Del Ⅱ Izboljšanje dušika sečnine v krvi in ​​kreatinina v serumu z uporabo nove kultivacije Cordyceps Militaris

Rezultati

Kontrolne miši in miši z nefrektomijo so bile zdravljene z micelijem C. militaris in brez njega enkrat na dan z oralno gavažo 30 dni. Število vzorcev v vsaki obdelavi je bilo 4–6 miši na skupino. Odstotno povečanje telesne teže in vrednosti dušika sečnine v krvi (BUN), serumskega kreatinina, skupnih beljakovin in sečne kisline na dan 30 so povzeti na sliki 1. Na koncu poskusov je bilo odstotno povečanje telesne teže nižji pri uremičnih miših, ki so bile podvržene delni nefrektomiji (Nx, 0,66 ± 2,58 odstotka) kot pri kontrolnih miših (Sham, 6,41 ± 2,92 odstotka), kar razkriva, da so uremične miši med poskusnim obdobjem doživele zastoj rasti. Telesna teža uremičnih miši z in brez zdravljenja s C. militaries je prikazana na slikah 1(a) in 2. Rezultati so pokazali, da je bila telesna teža v skupini HKS, HKS plus A ali CM plus A zmanjšana v primerjavi s tisto v skupini skupina Nx na dan 30 (slika 1(a)). Vendar nobena od skupin, zdravljenih s C. militaris, med poskusnim obdobjem ni pokazala očitnih razlik v telesni teži v primerjavi z uremičnimi kontrolnimi mišmi. Ti podatki na sliki 2 kažejo, da zdravljenje z micelijem C. militaris ni bistveno vplivalo na težo uremičnih miši.

Biokemične vrednosti plazme so predstavljene na slikah 1(b), 1(c) in 3. Kot je bilo pričakovano, sta bila BUN in serumski kreatinin bistveno višja (283--krat in 1.63--krat, v tem zaporedju) pri uremičnih miših kot pri kontrolnih miših Nx, kar dokazuje, da ta model uremične miši natančno odraža progresivno KLB (sliki 1 (b) in 1 (c)). Ravni BUN so se 10. dan zmanjšale pri uremičnih miših, hranjenih z micelijem C. militaris, gojenim v medijih HKS (41 odstotkov), HKS plus A (41 odstotkov) in CM plus A (34 odstotkov) v primerjavi z uremične kontrolne miši (Nx) (slika 3(a)). Raven serumskega kreatinina je bila znižana 10. dan v skupini HKS plus A (35 odstotkov) in 30. dan v skupinah HKS (14 odstotkov) in CM plus A (13 odstotkov) (slika 3(b)). Raven serumskega kreatinina se je 10. dan povečala v skupinah HKS (93 odstotkov) in CM (41–53 odstotkov) (slika 3(b)). Med lažnimi in Nx mišmi niso odkrili razlik v telesni teži, skupnih beljakovinah in sečni kislini (podatki niso prikazani). Poleg tega so bile skupne ravni beljakovin podobne v različnih skupinah, kar kaže, da bi lahko zdravljenje s C. militaris iz različnih gojenj preprečilo napredovanje kronične ledvične bolezni (slika 1(d)). Tudi sečna kislina je imela podobne ravni, razen v skupini CM, ki je imela višje ravni sečne kisline (slika 1 (e)).

Za primerjavo učinkov različnih skupin, zdravljenih z micelijem C. militaries, na ledvice in histološke podatke zdravih in uremičnih miši so pregledali. Slika 4 prikazuje površine preseka ledvičnih glomerulov pri lažnih in uremičnih miših z ali brez zdravljenja z micelijem C. militaris. Srednjo površino glomerulnega preseka smo dobili z izračunom povprečne površine približno 8 do 15 posameznih glomerulov z uporabo programa Image J. Med skupinami z uremiko ni statistične pomembnosti. V lažni kontrolni skupini so odseki ledvičnega tkiva pokazali normalno morfologijo (slika 5(a)), medtem ko so odseki ledvičnega tkiva iz uremičnih miši pokazali povečane glomerule in razširjene ledvične tubule, obdane s ploščatimi epitelnimi celicami (slike 5(b)–5( f )). Glomerularna površina preseka je bila znatno večja pri uremičnih miših (174-krat) kot pri zdravih (navideznih) miših. Tudi pri poškodovani ledvici je bila prisotna nepravilna razporeditev tubulov in koloidnih odlitkov v lumnu tubulov. Povečanje ostankov glomerulov dokazuje, da je preostanek ledvic v tem modelu uremičnih miši lahko posledica dolgotrajnega visokega hemodinamičnega pritiska in preobremenitve presnovnih odpadkov.

Diskusija

V zadnjem času so umetne kulture micelija C. militaris priljubljena raziskovalna tema [22–27]. Raziskovalci so na primer raziskovali različne medije za umetno gojenje micelija C. militaris, kot so lutke sviloprejke, medij s trdnim rižem, gojišče iz kaljene soje in sojina juha [34–39]. Številne študije so preučevale različne koncentracije ogljika in dušika v medijih, da bi raziskale najboljše pogoje za rast micelija C. militaris [40–45]. Prejšnje študije so pokazale, da micelij C. militaris vsebuje specifične farmakološko aktivne sestavine, kot so kordicepin, polisaharidi, ergosterol in manitol, in da jih je mogoče učinkovito uporabljati v različne medicinske namene ali kot funkcionalna živila [46–48]. Raziskane so bile tudi razlike v strukturnih značilnostih, imunomodulaciji polisaharidov in antioksidativni aktivnosti micelija C. militaris, gojenega na različnih medijih [49]. Sedanja študija se je osredotočila na renoprotektivne lastnosti micelija C. militaris in vivo in primerjala učinke micelija C. militaris, inkubiranega v novih medijih. Rezultati so pokazali, da so imele miši s poškodbo ledvic, zdravljene z micelijem C. militaris, gojenim na gojišču HKS ali CM plus A, znake izboljšanja delovanja ledvic. .e HKS medij vsebuje ekstrakt kvasa in dvakrat več peptona kot CM medij; poleg tega ima očitno pomanjkanje glukoze. .e HKS medij je medij z visoko vsebnostjo dušika, medtem ko je medij CM medij z visoko vsebnostjo ogljika. Smo pionirski raziskovalci pri uporabi medijev HKS in CM za umetno gojenje micelija C. militaris, da bi razumeli različne učinke, ki jih imata medij z visoko vsebnostjo dušika (HKS) in medij z visoko vsebnostjo ogljika (CM) na biosintetske spremembe. micelija C. militaris.

Vitamin A je skupina organskih snovi, topnih v maščobah, ki vključujejo retinol, retinal, retinoinsko kislino, več karotenoidov provitamina A in beta-karoten [50]. Karotenoidi, ki so predhodniki vitamina A, so izoprenoidne molekule, ki jih na novo sintetizirajo fotosintetične rastline, glive in alge ter so odgovorni za oranžno, rumeno in (nekatere) rdeče barve različnega sadja in zelenjave. Pokazalo se je, da vitamin A in njegovi sorodni derivati ​​zavirajo več bioloških funkcij, vključno z rastjo tumorja, angiogenezo, metastazami in celično proliferacijo, ter inducirajo celično apoptozo in diferenciacijo [51, 52]. Prisotnost vitamina A v gojišču je spodbudila biosintezo -karotena v Phycomyces blakesleeanus [53], kar kaže, da je vitamin A močan aktivator karotenogeneze v Phycomyces. Kot je prikazano na sliki 3(b), je 30. dan v skupini CM plus A micelij C. militaris začel izvajati zaviralni učinek na serumski kreatinin. Nasprotno pa zdravljenje z micelijem C. militaris v skupini CM (brez vitamina A) ni imelo zaviralnega učinka na ravni kreatinina v serumu. Poleg tega zaviralni učinek ni bil opažen pri miceliju C. militaris, ko je bil gojišču KHS dodan vitamin A. Zato je funkcija vitamina A v glivah nejasna. Sumimo, da lahko vitamin A zagotovi material za micelij C. militaris za sintezo sekundarnih presnovkov in s tem vpliva na celično apoptozo. Vlogo vitaminov v gojiščih je treba nadalje raziskati, da bi podprli industrijsko proizvodnjo micelija C. militaris [54].

Za nakup kliknite tukajCistanche izdelki

Dong et al. so pokazali učinek micelija C. militaris na raven BUN in serumskega kreatinina pri podganah s sladkorno boleznijo, ki jih povzroča streptozotocin [55]. Inhibicijski učinki na BUN, kreatinin, sečno kislino in beljakovine so razkrili zaščito izvlečkov C. militaris pred diabetično nefropatijo. Domnevali so, da ima ekstrakt C. militaris velik potencial za zdravljenje sladkorne bolezni. Yu et al. so raziskovali učinek zdravljenja s Cordyceps militaris na zmanjšanje poškodbe ledvic pri miših z diabetično nefropatijo tipa 2 [56]. Poročali so, da so se glukoza v krvi, označevalci ledvične disfunkcije (npr. serumski kreatinin in razmerje med ledvično in telesno težo) in patološke spremembe v ledvičnih tkivih po zdravljenju znatno ublažili in izboljšali. Tu smo dokazali, da so ravni BUN pri uremičnih miših zavirale micelije C. militaris, gojene v mediju HKS, HKS plus A ali CM plus A po 10 dneh in v mediju HKS ali CM plus A po 30 dneh ( Slika 3(a)). Poleg tega smo dokazali, da so ravni serumskega kreatinina zavirale micelije C. militaris, gojene v mediju HKS plus A po 10 dneh in v mediju HKS ali CM plus A po 30 dneh (slika 3(b)). Ugotovili smo, da imajo praški micelija C. militaris, pridobljeni iz medijev HKS in CM plus A, močnejši učinek na znižanje ravni BUN in serumskega kreatinina za odpravo poškodbe ledvic pri miših s kronično ledvično boleznijo. Micelij C. militaris, nabran iz različnih medijev, lahko povzroči različne spojine, ki imajo različne zaščitne učinke na KLB. Skupaj lahko zdravljenje z micelijem C. militaris izboljša biokemični indeks kronične ledvične bolezni, vendar ne more popraviti škode v tem modelu uremičnih miši.

Khan et al. izkoriščen emulgel z aspirinom za lokalno uporabo [57]; ta koncept bi lahko nadalje uporabili v naši študiji. Predlagamo, da se lahko micelij C. militaris naloži v mikro/nano kroglice za aplikacije z nadzorovanim sproščanjem zdravil. Poleg tega Fattepur et al. in Zharif et al. uporabite etanolni ekstrakt rastlin za preučevanje toksikološkega, farmakološkega delovanja ali sinergističnega učinka antibiotikov [58, 59]. Ekstrakcija bioaktivnih spojin je bila dobra ideja za naše nadaljnje študije. Zato predlagamo, da se v prihodnosti uporabi in prouči etanolna ekstrakcija micelija C. militaris.

Predlagamo, da bi se prihodnje študije osredotočile na podroben molekularni mehanizem imunomodulacijske aktivnosti, histopatološke spremembe v ledvičnih tkivih in novo formulacijo micelija C. militaris.

Cistanchejevi učinki

Zaključek

Uspešno smo opazili renoprotektivne učinke micelija C. militaris v novih medijih na miših s kronično ledvično boleznijo. Na mladih miših (približno 30 g) so izvedli operacijo ledvic, da bi povzročili uremijo. .is je prvo poročilo z uporabo štirih novih gojišč (HKS, HKS plus A, CM in CM plus A medij) za micelij C. militaris. Vsak medij micelija C. militaries na CKD ima poseben učinek na BUN, serumski kreatinin, telesno težo, skupne beljakovine in sečno kislino. Rezultati so pokazali, da ima medij HKS micelija C. militaris najmočnejši učinek na znižanje ravni BUN in serumskega kreatinina za odpravo poškodbe ledvic pri miših s kronično ledvično boleznijo. .e HKS plus Gojišče micelija C. militaris je bilo učinkovito 10. dan, ni pa primerno za dolgotrajno uporabo (npr. 30 dni). Gojišče CM micelija C. militaris ni bilo strokovnjak za zaviranje učinkov na BUN ali serumski kreatinin. .e CM plus Gojišče micelija C. militaris ima sprejemljiv učinek na uremične miši. Predvidevamo, da ima micelij C. militaris, gojen v gojišču HKS ali CM plus A, potencial, da postane nova funkcionalna hrana za kronično ledvično bolezen.

Učinkovitost Cistanche pri kronični ledvični bolezni

Kronična ledvična bolezen (CKD) je velik svetovni javnozdravstveni problem, ki prizadene milijone ljudi po vsem svetu. Za kronično ledvično bolezen je značilno postopno upadanje delovanja ledvic, ki pogosto vodi v končno ledvično odpoved (ESRD). Kljub napredku konvencionalne medicine trenutno ni učinkovitega zdravljenja za preprečevanje ali upočasnitev napredovanja ESRD. Kot taka je bilo zanimanje za alternativne terapije, kot je tradicionalna kitajska medicina (TCM).

Cistanche je zdravilna rastlina z dolgo zgodovino uporabe v TKM. Že stoletja se uporablja za tonificiranje ledvic, izboljšanje moške spolne funkcije in podaljšanje dolgoživosti. Nedavne raziskave kažejo, da je izvleček Cistanche lahko obetaven kot alternativna terapija za KLB.

Raziskave kažejo, da ima izvleček Cistanche močne antioksidativne in protivnetne lastnosti, ki lahko pomagajo zaščititi pred oksidativnim stresom in vnetjem v ledvicah. Študije so pokazale, da lahko Cistanche izboljša hitrost glomerularne filtracije (GFR), zmanjša proteinurijo in hematurijo ter prepreči fibrozo ledvic. Ti učinki naj bi bili posledica različnih bioaktivnih spojin, prisotnih v Cistancheju, vključno s feniletanoidnimi glikozidi, iridoidi, lignani in polisaharidi.

Standardizirana Cistanche

Študije na živalih so pokazale, da izvleček Cistanche upočasni napredovanje kronične ledvične bolezni in izboljša delovanje ledvic. Ena študija je na primer pokazala, da je zdravljenje z izvlečkom Cistanche znatno zmanjšalo raven beljakovin v urinu in oslabilo strukturno poškodbo ledvic pri živalih s povzročeno KLB. Druga študija na živalih je pokazala, da je izvleček Cistanche izboljšal GFR, zmanjšal proteinurijo in apoptozo epitelijskih celic ledvičnih tubulov ter zmanjšal fibrozo ledvic pri podganah s kronično ledvično boleznijo.

Klinična preskušanja zagotavljajo tudi dokaze, ki podpirajo potencialno učinkovitost zdravila Cistanche pri izboljšanju delovanja ledvic pri bolnikih s kronično ledvično boleznijo. V kliničnem preskušanju, opravljenem na 62 udeležencih s kronično ledvično boleznijo 3. stopnje, so tisti, ki so prejemali kapsule z izvlečki Cistanche, pokazali znatno izboljšanje delovanja ledvic v primerjavi s tistimi, ki so prejemali placebo. Uporaba izvlečka Cistanche poveča hitrost glomerulne filtracije, zmanjša proteinurijo in izboljša delovanje ledvic.

Vendar ostajajo nekatera vprašanja glede idealnega režima odmerjanja za izvleček Cistanche in njegovega dolgoročnega varnostnega profila. Potrebne so nadaljnje raziskave za določitev optimalnih odmerkov in natančnih mehanizmov delovanja, vključenih v terapevtske učinke zdravila Cistanche na KLB.

Kljub obetavnim rezultatom še vedno obstajajo omejitve, ki jih je treba upoštevati pri obravnavi izvlečka Cistanche kot alternativne terapije za KLB. Prvič, večina doslej izvedenih študij je bila predkliničnih ali kliničnih pilotnih študij z majhnimi velikostmi vzorcev in spremenljivimi načrti študij. Poleg tega so bile mnoge od teh študij izvedene predvsem na živalskih modelih in ne na ljudeh. Potrebne so obsežnejše, visokokakovostne raziskave, da se ugotovi varnost in učinkovitost zdravila Cistanche pri zdravljenju KLB. Poleg tega obstaja tudi potreba po standardizirani pripravi zdravila Cistanche, da se zagotovi enotna kakovost in učinkovitost.

Za zaključek je bilo dokazano, da izvleček Cistanche ugodno vpliva na delovanje ledvic in lahko ponudi obetavno alternativno terapijo za bolnike s kronično ledvično boleznijo. Medtem ko so potrebna nadaljnja obsežna klinična preskušanja, preden je mogoče podati dokončna priporočila o terapevtskem potencialu izvlečka Cistanche, so zgodnji podatki obetavni in kažejo, da bi se to tradicionalno kitajsko zdravilo lahko uporabljalo kot del celostnega pristopa k zdravljenju KLB. Kot vedno se morajo bolniki posvetovati s svojim zdravstvenim delavcem o vseh alternativnih terapijah, ki jih nameravajo jemati, da bi se izognili neželenim učinkom in zagotovili varnost.

Izvleček Cistanche

Reference

[36] Y. Ji, A. Su, G. Ma et al., "Primerjava bioaktivnih sestavin in učinkov na črevesno mikrobioto z in vitro fermentacijo med Ophicordyceps sinensis in Cordyceps militaris," Journal of Functional Foods, vol. 68, ID članka 103901, 2020.

[37] P. Aramwit, N. Bang, J. Ratanavaraporn, T. Nakpheng in T. Srichana, "Protirakavi kordicepin, ki ga proizvaja Cordyceps militaris, ki raste na mrtvi ličinki sviloprejke Bomby more," Journal of Agricultural Science, vol. 6, str. 41–53, 2014.

[38] X. Li, Q. Liu, W. Li et al., "Preboj pri umetnem gojenju kitajskega kordicepsa v velikem obsegu in njegov vpliv na znanost, gospodarstvo in industrijo," Critical Reviews in Biotechnology , vol. 39, št. 2, str. 181–191, 2019.

[39] F. Wu, H. Yan, X. Ma et al., "Primerjava strukturne karakterizacije in biološke aktivnosti kislih polisaharidov iz Cordyceps militaris, gojenih z različnimi mediji", World Journal of Microbiology and Biotechnology, vol. 28, št. 5, str. 2029–2038, 2012.

[40] Y. Ohta, J.-B. Lee, K. Hayashi, A. Fujita, DK Park in T. Hayashi, "In vivo aktivnost imunomodulatornega kislega polisaharida proti virusu gripe, izoliranega iz kordicepsovih vojakov, gojenih na kaljeni soji," Journal of Agricultural and Food Chemistry, vol. 55, št. 25, str. 10194– 10199, 2007.

[41] SK Das, M. Masuda, M. Hatashita, A. Sakurai in M. Sakakibara, "Optimizacija gojišča za proizvodnjo kordicepina z uporabo mutanta Cordyceps militaris, pridobljenega z obsevanjem z ionskim žarkom," Procesna biokemija, vol. 45, št. 1, str. 129–132, 2010.

[42] Y.-X. Gu, Z.-S. Wang, S.-X. Li in Q.-S. Yuan, "Učinek več dejavnikov na kopičenje nukleozidov in baz v Cordyceps militaris", Food Chemistry, vol. 102, št. 4, str. 1304–1309, 2007.

[43] X.-B. Mao, T. Eksriwong, S. Chauvatcharin in J.-J. Zhong, "Optimizacija vira ogljika in razmerja ogljik/dušik za proizvodnjo kordicepina s potopljenim gojenjem medicinske gobe Cordyceps militaris," Process Biochemistry, vol. 40, št. 5, str. 1667–1672, 2005.

[44] B. Chen, Y. Sun, F. Luo in C. Wang, "Bioaktivni metaboliti in potencialni mikotoksini, ki jih proizvajajo glive kordiceps: pregled varnosti," Toxins, vol. 12, št. 6, str. 410, 2020.

[45] V. Kaushik, A. Singh, A. Arya, SC Sindhu, A. Sindhu in A. Singh, "Izboljšana proizvodnja kordicepina v Ophiocordyceps sinensis z uporabo rastnih dodatkov v potopljenih pogojih," Biotechnology Reports, vol. 28, ID članka e00557, 2020.

[46] A. Suparmin, T. Kato, H. Takemoto in EY Park, "Metabolična primerjava zračnega in potopljenega micelija, oblikovanega v tekoči površinski kulturi Cordyceps militaris," Microbiology open, vol. 8, št. 9, ID članka e00836, 2019.

[47] H.-W. Lou, Y. Zhao, H.-B. Tang, et al., "Transkriptomska analiza Cordyceps militaris razkriva gene, povezane s sintezo karotenoidov in identifikacijo funkcije gena Cmtns," Frontiers in Microbiology, vol. 10, str. 2105, 2019.

[48] ​​L. Wu, H. Sun, Y. Hao et al., "Kemična struktura in inhibicija -glukozidaze polisaharidov iz Cordyceps militaris z različnimi razvojnimi stopnjami," International Journal of Biological Macromolecules, vol. 148, str. 722–736, 2020.

[49] PH Leung, S. Zhao, KP Ho in JY Wu, "Kemijske lastnosti in antioksidativna aktivnost eksopolisaharidov iz micelijske kulture glive Cordyceps sinensis Cs-HK1," Food Chemistry, vol. 114, št. 4, str. 1251–1256, 2009.

[50] AS Hombali, JA Solon, BT Venkatesh, NS Nair in JP Peña-Rosas, "Obogatitev osnovnih živil z vitaminom A za pomanjkanje vitamina A", Cochrane Database of Systematic Reviews, vol. 5, ID članka CD010068, 2019.

[51] F. Alizadeh, A. Bolhassani, A. Khavari, SZ Bathaie, T. Naji in SA Bidgoli, "Retinoidi in njihovi biološki učinki proti raku," Mednarodna imunofarmakologija, vol. 18, št. 1, str. 43–49, 2014.

[52] N. Bushue in Y.-JY Wan, "Retinoidna pot in zdravljenje raka", Advanced Drug Delivery Reviews, vol. 62, št. 13, str. 1285–1298, 2010.

[53] MJ Ruiz-Hidalgo, EP Benito, G. Sandmann in AP Eslava, ".e fitoen dehidrogenazni gen Phycomyces: regulacija njegove ekspresije z modro svetlobo in vitaminom A," Molecular and General Genetics MGG, vol. 253, št. 6, str. 734–744, 1997.

[54] N. Chitsaz, L. Dehghani, M. Rezvani, V. Shaygannejad, F. Khorvash in N. Esmalian-Afyouni, ".e primerjalna ocena dodatka vitamina D na glikemične indekse pri avtoimunskih boleznih," Biointerface Research v Uporabna kemija, let. 6, str. 1627–1630, 2016.

[55] Y. Dong, T. Jing, Q. Meng et al., "Študije o antidiabetičnih aktivnostih izvlečka Cordyceps militaris pri diabetičnih podganah Sprague-Dawley, povzročenih s streptozotocinom," BioMed Research International, vol. 2014, ID članka 160980, 11 strani, 2014.

[56] S.-H. Yu, NK Dubey, W.-S. Li et al., "Zdravljenje s Cordyceps militaris ohranja delovanje ledvic pri miših z diabetično nefropatijo tipa 2," PLoS One, vol. 11, št. 11, ID članka e0166342, 2016.

[57] J. Khan, S. Norfarhani, RK Sahu, et al., "Razvoj in ocena lokalnega emulgela aspirina z uporabo različnih polimernih baz," Research Journal of Pharmacy and Technology, vol. 13, št. 12, str. 6300–6304, 2020.

[58] S. Fattepur, KC Nilugal, TT Darshan, et al., "Toksikološka in farmakološka aktivnost etanolnih izvlečkov Catharanthus roseus pri poskusnih živalih," International Journal of Medical Toxicology & Legal Medicine, vol. 21, št. 3- 4, str. 141–144, 2018.

[59] N. Sharif, F. Santosh, CN Kiran, A. Fadli, A. Ibrahim in G. Nizam, "Sinergistični učinek etanolnega ekstrakta listov melastoma malabataricum in antibiotikov," International Journal of Medical Toxicology & Legal Medicine, vol. 21, št. 3-4, str. 167–170, 2018.

Chih-Hui Yang, 1,2,3Wen-Shuo Kuo,4 Jun-ShengWang,2Yi-Ping Hsiang,3,5Yu-Mei Lin,1,6 Yi-Ting Wang, 1,6 Fan-Hsuan Tsai,6 Chun- Ting Lee, 6,7 Jiun-Hua Chou, 1 Huei-Ya Chang, 1 Lung-Shuo Wang, 6,8 Shu-Chi Wang, 6,9 in Keng-Shiang Huang 6

1 Oddelek za biološko znanost in tehnologijo, Univerza I-Shou, Kaohsiung, Tajvan

2 Tajvanski raziskovalni inštitut za instrumente, Nacionalni laboratoriji za uporabne raziskave, Hsinchu, Tajvan

3 Farmacevtski oddelek bolnišnice E-Da, Kaohsiung, Tajvan

4 School of Chemistry and Materials Science, Nanjing University of Information Science and Technology, Nanjing, Kitajska

5 Oddelek za biotehnologijo in kemijsko inženirstvo, Univerza I-Shou, Kaohsiung, Tajvan

6 School of Chinese Medicine for Post-Baccalaureate, I-Shou University, Kaohsiung, Tajvan

7 Klinika kitajske medicine Amulette, Taipei, Tajvan

8 Oddelek za kitajsko medicino, bolnišnica Sin-Lau, Tainan, Tajvan

9 Medicinska fakulteta za mednarodne študente, Univerza I-Shou, Kaohsiung, Tajvan