Večsmerno delovanje Bakuchiola proti celičnim mehanizmom staranja obraza - Eksperimentalni dokazi za celostni pristop zdravljenja 1. del

Povzetek

Cilj: Staranje kože je večfaktorski proces, ki vključuje nastanek reaktivnih kisikovih vrst, posledično vnetje z zmanjšano sposobnostjo preživetja epidermalnih in dermalnih celic ter posledično poškodbo zunajceličnega matriksa. Učinkoviti dermo-kozmetični načini zdravljenja bi morali v idealnem primeru obravnavati te značilnosti v celostnem pristopu. Tukaj smo določili ustrezen profil delovanja bakuchiola, meroterpena rastlinskega izvora, v nizu študij in vitro, ex vivo in in vivo ter ga primerjali z retinolom, ki trenutno velja za zlati standard v lokalni kozmetiki proti staranju.

Glikozid cistanche lahko tudi poveča aktivnost SOD v srčnem in jetrnem tkivu ter znatno zmanjša vsebnost lipofuscina in MDA v vsakem tkivu, učinkovito lovi različne reaktivne kisikove radikale (OH-, H₂O₂ itd.) in ščiti pred povzročeno poškodbo DNK z OH-radikali. Cistanche feniletanoidni glikozidi imajo močno sposobnost lovljenja prostih radikalov, večjo redukcijsko sposobnost kot vitamin C, izboljšajo aktivnost SOD v suspenziji semenčic, zmanjšajo vsebnost MDA in imajo določen zaščitni učinek na delovanje membrane semenčic. Cistanche polisaharidi lahko povečajo aktivnost SOD in GSH-Px v eritrocitih in pljučnem tkivu eksperimentalno starajočih se miši, ki jih povzroča D-galaktoza, pa tudi zmanjšajo vsebnost MDA in kolagena v pljučih in plazmi ter povečajo vsebnost elastina. dober čistilni učinek na DPPH, podaljša čas hipoksije pri starajočih se miših, izboljša aktivnost SOD v serumu in upočasni fiziološko degeneracijo pljuč pri eksperimentalno starajočih se miših. Pri celični morfološki degeneraciji so poskusi pokazali, da ima Cistanche dobro antioksidativno sposobnost in ima potencial, da postane zdravilo za preprečevanje in zdravljenje bolezni staranja kože. Hkrati ima ehinakozid v Cistanche pomembno sposobnost čiščenja prostih radikalov DPPH in lahko lovi reaktivne kisikove vrste, preprečuje razgradnjo kolagena, ki jo povzročijo prosti radikali, in ima tudi dober učinek popravljanja poškodb anionov prostih radikalov timina.

Kliknite na Antioxidant Cistanche Tubulosa

【Za več informacij:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Metode: Antioksidativno zmogljivost in moč bakuchiola in retinola smo analizirali z merjenjem redukcije 2,2'-difenil-1-pikrilhidrazila (DPPH) z njegovim absorpcijskim razpadom oziroma elektronsko spin resonančno spektroskopijo. Učinki na prostaglandin E2 (PGE2), faktor zaviranja migracije makrofagov (MIF), rastni faktor fibroblastov 7 (FGF7), kolagen tipa I in VII (COL1A1, COL7A1), ravni fibronektina (FN) kot tudi na presnovo vodotopnega tetrazolija 1 (WST-1) so določili v človeških dermalnih fibroblastih. Epidermalno regeneracijo so ocenili z uporabo modela celjenja ran in vitro. Ravni FN beljakovin so bile analizirane ex vivo po obdelavi s formulacijo, ki je vsebovala bakuhiol, retinol ali vehikel, z uporabo tekočine iz sesalnih pretisnih omotov. Izboljšanje stanja kože je bilo ugotovljeno in vivo v primerjalni študiji razcepljenega obraza po nanosu bakuchiola ali nosilca.

Rezultati: V nasprotju z retinolom je bakuchiol pokazal visoko antioksidativno učinkovitost. Ravni PGE2 in MIF sta se bistveno zmanjšala z bakuchiolom in retinolom. Bakuchiol, ne pa retinol, je bistveno povečal raven beljakovin FGF7. Ravni presnove WST-1 so bile znatno povečane z bakuchiolom in retinolom. Uporaba bakuchiola in retinola je povzročila znatno povečanje ravni beljakovin COL1A1, COL7A1 in FN. Rane, dopolnjene z bakuchiolom, vendar ne z retinolom, so pokazale znatno povečanje regeneracije povrhnjice. Klinično so območja, obdelana s formulacijo, ki vsebuje bakuchiol, pokazala statistično značilno povečanje vrednosti beljakovin FN po 4-tedenskem nanosu v primerjavi z neobdelanimi območji in območji, obdelanimi z vehiklom.

Zaključek: Ti podatki zagotavljajo dokaze o večsmerni učinkovitosti bakuchiola proti celičnim znakom staranja kože. Njegov profil aktivnosti ima nekatere skupne značilnosti z retinolom, vendar kaže več doslej neznanih pozitivnih učinkov v naših študijah, in sicer stimulacijo kritične komponente zunajceličnega matriksa FN ter pospešeno regeneracijo povrhnjice in celjenje ran.

KLJUČNE BESEDE

proti staranju, bakuchiol, utemeljitev trditev in vivo/ex vivo/in vitro, retinol, fiziologija/strukture kože

UVOD

Za starano kožo so značilne gube, neenakomerna pigmentacija, hrapavost kože in ohlapnost. Ti klinični znaki so posledica strukturnih in presnovnih sprememb, ki jih povzročajo procesi intrinzičnega in ekstrinzičnega staranja. Intrinzično staranje so pripisali dejavnikom, vključno s skrajšanjem telomer, kroničnim vnetjem, posameznimi mutacijami mitohondrijske DNA in prostimi radikali [1]. Stara koža dodatno vključuje zmanjšanje njenih antioksidativnih sistemov [2]. Poleg tega se hitrost celične proliferacije zmanjša zaradi biološkega procesa staranja, ki vodi v izgubo strukture in funkcije kože. Ekstrinzično staranje sprožijo predvsem UV-sevanje in vplivi okolja. Te žalitve povzročijo poškodbe kože, ki okrepijo kronološki upad in pospešijo staranje kože. Človeška koža med staranjem nadalje izgubi sposobnost obvladovanja vnetnih stanj, kar ima za posledico kronično vnetno stanje.

Lokalna uporaba retinoidov, kot so retinojska kislina, retinal ali retinol, velja za klinični zlati standard za učinkovito zdravljenje proti staranju [3, 4]. Molekularni mehanizmi retinoidov so bili obširno opisani [5–10]. Lokalni retinoidi učinkovito zmanjšajo vidne znake staranja, kot so gube, ohlapnost ali hrapavost [4, 11], in zmanjšajo depigmentacijo fotopoškodovane kože, vključno z livedo reticularis in actinic lentigines [12]. Vendar lahko lokalno zdravljenje z retinoidi povzroči suhost in draženje kože, odvisno od koncentracije [13]. Ker uporaba retinola povzroča manjše neželene učinke v primerjavi z drugimi retinoidi, kot je retinojska kislina [6, 14], se pogosto uporablja pri kozmetičnem zdravljenju staranja obraza.

V nasprotju z retinolom, ki se v izdelkih za nego kože uporablja od leta 1984 [15], je bakuchiol šele pred kratkim pridobil pozornost kot aktualna spojina proti staranju. Bakuchiol je meroterpen (slika 1), ki je pridobljen iz semen Psoralea corylifolia. V tradicionalni indijski in kitajski medicini se uporablja že stoletja [16, 17] in se dobro prenaša [18]. Predlagano je bilo, da ima bakuchiol funkcije, podobne retinolu, saj v modelu kožnega nadomestka obe snovi kažeta podobne vzorce izražanja genov in vitro [19] in izboljšanje fotopoškodbe kože in vivo [20]. Zato ga imenujejo tudi funkcionalni analog retinoida rastlinskega izvora [21]. Nadaljnje študije so pokazale antioksidativne [19, 22–24], protivnetne [19, 25–27], antibakterijske [28] ter antiproliferativne in protitumorske učinke [29, 30] bakuchiola.

Za učinkovito izboljšanje in odložitev večfaktorskih procesov staranja kože je treba v integriranem pristopu obravnavati različne celične mehanizme. Bakuchiol hkrati modulira različne tarče, zaradi česar je v tem pogledu obetavna spojina. Ker sta oksidativni in vnetni stres tesno povezana s staranjem kože, bi lahko njihovo preprečevanje z bakuchiolom spodbudilo splošno stanje kože. Kakovost trenutnih znanstvenih dokazov pa je bila nedavno kritično ocenjena [31]. V tem kontekstu smo določili (i) antioksidativne in (ii) protivnetne sposobnosti bakuchiola in retinola ter preučili njuno sposobnost izboljšanja celičnega metabolizma in sinteze rastnega faktorja 7, povzetega kot (iii) celična aktivnost. Nadalje smo analizirali, ali bakuchiol in retinol vplivata na izražanje določenih (iv) komponent ECM in izboljšata (v) epidermalno regeneracijo in ponovno epitelizacijo. Nazadnje je bila izvedena študija in vivo, da bi preverili klinično sposobnost bakuchiola za preprečevanje staranja v človeški koži.

MATERIALI IN METODE

Testni materiali

Bakuchiol je bil pridobljen pri Sytheon Ltd (Boonton, New Jersey, Združene države). Retinol je bil kupljen pri Sigma-Aldrich (St. Louis, Missouri, Združene države). Za poskuse celične kulture sta bili obe preskusni snovi sveže razredčeni v DMSO (Merck, Darmstadt, Nemčija). Za založne raztopine DMSO je bila uporabljena koncentracija preskusnih snovi 1000--krat večja od najvišje koncentracije, uporabljene v celični kulturi, ki je dala 0.1 odstotka DMSO v mediju ali pufru. Nadaljnje razredčitve so bile izvedene z uporabo medija ali pufra z 0.1 odstotki DMSO. Zato so bili vsi poskusi celične kulture izvedeni v prisotnosti 0.1 odstotka DMSO. Za študije in vivo je bil lokalni retinol formuliran v istem nosilcu kot bakuchiol.

Študije in vitro

Določanje antioksidativne sposobnosti

Bakuchiol, retinol (oba uporabljena v končni koncentraciji 100 μM) ali visokostandardni troloks (Merck, končna koncentracija 25 μM) so bili razredčeni v DMSO. Na kratko, 30 μL teh spojin (10-krat večja koncentracija od končne preskusne koncentracije) smo dodali v 96-ploščo z ravnim dnom vdolbinic. Nato smo v vsako vdolbinico hitro dodali 270 μL 39 ug/mL DPPH (Merck, razredčenega v mešanici voda/etanol 1:1), kar je dalo končno koncentracijo 10 odstotkov DMSO. Kot kontrolo je bila raztopina DPPH inkubirana z DMSO brez testnih snovi. Nadalje so bile slepe kontrole izvedene z inkubacijo bakuchiola ali retinola z vodo/etanolom (1:1) ali samo z mešanico voda/etanol (1:1), ki je vsebovala 10 odstotkov DMSO v odsotnosti DPPH. Po 10, 30 in 60 minutah smo izmerili absorbanco pri 524 nm z uporabo večmodnega bralnika mikroplošč Spark (Tecan, Männedorf, Švica). Signali praznih kontrol so bili odšteti.

Določanje antioksidativne moči

HDF so bile zasejane v {{0}}plošče z vdolbinicami s 150 000 celicami/vdolbinico v 2 ml medija, ki je vseboval 10 odstotkov telečjega seruma, in inkubirane 24 ur. Kasneje smo stari medij zavrgli in celice obdelali z medijem, ki je vseboval 2 odstotka telečjega seruma in bakuchiol ali retinol v končni koncentraciji 10 μM. Kontrolni HDF so bili dopolnjeni z 0,1-odstotnim DMSO brez bakuhiola ali retinola. Slepe kontrole so bile izvedene z inkubacijo medija brez celic. Po 24 urah smo kondicionirani medij prenesli v vrtilne kolone koncentratorja beljakovin Vivaspin (5000 MWCO; Sartorius, Göttingen, Nemčija) in koncentrirali približno 10--krat. Volumni vseh srednjih supernatantov so bili izenačeni s ponovnim dodajanjem pretoka. Raven proteina FGF7 v koncentriranem kondicioniranem mediju smo analizirali z uporabo komercialno dostopnega kompleta ELISA po navodilih proizvajalca (Bio-Techne GmbH). Meritve so bile izvedene z uporabo večmodnega bralnika mikroplošč Spark (Tecan). Signale, dobljene iz slepih kontrol, smo odšteli in ravni proteina FGF7 normalizirali na skupno število celic, ki smo ga določili z uporabo celičnega števca (Scepter, Merck).

Določitev presnove WST-1

HDF so bile zasejane v {{0}}plošče z jamicami s 3000 celicami/jamico v 100 μL mediju, ki je vseboval 10 odstotkov telečjega seruma, in inkubirane 24 ur. Osiromašeni medij smo zavrgli in celice obdelali s 100 μL medija, ki je vseboval retinol ali bakuchiol v končni koncentraciji 1 μM oziroma 10 μM. Kontrolni HDF so bili dopolnjeni z 0,1-odstotnim DMSO brez bakuhiola ali retinola. Kot nadaljnjo kontrolo smo celice obdelali z 10 odstotki triton-X (Merck). Slepe kontrole so bile izvedene z inkubacijo medija brez celic. Po 72 urah smo celice obarvali s komercialno dostopnim reagentom za celično proliferacijo WST-1 po navodilih proizvajalca (Merck). Absorbanco smo izmerili pri 450 in 620 nm z uporabo bralnika mikroplošč Tecan infinity M200 (Tecan). Razlika v teh meritvah je bila uporabljena za analizo. Signali praznih kontrol so bili odšteti.

Določanje ravni beljakovin COL1A1 in COL7A1

HDF so bile zasejane v {{0}}plošče z vdolbinicami s 10  000 celicami/vdolbinico v 100 μL medija, ki je vseboval 10 odstotkov telečjega seruma, in inkubirane 24 ur. Bakuchiol ali retinol smo razredčili v 100 μL mediju brez telečjega seruma in dodali v sedanji medij v končni koncentraciji 1 μM oziroma 10 μM. Kontrolo smo dopolnili s 100 μL medija brez seruma, kar je dalo koncentracijo 0,1 odstotka DMSO, ki ustreza zdravljenju z retinolom in bakuchiolom. Kot visok standard smo uporabili 10 ng/mL transformirajočega rastnega faktorja (TGF-) in 11 ug/mL natrijevega askorbata (oba Merck). Slepe kontrole so bile izvedene z inkubacijo medija brez celic. Po 4 urah smo ravni beljakovin COL1A1 in COL7A1 v kondicioniranem mediju analizirali z uporabo komercialno dostopnih kompletov ELISA po navodilih proizvajalca (Novus Biologicals, Littleton, Colorado, Združene države). Meritve so bile izvedene z uporabo večmodnega bralnika mikroplošč Spark (Tecan). Signali praznih kontrol so bili odšteti. Raven beljakovin COL1A1 in COL7A1 je bila normalizirana na celotno količino beljakovin celičnega lizata, ki je bila določena z uporabo komercialno dostopnega kompleta za analizo bicinhoninske kisline (Thermo Fisher Scientific) v skladu z navodili proizvajalca. Predpogoj za uporabo rezultatov je bila pozitivna reakcija celic na visoki standard TGF- in natrijev askorbat.

Za analizo ravni beljakovin COL7A1 po podaljšanem času inkubacije so HDF zasejali v 96-plošče z vdolbinicami s 3000 celicami/vdolbino v 100 μL mediju, ki je vseboval 10 odstotkov telečjega seruma. Vse obdelave, kontrole in analize so bile izvedene, kot je opisano zgoraj, z izjemo, da sta bila bakuchiol in retinol uporabljena le v končni koncentraciji 10 μM. Celice so bile pobrane, ko je bila dosežena subkonfluencija, zlasti po 72 ali 96 urah.

Določanje ravni FN proteina

HDF so bile zasejane v {{0}}plošče z vdolbinicami s 10 000 celicami/vdolbinico v 100 μL mediju, ki je vseboval 10 odstotkov telečjega seruma, in inkubirane 24 ur. Staro gojišče smo nadomestili z gojiščem, ki je vsebovalo 2 odstotka telečjega seruma in bakuchiol ali retinol v končni koncentraciji 10 μM. Kontrolo smo dopolnili z 0,1-odstotnim DMSO brez bakuhiola ali retinola. Slepe kontrole so bile izvedene z inkubacijo medija brez celic. Po 24 urah smo analizirali nivoje beljakovin FN v kondicioniranem mediju z uporabo komercialno dostopnega kompleta ELISA po navodilih proizvajalca (R&D Systems, Minneapolis, Minnesota, Združene države). Meritve so bile izvedene z uporabo večmodnega bralnika mikroplošč Spark (Tecan). Signali praznih kontrol so bili odšteti. Ravni proteina FN so bile normalizirane na celotno količino proteina celičnega lizata, ki je bila določena, kot je navedeno zgoraj.

Določanje epidermalne regeneracije v in vitro modelu celjenja ran

Poskusi so bili izvedeni, kot je opisano prej [34]. Za zdravljenje modelov celjenja ran smo bakuchiol ali retinol razredčili v DPBS in dodali v končni koncentraciji 100 μM v območje rane (5 μL na rano). Referenčne rane so bile dopolnjene z enako količino DPBS, ki je vsebovala 0,1 odstotka DMSO brez bakuchiola ali retinola. Dodatne rane so bile neobdelane kot nadaljnja kontrola. Modele celjenja ran smo inkubirali 43 ur pri 95-odstotni vlažnosti, 5-odstotnem CO2 in 37 stopinjah. Nato so bili vzorci hitro zamrznjeni v izopentanu, predhodno ohlajenem s tekočim dušikom, in shranjeni pri –80 stopinjah. Ponovno epitelizacijo smo ovrednotili v odsekih kriostata, obarvanih s hematoksilinom in eozinom, z merjenjem dolžine regenerirane povrhnjice z uporabo mikroskopa Leica DMLS (10×), kamere Leica MC 170 HD CCD in programske opreme Leica LAS V4.9 (Leica Microsystems, Wetzlar, Nemčija). Kvantifikacija je bila izvedena na slep način.

Študije in vivo I in II

Za obe študiji in vivo so bila upoštevana priporočila trenutne različice Helsinške deklaracije in smernice Mednarodne konference o usklajevanju dobre klinične prakse, ki veljajo za kozmetično študijo. Protokol študije I je odobril Neodvisni odbor za etiko Freiburg (koda feki 08/2610). V obeh študijah so vsi prostovoljci dali pisno informirano soglasje. Osebe so imele zdravo kožo, pripadale Fitzpatrickovemu tipu kože od I do III in začetek ali zamenjava hormonskega zdravila je bil kriterij za izključitev.

Med 10--dnevnim obdobjem predkondicioniranja in skozi celotno študijsko obdobje so se subjekti morali vzdržati izpostavljenosti UV-žarkom na testnih območjih. Dejavnosti, ki spodbujajo potenje, so bile prepovedane 24 ur pred načrtovanimi ocenami.

Raziskovalec je prikazal pravilno uporabo formulacij z uporabo količine, ki je ustrezala običajnemu režimu nege kože preiskovancev.

Študija I: Ex vivo določanje ravni beljakovin FN

Od 52 preiskovank, ki so bile vključene v to študijo, kontrolirano z vozilom, je študijo zaključilo 33 preiskovancev, v analizo podatkov pa so bili vključeni podatki 31 preiskovancev (30–64 let, povprečna starost: 50,9 let). Do osipa je prišlo zaradi pandemije SARS-CoV-2 in osebnih razlogov (13 preiskovancev) ter zaradi nekompatibilnih reakcij (pet preiskovancev zaradi zdravljenja z retinolom). Reakcije nezdružljivosti, ki jih povzroča retinol, in težave z vzorčenjem so povzročile različno število oseb, testiranih za vsako stanje (za podrobnosti glejte rezultate).

Sedem dni pred načrtovanimi pregledi je bila prepovedana uporaba izdelkov za nego kože, čistil in mil na podlakteh. Prvi dan študije so bila na notranji strani podlakti postavljena štiri testna območja. Na dveh testnih območjih sta bili uporabljeni dve formulaciji veruma, ki sta vsebovali {{0}}.5 odstotkov bakuhiola oziroma 0,15 odstotka retinola. V mnenju, ki ga je leta 2016 objavil Znanstveni odbor za varstvo potrošnikov, je uporabljena koncentracija retinola veljala za kozmetično zdravljenje [35]. Na drugih dveh testnih območjih je bilo uporabljeno ustrezno vozilo ali pa območje ni bilo obdelano. Položaj lokacij zdravljenja je bil spremenjen. Po 4 tednih uporabe testnih formulacij dvakrat na dan so se prostovoljci vrnili v testni inštitut. Na vsakem testnem območju so bili ustvarjeni trije sesalni pretisni omoti (premera 7 mm), kot je opisano prej [36, 37]. Na kratko, po meri izdelane priseske pretisnih omotov so bile nameščene na testna območja in uporabljen je bil vakuum 550–850 mbar. Po približno 90–150 minutah, ko so se oblikovali sesalni pretisni omoti, se je vakuum sprostil in tekočina je bila aspirirana iz pretisnega omota z 24-merilno iglo. Tekočine so bile do analize takoj zamrznjene pri –80 stopinjah na suhem ledu. Ravni beljakovin FN so bile kvantificirane v vzorcih tekočine iz sesalnih pretisnih omotov z uporabo komercialno dostopnega kompleta ELISA (R&D Systems). Meritve so bile izvedene z uporabo večmodnega bralnika mikroplošč Spark (Tecan). Ravni FN so bile normalizirane na skupne ravni beljakovin v vzorcih tekočine iz sesalnih pretisnih omotov, ki so bili določeni, kot je navedeno zgoraj.

Študija II: In vivo določanje izboljšanja stanja kože

Skupno je bilo 43 prostovoljk vključenih v to z vozilom nadzorovano primerjalno študijo razcepljenih obrazov. Po zdravniških ocenah so imeli subjekti mešane tipe kože (suha, normalna, mastna in mešana koža). 34 preiskovancev (39–66 let, povprečna starost: 56,2 leta) je zaključilo študijo in je bilo vključenih v analizo. Izpade so povzročili tehnični problemi in neskladnost (osem preiskovancev) ter reakcije nekompatibilnosti (en preiskovanec, povzročena z vehiklom in zdravljenjem z bakuchiolom).

Dva tedna pred začetkom študije in v celotnem obdobju študije so se morali prostovoljci vzdržati uporabe izdelkov za samoporjavitev ali intenzivnih kozmetičnih tretmajev obraza (npr. odstranjevanje površinskih plasti kože). Med 10--dnevnim obdobjem predkondicioniranja in med celotno študijo so bili subjekti pozvani, naj se vzdržijo trajnega ličenja, nege trepalnic in obrvi, mask za oči in obližev. Tri dni pred prvo oceno so bili subjekti pozvani, naj se vzdržijo uporabe izdelkov za nego obraza. Večer pred predvidenim ocenjevanjem so morali subjekti prenehati z nanašanjem dekorativne kozmetike.

V prvih 7 dneh 10-dnevne faze predkondicioniranja so preiskovanci prejeli kozarec s kremo, ki je vseboval preučevano kremo (brez informacij o vsebini) in jo dvakrat na dan nanesli na celoten obraz. Na začetku so prostovoljci izvedli samoocenjevanje. Predvsem so vizualno ocenili celoten videz kože obraza z opazovanjem njene svežine in sijaja ter morebitnih znakov staranja kože. Pri tem je bila uporabljena vizualna analogna lestvica v razponu od 1 (zelo utrujena, starana) do 10 (zelo sveža, brez znakov starane kože). Nato so preiskovanci prejeli dva zaslepljena kozarca kreme, ki sta vsebovala verum (nosilec, ki vsebuje 0,5 odstotka bakuchiola) oziroma nosilec, brez kakršne koli specifikacije o vsebini. Med študijskim obdobjem 12 tednov je bila ena obrazna stran dvakrat na dan zdravljena z verumom, druga obrazna stran pa dvakrat na dan z vehiklom. Dodelitev zdravljenj na testna mesta je bila spremenjena. Po 12 tednih redne uporabe so prostovoljci ponovno izvedli samoocenjevanje, kot je navedeno zgoraj.

Statistična analiza

Statistične analize so bile izvedene z uporabo Microsoft Excel za Office 365 (Microsoft Corporation, Redmond, Washington, Združene države), programskega paketa SAS za Windows V9.4 (SAS Institute GmbH, Heidelberg, Nemčija) in GraphPad Prism V8 (programska oprema GraphPad, San Diego). , Kalifornija, Združene države).

Normalna porazdelitev podatkov je bila ocenjena s Shapiro–Wilkovim testom. Če je bila normalna porazdelitev potrjena, je bila izvedena analiza variance s ponovljenimi merami (RM-ANOVA) s post hoc parno primerjavo. Če je bila hipoteza o normalnosti zavrnjena, so bili Blom-transformirani rangi prvotnih podatkov ocenjeni z uporabo RM-ANOVA z post-hoc parno primerjavo ali pa so bili izvirni podatki ocenjeni z uporabo Wilcoxonovega testa rangiranja znakov. Vsi statistični testi so bili dvostranski na ravni pomembnosti alfa=0.05.

REZULTATI

Študije in vitro

Določanje antioksidativnih učinkov

Za analizo (i) antioksidativnih učinkov bakuchiola in retinola smo izvedli dva različna testa z uporabo DPPH kot detektorske molekule.

Antioksidativna sposobnost

Antioksidativno sposobnost smo določili z merjenjem zmanjšanja DPPH preko njegovega absorpcijskega razpada. Visokostandardni Trolox je pokazal znatno povečano antioksidativno zmogljivost glede na kontrolo (p=0.0000 za vse navedene časovne točke), kar je potrdilo pravilno meritev (slika 2a). Kar zadeva kontrolo, je bila tudi absorbanca v vzorcih, obdelanih z bakuchiolom, znatno zmanjšana na vseh preiskovanih časovnih točkah (10 min: p=0.0003, 30 in 60 min: p=0.0000 ), ki kažejo povečano antioksidativno sposobnost. Nasprotno pa retinol v primerjavi s kontrolo ni pokazal pomembne antioksidativne sposobnosti.

【Za več informacij:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】