2. DEL Ehinakozid zavira sproščanje glutamata z zaviranjem od napetosti odvisnega Ca2 plus vstopa in protein kinaze C v cerebrokortikalnih živčnih terminalih podgan

Za več informacij se obrnite na:Joanna.jia@wecistanche.com

KLIKNITE TUKAJ ZA 1. DEL

3. Razprava

V tej študiji je ehinakozid, aktivna spojina vHerba Cistanche, zavira4-z aminopiridin izzvano sproščanje glutamata v živčnih končičih možganske skorje podgan. Možni osnovni mehanizmi za inhibicijo sproščanja glutamata, ki jo posreduje ehinakozid, so nadalje raziskani in obravnavani tukaj.

Cistanche deserticola ima številne učinke, kliknite tukaj za več informacij

3.1. Mehanizmi, na katerih temelji z ehinakozidom posredovana inhibicija sproščanja glutamata Sproščanje glutamata

sprožen z 4-aminopiridinom, obsega dve komponenti: fiziološko pomembno komponento, odvisno od Ca2 plus, ki nastane z eksocitozo sinaptičnih veziklov, ki vsebujejo glutamat; in komponenta, neodvisna od Ca2 plus, ki izvira iz podaljšane depolarizacije, ki povzroči premik stanja dinamičnega ravnovesja transporterja glutamata, ki ga posreduje membranski potencial, v smeri navzven, kar vpliva na citosolni izliv glutamata [31]. Evo, to smo opaziliehinakozidni bistveno zaviral 4-z aminopiridin izzvanega sproščanja glutamata v prisotnosti medija brez Ca2 plus (Ca2 plus neodvisno sproščanje). Nadalje opaženoehinakozid-posredovano zaviranje 4-z aminopiridin izzvanega sproščanja glutamata je učinkovito preprečil bafilomicin A1 (ki zmanjša vsebnost glutamata v sinaptičnih mehurčkih), ne pa tudi DL-TBOA (ki neselektivno zavira vse ekscitatorne podtipe prenašalcev aminokislin). Ti rezultati kažejo na toehinakozidvpliva na od Ca2 plus odvisno eksocitozo sproščanja glutamata, ne da bi vplival na od Ca2 plus neodvisen citosolni iztok glutamata prek obračanja transporterja glutamata na plazemski membrani živčnih terminalov. V sinaptičnih končičih inhibicija Na plus kanala ali aktivacija K plus kanala stabilizira razdražljivost membrane in posledično zmanjša izzvan vstop Ca2 plus in sproščanje nevrotransmiterjev [32,33]. Zato je potencialni mehanizem v osnoviehinakozid-posredovana inhibicija sproščanja glutamata vključuje zmanjšanje sinaptosomske ekscitabilnosti. Vendar je ta možnost nevzdržna na podlagi dveh opazovanj: (1) 4-depolarizacija membranskega potenciala, izzvana z 4-aminopiridinom, izmerjena z barvilom DiSC3(5), občutljivim na membranski potencial, ni vplivala na dodatekehinakozid; in (2) ehinakozid ni vplival na 4-aminopiridin izzvano Ca2 plus -neodvisno sproščanje glutamata, komponento sproščanja, ki je odvisna samo od membranskega potenciala [31]. Če učinka ne povzroči zatiranje sinaptosomske razdražljivosti, se lahko kaže v zmanjšanju aktivnosti Cav2.2 (tip N) in Cav2.1 (tip P/Q) Ca2 plus kanalov, povezanih z eksocitozo glutamata v živčnih končičev [34–36]. Z uporabo fura-2 to dokazujemoehinakozidbistveno zmanjša 4-z aminopiridinom izzvano povečanje koncentracije Ca2 plus. Poleg tega naši podatki kažejo, da je zaviralni učinekehinakozidna 4-z aminopiridin sproščeno sproščanje glutamata se je zmanjšalo s 42,4 odstotka ˘ 2,3 odstotka na 12,1 odstotka ˘ 3,9 odstotka po izpostavljenosti blokatorju Cav2.2 (N-tip) in Cav2.1 (P/Q-tip) Ca2 plus kanali. Poleg tega smo opazili, daehinakozidše naprej pomembno zavira 4-z aminopiridin izzvano sproščanje glutamata v prisotnosti intracelularnih zaviralcev sproščanja Ca2 plus. Ti rezultati kažejo, da je hkratna supresija Cav2.2 (tip N) in Cav2.1 (tip P/Q) Ca2 plus kanalska aktivnost možni mehanizem, na katerem temeljiehinakozid-posredovana inhibicija sproščanja glutamata. Vendar kombinirana aktivacija Cav2.2 (tip N) in Cav2.1 (tip P/Q) Ca2 plus kanalska aktivnost ni mogla blokirati delovanjaehinakozidpopolnoma. Zato so lahko v inhibicijo vključene druge neidentificirane vrste Ca2 plus kanalov ali druge presinaptične poti. Na primer, receptorji GABAA so prisotni na presinaptični ravni in dokazano je, da njihova aktivacija zavira dotok Ca2 plus in sproščanje glutamata [37]. V tej študiji antagonista receptorjev GABAA SR95531 in bikukulin nista blokirala inhibicije sproščanja glutamata, ki jo posreduje ehinakozid, kar kaže na to, da receptorji GABAA niso vključeni v zmanjšanje napetostno odvisne aktivnosti Ca2 plus kanala in v poznejše inhibicije sproščanja glutamata.

Vstop Ca2 plus skozi napetostno odvisne kanale Ca2 plus aktivira več protein kinaz, povezanih s sproščanjem glutamata v živčnih končičih, vključno z mitogenom aktivirano protein kinazo, protein kinazo C in protein kinazo A. Tukaj prikazujemo, da zaviralci protein kinaze C učinkovito antagonizirajoehinakozid-posredovana inhibicija sproščanja glutamata; kljub temu sta bila z mitogenom aktivirani inhibitor protein kinaze PD98059 ali inhibitor protein kinaze A H89 neučinkovita. Poleg tega to. J. Mol. Sci. 2016, 17, 1006 8 13 4-z aminopiridinom povzročene fosforilacije protein kinaze C se je zmanjšalo v sinaptosomih po predobdelavi zehinakozidv koncentraciji, ki učinkovito zavira sproščanje glutamata. Zato je signalna pot odehinakozid-posredovana inhibicija sproščanja glutamata lahko vključuje protein kinazo C. Protein kinaza C je pomemben znotrajcelični signalni sistem, ki je prisoten na presinaptični ravni in ima ključno vlogo pri eksocitozi nevrotransmiterjev. Na primer, več sinaptičnih proteinov, ki sodelujejo pri prometu s sinaptičnimi vezikli ali rekrutiranju in eksocitozi, kot je miristoilirani substrat C kinaze, bogat z alaninom, se fosforilira s protein kinazo C [38,39]. Ta proces fosforilacije se lahko poveča z vstopom Ca2 plus, stimuliranega z depolarizacijo, kar olajša sproščanje glutamata [40]. Zato lahko upravičeno domnevamo, da je zaviralni učinekehinakozidna vstopu Ca2 plus, ki ga opazimo tukaj, lahko zmanjša aktivnost protein kinaze C in posledično sproščanje glutamata.

3.2. Terapevtske posledice

Ekscitotoksičnost, patološki proces, ki ga povzroči čezmerno sproščanje glutamata in aktivacija glutamatnega receptorja, je glavni vzrok smrti nevronov pri akutnih in kroničnih možganskih motnjah, kot so možganska kap, travmatska poškodba možganov, Parkinsonova in Alzheimerjeva bolezen [13,41], ter terapevtske strategije ki vključujejo inhibicijo sproščanja glutamata, so lahko obetavne nevroprotektivne strategije za zdravljenje takih bolezni.EhinakozidPotrjeno je bilo, da prodre skozi krvno-možgansko pregrado (BBB) ​​in kaže nevroprotektivne učinke v različnih in vivo modelih nevrotoksičnosti [8,10–12,42]. Čeprav mehanizem teh nevroprotektivnih učinkov ni popolnoma razumljen, so poročali o več možnih mehanizmih, vključno z inhibicijo vnetnega odziva, stabilizacijo mitohondrijske funkcije, antioksidacijo, lovljenjem prostih radikalov in posnemanjem nevrotrofične funkcije [5,9,12,42]. V trenutni študiji lahko sposobnost ehinakozida, da zmanjša sproščanje glutamata iz živčnih končičev, delno pojasni tudi njegov nevroprotektivni mehanizem. Vendar, ali ta učinek prispeva k očitnemu terapevtskemu potencialu ehinakozida pri možganskih motnjah, povezanih z ekscitotoksičnostjo glutamata, zahteva nadaljnje raziskave.

4. Materiali in metode

4.1. Kemikalije

Fura-2-acetoksimetil ester (Fura-2-AM) in 3',3',3'-dipropiltiadikarbocianin jodid [DiSC3(5)] sta bila kupljena pri Invitrogenu (Carlsbad, CA, ZDA). ω-konotoksin MVIIC, rottlerin, 2-[1-(3-dimetilaminopropil)indol-3-il]-3-(indol-3-il) maleimid ( GF109203X), 5,6,7,13-tetrahidro-13-metil-5-okso-12H-indolo[2,3-a]pirolo[3,{ {27}}c]karbazol-12-propannitril (Go6976) in N-[2-(p bromocinamilamino)etil]-5-izokinolinsulfonamid (H89) sta bila kupljena pri TocrisBioscience (Bristol, Združeno kraljestvo). Ehinakozid, dantrolen, DL-treo-beta-benzil-oksiaspartat (DL-TBOA), 7-kloro-5-(2-klorofenil)-1,5-dihidro -4,1-benzotiazepin-2(3H)-on (CGP37157), 2-(2-amino-3-metoksifenil)-4 H-1-benzopiran-4-on) (PD98059), etilenglikol bis(-aminoetil eter)-N,N,N1,N1-tetraocetna kislina (EGTA) in vsi drugi reagenti so bili kupljeni iz Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, ZDA).

4.2. Živali

Uporabljeni so bili dvomesečni samci podgan Sprague–Dawley. Živali so bile nameščene v standardiziranih okoljskih pogojih (22 ˘ 1 ˝C; 50-odstotna relativna vlažnost; 12-urni cikel svetlobe/teme) in jim je bil omogočen neomejen dostop do hrane in vode. Živali so ubili z dekapitacijo in na hitro odstranili možgansko skorjo pri 4 ˝C. Eksperimentalne postopke je odobril odbor Fu Jen InstitutionalAnimal Care and Utilization Committee (A10259) v skladu z vodnikom Nacionalnega inštituta za zdravje za nego in uporabo laboratorijskih živali. Potrudili so se čim bolj zmanjšati trpljenje živali in uporabiti minimalno število živali, potrebno za zanesljive rezultate.

4.3. Sinaptosomski pripravki

Sinaptosome smo očistili iz možganske skorje podgan na diskontinuiranih Percollovih gradientih, kot je opisano prej [43,44]. Na kratko, tkivo smo homogenizirali v mediju, ki je vseboval 0.32 M saharozo (pH 7,4), homogenat centrifugirali 10 min pri 3000ˆ g (5{{25 }}00 vrt./min v rotorju JA 25.5; Beckman Coulter, Inc., Miami, FL, ZDA) in 4 ˝C, supernatant pa ponovno centrifugiramo 12 minut pri 14.500ˆ g ( 11,000 vrt./min v rotorju JA 25.5). Peleto smo nežno resuspendirali v 0,32 M saharozi (pH 7,4) in alikvot te sinaptosomske suspenzije (2 ml) dali na 3 ml Percollov diskontinuirani gradient, ki je vseboval 0,32 M saharozo, 1 mM EDTA, 0,25 mM DL-ditiotreitola in 3 odstotke, 10 odstotkov in 23 odstotkov Percoll (pH 7,4). Po 7-minutnem centrifugiranju pri 32.500ˆg (16.500 rpm v rotorju JA 20.5) pri 4˝C so sinaptosome pridobili med 10-odstotnim in 23-odstotnim Percollovim pasom in jih razredčili v končnem volumnu 30 ml. puferskega medija HEPES (140 mM NaCl, 5 mM KCl, 5 mM NaHCO3, 1 mM MgCl2¨ 6H2O, 1,2 mM Na2HPO4, 10 mM glukoze in 10 mM HEPES (pH 7,4)). Po nadaljnjem centrifugiranju pri 27,000ˆ g (15.000 rpm v JA 25.5) 10 minut je bila peleta sinaptosoma resuspendirana v 3 mL puferskega medija HEPES in vsebnost beljakovin je bila določena z Bradfordovim testom. Končno smo 0,5 mg suspenzije sinaptosomov razredčili v 10 ml puferskega medija HEPES in centrifugirali pri 3000ˆ g (5000 rpm v rotorju JA 20.1) 10 minut. Supernatant smo zavrgli, pelete, ki so vsebovale sinaptosome, pa shranili na ledu in uporabili v 4–6 urah.

4.4. Sprostitev glutamata

Sproščanje glutamata je bilo testirano s spletno fluorimetrijo, kot je opisano prej [45, 46]. Sinaptosomske pelete smo resuspendirali v pufrskem mediju HEPES (0,5 mg/mL) in predhodno inkubirali pri 37 ˝C 10 minut v prisotnosti 16 µM govejega serumskega albumina, da se vežejo vse proste maščobne kisline, sproščene iz sinaptosomov med predinkubacijo. 2-mL alikvot sinaptosomov smo prenesli v mešano kiveto, ki je vsebovala 2 mM NADP plus, 50 enot glutamat dehidrogenaze in 1,2 mM CaCl2, in izmerili FL fluorescenco NADPH v Perkin-Elmer LS{{ 14}} spektrofluorimeter (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA, ZDA) pri vzbujevalnih in emisijskih valovnih dolžinah 340 oziroma 460 nm. Ker sinaptosomi niso primerni za električno stimulacijo, je bil za stimulacijo sproščanja glutamata uporabljen zaviralec kalijevih kanalčkov 4-aminopiridin. 4-aminopiridin destabilizira membranski potencial in domneva se, da povzroča ponavljajočo se spontano od Na plus kanala odvisno depolarizacijo, ki je zelo podobna in vivo depolarizaciji sinaptičnega terminala, kar vodi do aktivacije napetostno odvisnih Ca2 plus kanalov in sproščanja nevrotransmiterjev [47]. ]. Podatki so bili pridobljeni v 2 s intervalih. Na koncu vsakega poskusa je bil dodan standard eksogenega glutamata (5 nmol). Vrednost spremembe fluorescence FL, ki jo povzroči standardni dodatek, je bila uporabljena za izračun sproščenega glutamata kot nanomolov glutamata na miligram sinaptosomskega proteina (nmol/mg). V besedilu navedene vrednosti sproščanja so ravni, dosežene v stanju dinamičnega ravnovesja po 5 minutah depolarizacije (nmol/mg/5 minut). Kumulativni podatki so bili analizirani s preglednicami Lotus 1-2-3 (IBM, White Plains, NY, ZDA) in MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, ZDA).

4.5. Potencial plazemske membrane

Potencial plazemske membrane je bil določen z barvilom, občutljivim na membranski potencial, DiSC3(5) [48]. Sinaptosome smo resuspendirali v pufrskem mediju HEPES in alikvote po 2 ml prenesli v mešano kiveto, ki je vsebovala 5 µM DiSC3(5) pri 37 ˝C v spektrofluorometru Perkin–Elmer LS-55 (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA, ZDA). Potem ko smo pustili, da se zmes uravnoteži 3 minute, smo določili fluorescenco FL pri vzbujevalnih in emisijskih valovnih dolžinah 646 oziroma 674 nm. Podatki so bili zbrani v intervalih 2 s. Kumulativni podatki so bili analizirani z uporabo MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, ZDA) in izraženi v fluorescenčnih enotah FL.

4.6. Citosolna koncentracija Ca2 plus ([Ca2 plus ]C)

[Ca2 plus ]C smo izmerili z indikatorjem Ca2 plus fura-2. Sinaptosome (0.5 mg/mL) smo predhodno inkubirali v pufrskem mediju HEPES, ki je vseboval 5 µM fura-2 in 0.1 mM CaCl2, 30 minut pri 37 ˝C v preskusu z mešanjem cev. Po nalaganju fura-2 smo sinaptosome centrifugirali v mikrocentrifugi 30 s pri 3000ˆ g (5000 rpm). Sinaptosomske pelete smo resuspendirali v pufrskem mediju HEPES in sinaptosomsko suspenzijo mešali v termostatirani kiveti v spektrofluorometru Perkin-Elmer LS-55 (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA, ZDA). CaCl2 (1 mM) smo dodali po 3 minutah in nadaljnje dodatke naredili po dodatnih 10 minutah. Podatki o fluorescenci so bili zbrani pri valovnih dolžinah vzbujanja 340 in 380 nm (valovna dolžina emisije 505 nm) v intervalih 2 s. [Ca2 plus ]C (nM) je bil izračunan z uporabo umeritvenih postopkov [49] in enačb, opisanih prej [50]. Kumulativne podatke smo analizirali z uporabo MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, ZDA).

4.7. Western Blotting

Sinaptosome smo homogenizirali v pufru za lizo (10 mM pufra HEPES, pH 7,4), 1 odstotku Tritona X-100 in mešanici inhibitorja proteaze. Lizate smo zbistrili s centrifugiranjem in koncentracijo beljakovin določili s kompletom za analizo beljakovin (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, ZDA). Enake količine proteinov smo ločili z elektroforezo v natrijevem dodecil sulfatu in poliakrilamidnem gelu (SDS-PAGE) in jih prenesli na nitrocelulozno membrano. Membrane so bile blokirane s tris-pufrano fiziološko raztopino, ki je vsebovala 5 odstotkov mleka z nizko vsebnostjo maščobe, in inkubirane z ustreznim primarnim protitelesom (fosfo-protein kinaza C (pan), 1:3000, NOVUS Biologicals Inc., Beverly, MA, ZDA) čez noč pri 4˝C. Po treh izpiranjih v tris-pufrani fiziološki raztopini smo membrano nato 1 uro pri sobni temperaturi obdelali s sekundarnim protitelesom, konjugiranim s hrenovo peroksidazo (1:3000). Membrane so bile nato vsaj trikrat sprane s tris-pufrano fiziološko raztopino in vizualizirane z uporabo izboljšanega kemiluminiscenčnega sistema (Amersham, Buckinghamshire, UK). Alikvot vzorcev je bil naložen in testiran s protitelesom proti PKC za odkrivanje PKC kot kontrole nalaganja. Raven ekspresije ali fosforilacije je bila ocenjena z gostoto traku, ki je bila kvantificirana z denzitometrijo. Denzitometrično kvantifikacijo pasov smo analizirali s programsko opremo Syngene (Synoptics, Cambridge, UK).

4.8. Statistična analiza

Podatki so bili pridobljeni iz enega samega sinaptosomskega pripravka in niso bili neodvisni drug od drugega. Za testiranje pomembnosti učinka zdravila v primerjavi s kontrolo je bil uporabljen dvostranski Studentov t-test. Ko je bila potrebna dodatna primerjava (na primer, ali je drugo zdravljenje vplivalo na delovanje ehinakozida), je bila uporabljena enosmerna ANOVA, ki ji je sledil Tukeyjev test. Analiza je bila dokončana s programsko opremo SPSS (17.0; SPSS Inc., Chicago, IL, ZDA). Podatki so izraženi kot povprečje ˘ SEM; pomembnost je bila ocenjena na p < 0,05="" za="" vse="" statistične="">

5. Sklepi

To je prva študija, ki to dokazujeehinakozidzavira sproščanje glutamata iz cerebrokortikalnih sinaptosomov podgan z zmanjšanjem dotoka Ca2 plus skozi kanala Cav2.2 in Cav2.1, in to zaviranje sproščanja je verjetno vsaj delno odvisno od supresije poti protein kinaze C. Ta ugotovitev je dragocena, ker zagotavlja nov vpogled v mehanizme delovanja ehinakozida v možganih.

Zahvala:To delo je podprlo štipendijo Ministrstva za znanost in tehnologijo (MOST 103-2320-B-030-001 MY3).

Avtorski prispevki:Tzu Yu Lin in Su Jane Wang sta zasnovala in oblikovala poskuse; Cheng Wei Lu je izvedel poskuse; Cheng Wei Lu in Shu Kuei Huang sta analizirala podatke; Su Jane Wang je napisala članek.

Nasprotja interesov:Avtorji izjavljajo, da ni navzkrižja interesov.

Nasprotje interesov: Avtorji izjavljajo, da ni navzkrižja interesov.

Reference

1. Tu, PF; Wang, B.; Deyama, T.; Zhang, ZG; Lou, ZC Analiza feniletanoidnih glikozidovHerba cistanchez RP-HPLC. Acta Pharm. greh 1997, 32, 294-300.

2. Dalby-Brown, L.; Barrett, H.; Landbo, AK; Meyer, AS; Molgaard, P. Sinergistični antioksidativni učinki alkamidov, derivatov kofeinske kisline in polisaharidnih frakcij iz Echinacea purpurea na in vitro oksidacijo človeških lipoproteinov nizke gostote. J. Agric. Food Chem. 2005, 53, 9413-9423. [CrossRef] [PubMed]

3. Dapaš, B.; Dall'Acqua, S.; Bulla, R.; Agostinis, C.; Perissutti, B.; Invernizzi, S.; Grassi, G.; Voinovich, D. Imunomodulacija, posredovana z zeliščnim sirupom, ki vsebuje standardiziran izvleček korenine Echinacea: Pilotna študija pri zdravih ljudeh o ekspresiji genov citokinov. Fitomedicina 2014, 21,1406-1410. [CrossRef] [PubMed]

4. On, WJ; Fang, TH; Tu, PF Napredek raziskav o farmakoloških aktivnostih ehinakozida. Kitajska J. Chin. Mater. Med. 2009, 34, 476-479.

5. Deng, M.; Zhao, JY; Tu, PF.; Jiang, Y; Li, ZB; Wang, YH Echinacoside rešuje nevronske celice SHSY5Y pred apoptozo, ki jo povzroči TNFalpha. EUR. J. Pharmacol. 2004, 505, 11-18. [CrossRef] [PubMed]

6. Koo, KA; Sung, SH; Park, JH; Kim, SH; Lee, KY; Kim, YC In vitro nevroprotektivne aktivnosti feniletanoidnih glikozidov iz Callicarpa dichotoma. Planta Med. 2005, 71, 778-780. [CrossRef] [PubMed]

7. Wang, YH; Xuan, ZH; Tian, ​​S.; Du, GH Ehinakozid ščiti pred 6-mitohondrijsko disfunkcijo, ki jo povzroča hidroksidopamin, in vnetnimi odzivi v celicah PC12 z zmanjšanjem proizvodnje ROS. Evid. Na osnovi dopolnila. Altern. Med. 2015, 2015, 189239. [CrossRef] [PubMed]

8. Žu, M.; Lu, C.; Li, W. Prehodna izpostavljenost ehinakozidu zadostuje za aktiviranje signalizacije Trk in zaščito nevronskih celic pred rotenonom. J. Neurochem. 2013,124, 571-580. [CrossRef] [PubMed]

9. Geng, X.; Tian, ​​X.; Tu, P.; Pu, X. Nevroprotektivni učinki ehinakozida v mišjem MPTP modelu Parkinsonove bolezni. EUR. J. Pharmacol. 2007, 564, 66-74. [CrossRef] [PubMed]

10. Wei, LL; Chen, H.; Jiang, Y; Tu, PF.; Zhong, M.; Du, J.; Liu, F.; Wang, L.; Liu, CY Učinki ehinakozida na histiocentralne ravni aktivne mase pri podganah z okluzijo srednje možganske arterije. Biomed. Okolje. Sci. 2012, 25, 238-244. [PubMed]

11. Wu, CR; Lin, HC; Su, MH Reversal z vodnimi izvlečkiCistanche tubulosaiz vedenjskih pomanjkljivosti v modelu podgan, podobnem Alzheimerjevi bolezni: pomembnost za odlaganje amiloida in funkcijo centralnega nevrotransmiterja. BMC dopolnilo. Altern. Med. 2014, 14, 202. [CrossRef] [PubMed]

12. Zhao, Q.; Gao, J.; Li, W.; Cai, D. Nevrotrofični in nevroreševalni učinki ehinakozida v subakutnem MPTP mišjem modelu Parkinsonove bolezni. Brain Res. 2010, 1346, 224-236. [CrossRef] [PubMed]

13. Meldrum, BS Glutamat kot nevrotransmiter v možganih: pregled fiziologije in patologije. J. Nutr. 2000, 130, 1007S-1015S. [PubMed]

14. Lee, D.; Shim, MS; Kim, KY; Ne, YH; Kim, H.; Kim, SY; Weinreb, RN; Ju, WK Koencim Q10 zavira eksitotoksičnost glutamata in mitohondrijsko spremembo, ki jo povzroča oksidativni stres, v mišjem modelu glavkoma. Raziskati. Ophthalmol. Vis. Sci. 2014, 55, 993-1005. [CrossRef] [PubMed]

15. Choi, DW Kalcij in eksitotoksična nevronska poškodba. Ann. NY Acad. Sci. 1994, 747, 162-171. [CrossRef] [PubMed]

16. Lau, A.; Tymianski, M. Glutamatni receptorji, nevrotoksičnost in nevrodegeneracija. Pflugers. Arh. 2010, 460, 525-542. [CrossRef] [PubMed]

17. Sattler, R.; Tymianski, M. Molekularni mehanizmi ekscitotoksične smrti nevronskih celic, posredovane z glutamatnim receptorjem. Mol. Neurobiol. 2001, 24, 107-129. [CrossRef]

18. Schauwecker, PE Nevrozaščita z antagonisti glutamatnih receptorjev proti epileptični ekscitotoksični celični smrti v starajočih se možganih. Exp. Neurol. 2010, 224, 207-218. [CrossRef] [PubMed]

19. Yeganeh, F.; Nikbakht, F.; Bahmanpoui; S.; Rastegar, K.; Namavar, R. Nevroprotektivni učinki antagonistov metabotropnega glutamatnega receptorja NMDA in skupine I proti nevrodegeneraciji, ki jo povzroča homocistein v hipokampusu podgan: Študija in vivo. J. Mol. Neurosci. 2013, 50, 551-557. [CrossRef] [PubMed]

20. Doble, A. Vloga ekscitotoksičnosti pri nevrodegenerativnih boleznih: posledice za terapijo. Pharmacol. Ther. 1999, 81, 163-221. [CrossRef]

21. Muir, KW Terapevtski pristopi na osnovi glutamata: klinična preskušanja z antagonisti NMDA. Curr. Opin. Pharmacol. 2006, 6, 53-60. [CrossRef] [PubMed]

22. Gonzalez, JC; Egea, J.; del Carmen Godino, M.; Fernandez-Gomez, FJ; Sanchez-Prieto, J.; Gandia, L.; Garcia, AG; Jordan, J.; Hernandez-Guijo, JM Nevroprotektor minociklin zavira glutamatergično nevrotransmisijo in Ca2 plus signalizacijo v hipokampalnih nevronih. EUR. J. Neurosci. 2007, 26, 2481-2495. [CrossRef] [PubMed]

23. Lu, CW; Lin, TY; Wang, SJ Memantin zavira sproščanje glutamata z inhibicijo napetostno odvisnega vnosa Ca2 plus in protein kinaze C v živčnih terminalih možganske skorje podgan: mehanizem, neodvisen od receptorja NMDA. Neurochem. Int. 2010, 57, 168-176. [CrossRef] [PubMed]

24. Wang, SJ; Sihra, TS Nekonkurenčni metabotropni antagonist receptorjev glutamata 5 (E)-2-metil-6- stiril-piridin (SIB1893) zavira sproščanje glutamata z inhibicijo napetostno odvisnega vstopa Ca2 plus v cerebrokortikalne živčne terminale podgan (sinaptosome). J. Pharmacol. Exp. Ther. 2004, 309, 951-958. [CrossRef] [PubMed]

25. Dunkley, PR.; Jarvie, PE; Heath, JW; Kidd, GJ; Rostas, JA Hitra metoda za izolacijo sinaptosomov na Percollovih gradientih. Brain Res. 1986, 372, 115-129. [CrossRef]

26. Araque, A.; Li, N.; Doyle, RT; Haydon, PG SNARE beljakovinsko odvisno sproščanje glutamata iz astrocitov. J. Neurosci. 2000, 20, 666-673. [PubMed]

27. Dunlop, J. Terapevtski pristopi na osnovi glutamata: Usmerjanje na transportni sistem glutamata. Curr. Opin. Pharmacol. 2006, 6, 103-107. [CrossRef] [PubMed]

28. Zucchi, R.; Ronca-Testoni, S. Sarkoplazemski retikulum Ca2 plus kanal/rianodinski receptor: Modulacija z endogenimi efektorji, zdravili in bolezenskimi stanji. Pharmacol. Rev. 1997, 49, 1-51. [PubMed]

29. Fan, Y.; Li, J.; Zhang, YQ; Jiang, LH; Zhang, YN; Yan, CQ Protein kinaza C delta posredovana citotoksičnost 6-hidroksidopamina prek trajne zunajcelične signalno regulirane aktivacije kinaze 1/2 v celicah PC12. Neurol. Res. 2014, 36, 53-64. [CrossRef] [PubMed]

30. Gschwendt, M.; Muller, HJ; Kielbassa, K.; Zang, R.; Kittstein, W.; Rincke, G.; Marks, F. Rottlerin, nov inhibitor protein kinaze. Biochem. Biophys. Res. Komun. 1994, 199, 93-98. [CrossRef] [PubMed]

31. Nicholls, DG; Sihra, TS; Sanchez-Prieto, J. Od kalcija odvisno in neodvisno sproščanje glutamata iz sinaptosomov, spremljano z neprekinjeno fluorometrijo. J. Neurochem. 1987, 49, 50-57. [CrossRef] [PubMed]

32. Nicoll, RA Spajanje receptorjev nevrotransmiterjev na ionske kanale v možganih. Science 1988, 241, 545-551. [CrossRef] [PubMed]

33. Wu, LG; Saggau, P. Presinaptična inhibicija izzvanega sproščanja nevrotransmiterjev. Trendi Neurosci. 1997, 20, 204-212. [CrossRef]

34. Turner, TJ; Dunlap, K. Farmakološka karakterizacija presinaptičnih kalcijevih kanalov z uporabo subsekundnih biokemičnih meritev sinaptosomske nevrosekrecije. Neuropharmacology 1995, 34, 1469-1478. [CrossRef]

35. Millan, C.; Sanchez-Prieto, J. Diferencialno spajanje kalcijevih kanalčkov tipa N in P/Q na eksocitozo glutamata v možganski skorji podgan. Neurosci. Lett. 2002, 330, 29-32. [CrossRef]

36. Vazquez, E.; Sanchez-Prieto, J. Presinaptična modulacija sproščanja glutamata cilja na različne kalcijeve kanale v cerebrokortikalnih živčnih terminalih podgan. EUR. J. Neurosci. 1997, 9, 2009-2018. [CrossRef] [PubMed]

37. Dolgi, P; Mercer, A.; Begum, R.; Stephens, GJ; Sihra, TS; Jovanovic, JN živčni končni receptorji GABAA aktivirajo signalizacijo, odvisno od Ca2 plus/kalmodulina, da zavirajo napetostno odvisni Ca2 plus influks in sproščanje glutamata. J. Biol. Chem. 2009, 284, 8726-8737. [CrossRef] [PubMed]

38. Turner, JR; Angle, JM; Črna, ED; Joyal, JL; Sacks, DB; Madara, JL PKC-odvisna regulacija transepitelijske odpornosti: vloge MLC in MLC kinaze. Am. J. Physiol. 1999, 277, C554-C562. [PubMed]

39. Vaughan, PF; Walker, JH; Peters, C. Regulacija izločanja nevrotransmiterjev s protein kinazo C. Mol. Neurobiol. 1998, 18, 125-155. [CrossRef] [PubMed]

40. Coffey, ET; Sihra, TS; Nicholls, DG; Pocock, JM. Fosforilacijo sinapsina I in MARCKS v živčnih končičih posreduje vstop Ca2 plus preko Aga-GI občutljivega Ca2 plus kanala, ki je povezan z eksocitozo glutamata. FEBS Lett. 1994, 353, 264-268. [CrossRef]

41. Obrenovič, TP; Urenjak, J. Spremenjen glutamatergični prenos pri nevroloških motnjah: od visokega zunajceličnega glutamata do prekomerne sinaptične učinkovitosti. Prog. Neurobiol. 1997, 51, 39-87. [CrossRef]

42. Zhang, D.; Li, H.; Wang, JB Echinacoside zavira amiloidno fibrilizacijo HEWL in ščiti pred nevrotoksičnostjo, ki jo povzroča Ap. Int. J. Biol. Macromol. 2015, 72, 243-253. [CrossRef] [PubMed]

43. Lin, TY; Lu, CW; Wang, CC; Lu, JF; Wang, SJ Hispidulin zavira sproščanje glutamata v cerebrokortikalnih živčnih terminalih podgan. Toxicol. Appl. Pharmacol. 2012, 263, 233-243. [CrossRef] [PubMed]

44. Chang, CY; Lin, TY; Lu, CW; Huang, SK; Wang, YC; Chou, SS; Wang, SJ Hesperidin zavira sproščanje glutamata in izvaja nevroprotekcijo pred ekscitotoksičnostjo, ki jo povzroča kainska kislina v hipokampusu podgan. Nevrotoksikologija 2015,2015,157-169. [CrossRef] [PubMed]

45. Nicholls, DG; Sihra, TS Sinaptosomi imajo eksocitotični bazen glutamata. Nature 1986, 321, 772-773. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Wang, CC; Kuo, JR; Wang, SJ Dimebon, antihistaminik, zavira sproščanje glutamata v cerebrokortikalnih živčnih terminalih podgan. EUR. J. Pharmacol. 2014, 734, 67-76. [CrossRef] [PubMed]

47. Tibbs, Grčija; Barrie, AP; van Mieghem, FJ; Mc-Mahon, HT; Nicholls, DG. Ponavljajoči se akcijski potenciali v izoliranih živčnih končičih v prisotnosti 4-aminopiridina: Učinki na citosolni prosti Ca2 plus in sproščanje glutamata. J. Neurochem. 1989,53, 1693-1699. [CrossRef] [PubMed]

48. Akerman, KE; Scott, LG; Heikkila, JE; Heinonen, E. Ionska odvisnost membranskega potenciala in odzivov, povezanih z glutamatnim receptorjem, v sinaptoneurosomih, merjeno s cianin barvilom, DiSC2 (5). J. Neurochem. 1987, 48, 552-559. [CrossRef] [PubMed]

49. Sihra, TS; Bogonez, E.; Nicholls, DG Lokaliziran vnos Ca2 plus vpliva prednostno na defosforilacijo beljakovin, fosforilacijo in sproščanje glutamata. J. Biol. Chem. 1992, 267, 1983-1989. [PubMed]

50. Grynkiewicz, G.; Poenie, M.; Tsien, RY Nova generacija indikatorjev Ca2 plus z močno izboljšanimi fluorescenčnimi lastnostmi. J. Biol. Chem. 1985, 260, 3440-3450. [PubMed]