Mahanimbin je izboljšal s staranjem povezane pomanjkljivosti spomina pri miših z izboljšanim holinergičnim prenosom in zaviranjem oksidativnega stresa, ravni amiloida in nevrovnetja 2. del

2.6. Vrednotenje ravni malondialdehida (MDA) in glutationa (GSH).

Z uporabo komercialno dostopnih kompletov so analizirali ravni MDA in GSH v vzorcih možganov (Cayman Chemical Company, Ann Arbor, MI, ZDA).

Ker znanost in tehnologija še naprej napredujeta, poskušajo znanstveniki odkriti skrivnosti skrivnostnih in pomembnih človeških psiholoških dejavnosti, kot so spomin, mišljenje in zavest. Med njimi velja, da je preučevanje vzorcev možganov zelo zaskrbljujoče, saj nam lahko pomaga globlje razumeti odnos med spominom in možgani.

Kliknite poznajte dodatke za povečanje spomina

Najprej, kaj je vzorec možganov? Preprosto povedano, se nanaša na metodo zajemanja, ohranjanja in analiziranja nevronov (možganskih celic) in njihovih povezav v možganih. Laično povedano je kot zemljevid možganov, ki lahko pokaže povezave in funkcije med različnimi področji.

Nato se pogovorimo o razmerju med vzorci možganov in spominom. Znanstvene raziskave so pokazale, da je naš spomin tesno povezan s strukturo možganov. Ko se učimo novega znanja, se v možganih oblikujejo nove nevronske povezave, ki se sčasoma krepijo. S preučevanjem vzorcev možganov znanstveniki trdo delajo na preučevanju teh možganskih povezav in poskušajo razumeti, kako z njimi izboljšati učenje in spomin.

Poleg tega lahko znanstveniki z analizo vzorcev možganov odkrijejo tudi nekaj zanimivosti. Ugotovili so na primer, da je hipokampus v človeških možganih področje, ki je tesno povezano s spominom. To je zato, ker ima hipokampus v človeških možganih pomembno funkcijo pretvarjanja informacij iz kratkoročnega spomina v dolgoročni spomin.

Zato vrednost raziskav vzorcev možganov ni le v tem, da nam pomagajo bolje razumeti razmerje med možgani in spominom, temveč tudi v tem, da nam pomagajo odkriti temeljne vzroke za motnje spomina ali kognitivne bolezni, s čimer spodbujamo zdravljenje in preprečevanje povezanih bolezni.

Končno bi morali imeti pozitiven pogled na pomoč raziskav vzorcev možganov pri spominu. Čeprav je še veliko znanstvenih problemov, ki jih je treba rešiti, z nenehnim izboljševanjem znanosti in tehnologije verjamemo, da bo v prihodnosti še več prebojev. Veselimo se prihodnosti skupaj in veselimo se, da bomo z znanstvenimi raziskavami naredili naše možgane pametnejše! Vidi se, da moramo izboljšati spomin. Cistanche lahko znatno izboljša spomin, saj ima Cistanche antioksidativne, protivnetne in anti-aging učinke, ki lahko pomagajo zmanjšati oksidativne in vnetne reakcije v možganih ter tako ščitijo zdravje živčnega sistema. Poleg tega lahko Cistanche spodbuja tudi rast in popravilo živčnih celic ter tako izboljša povezljivost in delovanje nevronskih mrež. Ti učinki lahko pomagajo izboljšati spomin, sposobnost učenja in hitrost razmišljanja ter lahko tudi preprečijo pojav kognitivnih motenj in nevrodegenerativnih bolezni.

Ravni MDA in GSH so bile izmerjene v nanomolih/miligramih beljakovin oziroma v mikromolih/miligramih beljakovin. Za oceno vsebnosti beljakovin v možganskih tkivih smo upoštevali Bradfordovo tehniko.

2.7. Ocena aktivnosti acetilholina (ACh) in acetilholinesteraze (AChE).

Ravni ACh in AChE v homogenatu možganov so analizirali z uporabo komercializiranih kompletov (BioAssay System, Hayward, CA, ZDA), ki so bili komplet EnzyChromTM AcetylcholineAssay in QuantiChromTM Acetylcholinesterase Assay komplet.

Intenzivnost tvorbe barve je bila zaznana v čitalniku mikroplošč pri 570 oziroma 412 nm. Dobljena raven ACh je bila izražena kot µM, medtem ko je bila aktivnost AChE izražena kot U/L.

2.8. Merjenje ravni -amiloida

Za ovrednotenje ravni A 1-40 in A 1-42 v možganskih homogenatih so bili uporabljeni kompleti ELISA podjetja Cloud Clone Corp (Katy, TX, ZDA). Za merjenje nastajanja barve je bil uporabljen čitalnik mikroplošč, nastavljen na 450 nm.

Koncentracija A 1-40 in A 1-42 v vzorcu je bila obratno sorazmerna z intenzivnostjo barve. Rezultati so bili predstavljeni v smislu pg/mL skupnih beljakovin.

2.9. Ocena aktivnosti -sekretaze (BACE-1) v mišjih možganih

Aktivnost BACE-1 v homogenatu je bila kvantificirana z uporabo komercializiranega kompleta (SensoLyte® -Secretase Assay Kit podjetja AnaSpec, Fremont, CA, ZDA). Zaznavanje kompleta temelji na peptidu, ki ga cepi BACE-1, signal pa se zazna z uporabo aspektofotometra z vzbujanjem/emisijo pri 490/520 nm.

2.10. Merjenje celotne aktivnosti ciklooksigenaze (COX).

Aktivnost skupnega COX v homogenatu možganov je bila ocenjena z uporabo kompleta ELISA (Cayman Chemical Company, Ann Arbor, MI, ZDA). Tvorba barve je bila neposredno sorazmerna s skupno aktivnostjo COX. Za branje absorbance pri 590 nm smo uporabili čitalnik mikroplošč.

2.11. Izražanje genov BACE-1 in COX-2

Ekspresija BACE-1 in COX-2 v izolirani možganski RNA je bila analizirana z RT-PCR. Trije glavni vključeni koraki so bili: ekstrakcija RNA, pretvorba RNA v tocDNA in verižna reakcija s polimerazo v realnem času (RT-PCR).

Vsi koraki so vključevali komplete, ki jih zagotavlja Qiagen Valencia, CA, ZDA. Najprej je bila RNA ekstrahirana iz vzorca možganov, ohranjenega v RNA. V tem koraku smo približno 100 mg vzorca možganskega tkiva izhomogenizirali z uporabo TissueRuptorja v 1 ml reagenta za lizo QIAzol in inkubirali 5 minut pri sobni temperaturi.

Mešanici možganskega lizata in reagenta za lizo QIAzol smo dodali kloroform in močno stresali 15 s, čemur je sledila inkubacija pri sobni temperaturi 2–3 minute.

Zmes smo centrifugirali pri 12,000× g 15 minut pri 4 ◦C in tri faze so tvorile brezbarvno fazo (zgornjo fazo), ki je bila sestavljena iz RNA in je bila zbrana z 1 volumnom 70% etanola, dodanega to.

Nato smo 700 µL vzorca prenesli v centrifugalno kolono in centrifugirali pri sobni temperaturi pri 8000 × g 15 s; pretok je bil zavržen. Po dodatku 700 µL pufra RW1 (priložen v kompletu) in centrifugiranju 15 s pri 8000 × g je bil pretok zavržen. Korak smo nadaljevali z dodatkom 500 µL pufra RPE (priložen v kompletu) in centrifugiranje 15 s pri 8000 × g.

Ta korak smo ponovili dvakrat, da smo izprali morebitno organsko kontaminacijo v RNA. Nazadnje smo RNA eluirali z dodatkom 50 µL vode brez RNAse in centrifugirali 1 minuto pri 8000 × g.

Koncentracijo RNA smo izmerili z ananodropom (nanodrop 2000c, Thermofisher Scientific, Waltham, MA, ZDA). Ekstrahirano RNA smo nato pretvorili v cDNA, ki smo jo uporabili za izvedbo RT-PCR.

Najprej smo dodali 14 µL šablonske RNA s 6 µL glavne mešanice za reverzno transkripcijo (1 µL reverzne transkriptaze Quantiscript, 4 µL pufra Quantiscript RT, 1 µL mešanice primerjev za RT). Po mešanju smo ga inkubirali 15 minut pri 42 °C, čemur je sledila inkubacija pri 95 °C 3 minute, da inaktiviramo reverzno transkriptazo Quantiscript.

Nastali produkt je bila cDNA in na koncu je bila izvedena RT-PCR. Pogoji RT-PCR so bili fiksirani na 95 °C za 5 minut, čemur je sledilo 40 ciklov pri 95 °C za 10 minut in 60 °C za 30 minut.

Izražanje genov BACE-1 in COX-2 je bilo kvantificirano in normalizirano glede na dva gena za gospodinjstvo (-actin in GAPDH). Primerji nukleotidnih sekvenc so temeljili na mišjem BACE-1 (spredaj50-GCATGATCATTGGTGGTATC-30: vzvratno 50-CCATCTTGAGATCTTGAC-CA-30) ​​in COX-2 (naprej 50-GTGTGCGACATACTCAAGCAGGA) zaporedja cDNA. -30: vzvratno 50-TGAAGTGGTAACCGCTCAGGTG-30), GAPDH (naprej 50-TGACAGGATGCAGAAGGAGA-30: vzvratno 50-GCTGGAAGGTGGACAGTGAG-30) in -aktin (naprej 50-TGACAGGATGCAGAAGGAGA-30: vzvratno 50-GCTGGAAGGTGGACAGTGAG-30).

Opravljene so bile meritve fluorescence in za njihovo oceno je bila uporabljena programska oprema Rotor-Gene 6000 (Qiagen, Hilden, Nemčija).

Rezultati so bili predstavljeni kot ravni izražanja po normalizaciji na gospodinjski gen, ki sta bila B-aktin in GAPDH z uporabo primerjalnega pristopa CT (pražni cikel). Enačba (1) je bila uporabljena za izračun genske ekspresije vzorca.

CT vrednost vsakega vzorca je bila pridobljena na podlagi standardne krivulje, ki je bila ustvarjena za vsak gen (ciljni gen in referenčni gen).

∆∆CT=∆CT vzorec − ∆CT kontrola (1)

kjer

∆CT vzorec: CT vrednost ciljnega gena − CT vrednost referenčnega gena

∆CT kontrola: CT vrednost ciljnega gena − CT vrednost referenčnega gena

2.12. Statistična analiza

Eksperimentalni podatki so bili predstavljeni kot povprečje ± SEM. Za kategorizacijo statističnih variacij sta bila uporabljena enosmerni postopek ANOVA (Graph Pad različica 9, GraphPad Software Inc., La Jolla, CA, ZDA) in test Tukey–Kramerpost hoc. Pomembna je bila opredeljena kot vrednost verjetnosti 0.05.

3. Rezultati

3.1. Mahanimbine-izboljšan spomin pri starih miših

Sposobnost prostorskega učenja in pomnjenja mahanimbina v mišjem modelu so preučili s testom MWM. Izmerjena je bila zakasnitev pobega (EL), razdalja pobega (ED) in čas, porabljen v ciljnem kvadrantu.

Poleg tega je bila upoštevana tudi lokomotorna aktivnost na podlagi povprečne hitrosti plavanja miši. Slika 2A prikazuje, da je imela stara kontrolna skupina izrazito daljši EL od 1. dne do danes 3 (22.05 ± 1,70 s, 21,35 ± 1,85 s, 19,96 ± 2,34 s; p < 0,001; v tem zaporedju) v primerjavi z mlado kontrolo (12,75 ± 1,30; 10,12 ± 0,98; 7,60 ± 1,31; v tem zaporedju).

Razkrilo je, da so stare miši v testu MWM ugotovile znaten primanjkljaj v učni in spominski funkciji. Vendar pa je peroralno zdravljenje z različnimi odmerki (1 in 2 mg/kg) mahanimbina pokazalo preobrat prej omenjenih sprememb v EL starih miši.

Vrednosti EL za skupino z 1 mg/kg mahanimbina so bile 22.01 ± 1,60 s, 15,88 ± 1,54 s (p < 0.01) in 8 0,26 ± 0.93 s (p < 0.001) za 1., 2. in 3. dan, ustrezno v primerjavi s starostno kontrolo, medtem ko je EL vrednosti za skupino z 2 mg/kg mahanimbina so bile 16.09 ± 0,33 s (p < 0,05), 17,14 ± 0,57 s (p < 0,05), 10,57 ± 0.86 s (p < 0,01), v tem zaporedju, če ga primerjamo s starostno kontrolo. Tretji dan se EL obeh skupin (1 in 2 mg/kg) mahanimbina ni bistveno razlikoval od mladega nadzora.

Slika 2. Učinek mahanimbina na (A) zakasnitev pobega, čas, potreben za iskanje skrite platforme. (B) Razdalja pobega, prevožena razdalja od začetne točke do najdbe skrite platforme; (C) povprečna hitrost, hitrost plavanja živali, da najde skrito ploščad; (D) test sonde, odstotek časa starih miši v ciljnem kvadrantu z Morrisovim testom vodnega labirinta. Z mahanimbinom pri starih miših je prišlo do pomembnih izboljšav v zakasnitvi pobega in razdalji pobega.

Poleg tega je zdravljenje povečalo čas, preživet v ciljnem kvadrantu starih miši. Vsi podatki so bili izraženi kot povprečje ± SEM (n {{0}}). Enosmerna ANOVA (1. dan: F(3,20)=11.74, p < 0.001, 2. dan: F(3,20)=17.38,p < 0.001 in 3. dan: F(3,2{{69 }})=14.88, p < 0.001 za ubežno zakasnitev 1. dan: F(3,20) {{ 26}}.22, p < 0.001, 2. dan: F(3,20)=28.62, p < 0,001, in 3. dan: F(3,20) {{40 }}.15, p < 0,001 za 1. dan pobega: F(3,20)=1.939, p > 0,05, 2. dan: F(3,20)=3.467, p > 0,05 in 3. dan: F(3,20)=2,497, p > 0,05 za povprečno hitrost; F(3,20)=7,185, p < 0,01 za test sonde, ki mu sledi Tukey–Kramerjev test večkratnih primerjav.** p < 0,01 in *** p < 0,001 v primerjavi z mlado kontrolo, # p < 0,05, ## p < 0,01 in ### p < 0,001 v primerjavi s staro kontrolo.

Slika 2B predstavlja učinek mahanimbina na prevoženo razdaljo od začetne točke do iskanja skrite platforme. Starejša kontrolna skupina je prepotovala najdaljšo razdaljo, preden je našla skrito ploščad 1., 2. in 3. dan (4,79 ± 0,73 m, 4,34 ± {{10}},11 m in 4,38 ± 0.59 m; {{20}.001) v povezavi z mlado kontrolo (1,36 ± 0,31 m, 1,35 ± 0,24 m oziroma 0,78 ± 0,14 m);

Starejše miši, ki so bile hranjene z 1 mg/kg mahanimbina, so znatno zmanjšale ED (2,17 ± 0.11 m (p < 0.01), 2,10 ± { {13}}.24 m (p < 0.001), 0,89 ± 0,18 (p < 0,001) za 1. dan do 3. dan v skladu s starostno kontrolo.

Znatno vzporedno zmanjšanje ED so opazili pri miših, ki so prejemale 2 mg/kg mahanimbina 1., 2. in 3. dan (2,43 ± 0.28 (p < 0.01) , 2,78 ± 0.32 (p < 0.001), 1,47 ± 0,30 (p < 0,001);

Kar zadeva povprečne hitrosti plavanja med nalogo, med skupinami ni bilo opaziti razlik (slika 2C). To kaže, da mahanimbin ni spremenil nobene lokomotorne aktivnosti, povezane z motorično funkcijo pri starih miših.

Po 24 urah dejanske naloge je bila izvedena testna seja s sondo (3. dan0), da se oceni ohranitev spomina živali. Starejša kontrolna skupina (slika 2D) je preživela manj časa v ciljnem kvadrantu (10.10 ± 1,14 % (p < 0,001)) in pokazala bistveno krajši čas, porabljen v ciljnem kvadrantu v primerjavi z mlada kontrola (19,53 ± 2,56 %), medtem ko so stare miši, zdravljene z 1 mg/kg (20,27 ± 4,84 %, p < 0,01) in 2 mg/kg (17,85 ± 1,56 %, p < 0,05) mahanimbina z oralno gavažo, pokazale pomembno daljši čas, porabljen v ciljnem kvadrantu v primerjavi s starostno kontrolo.

3.2. Vpliv mahanimbina na ravni MDA in GSH v možganih ostarele miške

Ravni MDA v stari kontroli (slika 3A) so bile precej višje (11,54 ± 0,88 µM; p < 0.001) v primerjavi z mlado kontrolo (4,37 ± 0,09). µM). Povečanje ravni MDA v možganskem homogenatu starih miši je odražalo višjo aktivnost LPO, kar je kazalo na zvišanje oksidativnega stresa v možganskem tkivu.

Nasprotno pa je dajanje mahanimbina (1 mg/kg, peroralno) bistveno znižalo možganske ravni MDA pri starih miših (7,56 ± 0,35 µM; p < 0.001) v primerjavi za nadzor nad staranjem. Pri 2 mg/kg mahanimbina (9,65 ± 0,51 µM) niso opazili bistvenih sprememb.

Količina glutationa (GSH) v možganskem homogenatu je nakazovala antioksidativni potencial mahanimbina. Statistična analiza GSH (slika 3B) je pokazala pomembno oslabitev med starejše kontrolne skupine (0.0028 ± 0.0004 µmol/ mg; p < 0,001) v povezavi z mlado kontrolo (0,0447 ± 0,0029 µmol/mg).

Ta študija je tudi ugotovila, da je zdravljenje z mahanimbinom (1 in 2 mg/kg, peroralno) obrnilo raven GSH, ki je bila znatno višja (0.0372 ± 0.{{8} }{{10}}38 µmol/mg, p < 0,001 oziroma 0,0282 ± 0,0041 µmol/mg, p < 0,001);

3.3. Mahanimbin je izboljšal holinergično aktivnost v možganih ostarele miši

Slika 4A prikazuje ravni ACh v mišjih možganih. ACh je bil primerljivo znižan (p < 0.001) v starejši kontroli (17,79 ± 1,54 µM), kot se ujema z mlado kontrolo (34,82 ± 0). 31 µM). Dajanje mahanimbina (1 in 2 mg/kg) pa se je znatno povečalo (35,61 ± 0,85 µM, (p < 0,001); 39,42 ± 0,88 µM (p < 0,001); raven ACh v možganih v povezavi s starostno kontrolo.

Slika 4B predstavlja učinek mahanimbina proti aktivnosti ACHE v možganih. Aktivnost AChE v starejši kontrolni skupini (204,80 ±1,55 U/L) je bila precej povišana (p < 0,001) v primerjavi z mlado kontrolo (51,06 ± 1,36 U/L).

Kljub temu je bila raven AChElevel domnevno zavirana z zdravljenjem z 1 mg/kg (62.03 ± 4,64 U/l; p < 0,001) in 2 mg/kg (43,73 ± 4,76 U /L; p < 0,001) mahanimbin, ko je povezan s kontrolo staranja. Na splošno je uporaba velikega odmerka mahanimbina (2 mg/kg, peroralno) dala boljše rezultate za holinergično aktivnost, saj je povečala raven ACh in zatrla aktivnost AChE.

For more information:1950477648nn@gmail.com