Niosomski nanoprevozniki za izboljšano dostavo kvercetina v kožo s funkcijami proti tirozinazi in antioksidantom

Povzetek:

Ta študija je bila namenjena odkrivanju učinkovitega flavonoida z obetavnimi belilnimi in antioksidativnimi zmogljivostmi ter oblikovanju niosomov, obremenjenih s flavonoidi, za izboljšanje njegove topnosti, stabilnosti in penetracije. Izvedeni so bili poskusi ločevanja prostih radikalov proti tirozinazi in 1,1-difenil-2-pikrilhidrazilu (DPPH) in vitro, da bi raziskali belilne in antioksidativne sposobnosti več flavonoidov, vključno s kvercetinom, morinom, festinom, miricetinom, rutinom in breviskapin.

Proučevali so prevodnost, viskoznost in velikost delcev formulacije neionskih površinsko aktivnih veziklov (niosomov) na osnovi Span{{0}}RH40- z različnimi masnimi razmerji, da bi določili najprimernejšo formulacijo. Z zdravili obremenjeni niosomi so bili označeni glede na velikost, zeta potencial, morfologijo in učinkovitost ujetja. Proučevali so tudi fotostabilnost, topnost, obnašanje pri sproščanju, prodiranje zdravila ex vivo in zadrževanje kože. Rezultati so pokazali, da ima kvercetin precejšnje belilne in antioksidativne sposobnosti in Span60-RH40 pri masnem razmerju 9:11 tvori sferične ali ovalne niosome 97,6 ± 3,1 nm z območjem zeta potenciala 31,1 ± 0,9 mV in zdravilo učinkovitost ujetja kar 87,3 ± 1,6 odstotka. Niosomi so izjemno izboljšali topnost in fotostabilnost kvercetina.

Poleg tega so imeli liposomi kvercetina v primerjavi z raztopino kvercetina prednosti podaljšanega sproščanja in izboljšane transdermalne penetracije, pri čemer je zadrževanje kože 2,95-krat večje kot raztopina kvercetina.

Antioksidant je vsaka snov, ki lahko v nizkih koncentracijah učinkovito zavira oksidacijsko reakcijo prostih radikalov. Mehanizem njegovega delovanja je lahko neposredno delovanje na proste radikale ali posredno uživanje snovi, ki zlahka tvorijo proste radikale, da prepreči nadaljnje reakcije. Čeprav človeško telo neizogibno proizvaja proste radikale, naravno proizvaja tudi antioksidativne snovi, ki se upirajo prostim radikalom, da preprečijo oksidativne napade prostih radikalov na človeške celice. Študije so dokazale, da je antioksidativni sistem človeškega telesa sistem s celovitimi in kompleksnimi funkcijami, primerljivim z imunskim sistemom. Močnejša kot je antioksidativna sposobnost telesa, bolj zdravo je in daljša je njegova življenjska doba. V naši raziskavi smo ugotovili, da ima puščavska cistanča (Cistanche deserticola) tudi antioksidativni učinek. Cistanche deserticola je bogata s polisaharidi, flavonoidi, alkaloidi, flavonoidnimi glikozidi, flavonskimi kislinami in drugimi sestavinami, te snovi pa imajo močan antioksidativni učinek. Lahko se uprejo oksidativnemu stresu in zmanjšajo poškodbe celic tako, da zajamejo proste radikale, zmanjšajo oksidacijske reakcije in povečajo aktivnost antioksidativnih encimov, s čimer igrajo vlogo antioksidanta.

Kliknite dodatek cistanche deserticola

Ključne besede:

anti-tirozinaza; antioksidant; niosomi; fotostabilnost; transdermalno dostavo.

1. Uvod

Flavonoidi so široko razširjeni v sadju, zelenjavi in ​​zeliščih ter imajo obsežno biološko delovanje, vključno z protivirusnim, protivnetnim, protirakavim, antioksidativnim in antitirozinaznim [1,2]. V zadnjem času je iskanje varnega novega zaviralca tirozinaze deležno veliko pozornosti na področju kozmetike, saj lahko nekateri znani zaviralci, kot so kojična kislina, hidrokinon in kortikosteroidi, sprožijo zdravstvene težave, kot sta dermatitis in razdraženost kože. , ohronoza, citotoksičnost in kožni rak [3]. Zaradi njihove nizke toksičnosti in znatnih antioksidativnih in antitirozinaznih aktivnosti so flavonoidi pritegnili veliko zanimanja kot potencialna naravna belilna in antioksidativna sredstva za uporabo v izdelkih za nego kože [4–6].

Vendar imajo flavonoidi veliko različnih struktur, vključno z različnimi konfiguracijami z istim matičnim jedrom, vendar še vedno ni jasno, katere vrste struktur imajo močne antitirozinazne in antioksidativne sposobnosti. Poleg tega ima večina flavonoidov slabo topnost v vodi in liposolubilnost, zmerna lipofilnost in nizka molekulska teža pa sta dejavnika, za katera je znano, da spodbujata boljšo penetracijo. Drug pomemben dejavnik, ki vpliva na učinkovitost komponent, so biološke pregrade same kože, kot je rožena plast. Čeprav lahko fizikalno-kemijske metode, vključno z iontoforezo, ultrazvokom, mikroiglicami, sistemi za injiciranje brez igel in ojačevalci penetracije, pospešijo penetracijo učinkovin skozi stratum corneum, so te metode lahko invazivne, dražijo kožo in so drage.

Po drugi strani pa so se pojavili nekateri novi sistemi za dostavo učinkovin, ki jih posreduje nosilec, vključno z emulzijo, miceli, vezikli in ciklodekstrinom, da bi povečali učinkovitost obstoječih sestavin, zlasti tistih s slabo topnostjo in biološko uporabnostjo. Vezikli so bili deležni več pozornosti pri transdermalni dostavi. Med vezikli so transfersomi dobro deformabilni liposomi z izboljšano perkutano prepustnostjo in lahko izboljšajo topnost in stabilnost zdravila. Transfersomi so sestavljeni iz specifičnega razmerja fosfolipidov in površinsko aktivnih snovi, medtem ko so fosfolipidi dragi in jih je enostavno oksidirati.

Zato je iskanje drugih stabilnih in zamenljivih veziklov zanimiv predmet raziskovanja. Niosomi so neionski površinsko aktivni vezikularni sistemi, o katerih so prvič poročali leta 1979, ko so bili uporabljeni v kozmetični industriji [7], vendar so jih od takrat preučevali kot sistem za dostavo zdravil v farmaciji [8–13]. Fizikalne lastnosti, tehnike priprave in strukture niosomov so zelo podobne tistim pri liposomih. Vendar pa imajo niosomi tudi prednosti pri transdermalnem dajanju zdravil, kot so dolgotrajno sproščanje zdravil, boljša penetracija in večja retencija kože [14], so cenejši za pripravo in so bolj stabilni [15]. Zato se niosomi lahko uporabljajo v kozmetični industriji [16–18].

Zgodnji površinsko aktivni vezikli so bili pripravljeni z uporabo ionskih površinsko aktivnih snovi [19–22]. Obsežne študije toksičnosti površinsko aktivnih snovi so pokazale, da so kationske površinsko aktivne snovi najbolj toksične, sledijo anionske površinsko aktivne snovi, medtem ko so neionske površinsko aktivne snovi najmanj toksične. Zato je ob upoštevanju varnosti in industrijske uporabe uporaba liposomov, ki vsebujejo neionske površinsko aktivne snovi, boljša možnost za transdermalno dostavo. Zaradi strukture amfifilnih dvoslojev bo na lestvici hidrofilno-lipofilnega ravnovesja (HLB) od 4 do 8 lažje oblikovati niosome [14,23,24].

Zato bodo formulirane, neionske površinsko aktivne snovi z različnimi vrednostmi HLB lažje za tvorbo niosomov. Span, Tween in Brij so običajne neionske površinsko aktivne snovi, ki se uporabljajo za pripravo liposomov [15, 25–34]. Neionske površinsko aktivne snovi z dolgimi ogljikovodikovimi verigami brez dvojnih vezi so primerni kandidati, ker je mogoče oblikovati stabilne niosome s potencialom povečane obremenitve z zdravili. Span60 z nizko vrednostjo HLB se pogosto uporablja za tvorbo niosomov [15,29,31,33,34]. Neionske površinsko aktivne snovi z visokimi vrednostmi HLB, kot so Tween20, Tween60, Tween80, Brij35 in Brij58, ne tvorijo enostavno niosomov same ali brez optimalne količine holesterola [28, 35, 36], zaradi njihove velike hidrofilnosti. glave in kratke ogljikovodikove verige. Zato lahko tvorijo niosome samo z dodatkom holesterola ali kadar so formulirani z drugimi površinsko aktivnimi snovmi [10,27,31,37–39]. Cremophor RH40 je zelo hidrofilen in ima nizko toksičnost ter se pogosto uporablja v formulacijah peroralnih zdravil, vendar nobeno poročilo ne kaže na uporabo Cremophor RH40 v formulaciji liposomov.

V tej študiji smo pregledali flavonoide z dobrimi belilnimi in antioksidativnimi učinki ter raziskali Span60-RH40, sistem neionskih površinsko aktivnih snovi z različnimi razmerji lipidov za tvorbo niosomov. Niosome, obremenjene s kvercetinom, smo okarakterizirali glede na velikost veziklov, zeta potencial, učinkovitost inkapsulacije in transmisijsko elektronsko mikroskopijo (TEM), raziskali pa smo tudi njihovo topnost in fotostabilnost. Poleg tega so podgane uporabili za raziskovanje transdermalne penetracije niosomov, obremenjenih s kvercetinom.

2. Rezultati

2.1. Zaviranje tirozinaze flavonoidov

Dobro je znano, da imajo flavonoidi več hidroksilnih skupin (slika 1), ki so pomembne za delovanje proti tirozinazi. Poroča se, da sta število in položaj hidroksilnih skupin ter prisotnost sladkornih delov povezana z inhibicijo tirozinaze. V tabeli 1 miricetin ni pokazal antitirozinazne aktivnosti, ker zlahka tvori močne medmolekularne vodikove vezi, ki lahko ovirajo kelacijo s tirozinazo. Rutin in breviskapin nista pokazala obetajočega delovanja proti tirozinazi, medtem ko so kvercetin, morin in festin pokazali precej večjo aktivnost proti tirozinazi kot arbutin, ki je običajno belilno sredstvo, ki se uporablja v kozmetiki.

2.2. Antioksidativno delovanje flavonoidov

Flavonoids can scavenge free radicals as antioxidants by donating a hydrogen atom. The antioxidant activity of flavonoids is related to the number of hydroxyl groups and their structure. This includes (i) the presence of an ortho-hydroxyl group in the B ring; (ii) the presence of a C2-C3 double bond in the C ring; (iii) or the presence of a C-3 hydroxyl group [40–42]. As shown in Table 2, the 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) radical scavenging activity of the six compounds is in the following order: quercetin = fest in>miricetin=morin > rutin > BHT ≈ breviskapin. Kvercetin in festin sta imela najmočnejšo sposobnost lovljenja radikalov.

2.3. Formulacija niosomov

2.3.1. Prevodnost sistema Span60-RH40

Transfersomi so nestabilni, ker so v glavnem sestavljeni iz fosfolipidov, ki se zlahka oksidirajo, kar povzroči uhajanje zdravila. Niosomi so bili identificirani kot alternativa za transfersome pri transdermalni dostavi. Čeprav lahko veliko neionskih površinsko aktivnih snovi tvori niosome [15, 26, 28], so neionske površinsko aktivne snovi z nenasičenimi ogljikovodikovimi verigami manj stabilne kot neionske površinsko aktivne snovi z nasičenimi ogljikovodikovimi verigami [37]. Zato smo v tej študiji izbrali Span60 in RH40, ki oba nimata dvojnih vezi, za tvorbo niosomov za izboljšanje njihove stabilnosti.

Meritve prevodnosti so bile izvedene za določitev agregacijskega obnašanja neionskih površinsko aktivnih snovi v vodni raztopini. Prevodnost Span60-RH40, razpršenega v vodi, se je postopoma povečevala od masnega razmerja 4:16 do 9:11, nato pa je dosegla plato med masnimi razmerji 9:11 do 13:7 in se zmanjšala od 13:7 do 16 :4 (slika 2a). Dve mejni točki lahko kažeta na spremembe v mikrostrukturi agregatov. Kot je prikazano na sliki 3, so pri masnem razmerju 9:11 začeli nastajati niosomi.

2.3.2. Velikost sistema Span60-RH40

Velikost delcev je pomemben indeks vrednotenja nanometrskih delcev. Merjenje velikosti sistema Span60-RH40 z različnimi masnimi razmerji površinsko aktivne snovi bi lahko nadalje odražalo spremembo mikrostrukture agregatov v sistemu. Kot je prikazano na sliki 2b, je bila na začetku velikost agregata relativno majhna in konstantna pri masnem razmerju od 4:16 do 9:11. Nato se je velikost agregata močno povečala pri masnem razmerju od 9:11 do 13:7, nato pa nenehno močno naraščala pri masnem razmerju od 13:7 do 16:4, kar je bilo celo do ~1 µm. Spontani strukturni prehod agregatov Span60/RH40 je bil dodatno potrjen z velikostjo agregatov v kombinaciji s prevodnostjo in viskoznostjo.

2.3.3. Viskoznost sistema Span60-RH40

Viskoznost sistema Span60-RH40, prikazanega na sliki 2c, je predstavljala ustrezne spremembe. Prvič, viskoznost sistema Span60-RH40 je bila nizka in stalna pri masnem razmerju od 4:16 do 9:11. Nato se je pri masnem razmerju od 9:11 do 13:7 viskoznost močno spremenila, pri čemer se je viskoznost povečevala in nato zmanjševala. Zgoraj obravnavana prevodnost in velikost sta prav tako nastali v skladu s spremembami v tem razponu masnega razmerja Span60-RH40. Nato se je pri masnem razmerju od 13:7 do 16:4 viskoznost močno povečala.

2.4. Velikost, zeta potencial, morfologija in učinkovitost ujetja kvercetin-niosomov

Kvercetin so naložili niosomi Span60-RH40 in nato homogenizirali s 1500 bari. Kot je prikazano v tabeli 3, je bil hidrodinamični premer praznih niosomov in liposomov kvercetina 146,4 ± 5,4 nm oziroma 97,6 ± 3,1 nm.

Zeta potencial so proučevali, da bi razumeli površinske naboje niosomov. Zeta potencial slepih niosomov in niosomov kvercetina je bil -41,2 ± 0,6 mV oziroma -31,1 ± 0,9 mV (tabela 3). Slika TEM na sliki 4b je pokazala, da so kvercetin-niosomi sferični ali ovalni. Učinkovitost ujetja liposomov kvercetina je bila 87,3 ± 1,6 odstotka, kar je bilo višje od tistih v razponu od 48,4 do 78,4 odstotka v prejšnjih delih [37,43,44]. Povečano učinkovitost ujetja zdravil lahko pripišemo afiniteti med zdravili in dvosloji niosomov [45].

2.5. Topnost v vodi in ravnotežna topnost kvercetina

Kot je prikazano na sliki 5, je bila topnost kvercetina v vodi izjemno nizka. Njegova topnost ni imela pomembne razlike (P > 0.05) v fosfatnem pufru z drugačnim pH v primerjavi s tistim v vodi. Rezultat ravnotežne topnosti kvercetina je pokazal, da je kvercetin visoko liposolubilna komponenta. Kot je prikazano na slikah 6 in 7, je ravnotežna topnost kvercetina ostala stabilna pri različnih razmerjih voda/n-oktanol, vendar se je zmanjšala pri pH 8,0, ker se je struktura kvercetina spremenila pod bazičnimi pogoji, kar je povzročilo povečanje topnosti v vodi.

Vendar pa je bila slaba topnost kvercetina v vodi omejena na njegovo uporabo. Na podlagi tabele 4 se je topnost kvercetina izboljšala v spodaj obravnavanih površinsko aktivnih snoveh, zlasti v 0.6 odstotkov Tween80 (P < 0.05). Vendar pa je bila njegova topnost dodatno izboljšana z nalaganjem v niosome. Kvercetin (300 µg/mL) je bil naložen v niosome in visoka inkapsulacija noizoma Span60-RH40 je bila 87,3 ± 1,6 odstotka, zato je bila topnost kvercetina v niosomih 261,9 ± 4,8 µg/mL, kar je bilo {{ 17}}krat večja kot v vodi (P <0,05).

2.6. Fotostabilnost kvercetin-niosomov

Kvercetin ima slabo fotostabilnost in se hitro razgradi pod izpostavljenostjo sončni svetlobi ali UV-sevanju [46–48], verjetno zato, ker je kvercetin podvržen fotooksidaciji ob UV-sevanju [49]. Vendar je fotostabilnost potrebna, da kvercetin pokaže svoje aktivnosti. Kot je prikazano na sliki 8, so niosomi učinkovito izboljšali fotostabilnost kvercetina in ostali pri 88,06 odstotka po 10 dneh izpostavljenosti močni svetlobi. Kvercetin je bil zaščiten pred UV žarki, ker je bil inkapsuliran v dvoslojih niosomov. Molecules 2019, 24, x ZA MEDNARODNI PREGLED 8 od 18 izpostavljenosti močni svetlobi. Kvercetin je bil zaščiten pred UV žarki, ker je bil inkapsuliran v dvoslojih niosomov.

2.7. In vitro sproščanje kvercetin-niosomov

Ustrezen medij za sproščanje je bil pregledan, da se ohranijo pogoji ponora, zato je bila ocenjena topnost kvercetina v različnih medijih. Rezultati v tabeli 5 kažejo, da je imel kvercetin večjo topnost v vodi Tween80 in da se je njegova topnost postopoma povečevala z naraščajočo koncentracijo Tween80. Topnost kvercetina se je v kislih pogojih povečala na 76,07 ± 3,11 µg/mL. Zato je bil ob upoštevanju pH človeške kože 0,8-odstotni Tween80 (pH 5,0) izbran kot medij za sproščanje za preučevanje sproščanja prostega kvercetina in kvercetin-niosomov.

Kot je prikazano na sliki 9, se je prosti kvercetin v primerjavi z niosomi kvercetina veliko hitreje sprostil v mediju za sproščanje, kar dokazuje, da so imeli niosomi učinek podaljšanega sproščanja. Trajno sproščanje skrajša čas nanosa, zmanjša toksičnost in ohranja učinkovito koncentracijo zdravila.

2.8. Ex vivo študije prepustnosti in zadrževanja kože

V tej študiji je bila kot medij za sproščanje penetracije uporabljena {{0}}.6-odstotna raztopina Tween80. V naši študiji penetracije exvivo kvercetina ni bilo mogoče določiti v mediju za sproščanje penetracije, kar je pokazalo, da kvercetin ni prodrl skozi dermis in dosegel medij za sproščanje, vendar so niosomi izjemno izboljšali zadrževanje kvercetina v koži (P < 0.{ {20}}5). Kot je prikazano v tabeli 6, je zadrževanje kvercetin-niosomov (1,92 plus 0,74 ug/cm?), kvercetin-niosom-1 odstotkov propandiola (2,34 plus 0,40 ug /cm?) in kvercetin-transfersomi (2,53 plus 0,40 ug/cm-) so bili bistveno višji v primerjavi s tistimi za kvercetin-propandiol (0,65 plus 0,10 ug/cm2) (P <0,05).

3. Razprava

Prejšnje študije so pokazale, da je imela prosta hidroksilna skupina na položaju C-3 pomembno vlogo pri inhibiciji tirozinaze [50–52]. Nasprotno pa lahko 3-O-glikozidi ovirajo njihovo vezavo na aktivna mesta tirozinaze in so lahko razlog, zakaj rutin ni pokazal antitirozinaznega delovanja. V nasprotju s tem je imel sladkorni del, ki se nahaja na položaju C-7, majhen učinek na aktivnost proti tirozinazi in ni blokiral kelacije s tirozinazo [51].

Vendar pa je prisotnost dodatne hidroksilne skupine na položaju C-30 obroča B povečala inhibicijo tirozinaze [53, 54]. Breviskapin ni pokazal antitirozinazne aktivnosti, ker ni imel C-3 hidroksilne skupine in C-30 hidroksilne skupine, ki sta morda vplivali na antitirozinazno aktivnost in ne prisotnost 7- O-glikozidi. Pri analizi razmerja med strukturo in aktivnostjo kvercetina in morina smo opazili, da je vrednost IC50 morina približno 1/3 vrednosti kvercetina in da je edina razlika med strukturo kvercetina in morina položaj hidroksilnih skupin v obroču B.

Zato je prisotnost o-dihidroksilnih skupin v obroču B povečala aktivnost proti tirozinazi. Vrednost IC50 festina je bila približno 1/20 vrednosti kvercetina in edina razlika med strukturo kvercetina in festina je ta, da je festin odsotnost C-5 hidroksilne skupine v A obroču. Hidroksilna skupina na položaju C-5 ima prav tako pomembno vlogo pri povečanju aktivnosti zaviranja tirozinaze, saj lahko kelatira Cu2 plus na aktivnem mestu tirozinaze s karbonilom na položaju C-4 [50]. ]. Kvercetin ima proste hidroksilne skupine, ne le na položajih C-3 in C-5 obroča C, ampak tudi na položaju C-30 obroča B. Tako ima kvercetin veliko močnejšo inhibicijo tirozinaze v primerjavi z drugimi flavonoidi.

Flavonoidi nimajo samo obetajočega delovanja proti tirozinazi, ampak imajo tudi močno antioksidativno delovanje. Kvercetin ima dodatno C-5 hidroksilno skupino; vendar sta imela tako kvercetin kot fisetin enako antioksidativno zmogljivost, kar kaže na to, da ima C-5 hidroksilna skupina majhen vpliv na odstranjevanje radikalov. Miricetin ima več hidroksilnih skupin v obroču B, vendar ni pokazal močnejšega antioksidativnega delovanja kot kvercetin ali fisetin. To je morda zato, ker lahko miricetin tvori močne medmolekularne vodikove vezi in zmanjša darovanje atoma vodika.

Podobno je morin pokazal nižjo antioksidativno zmogljivost kot kvercetin in festin zaradi konfiguracije hidroksilnega obroča B, kar je pokazalo, da je o-dihidroksil v obroču B pomemben za povečanje sposobnosti čiščenja radikalov. Vendar pa sta imela rutin in breviskapin znatno manjšo antioksidativno zmogljivost, ker ima rutin glikozide na položaju C-3, ki povzročajo sterične ovire. Breviskapin ima eno samo hidroksilno skupino na obroču B in manj prostih hidroksilnih skupin. Posledično rezultati v tem dokumentu kažejo, da je bila hidroksilna konfiguracija obroča B pomembna za antioksidativno zmogljivost flavonoidov, medtem ko je obroč A le malo vplival na sposobnost čiščenja radikalov. Poleg tega lahko blokiranje ali odstranitev hidroksilne skupine na položaju C-3 zmanjša sposobnost flavonoidov za lovljenje radikalov.

Span60 in RH40 nista sposobna ionizacije. Zato se zdi, da naboji izvirajo iz interakcije med hidrofilnimi glavnima skupinama Span60 in RH40, ki tvorita vodikove vezi [55], ko se med lipofilnim Span60 in hidrofilnim RH40 oblikujejo nabiti agregati.

Zato je lahko prevodnost posledica kombinacije Span60 in RH40. Prevodnost se je na začetku povečala, verjetno zato, ker dodatek Span60, ki se povezuje z RH40, tvori nabite mešane micele. Povečanje Span60 je povečalo tudi število nabitih agregatov in prevodnost se je postopoma povečevala. Do preloma je prišlo pri masnem razmerju 9:11. Nenadna sprememba nakazuje, da se lahko spremeni mikrostruktura agregatov in lahko nastanejo niosomi. Prevodnost se je nato nekoliko zmanjšala in ostala relativno konstantna, kar lahko kaže na nastanek niosomov, saj so bili naboji zaprti. Druga prelomna točka se je pojavila pri masnem razmerju 13:7 in prevodnost se je močno zmanjšala, vendar se je velikost agregatov povečala s povečanjem Span60, verjetno zaradi nastajanja gostih skupin večjih večlamelarnih niosomov in pojava bele oborine [56]. ,57], kar povzroči zmanjšanje prostih nabitih agregatov.

Spontani strukturni prehod agregatov Span60-RH40 je bil dodatno potrjen z velikostjo agregatov v kombinaciji s prevodnostjo in viskoznostjo. Ko je prevladoval masni delež RH40, je bila velikost agregata relativno konstantna in majhna. Sistem je imel vodo podobno viskoznost in lahko nastanejo mešani miceli. Z naraščajočim masnim deležem Span60 se je hidrofobnost sistema povečala, viskoznost in velikost agregata pa sta se povečali. Povečanje Span60 lahko povzroči nastanek niosomov. Vendar pa se je z nadaljnjim povečanjem Span60 močno povečala tudi viskoznost in velikost zaradi obstoja obilice večjih multilamelarnih niosomov, ki so povzročili nastanek oborine. Tvorbo niosomov smo preverili tudi s TEM (slika 3).

Ko je bila koncentracija Span60 nizka, je imel sistem Span60-RH40 viskoznost, podobno vodi, velikost agregata pa je bila relativno majhna, kar kaže na nastanek mešanih micel. Od masnega razmerja 9:11 do 13:7 sta viskoznost in motnost sistema naraščali hkrati. Očitna sprememba viskoznosti je lahko povezana s prehodom micela v tog in viskozen noisom, saj so površinsko aktivne snovi tesno zapakirane in nastanejo dvosloji; ta ugotovitev je bila skladna z literaturo [57,58]. Med masnimi razmerji 13:7 in 16:4 se je viskoznost znatno povečala, verjetno zaradi obstoja obilice večjih večlamelarnih niosomov, ki povzročajo nastajanje oborine.

Zanimivo je, da so imeli kvercetin-niosomi manjše velikosti kot prazni niosomi, kar je bilo v predhodno objavljenih študijah [43]. Ponazorjeno je bilo, da če bi bile molekule, ki kažejo dobro afiniteto s sestavnimi površinsko aktivnimi snovmi niosomov, vključene v dvosloje, bi to povzročilo zmanjšanje velikosti veziklov. Ta ugotovitev je lahko posledica učinka močne afinitete za zdravila in niosome na držanje različnih lamel skupaj, zaradi česar je membrana bolj toga [14]. Absolutna vrednost zeta potenciala za kvercetin-liposome je bila nižja kot pri praznih liposomih (tabela 3). To je lahko posledica interakcije kvercetina z glavno skupino površinsko aktivnih snovi, ki nevtralizirajo negativne naboje na površini niosomov. O tej ugotovitvi so poročali tudi prej; da bi zdravila lahko zmanjšala negativne površinske naboje [59].

Ugotovili smo, da je kvercetin netopen v vodi in fosfatnem pufru. V prejšnjih študijah so za vzdrževanje stanja ponora slabo topnih zdravil v mediju za sproščanje penetracije pogosto uporabljena sotopila, vključno z alkoholi in površinsko aktivnimi snovmi [14], zato je bila kot raztopina 0.6 % uporabljena raztopina Tween80. sredstvo za sproščanje penetracije, da ohrani stanje ponora.

Glede na učinkovitost pa je za nego kože in zdravljenje kožnih bolezni učinkoviteje in varneje sestavine ali zdravila zadržati globoko v koži, kot pa vstopiti v krvni obtok. V naši študiji, čeprav kvercetin ni prodrl skozi dermis v medij, so poskusi zadrževanja kože pokazali, da so niosomi v primerjavi s prostim kvercetinom izboljšali prodiranje kvercetina v povrhnjico.

Zato so niosomi lahko obetaven sistem dostave za kozmetične namene in zdravljenje kožnih bolezni. Kvercetin je visoko topen v maščobah, njegova nizka topnost v vodi pa omejuje njegov razvoj in uporabo. Niosomi, obremenjeni s kvercetinom, niso le izboljšali topnosti v vodi, temveč tudi transdermalno absorpcijo kvercetina. Kvercetin-niosomi so imeli 3--kratno povečanje zadrževanja kože v primerjavi z raztopino kvercetin-propandiola. Po dodajanju 1 odstotka propandiola, spodbujevalca penetracije, v izvirno formulacijo niosomov Span60-RH40 se je izboljšala transdermalna absorpcija, ki je primerljiva z absorpcijo kvercetin-transfersomov.

4. Materiali in metode

4.1. Materiali

Kvercetin, morin, festin, miricetin, rutin in breviskapin so bili kupljeni pri DATIAN Biology Co (Shanxi, Kitajska), -arbutin pri Beijing Brilliance Biochemical Co, Ltd (Peking, Kitajska) in 1,1-difenil{{ 3}}pikrilhidrazil (DPPH) podjetja Guangzhou Qiyun Bio-technology Co (Guangzhou, Kitajska). Natrijev dihidrogenfosfat, dinatrijev hidrogenfosfat, dimetil sulfoksid (DMSO) in absolutni etilni alkohol so bili kupljeni pri DAMAO CHEMICAL REAGENT FACTORY (Tianjin, Kitajska). Span60 je bil kupljen pri Tianjin Kemiou Chemical Reagent Co, Ltd (Tianjin, Kitajska), Cremophor RH40 pa pri Guangzhou Jiefu Trading Co, Ltd (Guangzhou, Kitajska). Uporabljeni so bili samci podgan Sprague-Dawley (200 ± 20 g), ki jih je dobavil Guangdong Animal Experiment Center (Guangzhou, Kitajska). Podgane so hranili pri standardnih pogojih temperature, vlažnosti in svetlobe, s standardno prehrano za glodavce in vodo. Raziskavo je odobril Odbor za etiko eksperimentalnih živali Guangdong Pharmaceutical University (št. SPF2017120, Guangzhou, Kitajska).

4.2. In vitro inhibicijska aktivnost tirozinaze flavonoidov

Test inhibicije tirozinaze je bil izveden na podlagi prejšnje študije z majhnimi spremembami [2]. Aktivnost inhibicije tirozinaze smo določili s spektrofotometrom s spremljanjem tvorbe dopakroma pri 493 nm. Reakcijski sistem, kot je prikazano v tabeli 7, je vseboval 0,5 ml različnih koncentracij flavonoidov, vključno z arbutinom, kvercetinom, morinom, festinom, rutinom in breviskapinom, ter 0,5 ml tirozinaze (120 enot/mL v fosfatnem pufru, pH 6,8), ki smo jih združili z 1,5 ml fosfatnega pufra (pH 6,8). Po 10-minutni inkubaciji pri 30 ◦C smo sistemom dodali 0,5 mL l-tirozina. Reakcijske sisteme smo inkubirali pri 30 °C 20 minut in določili absorbanco pri 493 nm. Arbutin je bil uporabljen kot pozitivna kontrola. Stopnja inhibicije vzorca je bila izražena kot 50-odstotna koncentracija inhibicije (IC50).

4.3. In vitro antioksidativna aktivnost flavonoidov

Antioksidativno aktivnost flavonoidov so merili s stopnjo beljenja DPPH, ki jo je navedel Blois [60]. V svoji radikalni obliki DPPH absorbira pri valovni dolžini 515 nm, vendar se njegova absorpcija zmanjša pri redukciji z antioksidantom ali radikalsko spojino. Aktivnost flavonoidov pri lovljenju radikalov DPPH je bila ovrednotena po metodi, ki jo je opisal Rui Yang, z nekaj modifikacijami [61]. Na kratko, 5 mL DPPH (30 µg/mL) smo zmešali z 0,1 mL absolutnega etilnega alkohola in 0,1 mL vzorcev z različnimi koncentracijami. Nato smo določili absorbanco zmesi pri 515 nm. Aktivnost lovljenja radikalov DPPH je bila izračunana na naslednji način:

4.4. Formulacija niosomov

Na podlagi prejšnjih raziskav in objavljenih člankov, ki so pokazali, da je Span60 običajna površinsko aktivna snov, ki se uporablja za tvorbo niosomov [15,27,31], smo zasnovali formulacijski sistem neionskih površinsko aktivnih snovi z uporabo Span60 in RH40 v različnih masnih razmerjih. Raziskovali so prevodnost, viskoznost in velikost kot indekse, da bi določili pravilno razmerje neionskih površinsko aktivnih snovi, ki tvorijo liposome.

Raziskana masna razmerja Span60 in RH40 so bila 4:16, 6:14, 8:12, 9:11, 10:10, 12:8, 13:7, 14:6 , 15:5 in 16:4 (skupna teža: 2 g). Span60 smo stopili pri 80 ◦C in nato mešali z RH40 z mešalom 2 minuti. Nato smo zmesi hidrirali s 100 ml vode pri 80 °C 10 minut. Prevodnost (DDS-11A konduktometer, Shanghai Ridao Scientific Instruments Co., Ltd., Šanghaj, Kitajska), viskoznost (Ubbelode viskozimeter, 0,4–0,5 mm, Shanghai Liangjing Glass Instrument Factory, Šanghaj, Kitajska) in velikost (Nano-ZS90, Malvern, Malvern, Združeno kraljestvo) sistemov neionskih površinsko aktivnih snovi smo izmerili pri sobni temperaturi.

4.5. Priprava in vrednotenje niosomov, obremenjenih s kvercetinom

4.5.1. Priprava s kvercetinom obremenjenih niosomov

Na podlagi TEM slike sistema Span{{0}}RH40 (slika 3), Span60 in RH40 pri masnem razmerju 9:11 se zdi, da nastajajo sferični ali ovalni niosomi. Zato smo pripravili niosome, polnjene s kvercetinom, z masnim razmerjem Span60/RH40 9:11 z uporabo magnetnega mešala. Span60 (0,9 g), RH40 (1,1 g) in kvercetin (30 mg) smo stopili skupaj. Nato smo mešanici dodali 100 mL prečiščene vode pri 80 °C in jo hidrirali 10 minut. S kvercetinom napolnjeni niosomi so bili oblikovani in nato ohlajeni na sobno temperaturo. Čiste niosome smo pridobili z obdelavo z visokotlačno homogenizacijo pri 1500 barih.

4.5.2. Velikost, Zeta potencial in morfologija niosomov, obremenjenih s kvercetinom

Velikost in zeta potencial praznih niosomov in niosomov, napolnjenih s kvercetinom, sta bila izmerjena z uporabo Malvern Zetasizer (ZS90 plus MPT-2, Malvern, Malvern, UK). Morfologijo niosomov, obremenjenih s kvercetinom, smo okarakterizirali s transmisijsko elektronsko mikroskopijo. Vzorce kvercetin-niosomov smo odložili na bakreno mrežo in po 1 minuti smo presežek vzorca odstranili s filtrirnim papirjem. Za opazovanje vzorcev po negativnem barvanju s fosfovolframovo kislino smo uporabili TEM.

4.5.3. Učinkovitost zajetja zdravil

Učinkovitost ujetja zdravila v niosome, obremenjene s kvercetinom, je bila določena s tehniko centrifugiranja z minikolono. Minikolono smo pripravili z uporabo hidrirane disperzije Sephadex G50 v 5 ml brizgo, ki smo jo centrifugirali 30 s pri 900 obratih na minuto. Alikvot niosomov, napolnjenih s kvercetinom (400 µL), smo vzeli v minikolono in elute zbrali s centrifugiranjem pri 1500 obratih na minuto 3 minute. Elute smo razredčili na 10 mL z metanolom in vrtinčili ter 10 µL filtriranih vzorcev vbrizgali v tekočinsko kromatografijo visoke ločljivosti (HPLC). Nato smo prosti kvercetin eluirali s centrifugiranjem s 25 ml 80-odstotnega metanola in s HPLC določili vsebnost kvercetina.

4.6. Topnost v vodi in ravnotežna topnost kvercetina

Topnost kvercetina v vodi smo merili s 15 mL prečiščene vode, fosfatnih pufrov z različnimi pH vrednostmi (pH 5.0, 6.0, 6,8, 7,4, 8.0) , in presežek kvercetina, ter dano v viale. Viale smo stresali 24 ur v vodni kopeli pri 37 °C in supernatant določili s HPLC po centrifugiranju.

Ravnotežno topnost kvercetina smo izvedli z uporabo sistema n-oktanol-voda z razmerji n-oktanol/voda 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1: 7 in 1:8. Nato smo 70 µg/mL raztopine kvercetina pripravili z vodo nasičeno raztopino n-oktanola in 1 mL 70 µg/mL raztopine kvercetina smo vzeli v osem vial in nato 1 mL, 2 mL, 3 mL, 4 mL, 5 mL 6 mL, 7 mL in 8 mL prečiščene vode smo dodali v ustrezne viale.

Proučevali smo tudi ravnotežno topnost kvercetina v n-oktanol-puferskih sistemih pri različnih pH vrednostih. Razmerje n-oktanol-pufer je bilo izbrano na 1:2 na podlagi rezultata ravnotežne topnosti kvercetina v sistemu n-oktanol-voda. V viale smo dodali 2 ml volumna 70 µg/mL raztopine kvercetina in 4 ml z n-oktanolom nasičenih raztopin fosfatnega pufra pri različnih pH vrednostih in viale stresali 24 ur pri 37 ◦C. vodna kopel. Nato smo vzeli 0,2 mL raztopine kvercetina v plasti n-oktanola in jo razredčili na 5 mL (približno 2,8 µg/mL) z uporabo mobilne faze (metanol-1 % fosforne kisline=60:40). Vzorci so bili določeni s HPLC. Standardno raztopino kvercetina n-oktanola (70 µg/mL) smo razredčili in določili, kot je opisano zgoraj.

4.7. Fotostabilnost kvercetin-niosomov

Raztopino kvercetin metanola (300 µg/mL) smo dodali v prozorne viale in jih postavili na sončno svetlobo. Nato smo s HPLC določili vsebnost kvercetina pri 0, 12, 24, 36, 48, 60 in 72 h. Niosome kvercetina smo alikvotirali v prozorne viale in dali v komoro za preskus svetlobne stabilnosti (PTOP-500B, Zhejiang TOP Instrument Co., Ltd., Zhejiang, Kitajska) z osvetljenostjo 4500 ± 500 LX za 10 dni. 0,2 g vzorca liposomov kvercetina smo vzeli 0, 5 in 10. dan in raztopili v 10 ml etanola. Vzorce smo določili s HPLC po centrifugiranju in filtraciji z 0,22 µm Millipore filtrirno membrano. Fotostabilnost je bila ovrednotena z odstotkom preostalega kvercetina pri različnih časih obsevanja v primerjavi z neosvetljenimi vzorci.

4.8. Študija sproščanja in vitro

4.8.1. Topnost kvercetina v različnih medijih za sproščanje

Topnost kvercetina so raziskali v različnih medijih za sproščanje, vključno z {{0}}.1 odstotkov, 0.2 odstotkov, 0.3 odstotkov, 0.4 odstotkov, {{10}},6 odstotkov in 0,8 odstotkov vodne raztopine Tween80, kot tudi 0,2 odstotka, 0,4 odstotka in 0,6-odstotna vodna raztopina SDS. V vsako od vial smo dali vodno raztopino 15 ml Tween80 in SDS v različnih koncentracijah in presežek kvercetina. Viale smo 24 ur stresali v vodni kopeli pri 32 ◦C. Po 24 urah smo 5 ml suspenzijo centrifugirali pri 3000 RMP 15 minut in 0,2 ml supernatanta razredčili na 2 ml in določili s HPLC.

4.8.2. Sproščanje zdravil z dializo

Študija topnosti kvercetina, predstavljena v tabeli 5, je pokazala, da 0.8 odstotkov vodne raztopine Tween80 (pH 5.0) izpolnjuje pogoje ponora in ustreza vrednosti pH človeške kože. Zato smo raziskali sproščanje prostega kvercetina in liposomov kvercetina v 0.8-odstotni vodni raztopini Tween80 (pH 5,0).

Vrečko za dializat (8000–14,000 mejna vrednost molekulske mase) smo obdelali z 2-odstotno raztopino NaHCO3 in 1 mmol/mL EDTA. 10 mL (300 µg/mL) raztopine kvercetin-niosomov in kvercetin-propandiola smo dodali v vrečke za dializat in jih dali v posode za raztapljanje, ki so vsebovale 1000 mL 0,8-odstotne vodne raztopine Tween80 (pH 5,0) pri 32 ◦C. Posode za raztapljanje smo postavili na magnetno mešalo pri hitrosti 100 vrt/min. Medij za sproščanje (2 ml) smo odvzeli po 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12 in 24 urah in ga nadomestili s slepim medijem za sproščanje (2 ml). 2 ml odvzetega medija za sproščanje smo 15 minut centrifugirali pri 3000 vrt/min in filtrirali. Sproščeni kvercetin je bil kvantificiran s HPLC.

4.9. Ex vivo študije prepustnosti zdravil in zadrževanja kože

Podgane so žrtvovali z izpahom materničnega vratu, dlake na trebuhu so obrili, nato pa trebušno kožo ločili in dali v fiziološko raztopino. Nato smo s kirurškimi škarjami in hemostatskimi kleščami odstranili podkožno tkivo (mišice, maščobo in vaskulum) in ga nato shranili pri 4 ◦C s fiziološko raztopino za nadaljnje preiskave.

Študije prepustnosti in zadrževanja zdravila v koži kvercetin-niosomov, kvercetin-niosomov-1 odstotkov propandiola, kvercetin-transfersomov (sestavljenih iz fosfolipida in Tween80 v masnem razmerju 9:11) in prostega kvercetina raztopine -propandiola, da bi raziskali njihovo transdermalno dostavo z uporabo transdermalne difuzijske naprave TK-20B z učinkovito difuzijsko površino 2,99 cm2. Nato je bila kot medij za sproščanje penetracije izbrana 0.6-odstotna raztopina Tween80. Med difuzijsko in receptorsko celico smo položili kožna tkiva in na kožo nanesli 0,4 mL pripravkov kvercetina (ekvivalentno 120 µg kvercetina). Penetracijski medij (0,5 ml) smo odvzeli iz receptorske celice po 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12 in 24 urah z zamenjavo svežega penetracijskega medija (0,5 ml). Penetracijske medije, odvzete ob različnih časovnih točkah, smo razredčili na 7 ml z metanolom in določili s HPLC po centrifugiranju in filtraciji.

Po poskusu permeacije so izvedli poskus zadrževanja zdravila na koži. Po 24 urah smo izolirali kožna tkiva, nato popolnoma strgali v 7 ml metanola po izpiranju kvercetina na površini z destilirano vodo in ultrazvočno ekstrahirali 4 0 min. Nato smo vzorce vrtinčili in centrifugirali, supernatant pa analizirali s HPLC po filtraciji skozi 0,22 µm Millipore filtrirno membrano.

4.10. HPLC metoda

Analitska kolona je bila Dimark C18 (150 mm × 4,6, 5 µm). Mobilna faza je bila sestavljena iz metanola in 1 odstotka H3PO4 (60:40, v/v). Hitrost pretoka je bila nastavljena na 1 ml/min pri 30 °C in volumen injekcije 10 µL. Vrh kvercetina je bil zaznan pri 363 nm.

4.11. Statistična analiza

Podatki so izraženi kot povprečje poskusov ± standardni odklon (SD) in so bili analizirani z uporabo enosmerne analize variance (ANOVA), ki ji je sledil Tukeyjev post-test večkratne primerjave. Statistične razlike, ki dajejo P < 0,05, veljajo za statistično pomembne.

5. Sklepi

Pregledali smo kvercetin, naravni flavonoid z močnimi belilnimi in antioksidativnimi sposobnostmi, in oblikovali liposome z uporabo neionskega površinsko aktivnega sistema za izboljšanje topnosti, fotostabilnosti in sposobnosti prodiranja kvercetina v kožo.

Avtorski prispevki:

Konceptualizacija, WC in XL; metodologija, WC; programska oprema, YH; validacija, BL, YH in ZC; formalna analiza, BL; preiskava, JY; viri, HX; urejanje podatkov, BL; pisanje—izvirna priprava osnutka, BL; pisanje—pregledovanje in urejanje, XL; vizualizacija, WC; nadzor, XL; pridobitev sredstev, XL

Financiranje:

Ta raziskava ni prejela zunanjega financiranja.

Nasprotja interesov:

Avtorji izjavljajo, da ni navzkrižja interesov.

Reference

1. Chhikara, N.; Kaur, R.; Jaglan, S.; Sharma, R.; Gat, Y.; Panghal, A. Bioaktivne spojine ter farmakološke in živilske aplikacije Syzygium cumini - pregled. Prehranska funkcija. 2018, 9, 6096. [CrossRef] [PubMed]

2. Carol López de Dicastillo Carol López Bustos, F.; Valenzuela, X.; López-Carballo, G.; Vilariño, JM; Galotto, MJ Čilska jagoda, Ugni molinae, Turcz. Izvleček sadja in listov z zanimivimi antioksidativnimi, protimikrobnimi in inhibitornimi lastnostmi tirozinaze. Food Res. Int. 2017, 102, 119–128.

3. Chiari, ME; Vera, DM; Palacios, SM; Carpinella, MC Inhibicijska aktivnost tirozinaze 6-izoprenoidno substituiranega flavanona, izoliranega iz Dalea elegans. Bioorg. med. Chem. 2011, 19, 3474–3482. [CrossRef] [PubMed]

4. Sirat, HM; Rezali, MF; Ujang, Z. Izolacija in identifikacija odstranjevanja radikalov in inhibicije tirozinaze polifenolov iz Tibouchina semidecandra. J. Agric. Food Chem. 2010, 58, 10404–10409. [CrossRef] [PubMed]

5. Xiong, Z.; Liu, W.; Zhou, L.; Chen, J. Polifenol oksidaza gob (Agaricus bisporus), ki jo inhibira apigenin: multispektroskopske analize in računalniška simulacija priklopa. Food Chem. 2016, 203, 430–439. [CrossRef] [PubMed]

6. Yan-Zhen, Z.; Da-Fu, C.; Geng, D.; Guo, R. Učinek substituenta na aktivnost odstranjevanja radikalov apigenina. Molecules 2018, 23, 1989.

7. Handjani-Vila, RM; Ribier, A.; Rondot, B.; Vanlerberghie, B. Disperzije lamelarnih faz neionskih lipidov v kozmetičnih izdelkih. Int. J. Cosmet. Sci. 1979, 1, 303–314. [CrossRef] [PubMed]

8. Yoshida, H.; Lehr, CM; Kok, W.; Junginger, HM; Verhoef, JC; Bouwstra, JA Niosomi za oralno dostavo peptidnih zdravil. J. Nadzor. Izdaja 1992, 21, 145–153. [CrossRef]

9. Uchegbu, IF; Dvojna, JA; Kelland, LR; Turton, JA; Florence, AT Dejavnost niosomov doksorubicina proti celični liniji raka jajčnikov in trije modeli mišjih tumorjev in vivo. J. Drug Target. 1996, 3, 399–409. [CrossRef]

10. Alsarra, IA; Bosela, AA; Ahmed, SM; Mahrous, GM Proniosomi kot nosilec zdravil za transdermalno dostavo ketorolaka. EUR. J. Pharm. Biopharm. 2005, 59, 485–490. [CrossRef]

11. Hong, M.; Zhu, S.; Jiang, Y.; Tang, G.; Pei, Y. Učinkovito ciljanje tumorja PEGiliranih liposomov, napolnjenih s hidroksi kamptotecinom, modificiranih s transferinom. J. Nadzor. Izdaja 2009, 133, 96–102. [CrossRef] [PubMed]

12. Tavano, L.; Muzzalupo, R.; Picci, N.; de Cindio, B. Koinkapsulacija antioksidantov v liposomske nosilce: Študije sproščanja v prebavilih za nutracevtske aplikacije. Koloidno surfanje. B Biointerface 2014, 114, 82–88. [CrossRef] [PubMed]

13. Sohrabi, S.; Haeri, A.; Mahboubi, A.; Mortazavi, A.; Dadashzadeh, S. Niosomi moksifloksacina, vgrajeni v hitozanski gel: učinkovit protimikrobni hibridni sistem za okužbo z opeklinami. Int. J. Biol. Macromol. 2016, 85, 625–633. [CrossRef] [PubMed]

14. Kumar, N.; Goindi, S. Statistično oblikovani neionski površinsko aktivni vezikli za dermalno dostavo itrakonazola: Karakterizacija in in vivo ocena z uporabo standardiziranega modela okužbe s Tinea pedis. Int. J. Pharm. 2014, 472, 224–240. [CrossRef] [PubMed]

15. Cerqueira-Coutinho, C.; Dos Santos, EP; Mansur, CR Niosomi kot nano-dostavni sistemi na farmacevtskem področju. Crit. Rev. Ther. Zdravilo Carr. Syst. 2016, 33, 195. [CrossRef]

16. Ja, MI; Huang, HC; Liaw, JH; Huang, MC; Huang, KF; Hsu, FL Dermalna dostava z niosomi ekstrakta črnega čaja kot sredstva za zaščito pred soncem. Int. J. Dermatol. 2013, 52, 239–245. [CrossRef] [PubMed]

17. Manconi, M.; Sinico, C.; Valenti, D.; Loy, G.; Fadda, AM Niosomi kot nosilci za tretinoin. I. Priprava in lastnosti. Int. J. Pharm. 2002, 234, 237–248. [CrossRef] 18. Manconi, M.; Valenti, D.; Sinico, C.; Lai, F.; Loy, G.; Fadda, AM Niosomi kot nosilci za tretinoin: II. Vpliv vezikularne vključitve na fotostabilnost tretinoina. Int. J. Pharm. 2003, 260, 261–272. [CrossRef]

19. Kunitake, T.; Takahata, Y. Sintetična dvoslojna membrana. J. Am. Chem. Soc. 1977, 99, 3860–3861. [CrossRef]

20. Brady, JE; Evans, DF; Kačar, B.; Ninham, BM Spontani vezikli. J. Am. Chem. Soc. 1984, 106, 4279–4280. [CrossRef]

21. Kaler, E.; Murthy, A.; Rodriguez, B.; Zasadzinski, J. Spontana tvorba veziklov v vodnih mešanicah površinsko aktivnih snovi z enim repom. Znanost 1989, 245, 1371–1374. [CrossRef] [PubMed]

22. Kaler, EW; Herrington, KL; Murthy, AK; Zasadzinski, JAN Fazno obnašanje in strukture zmesi anionskih in kationskih površinsko aktivnih snovi. J. Phys. Chem. 1992, 96, 6698–6707. [CrossRef]

23. Uchegbu, IF; Vyas, SP Vezikli (niosomi) na osnovi neionskih površinsko aktivnih snovi pri dostavi zdravil. Int. J. Pharm. 1998, 172, 33–70. [CrossRef]

24. Mahale, NB; Thakkar, PD; Mali, RG; Walunj, DR; Chaudhari, SR Niosomi: Novi neionski stabilni vezikularni sistemi s podaljšanim sproščanjem - pregled. Adv. Colloid Interface Sci. 2012, 183–184, 46–54. [CrossRef] [PubMed]

25. Udupa, N.; Chandraprakash, KS; Umadevi, P.; Pillai, GK Formulacija in vrednotenje niosomov metotreksata. Drug Dev. Komun. 1993, 19, 12. [CrossRef]

26. Uchegbu, IF; Florence, AT Neionski površinsko aktivni vezikli (niosomi): fizikalna in farmacevtska kemija. Adv. Colloid Interface Sci. 1995, 58, 1–55. [CrossRef]

27. Yoshioka, T.; Sternberg, B.; Florence, AT Priprava in lastnosti veziklov (niosomov) sorbitan monoestrov (Span 20, 40, 60 in 80) in sorbitan triestra (Span 85). Int. J. Pharm. 1994, 105, 1–6. [CrossRef]

28. Manosroi, A.; Wongtrakul, P.; Manosroi, J.; Sakai, H.; Sugawara, F.; Yuasa, M.; Abe, M. Karakterizacija veziklov, pripravljenih z različnimi neionskimi površinsko aktivnimi snovmi, pomešanimi s holesterolom. Koloidno surfanje. B Biointerface 2003, 30, 129–138. [CrossRef]

29. Alsarra, IA Ocena proteasomov kot alternativne strategije za optimizacijo transdermalne dostave piroksikama. J. Microencapsul. 2009, 26, 272–278. [CrossRef]

30. Šarma, S.; Das, A.; Dasgupta, A.; Lee, WM; Kim, JO; Oh, DH; Kim, DD; Kim, JS; Yoo, BY; Choi, HG; et al. Formulacija in in vitro ocena niosomov minoksidila za izboljšano dostavo kože. Int. J. Pharm. 2009, 377, 1–8.

31. Junyaprasert, VB; Singh, P.; Suksiriworapong, J.; Chantasart, D. Fizikalno-kemijske lastnosti in prepustnost kože niosomov elagične kisline Span 60/Tween 60. Int. J. Pharm. 2012, 423, 303. [CrossRef] [PubMed]

32. Manosroi, A.; Khanrin, P.; Lohcharoenkal, W.; Götz, F.; Manosroi, W.; Manosroi, J. Povečanje transdermalne absorpcije skozi kožo podgane galidermina, naloženega v liposome. Int. J. Pharm. 2010, 392, 304–310. [CrossRef] [PubMed]

33. Auda, SH; Fathalla, D.; Fetih, G.; El-Badry, M.; Shakeel, F. Niosomi kot transdermalni sistem za dostavo zdravil za celekoksib: študije in vitro in in vivo. Polym. Bik. 2016, 73, 1229–1245. [CrossRef]

34. Manosroi, A.; Jantrawut, P.; Manosroi, J. Protivnetna aktivnost gela, ki vsebuje nove elastične niosome, ujete z diklofenak dietilamonijem. Int. J. Pharm. 2008, 360, 156–163. [CrossRef] [PubMed]

35. Shahiwala, A.; Misra, A. Študije o lokalni uporabi običajno ujetega nimesulida. J. Pharm. Pharm. Sci. 2002, 5, 220–225. [PubMed]

36. Pardakhty, A.; Varshosaz, J.; Rouholamini, A. In vitro študija niosomov polioksietilen alkil etra za dostavo insulina. Int. J. Pharm. 2007, 328, 130–141. [CrossRef] 37. Abdelbary, G.; El-Gendy, N. Niosome-inkapsuliran gentamicin za oftalmološko nadzorovano dostavo. Aaps Pharmscitech 2008, 9, 740–747. [CrossRef] [PubMed]

38. Wadda Abbad, S.; Yu, F.; Munyendo, WLL; Wang, J.; Lv, H.; Zhou, J. Formulacija, karakterizacija in farmakokinetika morin hidratnih niosomov, pripravljenih iz različnih neionskih površinsko aktivnih snovi. Int. J. Pharm. 2013, 456, 446–458. [CrossRef]

39. Mishra, J.; Swain, J.; Mishra, AK Preiskava temperaturno odvisnih sprememb medfazne hidracije in viskoznosti Tween20: holesterol (1:1) niosomske membrane z uporabo fisetina kot fluorescenčne molekularne sonde. Phys. Chem. Chem. Phys. 2018, 20, 13279–13289. [CrossRef]

40. Procházková, D.; Boušová, I.; Wilhelmová, N. Antioksidativne in prooksidativne lastnosti flavonoidov. Fitoterapia 2011, 82, 513–523. [CrossRef]

41. Cherrak, SA; Mokhtari-Soulimane, N.; Berroukeche, F.; Bensenane, B.; Cherbonnel, A.; Merzouk, H.; Elhabiri, M. In vitro antioksidant proti kovinskim ionskim kelacijskim lastnostim flavonoidov: raziskava strukture in aktivnosti. PLoS ONE 2016, 11, e0165575. [CrossRef] [PubMed]

42. Amič, D.; Davidovič-Amić, D.; Beslo, D.; Rastija, V.; Lučič, B.; Trinajstic, N. SAR in QSAR antioksidativne aktivnosti flavonoidov. Curr. med. Chem. 2007, 14, 827–845. [CrossRef] [PubMed]

43. Machado, ND; Fernando, SO; De Rossi, RH; Fernandez, MA Ciklodekstrin je modificiral niosome za inkapsulacijo hidrofilnih spojin. RSC Adv. 2018, 8, 29909–29916. [CrossRef]

44. Imran, M.; Šah, MR; Ullah, F.; Ullah, S.; Elhissi, AMA; Nawaz, W.; Ahmad, F.; Sadiq, A.; Ali, I. Liposomski nanocarrier na osnovi glikozidov za izboljšano delovanje cefiksima in vivo. Int. J. Pharm. 2016, 505, 122–132. [CrossRef] [PubMed]

45. Hao, Y.; Zhao, F.; Li, N.; Yang, Y.; Li, K. Študije o visoki inkapsulaciji kolhicina s sistemom noisome. Int. J. Pharm. 2002, 244, 73–80. [CrossRef]

46. ​​Anandam, S.; Selvamuthukumar, S. Izdelava ciklodekstrinskih nanospužev za dostavo kvercetina: fizikalno-kemijska karakterizacija, fotostabilnost in antioksidativni učinki. J. Mater. Sci. 2014, 49, 8140–8153. [CrossRef]

47. Lv, X.; Liu, T.; Ma, H.; Tian, ​​Y.; Li, L.; Li, Z.; Gao, M.; Zhang, J.; Tang, Z. Priprava mikroemulzij na osnovi eteričnega olja za izboljšanje topnosti, pH stabilnosti, fotostabilnosti in prepustnosti kvercetina v kožo. AAPS PharmSciTech 2017, 18, 3097–3104. [CrossRef]

48. Azzi, J.; Jraij, A.; Auezova, L.; Fourmentin, S.; Greige-Gerges, H. Nove ugotovitve za inkapsulacijo kvercetina in konzerviranje s ciklodekstrini, liposomi in zdravilom v ciklodekstrinu v liposomih. Food HydroColloid 2018, 81, 328–340. [CrossRef]

49. Smith, GJ; Thomsen, SJ; Markham, KR; Andary, C.; Cardon, D. Fotostabilnosti naravno prisotnih 5-hidroksi flavonov, flavonolov, njihovih glikozidov in njihovih aluminijevih kompleksov. J. Photochem. Photobiol. A Chem. 2000, 136, 87–91. [CrossRef]

50. Kubo, I.; Kinsthori, I. Flavonoli iz cvetov žafrana: inhibitorna aktivnost tirozinaze in mehanizem zaviranja. J. Agric. Food Chem. 1999, 47, 4121–4125. [CrossRef]

51. Kim, YJ; Uyama, H. Zaviralci tirozinaze iz naravnih in sintetičnih virov: Struktura, inhibicijski mehanizem in perspektiva za prihodnost. Celica. Mol. Life Sci. 2005, 62, 1707–1723. [CrossRef] [PubMed]

52. Kim, D.; Park, J.; Kim, J.; Han, C.; Yoon, J.; Kim, N.; Seo, J.; Lee, C. Flavonoidi kot zaviralci gobove tirozinaze: študija dušenja fluorescence. J. Agric. Food Chem. 2006, 54, 935–941. [CrossRef] [PubMed]

53. Fan, M.; Zhang, G.; Hu, X.; Xu, X.; Gong, D. Kvercetin kot zaviralec tirozinaze: zaviralna aktivnost, konformacijska sprememba in mehanizem. Food Res. Int. 2017, 100, 226–233. [CrossRef] [PubMed]

54. Didem ¸Söhreto ˘glu Suat, S.; Burak, B.; Özel, A. Inhibicija tirozinaze z nekaterimi flavonoidi: zaviralna aktivnost, mehanizem s študijami in vitro in silico. Bioorg. Chem. 2018, 81, 168–174. [CrossRef] [PubMed]

55. Gopinath, D.; Ravi, D.; Karwa, R.; Rao, B.; Shashank, A.; Rambhau, D. Farmakokinetika zidovudina po intravenskem bolusnem dajanju novega niosomskega pripravka brez holesterola. Arzneimittelforschung 2011, 51, 924–930. [CrossRef] [PubMed]

56. Ghosh, S.; Ghatak, C.; Banerjee, C.; Mandal, S.; Kuchlyan, J.; Sarkar, N. Spontani prehod micele-vezikle-micele v mešanici kationske površinsko aktivne snovi in ​​anionske površinsko aktivne snovi podobne ionske tekočine: čista nelipidna majhna enolamelarna vezikularna predloga, ki se uporablja za študijo topila in rotacijske relaksacije. Langmuir 2013, 29, 10066–10076. [CrossRef]

57. Sakai, T.; Ikoshi, R.; Toshida, N.; Kagaya, M. Termodinamično stabilna tvorba veziklov in prehod iz veziklov v micele enostranske anionske površinsko aktivne snovi v vodi. J. Phys. Chem. B 2013, 117, 5081. [CrossRef]

58. Ghosh, S.; Mondal, S.; Pan, A.; Mitra, RK; Ghosh, S. Prehod kationske površinsko aktivne snovi gemini, posredovan z ionsko tekočino micele v vezikle: spektroskopska preiskava. Mehka snov 2018, 14, 4185–4193.

59. Mukherjee, B.; Patra, B.; Layek, B.; Mukherjee, A. Trajno sproščanje aciklovirja iz nano-liposomov in nano-liposomov: študija in vitro. Int. J. Nanomed. 2007, 2, 213–225.

60. Blois, MS Določanje antioksidantov z uporabo stabilnega prostega radikala. Narava 1958, 181, 1199–1200. [CrossRef]

61. Rui, Y.; Ying, G.; Weixin, W.; Chen, H.; On, Z.; Jia, A.-Q. Antioksidativna zmogljivost fenolov v cvetovih Camellia nitidissima Chi in njihova identifikacija s HPLC Triple TOF MS/MS. PLoS ONE 2018, 13, e0195508.

Razpoložljivost vzorcev:

Vzorci spojin niso na voljo pri avtorjih.

© 2019 avtorjev. Imetnik licence MDPI, Basel, Švica. Ta članek je članek z odprtim dostopom, ki se distribuira pod pogoji in določili licence Creative Commons Attribution (CC BY) (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/).

Prejeto: 2. april 2019; Sprejeto: 21. junij 2019; Objavljeno: 24. junij 2019

For more information:1950477648nn@gmail.com