično posredovane odzive cepiva pri pujskih.

koristi dodatka cistanche-povečanje imunosti

Materiali in metode

Opis črede in izbor živali

Two commercial farrow-to-finish farms were included in the study based on the willingness of the farmer to participate. On both farms, circulation of M. hyopneumoniae was assumed based on the presence of the pathogen in tracheobronchial swabs (TBS) taken from fattening pigs in the past. Danbred breeding gilts were reared on farm A and purchased on farm B. On-farm A, the breeding gilts were vaccinated once against M. hyopneumoniae four weeks before first insemination with Ingelvac MycoFLEX® (Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH, Ingelheim am Rhein, Germany). On-farm B, breeding gilts were vaccinated with Stellamune® Mycoplasma (Elanco, Utrecht, The Netherlands) at six months of age upon arrival at the farm and a second time four weeks later. Furthermore, on-farm B gilts were also booster-vaccinated twice shortly before farrowing. On both farms, sows were not vaccinated against M. hyopneumoniae. Farm A practiced a 5-week batch-farrowing system and piglets were weaned and moved to the nursery unit at approximately 22 days of age. The piglets were vaccinated at 16 days of age against M. hyopneumoniae with an inactivated whole cell J strain-based bacterin (Ingelvac MycoFLEX®, Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH, Ingelheim am Rhein, Germany), porcine circovirus type 2 (PCV2) (Ingelvac CircoFLEX®, Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH) and porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) (UNISTRAIN® PRRS, HIPRA, Amer, Spain). Pigs were moved to the fattening unit at 9 weeks of age. Farm B worked in a 4-week batch-farrowing system and piglets were weaned and moved to the nursery unit at approximately 22 days of age. Tey was vaccinated at 16 days of age against M. hyopneumoniae with the same vaccine as in farm A (Ingelvac MycoFLEX®, Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH) and PRRSV (UNISTRAIN® PRRS, HIPRA). The piglets were moved to the fattening unit at 10 weeks of age. On both farms, five breeding animals (two gilts and three sows of mixed parity) were included in the study. The growing process was monitored by the main investigator and from each litter, five healthy piglets (birth weight>1 kg) so bili izbrani, zarezani na ušesa in spremljani mesečno od rojstva do zakola (n=25 pujskov/rejo). Navzkrižna reja pujskov z ušesi ni bila dovoljena in prašiči niso prejeli antibiotikov, ki bi bili aktivni proti M. hyopneumoniae na obeh farmah med celotnim poskusom.

cistanche tubulosa - izboljšanje imunskega sistema

Zasnova študije in vzorčenje

Študijo je odobril Etični odbor Fakultete za veterinarsko medicino in Fakultete za inženiring bioznanosti Univerze v Gentu (številka odobritve 2020/31). Svinjam so med prasitvijo odvzeli kolostrum. V 6 urah po prasitvi so svinjam odvzeli TBS (60 cm sesalni kateter, Medinorm GmbH, Spiesen-Elversberg, Nemčija) in kri v sterilni serumski epruveti (strjena kri). Pri starosti dveh dni so pujski odvzeli kri v serumske epruvete. Od enega do šestega meseca starosti so pujskov vsak mesec odvzeli kri v sterilnem serumu in epruvetah EDTA (nestrjena kri) ter TBS. Na farmi A so prašiče zaklali pri starosti 177 dni, zato je bil zadnji vzorec odvzet pri starosti 5,5 mesecev. Na farmi B so prašiče poslali v klavnico pri starosti 191 dni, tako da je bil zadnji vzorec odvzet pri starosti 6 mesecev. Vzorci kolostruma in seruma so bili do nadaljnje analize shranjeni pri -20 stopinjah, vzorci TBS pa pri -80 stopinjah. Nestrjena kri je bila takoj obdelana za celično posredovano analizo imunosti. Digitalni PCR za odkrivanje DNK M. hyopneumoniae Za testiranje prisotnosti M. hyopneumoniae je bila DNK ekstrahirana iz vzorcev TBS s komercialnim kompletom (DNeasy® Blood & Tissue kit, Qiagen, Venlo, Nizozemska) in digitalnim PCR (dPCR ) protokol, ki cilja na gen P102, je bil izveden po prej opisanem protokolu [27]. Protitelesa, specifična za Mycoplasma hyopneumoniae Protitelesa, specifična za Mycoplasma hyopneumoniae, v vzorcih seruma in kolostruma so bila analizirana s komercialno indirektno ELISA (test M. hyo Ab, IDEXX Laboratories Inc., Westbrook, ME, ZDA) po navodilih proizvajalca. Vzorci so bili pozitivni, če je bilo razmerje med vzorcem in pozitivnim (S/P) višje od 0,40, in negativni, če je bilo razmerje S/P enako ali manjše od 0,40.

T-celična proizvodnja citokinov

Iz sveže, nestrjene krvi smo izolirali mononuklearne celice periferne krvi (PBMC) z gradientom gostote Lym phoprep™ (tehnologije matičnih celic, Van - - couver, Kanada). Izolacija, stimulacija in barvanje PBMC so bili izvedeni, kot je opisano prej, z nekaj manjšimi spremembami [22]. Celice smo čez noč (20 ur) stimulirali z lastno izdelanim bakterinom seva M. hyopneumoniae J in za vsako žival smo vključili negativno gojišče in pozitivno kontrolo Concanavalin A (ConA). Bakterin seva M. hyopneumoniae J je bil izdelan na podlagi protokola za proizvodnjo bakterina M. hyopneumonia F7.2 C [16]. Da bi raziskali proizvodnjo citokinov, smo v vsako vdolbino zadnje 4 ure stimulacije dodali Brefeldin A (eBioscience™, San Diego, CA, ZDA) za zaviranje izločanja beljakovin. Za zunajcelično obarvanje smo PBMC inkubirali z monoklonskimi protitelesi anti-CD3 (klon PPT3), anti-CD4 (klon 74-12-4) in anti-CD8 (klon 11-295-33). Nato ustrezna sekundarna protitelesa proti mišjim IgG1 APC-Cy7 (Abcam, Cambridge, UK), proti mišjim IgG2b FITC (Biolegend, San Diego, CA, ZDA) in proti mišjim IgG2a PE-Cy7 (Abcam, Cambridge, UK) so bili dodani. Nato je bila izvedena stopnja blokiranja z mišjim IgG1 (10 µg/mL). Po površinskem obarvanju so bile celice fiksirane in permeabilizirane ter izvedeno znotrajcelično obarvanje za TNF-, IFN- in IL-17A [22]. Podatki so bili pridobljeni s pretočnim citometrom CytoFLEX (Beckman Coulter, Bea, CA, ZDA) in rezultati so bili nadalje analizirani s programsko opremo CytExpert (Beckman Coulter). Hierarhija prehodov je prikazana v dodatni datoteki 1.

Test proliferacije T-celic

Izolirane PBMC so stimulirali in vitro z lastno izdelanim bakterinom seva M. hyopneumoniae J, da bi ocenili proliferacijo celic T. Uporabljeni protokol je bil podrobno opisan v prejšnji študiji [22]. Za površinsko obarvanje smo celice najprej inkubirali z monoklonskimi protitelesi anti-CD3, anti-CD4 in anti-CD8 in nato z ustreznimi sekundarnimi protitelesi proti mišjim IgG1 APC-Cy7 (Abcam, Cambridge, UK), proti mišjim IgG2b FITC (Biolegend, San Diego, CA, ZDA) in protimišji IgG2a AlexaFluor 647 (Biolegend, San Diego, CA, ZDA) skupaj s propidijevim jodidom. Podatki so bili pridobljeni s pretočnim citometrom CytoFLEX, rezultati pa so bili nadalje analizirani s programsko opremo CytExpert. Hierarhija prehodov je prikazana v dodatni datoteki 2.

cistanche tubulosa - izboljšanje imunskega sistema

Analize podatkov

Statistical analyses were performed using IBM SPSS® Statistics Version 27 (IBM, Chicago, IL, USA) to compare results within farms. A descriptive analysis was performed for M. hyopneumoniae-specific antibody levels and the frequency of different T cell subsets. Kolmogorov-Smirnov and Shapiro-Wilk tests were used as tests for the normality of the residuals. For normally distributed data, repeated measures analyses of variance were used and post-hoc pairwise comparisons were made with a Bonferroni correction to assess possible differences between successive sampling moments. For not mally distributed data, a non-parametric Friedman test was used together with a Wilcoxon signed rank test with Bonferroni correction to compare the different sampling moments. Descriptive results were given to discuss whether the presence (S/P>{{0}}.40) ali odsotnost (S/P manj kot ali enako 0,40) MDA je vplivala na humoralno in celično posredovano imunost po cepljenju pujskov.

Rezultati

Na vsaki farmi je bilo med poskusom izločenih pet prašičev zaradi pogina ali izgube ušesne znamke. Podatki teh prašičev so bili vključeni v analizo do zadnjega pravilno dokumentiranega trenutka vzorčenja.

Prisotnost naravne okužbe z M. hyopneumoniae na farmah

Na farmi A so bili vsi vzorci TBS (od svinj, pujskov in prašičev za pitanje) negativni na prisotnost DNA M. hyopneumoniae. Na farmi B so bili vsi vzorci TBS svinj, pujskov in pitancev negativni na prisotnost DNK M. hyopneumoniae do petega meseca starosti. Pri šestih mesecih starosti so bili štirje pitanci pozitivni na M. hyopneumoniae s 300, 7, 22 in 14 organizmi M. hyopneumoniae/µL DNK.

Obstojnost protiteles, specifičnih za M. hyopneumoniae, pri prašičih

Na obeh farmah so štiri od petih svinj imele protitelesa, specifična za M. hyopneumoniae, v serumu in kolostrumu ob prasitvi (sliki 1A in C). Dva dni stari pujski, ki so sesali kolostrum teh svinj, so imeli M. hyopneumoniae specifična materina protitelesa (prisoten MDA), medtem ko so bili pujski seronegativnih svinj prav tako seronegativni (MDA ni) (sliki 1B in D). Kljub cepljenju pri starosti 16 dni se je na obeh farmah raven specifičnih protiteles M. hyopneumoniae v serumu prašičev znatno zmanjšala od dveh dni starosti do enega meseca, od enega meseca do dveh mesecev in od dveh mesecev do tri mesece starosti (slika 1E). Med kasnejšimi trenutki vzorčenja ni bilo opaziti bistvenih razlik. Od dveh mesecev starosti naprej so bili vsi prašiči, razen dveh na kmetiji A pri štirih mesecih, seronegativni za M. hyopneumoniae. Ravni protiteles, specifičnih za M. hyopneumoniae, pri pujskih z MDA so se sčasoma zmanjšale in pri dveh mesecih starosti dosegle enake ravni kot tiste pri pujskih brez MDA (slika 1F).

Kinetika frekvenc podskupin celic T pri prašičih

Med življenjem prašiča se zaradi zorenja imunskega sistema in stika z mikroorganizmi spreminja pogostost različnih podskupin celic T v krvi [28]. Da bi raziskali kinetiko različnih podskupin celic T, smo krvne PBMC iz kontrole nestimuliranega medija ovrednotili s pretočno citometrijo. Pri starosti enega meseca je bila pogostnost (povprečni %) CD4- CD8+ T celic 13,6±2,8% in 10,5±3,4% pri prašičih s farm A in B. Ta pogostost se je znatno povečala pri starosti dveh mesecev na obeh farmah in se ponovno znatno zmanjšala pri starosti treh mesecev na farmi A. Od starosti treh mesecev naprej je ostala stabilna na farmi A, medtem ko so na farmi B ponovno opazili znatno povečanje pri šestih mesecih starosti (slika 2A). Na obeh farmah je bila pogostnost celic CD4+CD8− T najvišja pri starosti enega meseca s 37,5±6.0% (kmetija A) in 42,3±5,9% (kmetija B). Ta pogostost se je znatno zmanjšala pri starosti dveh mesecev. Na kmetiji A se je pogostost ustalila od dveh mesecev naprej, medtem ko je na kmetiji B prišlo do zmanjšanja bolj postopoma (slika 2B). Pri starosti enega meseca je bilo razmerje CD4/CD8 2,8 (farma A) in 4.0 (farma B). Razmerje je padlo pri starosti dveh mesecev in ostalo pod 1.0 od starosti treh mesecev naprej na obeh farmah. Pogostnost celic CD4−CD8− T pri en mesec starih prašičih je bila 31,1±7,2% na farmah A in 25,6±5,4% na farmah B. Na obeh farmah je pogostnost ostala podobna pri starosti dveh mesecev, vendar se je pozneje znatno povečala in dosegla najvišje ravni pri starosti pet mesecev (slika 2C). Pogostnost celic CD4+CD8+ T je bila najnižja pri starosti enega meseca s 3,3 ± 1,1 % oziroma 4.0 ± 1,0 % na farmah A in B. Ta pogostost se je znatno povečala pri starosti dveh mesecev. Na kmetiji A je nato ostala stabilna, medtem ko se je na kmetiji B postopoma še povečevala do starosti štirih mesecev, da bi se ponovno znatno zmanjšala pri starosti petih mesecev (slika 2D).

Slika 1 Prisotnost protiteles, specifičnih za Mycoplasma hyopneumoniae, pri svinjah in prašičih. A, C

Slika 2 Mesečna pogostnost (%) podskupin CD3+ T celic v krvi prašičev. A

Slika 3 Obstojnost krožečih proliferirajočih celic CD3+ T pri prašičih. A, B

Proliferacija celic T

PBMC, stimulirane z M. hypopnea moniae, so analizirali, da bi raziskali odstotek proliferirajočih celic T. Kot je prikazano na slikah 3A in B, so bile proliferirajoče CD{2}} T celice prisotne v krvi prašičev ob vsakem trenutku vzorčenja na obeh farmah po in vitro stimulaciji z bakterinom M. hyopneumoniae, čeprav so bili odstotki nekaterih živali višji pri farma A. Na farmi A se je odstotek proliferirajočih celic T znatno zmanjšal pri starosti šestih mesecev v primerjavi z odstotkom pri starosti petih mesecev, medtem ko na farmi B ni bilo mogoče bistveno zmanjšati ali povečati odstotka proliferirajočih T celic. opazovati. Te CD4−CD8− T celice so bile prevladujoča podskupina CD3+ T celic, ki so proliferirale kot odgovor na stimulacijo z M. hyopneumoniae na obeh farmah, sledila pa jim je podskupina CD4+CD8− T celic (sliki 3 C in D).

Slika 4 Krožeče celice T CD4+CD8+, specifične za Mycoplasma hyopneumoniae, ki proizvajajo citokine, v krvi prašičev na obeh farmah. A

T-celična proizvodnja citokinov

Da bi pridobili boljši vpogled v prisotnost in obstojnost celic T, specifičnih za M. hyopneumoniae, pri prašičih, so produkcijo TNF-, IFN- in IL-17A s krvnimi PBMC, stimuliranimi in vitro z bakterinom M. hyopneumoniae, ocenili z pretočna citometrija. Kot je prikazano na sliki 4, so na obeh farmah stimulirane celice CD4+CD8+ T proizvajale citokine, kar je bilo bolj izrazito pri prašičih mlajše starosti. Odstotek celic TNF- + CD4+CD8+ T se je znatno zmanjšal pri prašičih na farmi A od enega do dveh mesecev starosti in od dveh do treh mesecev starosti na farmi B. A znatno zmanjšanje IFN- + CD4+CD8+ celic T so opazili pri prašičih od enega do dveh mesecev starosti na obeh farmah in od dveh do treh mesecev starosti na farmi B. Te odstotek celic CD4+CD8+ T, ki proizvajajo TNF- in IFN-, se je znatno zmanjšal pri prašičih od enega do dveh mesecev starosti na farmi A in od dveh do treh mesecev na farmi B. Po enem mesecu starosti je bil odstotek celic T IL-17A+ CD4+CD8+ višji v primerjavi z odstotkom pri dveh mesecih starosti, vendar ta razlika ni bila statistično pomembna. Štiri živali na farmi B, pri katerih je bil test M. hyopneumoniae pozitiven pri starosti šestih mesecev, so imele podobno proizvodnjo citokinov s CD4+CD8+ T celicami v primerjavi z živalmi, negativnimi na M. hyopneumoniae. Poleg podskupine celic T CD4+CD8+ smo opazili tudi razlike v proizvodnji citokinov pri drugih podskupinah celic T na farmi B. Slika 5 prikazuje podatke o jasnih odzivih in pomembnih razlikah v proizvodnji citokinov pri druge podskupine celic T, ki so se pojavile le na farmi B. Za druge parametre in na farmi A niso opazili razlik v proizvodnji citokinov CD4−CD8+, CD4+CD8− ali CD4− CD8− T celice. Odstotek celic TNF- + CD4+CD8− T se je znatno povečal, medtem ko se je odstotek celic T IFN- + CD4−CD8+ T znatno zmanjšal od enega do dveh mesecev starost. Omeniti velja, da je imel prašič, ki je bil pri šestih mesecih pozitiven na M. hyopneumoniae s 7 organizmi M. hyopneumoniae/µL DNA, visoke odstotke TNF- + CD4+CD8− in IL-17 A+ CD4−CD8+ celic T v njegovi krvi. Drugi prašiči, pozitivni na M. hyopneumoniae, pri šestih mesecih starosti so imeli podoben odstotek celic T, ki proizvajajo citokine, kot prašiči, negativni na M. hyopneumoniae.

Slika 5 Krožeče podskupine T-celic, specifičnih za Mycoplasma hyopneumoniae, ki proizvajajo citokine, v krvi prašičev na farmi B. A

Na vsaki farmi je bil MDA, specifičen za M. hyopneumoniae, prisoten v serumu 20 dva dni starih pujskov in ga ni bilo v serumu petih pujskov, ki izvirajo iz svinje brez serumskih protiteles, specifičnih za M. hyopneumoniae. Da bi raziskali, ali je MDA vplival na celično posredovano imunost, ki jo povzroči cepivo proti M. hyopneumoniae, so razlikovali med pujski z in brez MDA, razlike med obema skupinama pa so raziskali za podskupine celic T, za katere je pomembno razlike so opazili pri proizvodnji citokinov (sliki 6A–E). Na farmi B je bil odstotek celic TNF- + CD4+CD8+ T običajno višji pri enomesečnih prašičih z MDA v primerjavi z enomesečnimi prašiči brez MDA. Za druge celice CD4+CD8+ T, ki proizvajajo citokine, so bili povprečni odstotki podobni med obema skupinama prašičev, starih en mesec, na vsaki farmi. Sčasoma je prišlo do padajočega trenda v povprečnih odstotkih celic CD4+CD8+ T, ki proizvajajo citokine, v krvi prašičev z le majhnimi ali nobenimi razlikami pri šestih mesecih starosti med prašiči z in brez MDA (sliki 6A–C). Enako so opazili pri celicah T CD8+, ki proizvajajo IFN- -, v krvi prašičev na farmi B (slika 6D). Pri starosti enega in dveh mesecev je bil povprečni odstotek celic TNF- + CD4+CD8− T na farmi B podoben za prašiče z ali brez MDA, medtem ko je bil pri starosti šestih mesecev višji odstotek celic CD4+CD8− T, ki proizvajajo TNF- -, so opazili v krvi prašičev brez MDA (slika 6E).

koristi dodatka cistanche-povečanje imunosti

Diskusija

To je prva študija, ki zagotavlja vpogled v dolgoročne imunske odzive, ki jih povzroči cepivo M. hyopneumoniae, pri prašičih od rojstva do zakola v terenskih razmerah. Humoralnega imunskega odziva v serumu, ocenjenega z IDEXX ELISA, po cepljenju ni bilo, vendar so bili prisotni celično posredovani imunski odzivi. Proliferacijo celic T po in vitro stimulaciji z M. hyopneumoniae smo opazili do konca obdobja pitanja. Poleg tega so bile pri starosti enega meseca po cepljenju proti M. hyopneumoniae prisotne T-celice CD4+CD8+, ki proizvajajo citokine, specifične za M. hyopneumoniae, vključno s spominskimi celicami T, vendar se je s starostjo zmanjšalo . Videti je, da materinska protitelesa med življenjem prašiča niso vplivala na humoralne in celično posredovane imunske odzive, povzročene s cepivom, razen prisotnosti celic T TNF- + CD4+CD8+ . Za ovrednotenje obstojnosti in razlik v imunskem odzivu pri pujskih, cepljenih z M. hyopneumoniae na ravni farme, smo vključili dve komercialni farmi. Čeprav je bilo predvideno kroženje M. hyopneumoniae na obeh farmah, so proučevani prašiči ostali negativni na M. hyopneumoniae skozi celotno preskušanje, razen štirih prašičev na farmi B ob koncu preskušanja, kar nam je omogočilo, da raziščemo obstojnost s cepivom povzročene imunski odziv brez vpliva naravne okužbe. Štirje M. hyopneumoniae PCR-pozitivni prašiči, stari šest mesecev na farmi B, niso imeli višjih ravni protiteles, specifičnih za M. hyopneumoniae, v primerjavi s PCR-negativnimi prašiči. Razen pri enem prašiču tudi po in vitro stimulaciji z M. hyopneumoniae niso imeli višjih odstotkov celic T, ki proizvajajo citokine. To bi lahko razložili z dejstvom, da je do okužbe z M. hyopneumoniae verjetno prišlo tik pred trenutkom vzorčenja, kar imunskemu sistemu ni omogočilo dovolj časa, da bi se odzval na okužbo [29–31]. Pri treh od štirih prašičev, pozitivnih na M. hyopneumoniae, je bila tudi obremenitev s patogeni v vzorcu TBS precej nizka.

Slika 6 Povprečni odstotek podskupin T-celic, specifičnih za Mycoplasma hyopneumoniae, ki proizvajajo citokine, glede na ravni materinih protiteles. AC

Raven protiteles v serumu pri dvodnevnih prašičih je ustrezala ravni protiteles, specifičnih za M. hyopneumoniae, v serumu in kolostrumu svinj ob prasitvi, kar potrjuje prenos specifične imunosti za M. hyopneumoniae preko kolostruma [22, 23]. Po cepljenju proti M. hyopneumoniae pri starosti 16 dni niso opazili serokonverzije. Nasprotno, ravni protiteles, specifičnih za M. hyopneumoniae, so se sčasoma zmanjšale, pri čemer so vse živali postale seronegativne pri starosti dveh mesecev. Znano je, da komercialno cepivo proti M. hyopneumoniae, uporabljeno v tej študiji, povzroča omejeno serokonverzijo po enkratnem dajanju, kar so opazili tudi v prejšnjih študijah [14, 32, 33]. V eksperimentalni študiji cepljenja pujskov pred odstavitvijo je 40 % živali imelo serokonverzijo 3 tedne po cepljenju, medtem ko je v terenskem poskusu samo 3 od 40 prašičev serokonverziralo 7 tednov po cepljenju [14, 32]. Vendar pa prisotnost (ali odsotnost) serumskih protiteles, specifičnih za M. hyopneumoniae, po cepljenju ne ustreza zaščiti (ali pomanjkanju zaščite) pred okužbo [14, 25, 34]. Za zaščito gostitelja pred fakultativnimi intracelularnimi in zunajceličnimi bakterijskimi patogeni, kot je M. hyopneumoniae, imajo pomembno vlogo celice pomočnice CD4+CD8− T, predvsem celice T1 in T17. Celice T1 proizvajajo IFN-, ki aktivira makrofage, da ubijejo patogen, medtem ko celice T17 proizvajajo IL-17A za krepitev mukozne pregrade [35–38]. Pred kratkim je bilo dokazano, da je nizek odstotek celic M. hyopneumoniae mogoče najti tudi znotrajcelično in glede na ključno vlogo citotoksičnih celic T CD4−CD8+ pri zaščiti gostitelja pred znotrajceličnimi patogeni, te citotoksične celice T lahko tudi pomemben za nadzor okužb z M. hyopneumoniae [31, 35, 39]. Da bi raziskali kinetiko različnih frekvenc podskupin celic T in sposobnost teh celic T za proliferacijo po in vitro stimulaciji z M. hyopneumoniae, so bile PBMC izolirane iz pujskov na obeh farmah. Vzorec pogostnosti podskupine celic T je bil na teh dveh farmah podoben. Po drugih študijah je odstotek CD4+CD8− T celic višji od odstotka CD4−CD8+ T celic v mlajših letih. Z naraščajočo starostjo se odstotek CD4+CD8− T celic zmanjšuje, medtem ko se odstotek CD4−CD8+ T celic povečuje, kar povzroči zmanjševanje razmerja CD4/CD8 sčasoma [40–42]. Pujski se rodijo skoraj brez celic CD4+CD8+ T. Te celice se povečajo s starostjo, ko so prašiči v stiku z mikroorganizmi, saj imajo nekatere od teh celic za patogen specifično spominsko funkcijo [5, 22, 42–44]. Vendar pa je na farmi A pogostnost CD4+CD8+ celic T ostala na isti ravni od dveh mesecev starosti dalje. Na farmi B je prišlo do postopnega povečevanja do štirih mesecev starosti, kot je bilo pričakovano, čeprav se je odstotek celic CD4+CD8+ T po tem spet zmanjšal. Primerjava podskupin celic T z drugimi študijami ostaja težavna, saj PBMC v tej študiji niso bili izmerjeni neposredno po vzorčenju krvi, ampak so bili najprej inkubirani 20 ur, preden so izmerili odstotek subpopulacij T celic. Proliferacija celic T CD3+, specifična za Mycoplasma hyopneumoniae, je vztrajala do konca obdobja pitanja, kar potrjuje prisotnost celic T, specifičnih za M. hyo pneumoniae, v krvi prašičev, cepljenih pri starosti 16 dni. Prisotnost proliferirajočih celic T, specifičnih za M. hyopneumoniae, je lahko povezana z zaščito pred enzootsko pljučnico, ker so prejšnje raziskave pokazale, da je sposobnost PBMC za proliferacijo po in vitro stimulaciji z mitogenom ConA povezana z odpornostjo proti boleznim pri prašičih [45]. ]. Celice CD4−CD8− T so bile glavna podmnožica celic T, ki se je razmnoževala na obeh farmah, sledile pa so jim celice CD4+CD8− T, pri čemer so odstotki sčasoma nihali. Pri prašičih večina CD4-CD8-T celic nosi invariantne δ T celične receptorje v nasprotju z antigensko specifičnimi T celicami [31, 42]. Po okužbi prašičev z drugimi patogeni, kot je PRRSV, so bile celice δ T tudi glavni proliferativni odzivniki po viremiji PRRSV [46]. Te celice T igrajo tudi vlogo pri proizvodnji nevtralizirajočih protiteles po cepljenju prašičev proti klasični prašičji kugi [47]. Poleg tega so v bronhoalveolarni izpiralni tekočini prašičev, okuženih z Actinobacillus pleuropneumoniae, opazili povečanje CD8- δ T celic [48]. Potrebne so nadaljnje raziskave, da bi raziskali vlogo celic δ T pri nadzoru in zaščiti pred okužbami z M. hyopneumoniae. V testih odpoklica so bile različne podskupine celic T ocenjene glede njihove proizvodnje TNF-, IFN- in IL-17A. Pri dveh mesecih starosti se je odstotek TNF- -, IFN- - in TNF- /IFN- -celic CD4+CD8+ T, ki proizvajajo, znatno zmanjšal v primerjavi z odstotki pri starosti enega meseca. Kasneje so bili odstotki spremenljivi, bodisi so se še naprej zniževali ali pa ostali stabilni skozi čas. Enak vzorec so opazili pri celicah CD4+CD8+ T, ki proizvajajo IL{91}}A, čeprav ni bil statistično pomemben. Pri mladicah, cepljenih proti PRRSV, je bila proizvodnja IFN-ja s PBMC opažena tudi do 42 dni po prvem cepljenju, vendar se je nato zmanjšala do 147 dni po cepljenju [49]. Prej so dokazali povečano število limfocitov, ki izločajo IFN, po cepljenju proti M. hyo pneumoniae [9, 10].

Puščavska živa cistančatubuloza

V zadnjem času se kopičijo dokazi, da imajo polifunkcionalne celice T, ki proizvajajo več kot en citokin, ključno vlogo pri zaščiti in odstranjevanju patogenov. Na primer, pri prašičih, okuženih s klamidijo, so polifunkcionalne celice CD4+CD8− T povezane z zaščito [50]. Cepljenje pujskov proti M. hyo pneumoniae je povečalo tudi odstotek polifunkcionalnih CD4+CD8− in CD4−CD8+ T celic [12]. V drugi študiji je cepljenje prašičev proti PCV2 povzročilo višje ravni TNF- +/IFN- + CD4+CD8+ T celic 24 dni po cepljenju, ki so se ponovno znižale proti koncu študije 56 dni po cepljenju [51]. V naši študiji smo opazili tudi, da se je prisotnost celic CD4+CD8+ T, ki proizvajajo citokine, sčasoma zmanjšala. Ta študija se je osredotočila na krvne limfocite v obtoku, vendar cepljenje sproži tudi lokalne, za M. hyopneumoniae specifične celično posredovane imunske odzive v pljučih in bronhialnih bezgavkah [8]. Zato bi se morale prihodnje raziskave imunosti, specifične za M. hyo pneumoniae, povzročene s cepivom, osredotočiti tudi na lokalne celično posredovane imunske odzive. Poleg tega je bilo v tej študiji za imunizacijo pujskov uporabljeno samo eno komercialno cepivo proti M. hyopneumoniae. Imunski odzivi se lahko med cepivi razlikujejo, saj nanje vplivata formulacija cepiva (adjuvans in antigen) in način dajanja [16, 52, 53]. Znano je na primer, da karbopol, adjuvans v uporabljenem komercialnem cepivu proti M. hyopneumoniae, usmerja imunski odziv proti odzivu T1 [54]. Na vsaki farmi je bilo pet pujskov seronegativnih za M. hyopneumoniae, v serumu 20 pujskov pa je bila prisotna za M. hyopneu mobile specifična MDA. Ne glede na status MDA so bili vsi prašiči seronegativni za M. hyopneumoniae pri starosti dveh mesecev, serokonverzije pa pozneje niso opazili. Naše ugotovitve se ujemajo s prejšnjo študijo, v kateri so bili sedem dni stari pujski z in brez MDA cepljeni proti M. hyopneumoniae [25]. V obeh skupinah serokonverzije po cepljenju niso opazili in vsi prašiči so bili seronegativni 42 dni po cepljenju. Po drugi strani pa so drugi ugotovili, da je cepljenje proti M. hyopneumoniae v prisotnosti MDA povzročilo višje ravni protiteles v primerjavi z necepljenimi pujski, vendar višji kot je titer MDA, nižji je odziv [24, 26]. Čeprav po cepljenju proti M. hyopneumoniae ni vedno opaziti protitelesnega odziva, se inducirajo za M. hyopneumoniae specifični celično posredovani imunski odzivi [26]. V proliferaciji PBMC, izoliranih iz prašičev, cepljenih z M. hyopneumoniae, niso opazili nobene razlike, ne glede na ravni MDA [26]. V naši študiji znotraj vsake farme niso opazili razlik v celicah T, ki proizvajajo citokine, med prašiči, cepljenimi z M. hyopneumoniae, z in brez MDA pri starosti enega meseca. Samo na farmi B so imeli pujski z MDA večji odstotek celic TNF- + CD4+CD8+ T pri starosti enega meseca v primerjavi s pujski brez MDA. Ustreznost teh ugotovitev bi bilo treba nadalje raziskati v študiji, ki bi vključevala večje in enako število pujskov z in brez MDA, specifične za M. hyopneumoniae. Opraviti je treba tudi deset statističnih analiz, saj to v tej študiji ni bilo narejeno zaradi majhnega in neenakega števila živali v skupini brez in z MDA. Skratka, ta študija je pokazala, da čeprav ni bilo serokonverzije po cepljenju pujskov z M. hyopneumoniae, so bili odkriti celično posredovani imunski odzivi, specifični za M. hyopneumoniae. Polifunkcionalne celice CD4+CD8+ T, ki proizvajajo citokine, so bile prisotne do starosti treh mesecev, proliferirajoče celice T pa so opazili do konca obdobja pitanja, kar kaže na prisotnost celično posredovane imunosti, specifične za patogene pri prašičih, cepljenih z M. hyopneumoniae. Rezultati so podlaga za nadaljnje raziskave, ki ocenjujejo vpliv naravne okužbe z M. hyopneumoniae na imunost, ki jo povzroči cepivo v terenskih razmerah.

Reference

1. Pieters M, Maes D (2019) Mikoplazmoza. V: Zimmermann JJ, Karriker LA, Ramirez A, Schwartz KJ, Stevenson GW, Zhang J (ur.) Bolezni prašičev, 11. izd. Wiley, New York

2. Rycroft A (2020) Splošne značilnosti in razvrstitev vrst prašičev Mycoplasma. V: Maes D, Sibila M, Pieters M (ur.) Mycoplasmas in Swine. Acco, str. 26–46

3. Maes D, Segalés J, Meyns T, Sibila M, Pieters M, Haesebrouck F (2008) Nadzor okužb z Mycoplasma hyopneumoniae pri prašičih. Vet Microbiol 126: 297–309

4. Garza-Moreno L, Segalés J, Pieters M, Romagosa A, Sibila M (2018) Strategije prilagajanja mladic za nadzor okužbe z Mycoplasma hyopneumoniae. Vet Microbiol 219:23–29 5. Saalmüller A, Werner T, Fachinger V (2002) T-celice pomočnice od naivnih do predanih. Vet Immunol Immunopathol 87: 137–145

6. Ruiz AR, Utrera V, Pijoan C (2003) Vpliv cepljenja svinj proti Mycoplasma hyopneumoniae na kolonizacijo pujskov ob odstavitvi. J Swine Health Prod 11: 131–135

7. Sibila M, Bernal R, Torrents D, Riera P, Llopart D, Calsamiglia M, Segalés J (2008) Vpliv cepljenja svinj proti Mycoplasma hyopneumoniae na kolonizacijo in serokonverzijo svinj in pujskov ter poškodbe pljuč prašičev pri zakolu. Vet Microbiol 127: 165–170

8. Marchioro SB, Maes D, Flahou B, Pasmans F, Del Pozo Sacristán R, Vranckx K, Melkebeek V, Cox E, Wuyts N, Haesebrouck F (2013) Lokalni in sistemski imunski odzivi pri prašičih, intramuskularno injiciranih z inaktivirano Mycoplasma hyopneumoniae cepivo. Vaccine 31:1305–1311

9. Martelli P, Saleri R, Cavalli V, De Angelis E, Ferrari L, Benetti M, Ferrarini G, Merialdi G, Borghetti P (2014) Sistemski in lokalni imunski odziv pri prašičih, intradermalno in intramuskularno injiciranih z inaktiviranimi cepivi Mycoplasma hyopneumoniae. Vet Microbiol 168: 357–364

10. Thacker EL, Thacker BJ, Kuhn M, Hawkins PA, Waters WR (2000) Vrednotenje lokalnih in sistemskih imunskih odzivov, povzročenih z intramuskularno injekcijo bakterina Mycoplasma hyopneumoniae prašičem. Am J Vet Res 61:1384–1389

11. Seo HW, Han K, Oh Y, Park C, Choo EJ, Kim SH, Lee BH, Chae C (2013) Primerjava celično posredovane imunosti, povzročene s tremi komercialnimi enkratnimi odmerki bakterinov Mycoplasma hyopneumoniae pri prašičih. J Vet Med Sci 75: 245–247

12. Matthijs AMF, Auray G, Jakob V, Garcia-Nicolas O, Braun RO, Keller I, Bruggman R, Devriendt B, Boyen F, Guzman CA, Michiels A, Haesebrouck F, Collin N, Barnier-Quer C, Maes D , Summerfield A (2019) Sistemska emu neološka karakterizacija novih formulacij cepiva za bakterije Mycoplasma hyopneumoniae. Front Immunol 10:1087

13. Villarreal I, Meyns T, Dewulf J, Vranckx K, Calus D, Pasmans F, Haeseb‑rouck F, Maes D (2011) Učinek cepljenja na prenos Mycoplasma hyopneumoniae pri prašičih na terenu. Vet J 188: 48–52

14. Arsenakis I, Panzavolta L, Michiels A, Del Pozo Sacristán R, Boyen F, Haesebrouck F, Maes D (2016) Učinkovitost cepljenja proti Mycoplasma hyopneumoniae pred in ob odstavitvi proti poskusni okužbi pri prašičih. BMC Vet Res 12:63

15. Park C, Jeong J, Choi K, Chae C (2016) Učinkovitost novega bivalentnega cepiva za prašičji cirkovirus tipa 2 in Mycoplasma hyopneumoniae (Fostera™ PCV MH) v eksperimentalnih pogojih. Cepivo 34:270–275

16. Matthijs AMF, Auray G, Boyen F, Schoos A, Michiels A, García-Nicolás O, Barut GT, Barnier-Quer C, Jakob V, Collin N, Devriendt B, Summerfield A, Haesebrouck F, Maes D (2019) Učinkovitost treh inovativnih bakterinskih cepiv proti eksperimentalni okužbi z Mycoplasma hyopneumoniae. Vet Res 50:91

17. Reynolds SC, St Aubin LB, Sabbadini LG, Kula J, Vogelaar J, Runnels P, Peters AR (2009) Zmanjšane pljučne lezije pri prašičih, okuženih 25 tednov po dajanju enega odmerka cepiva proti Mycoplasma hyopneumoniae približno 1 teden starosti. Vet J 181: 312–320

18. Wilson S, Van Brussel L, Saunders G, Taylor L, Zimmermann L, Heinritzi K, Ritzmann M, Banholzer E, Eddicks M (2012) Cepljenje pujskov pri 1 tednu starosti z inaktiviranim cepivom proti Mycoplasma hyopneumoniae zmanjša pljučne lezije in izboljšuje povprečni dnevni prirast telesne teže. Cepivo 30:7625–7629

19. Del Pozo Sacristán R, Sierens A, Marchioro SB, Vangroenweghe F, Jourquin J, Labarque, Haesebrouck F, Maes D (2014) Učinkovitost zgodnjega cepljenja proti Mycoplasma hyopneumoniae proti mešani bolezni dihal pri starejših pitancih. Vet Rec 174:197

20. Cvjetkovíc V, Sipos S, Szabó I, Sipos W (2018) Klinična učinkovitost dveh strategij cepljenja proti Mycoplasma hyopneumoniae v čredi prašičev, ki trpi zaradi bolezni dihal. Porc Health Manag 4:19

21. Garza-Moreno L, Segalés J, Pieters M, Romagosa A, Sibila M (2017) Anketa o praksah aklimatizacije pozlačenih Mycoplasma hyopneumoniae v Evropi. Porc Health Manag 3:21

22. Biebaut E, Beuckelaere L, Boyen F, Haesebrouck F, Gomez-Duran CO, Devriendt B, Maes D (2021) Prenos specifične celično posredovane imunosti Mycoplasma hyopneumoniae na neonatalne pujske. Vet Res 52:96

23. Bandrick M, Ariza-Nieto C, Baidoo SK, Molitor TW (2014) Imuniteta, posredovana s kolostralnimi protitelesi in celicami, prispeva k prirojeni in antigen specifični imunosti pri pujskih. Dev Comp Immunol 43:114–120

24. Hodgins DC, Shewen PE, Dewey CE (2004) Vpliv starosti in materinih protiteles na protitelesni odziv neonatalnih pujskov, cepljenih proti Mycoplasma hyopneumoniae. J Swine Health Prod 12:10–16

25. Martelli P, Terreni M, Guazzetti S, Cavirani S (2006) Odziv protiteles na okužbo z Mycoplasma hyopneumoniae pri cepljenih prašičih z ali brez materinih protiteles, induciranih s cepljenjem svinje. J Vet Med 53: 229–233

26. Bandrick M, Theis K, Molitor TW (2014) Materinska imunost poveča celično posredovane imunske odzive pri pujskih proti Mycoplasma hyopneumoniae. BMC Vet Res 10:124

27. Beuckelaere L, Haspeslagh M, Biebaut E, Boyen F, Haesebrouck F, Krejci R, Meyer E, Gleerup D, De Spiegelaere W, Devriendt B, Maes D (2022) Različne lokalne, prirojene in adaptivne imunske odzive povzročata dva komercialne bakterije Mycoplasma hyopneumoniae in sam adjuvans. Front Imunol 13:1015525

28. Gerner W, Mair KH, Schmidt S (2022) Lokalna in sistemska T-celična imunost v boju proti virusnim in bakterijskim okužbam prašičev. Annu Rev Anim Biosci 10:349–372

29. Calsamiglia M, Pijoan C, Bosch GJ (1999) Profiliranje Mycoplasma hypopnea mobile na farmah z uporabo serologije in tehnike ugnezdene PCR. J Swine Health Prod 7: 263–268

30. Pieters M, Daniels J, Rovira A (2017) Primerjava vrst vzorcev in diagnostičnih metod za in vivo odkrivanje Mycoplasma hyopneumoniae v zgodnjih fazah okužbe. Vet Microbiol 203: 103–109

31. Tizard IR (2018) Veterinarska imunologija, 10. izdaja. Elsevier, St. Louis, Missouri

32. Arsenakis I, Michiels A, Del Pozo Sacristán R, Boyen F, Haesebrouck F, Maes D (2017) Cepljenje proti Mycoplasma hyopneumoniae ob ali tik pred odstavitvijo v terenskih pogojih: randomizirano preskušanje učinkovitosti. Vet Rec 181:19

33. Betlach AM, Fano E, Vanderwaal K, Pieters M (2021) Vpliv večkratnih cepljenj na prenos in stopnjo okužbe z Mycoplasma hyopneumoniae pri mladicah. Vaccine 39:767–774

34. Martínez-Boixaderas N, Garza-Moreno L, Sibila M, Segalés J (2022) Vpliv maternalne imunosti na imunske odzive, ki jih izzove zgodnje cepljenje pujskov proti najpogostejšim patogenom, vključenim v kompleks bolezni dihal pri prašičih. Porc Health Manag 8:11

35. Schroder K, Hertzog PJ, Ravasi T, Hume DA (2004) Interferon-: pregled signalov, mehanizmov in funkcij. J Leukoc Biol 75: 163–189

36. Dobbs NA, Odeh AN, Sun X, Simecka JW (2009) Večplastna vloga imunosti, posredovane s celicami T, v patogenezi in odpornosti na respiratorno bolezen mikoplazme. Curr Trends Immunol 10:1–19

37. Ge Y, Huang M, Yao Y (2020) Biologija interlevkina-17 in njegov patofiziološki pomen pri sepsi. Front Immunol 11:1558

38. Summerfeld A (2020) Imunski odzivi proti okužbam s prašičjo mikoplazmo. V: Maes D, Sibila M, Pieters M (ur.) Mycoplasmas in Swine. Acco, str. 110–125

39. Raymond BBA, Turnbull L, Jenkins C, Madhkoor R, Schleicher I, Uphof CC, Whitchurch CB, Rohde M, Djordjevic SP (2018) Mycoplasma hyopneumoniae prebiva intracelularno znotraj prašičjih epitelijskih celic. Sci Rep 8:17697

40. Borghetti P, De Angelis E, Saleri R, Cavalli V, Cacchioli A, Corradi A, Mocchegiani E, Martelli P (2006) Spremembe perifernih limfocitov T pri novorojenčkih: odnos z rastnim hormonom (GH), prolaktinom (PRL) in spremembe kortizola. Vet Immunol Immunopathol 110: 17–25

41. Brown DC, Maxwell CV, Erf GF, Davis ME, Singh S, Johnson ZB (2006) Ontogeneza limfocitov T in črevesne morfološke značilnosti pri novorojenčkih prašičev v različnih starostih v postnatalnem obdobju. J Anim Sci 84: 567–578

42. Stepanova H, Samankova P, Leva L, Sinkora J, Faldyna M (2007) Zgodnji postnatalni razvoj imunskega sistema pri pujskih: prerazporeditev podskupin T limfocitov. Cell Immunol 249: 73–79

43. Hernández J, Garfas Y, Nieto A, Mercado C, Montaño LF, Zenteno E (2001) Primerjalna ocena CD4 + CD8 + in CD4 + CD{{5} } limfocitov v imunskem odzivu na prašičji rubulavirus. Vet Immunol Immunopathol 79: 249–259

44. Blanc F, Prévost-Blondel A, Piton G, Bouguyon E, Leplat J, Adréoletti F, Egidy G, Bourneuf E, Bertho N, Vincent-Naulleau S (2020) Sestava levkocitov v obtoku se spreminja glede na starost in pojav melanoma v biomedicinski model prašičev MeLiM. Front Immunol 11:291

45. Jeon RL, Gilbert C, Cheng J, Putz AM, Dyck MK, Plastow GS, Fortin F, Canada P, Dekkers JC, Harding JCS (2021) Proliferacija mononuklearnih celic periferne krvi iz zdravih pujskov po stimulaciji z mitogenom kot indikatorji bolezni odpornost. J Anim Sci 99: skab084

46. ​​Kick AR, Amaral AF, Cortes LM, Fogle JE, Crisci E, Almond GW, Käser T (2019) Odziv celic T na virus reproduktivnega in respiratornega sindroma prašičev tipa 2 (PRRSV). Virusi 11:796

47. Petersen B, Kammerer R, Frenzel A, Hassel P, Dau TH, Becker R, Breithaupt A, Ulrich RG, Lucas-Hahn A, Meyers G (2021) Generacija in prva karakterizacija TRDC-knockout prašičev brez celic δT. Sci Rep 11:14965

48. Faldyna M, Nechvatalova K, Sinkora J, Knotigova P, Leva L, Krejci J, Toman M (2005) Eksperimentalna okužba z Actinobacillus pleuropneumoniae pri pujskih z različnimi tipi in stopnjami specifične zaščite: imunsko-genotipska analiza podskupin limfocitov v krvni obtok in limfoidno tkivo sluznice dihal. Vet Immunol Immunopathol 107: 143–152

49. Sánchez-Matamoros A, Camprodon A, Maldonado J, Pedrazuela R, Miranda J (2019) Varnost in dolgotrajna imunost kombiniranega dajanja cepiva z modificiranim živim virusom proti virusu prašičjega reproduktivnega in respiratornega sindroma 1 in inaktiviranega cepiva proti prašičjemu parvovirusu in Erysipelothrix rhusiopathiae pri mladicah za vzrejo. Porc Health Manag 5:11

50. Käser T, Pasternak JA, Delgado-Ortega M, Hamonic G, Lai K, Erickson J, Walker S, Dillon JR, Gerdts V, Mearens F (2017) Chlamydia suis in Chlamydia trachomatis inducirata multifunkcionalne CD4 T celice pri prašičih. Cepivo 35:91–100

51. Koinig HC, Talker SC, Stadler M, Ladinig A, Graage R, Ritzmann M, Hennig Pauka I, Gerner W, Saalmüller A (2015) Cepljenje proti PCV2 inducira T-celice, ki soproizvajajo IFN-/TNF, s potencialno vlogo pri zaščito. Vet Res 46:20

52. Xiong Q, Wei Y, Xie H, Feng Z, Gan Y, Wang C, Liu M, Bai F, Xie F, Shao G (2014) Vpliv različnih formulacij adjuvantov na imunogenost in zaščitni učinek žive Mycoplasma hyopneumoniae cepivo po intramuskularni inokulaciji. Vaccine 32:3445–3451

53. Maes D, Boyen F, Devriendt B, Kuhnert P, Summerfield A, Haesebrouck F (2021) Perspektive za izboljšanje cepiv proti Mycoplasma hyopneumoniae pri prašičih. Vet Res 52:67

54. Gartlan KH, Krashias G, Wegmann F, Hillson WR, Scherer EM, Greenberg PD, Eisenbarth SC, Moghaddam AE, Sattentau QJ (2016) Sterilno vnetje, povzročeno s Carbopolom, izzove robustne prilagodljive imunske odzive v odsotnosti molekularnih vzorcev, povezanih s patogeni . Vaccine 34: 2188–2196