Prvi del DsbA-L sodeluje z VDAC1 pri mitohondrijsko posredovani apoptozi tubularnih celic in prispeva k napredovanju akutne ledvične bolezni

Povzetek

1. Ozadje

dokazali smo, da je disulfidni vezi A oksidoreduktazi podoben protein (DsbA-L) vključen v napredovanje ledvične fibroze. Vendar pa natančna funkcija DsbA-L pri akutni ledvični poškodbi (AKI) in vpleteni mehanizmi še niso pojasnjeni.

2. Metode

Ilustriramo interakcijo DsbA-L z VDAC1 s co-IP (ko-imunoprecipitacijo) in vitro in Viv ter ugotovimo njihove interakcijske dele s poskusom mutacije. Zgornje ugotovitve smo preverili s solokalizacijo o njih. Poleg tega smo izdelali dva modela miši PT-DsbA-L in VDAC1 KO, da preverimo delovanje DsbAL in VDAC1 v modelih AKI, ki jih povzroča VAN, CL, P in I/R.

3. Ugotovitve

Miši PT-DsbA-L-KO so pokazale izboljšanje napredovanja AKI, povzročenega z I/R, VAN in CLP, prek znižane regulacije VDAC1. Nazadnje smo te spremembe v signalnih molekulah potrdili s pregledom celic HK-2 in biopsij ledvic, vzetih pri bolnikih z AKI, ki ga povzroča ishemični ali akutni intersticijski nefritis (AIN). Mehansko gledano je DsbA-L medsebojno deloval z aminokislinama 9-13 in 22-27 VDAC1 v mitohondrijih celic BUMPT, da je povzročil apoptozo ledvičnih celic in mitohondrijsko poškodbo.

4. Tolmačenje

To delo je nakazovalo, da DsbA-L, ki se nahaja v proksimalnih tubularnih celicah, spodbuja napredovanje AKI z neposrednim dvigom ravni VDAC1. Naslov: Vloga DsbA-L pri AKI.

5. Financiranje

Kitajska nacionalna naravoslovna fundacija, donacija Ključnega projekta znanstvene in tehnološke inovacije province Hunan, projekta mednarodnega sodelovanja in izmenjave oddelka za znanost in tehnologijo province Hunan, projekta urada za znanost in tehnologijo Changsha, naravoslovne fundacije province Hunan, Fundamental Raziskovalna sredstva za osrednje univerze Central South University, Fundacija za inovacije province Hunan za podiplomski študij Kitajska Oddelek za znanost in tehnologijo province Hunan.

Ključne besede

DsbA-L; VDAC_I; Bax; Cyt-c; AKI

Kliknite tukaj, če želite pridobiti ugodnosti Cistanche in kupiti tablete Cistanche

Uvod

Akutna ledvična poškodba (AKI), uničujoč klinični zaplet z visoko stopnjo obolevnosti in umrljivosti, prizadene milijone bolnikov po vsem svetu (1). AKI običajno povzročijo sepsa, nefrotoksična sredstva in ishemijsko-reperfuzijska poškodba (IRI) (2). Molekularni mehanizmi, na katerih temelji AKI, še niso v celoti razjasnjeni. Posledično za AKI ni na voljo učinkovitih strategij zdravljenja.

Poškodba tubularnih celic je že desetletja priznana kot pomemben dejavnik AKI.3 Z napredovanjem raziskav je vse več raziskovalcev ugotovilo, da ima poškodba mitohondrijev ključno vlogo pri poškodbi tubularnih celic in da je ta začetna poškodba posledica kopičenja ROS, proizvodnja citokinov in celična smrt (vključno z nekrozo in apoptozo); vsi ti procesi skupaj prispevajo k AKI.4-6 Čeprav se vedno več raziskav osredotoča na mehanizme, na katerih temelji mitohondrijska poškodba pri AKI,7- 12 natančen mehanizem, ki je odgovoren za mitohondrijsko poškodbo, še ni identificiran.

Protein, podoben oksidoreduktazi (DsbAL) z disulfidno vezjo, je bil najprej identificiran kot mitohondrijski protein v jetrnih celicah podgan.13 Prejšnje študije so pokazale, da je DsbA-L preprečil debelost, vnetje, inzulinsko rezistenco ali z dieto ali diabetično nefropatijo (DN) poškodba ledvic.14-18 Zanimivo je, da je naša nedavna študija pokazala, da je DsbA-L posredoval ledvično fibrozo, ki jo povzroča enostranska obstrukcija sečnice (UUO). Vendar sta vloga in mehanizem tubularnega DsbA-L pri AKI še vedno popolnoma neznana.

V tej študiji je proksimalna tubularna delecija DsbA-L (PT-DsbA-L-KO) v mišjem modelu povzročila opazno oslabitev I/R, skupaj z vankomicinom (VAN) in ligacijo in punkcijo cekuma (CLP )-inducirana AKI. Dosledno je DsbA-L posredoval tudi I/R, VAN- in LPS-inducirano apoptozo v mišjih ledvičnih proksimalnih tubularnih epitelnih (BUMPT) celicah. Zanimivo je, da smo ugotovili, da je DsbA-L sodeloval z regijami 9-13 in 22 27 napetostno odvisnega anionskega kanala 1 (VDAC1), ključnega člana družine proteinov VDAC19 21; ti učinki so bili opaženi tako v in vivo kot in vitro mitohondrijskih vzorcih in človeških vzorcih AKI. Poleg tega smo dokazali, da je PTVDAC1-KO izboljšal tudi apoptozo ledvičnih celic v in vitro in in vivo modelih AKI. Skupaj smo dokazali, da je DsbA-L medsebojno deloval z VDAC1 pri apoptozi tubularnih celic, posredovani z mitohondriji, in je zato povzročil napredovanje AKI.

Cistanche tubulosa

Materiali in metode

1. Etična izjava

Študijo je odobril revizijski odbor Druge bolnišnice Xiangya, Ljudska republika Kitajska (št. 2018065) ​​in v tej študiji je sodelovalo 18 bolnikov. Vsi udeleženci pred vključitvijo v študijo so bili izbrani s pisno informirano privolitvijo. Vsi poskusi na živalih so bili v skladu z vodilnimi načeli, ki jih je odobril Odbor za etiko oskrbe živali druge bolnišnice Xiangya, Ljudska republika Kitajska (št. 2020310).

2. Protitelesa in reagenti

Anti-COXIV (ab33985, RRID: AB_879754), VDAC1 (ab14734, RRID: AB_443084), and PGC-1a (ab191838, RRID: AB_2721267) antibodies were obtained from Abcam (Cambridge Science Park, Cambridge, UK). Anti-Caspase3 (9662, RRID: AB_331439) and cleavedcapase3 (9664, RRID: AB_2070042) antibodies were purchased from Cell Signaling Technology (Danvers, MA, USA). Anti-Bax (50599-2-Ig, RRID: AB_2061561), Cyt-c (10993-1-AP, RRID: AB_2090467), NRF1 (12482- 1-AP, RRID: AB_2282876), GAPDH (60004-1-Ig, RRID: AB_2107436), and b-tubulin (10094-1-AP, RRID: AB_2210695) antibodies were obtained from Proteintech (Rosemont, IL, USA). The anti-DsbA-L antibody was provided by Dr. Feng Liu(14). All secondary antibodies (MitoTracker Green FM and MitoTracker Red CMXRos) were obtained from Thermo Fisher Scientific (Waltham, MA, USA). The calcium ionophore was purchased from Sigma-Aldrich (Shanghai, China). Antimycin A (>95-odstotna čistost, ab141904) in komplet za frakcioniranje mitohondrije/citosola (ab65320) sta bila kupljena pri Abcam (Cambridge Science Park, Cambridge, UK). Ciljno zaporedje za mišji DsbAL je bilo opisano prej.22

3. Izdelava modelov AKI z ishemično reperfuzijo, CLP in VAN

Miši samci C57BL/6J (RRID: MGI:5657312), stari 8-10 tednov, so bili kupljeni pri Hunan SJA Laboratory Animal Co., Ltd. Miši, ki kažejo delecijo DsbA-L ali VDAC1, specifično za proksimalne tubule, so nastale s križanjem DsbA-L (flox/flox) miši (priskrbel dr. Feng Liu) ali miši VDAC1 (flox/flox) (pridobljene iz šanghajskih modelnih organizmov) z mišmi PEPCK-Cre (priskrbel dr. Volker Haase (Univerza Pennsylvania, Philadelphia, PA). ), kot je opisano prej.22,23 Samci miši (stari 8-10 tednov) so bili izpostavljeni ishemiji, CLP in VAN nefrotoksičnemu AKI, kot je opisano prej.23 27 Za ishemično AKI so dvostransko ledvično arterijo neprekinjeno strigli za 28 minut, čemur je sledila reperfuzija za 24 ali 48 ur. Telesno temperaturo miši smo vzdrževali pri približno 37 stopinjah. Za AKI, ki jo povzroča CLP, je bil cekum tesno podvezan na mestu 1,5 cm od konice. Temu je sledilo punkcijo 18 ur Za poškodbo VAN so miši intraperitonealno injicirali en odmerek VAN v odmerku 600 mg/kg 7 zaporednih dni, kot je opisano prej.28, 29 Poleg tega so miši C57BL/6 injicirali DsbA-L ali plazmidi VDAC1 ali siRNA VDAC1 (v odmerku 15 mg/kg) preko repne vene dvakrat na teden22; fiziološko raztopino smo uporabili kot kontrolno injekcijo. Za vsako študijo smo skupaj analizirali vzorce, da bi se izognili pristranskosti na podlagi prejšnjih študij, in uporabili programsko opremo PASS za določitev velikosti vzorca (n=6). Izključili smo vzorec, ki je umrl ali ni uspel vzpostaviti modela pred končno točko. Poskusne miši so bile razvrščene po tabeli naključnih števil. Preiskovalci med poskusom niso bili zaslepljeni, vendar so bili zaslepljeni med dodeljevanjem, zbiranjem vzorcev in analizo podatkov. Vsi poskusi na živalih so bili v skladu z vodilnimi načeli, ki jih je odobril Odbor za etiko oskrbe živali druge bolnišnice Xiangya, Ljudska republika Kitajska. Miši so bile nameščene v 12-h svetlem/temnem okolju s prostim dostopom do standardne prehrane za glodalce in vode.

Herba Cistanche

4. Celična kultura in ishemično-reperfuzijski model

Celice BUMPT, pridobljene od dr. Wilfreda Lieberthala (Bostonska medicinska fakulteta) ali celice HK{{0}}, pridobljene od Shanghai Zhongqiaoxinzhou Biotech, so bile gojene z DMEM (Gibco, 11965092) z dodatkom 10 odstotkov FBS (Gibco, 10100147) in 1 odstotek penicilin-streptomicina (Gibco, 15140163) pri 37 stopinjah v 5 odstotkih CO2. Za ishemični celični model so bile celice BUMPT obdelane z 10 mM antimicina A (inhibitor mitohondrijskega kompleksa III, Abcam, ab141904) in 1,5 mM kalcijevega ionoforja (Sigma, A23187) v Hanksovi uravnoteženi raztopini soli (Hyclone, SH30030.02) za 2 h.30 Nato smo zamenjali HBSS z medijem DMEM za 0, 2 in 4 ure za stopnjo reperfuzije. Apoptozo celic so odkrili z morfologijo in imunoblotingom za apoptotične indikatorje, vključno s cepljeno kaspazo3, Bax in Cyt-c. Ustvarjenih je bilo več plazmidov, ki so bili transficirani v celice z lipofekcijo: DsbA-L, HA-VDAC1-1-25, HA-VDAC1-26-366, HA-VDAC1-polne dolžine, HA-VDAC{{33 }}D9-13,22-27, HAVDAC1-D39-45,55-57 in HA- VDAC1-D9-13, 22-27 D39-45,55-57 in siRNA za DsbA-L in VDAC1. Šest do osem ur po transfekciji smo gojišče zamenjali z DMEM. Zaporedji siRNA DsbA-L in siRNA VDAC1 za miši sta bili 50 - GCAUGGAGCAACCAGAGAUTT -30 oziroma 50 - CCAGAGCAACTTCGCAGTT -30; sekvence za kodirano NC siRNA so bile 50 -UUCUCGAACGUGUCACGUTT-30. Zaporedji siRNA DsbA-L in siRNA VDAC1 za ljudi sta bili 50 - UCAUUUGCCAUGUAUAGUCCU-30 oziroma 50 -UAUUAAGCCAAAUCCAUAGCC -30; sekvence za kodirano NC siRNA so bile 50 -AACCACUCAACUUUUUCC CAA -30. Model IR je bil nato induciran, ko je gostota celic dosegla 90 odstotkov.

5. Pretočna citometrija

Pretočna citometrija je bila izvedena v skladu z navodili kompleta za odkrivanje apoptoze aneksina V FITC (BD, 556547). BUMPT ali HK-2 Celice z različnimi obdelavami smo zbrali z uporabo tripsina brez EDTA in jih trikrat sprali s PBS, čemur je sledil FITC 15 minut in PI 5 minut pri sobni temperaturi, na koncu pa jih pregledali s pretočno citometrijo.

6. Bolniki z AKI in odvzem vzorcev

Protokol je odobril revizijski odbor druge bolnišnice Xiangya, Ljudska republika Kitajska. V to študijo je bilo vključenih 18 bolnikov, vključno z 12 moškimi in 6 ženskami. Načelo rekrutiranja je temeljilo na biopsiji ledvic. Podatki o bolniku so dopolnjeni v tabeli 1. Vzorci biopsije ledvic so bili pridobljeni od bolnikov, ki živijo z boleznimi minimalnih sprememb (MCD) (n=6) in AKI, ki jih povzroča ishemični ali akutni intersticijski nefritis (AIN) (n{{6} }). Izjavljamo, da je vsa študija v skladu z vsemi ustreznimi etičnimi predpisi za raziskave s človeškimi udeleženci in je bila izvedena v skladu z načeli Helsinške deklaracije ter da je študija v skladu s smernicami Ministrstva za znanost in tehnologijo za pregled in odobritev Človeški genetski viri. Kriteriji za vključitev in izključitev MCD so bili opisani v naši prejšnji študiji.23 Za IR: kriteriji za vključitev: 1 Biopsija za bolnike z ishemijo in reperfuzijo, 2 Starost manj kot 75 let; Merila za izključitev1: izključitev bolnikov s tumorji, odkritimi pri pooperativnih zdravniških pregledih,2 izključitev bolnikov z anamnezo sladkorne bolezni, protina, hipertenzije, urinske tuberkuloze ali okužbe. Za AIN: Vključitvena merila1: Klinično diagnosticiran kot akutni intersticijski nefritis2 Bolniki z AIN potrjeni z biopsijo,3 Starost manj kot 75 let; Merila za izključitev1: izključite bolnike z nenormalnim kreatininom v krvi pred sprejemom,2 izključite bolnike z anamnezo sladkorne bolezni, protina, hipertenzije, urinske tuberkuloze ali okužbe. Ti vzorci so bili nato uporabljeni za barvanje HE, TUNEL in imunohistokemijo ter imunoprecipitacijo (IP) in imunobloting.

7. Imunoprecipitacija

Citoplazmo in mitohondrije iz celic BUMPT in ledvičnega tkiva miši in bolnikov z AKI smo ločili z uporabo kompleta za frakcioniranje mitohondrijev/citosolov (Abcam, ab65320); komplet je bil uporabljen po navodilih proizvajalca. Protitelesa (DsbA-L, VDAC1, HA ali IgG) so bila vezana na magnetne kroglice. Nato smo dodali lizat mitohondrije/citoplazme in ga inkubirali tri ure. Nato smo zmes eluirali in z imunoblotingom raziskali izražanje povezanih markerjev.

8. Relativna kvantitativna PCR (qPCR)

RNA je bila ekstrahirana iz celic BUMPT ali ledvičnega tkiva z reagentom Trizol (Invitrogen, Carlsbad, CA, ZDA). RNA je bila nato reverzno prepisana v prvo verigo cDNA z uporabo Prime Script RT Reagent kit in gDNA Eraser (TaKaRa, RR037A), kot je opisano prej.31'34 Nato smo uporabili cDNA kot predlogo s TB zelenim (TaKaRa, RR820A) in Light cycler 96 (Roche) z naslednjimi pari primerjev: DsbA-L: 5 - AAATATGGGGCCTT TGGGCT-3'(naprej) in 5'- TAGCAACTCCAAGCGGTCA G-3'(vzvratno); in GAPDH: 5'-GGTCTCTGACTTCACA-3'(naprej) in 5'-GTGAGGGTC TCTCTCTTCCT-3'(vzvratno); PGC- 1a: 5'-ATGTGTCGCCTTCTTGCTCTTCC-3 (naprej) in 5'-CTCCCGCTTCTCGTGCTCTTTG-3'(vzvratno); NrF1:5'-TCTGCTGTGGCTGATGGAGA GG-3'(naprej) in NrF1:5'-GATGCTTGCGTCGTCTGGATGG-3 (nazaj);

9. Odkrivanje BUN in kreatinina

Odkrivanje BUN in kreatinina je bilo izvedeno v skladu s protokolom BUN (Urea Nitrogen Content Assay Kit Beijing Boxbio Science & Technology Co, Ltd.) in Creatinine Assay kit (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, Kitajska).

10. HE barvanje, TUNEL barvanje, imunokemija, imunofluorescenca in imunobloting

Ledvično tkivo je bilo vstavljeno v parafin in nato razrezano na dele za različne vrste obarvanja, kot je opisano prej. 26, 35 Histologijo so ocenili z obarvanjem s hematoksilinom in eozinom. Merila, uporabljena za ocenjevanje poškodbe ledvičnih tubulov, so bila opisana prej.23 Barvanje TUNEL je bilo uporabljeno za oceno apoptoze v ledvičnih celicah. Delež (v odstotkih) TUNEL-pozitivnih celic v 10-20 mikroskopskih poljih na rez tkiva je bil uporabljen kot kvantitativni indikator apoptoze.26 Za imunokemijsko obarvanje so reze tkiva čez noč inkubirali pri 4 stopinjah C s specifičnim primarnim protitelesom ( DsbA-L 1:200 ali VDAC1 1:100). Naslednje jutro so sekcije inkubirale s sekundarnim protitelesom 30 minut pri 37 stopinjah in nato reagirale z DAB 5-10 minut. Za imunofluorescenčno obarvanje smo odseke inkubirali s specifičnim primarnim protitelesom (DsbA-L 1:200, VDAC1 1:100) čez noč pri 4 stopinjah, čemur je sledilo sekundarno fluorescentno protitelo 1 uro pri 37 stopinjah v temi. Nato smo za 3-5 min dodali DAPI in odseke opazovali s fluorescentno mikroskopijo. Mitohondrijsko barvanje je bilo izvedeno po standardnem protokolu. Beljakovinske lizate iz celic ali ledvic BUMPT smo pobrali in nato centrifugirali, da smo zbrali supernatant, ki vsebuje proteine. Supernatant smo izpostavili SDS-PAGE in nato prenesli na PVDF membrano. Membrane smo nato inkubirali s primarnim protitelesom čez noč pri 4 stopinjah, čemur je sledilo sekundarno protitelo 1 uro pri sobni temperaturi. Koncentracija antiCOXIV, VDAC1, PGC-1a, Bax, Cyt-c, NRF1, GAPDH in b-tubulina je 1:1000. Koncentracija anti-kapaze3 in cepljene kapaze3 je 1:2000.

Cistanche dodatek

11. Statistika

Vsi podatki so bili predstavljeni kot povprečje § SD. Dvostranski Studentov t-test je bil uporabljen za primerjavo dveh skupin. Enosmerna ANOVA, ki ji je sledila Tukeyjeva post hoc analiza, je bila uporabljena za več primerjav. Test Kruskal Walls je bil uporabljen za podatke z nenormalno porazdelitvijo. Programska oprema Graph Pad 8.0 je bila uporabljena za analizo podatkov in P<0.05 was considered statistically significant.

12. Vloga vira financiranja

Financerji niso sodelovali pri načrtovanju študije, zbiranju podatkov, analizi, interpretaciji ali pisanju rokopisa.

Reference

1 Zuk A, Bonventre JV. Akutna poškodba ledvic. Annu Rev Med. 2016; 67: 293–307.

2 Zhou D, Tan RJ, Lin L, Zhou L, Liu Y. Aktivacija receptorja hepatocitnega rastnega faktorja, c-met, v ledvičnih tubulih je potrebna za ponovno zaščito po akutni poškodbi ledvic. Kidney Int. 2013;84(3):509–520.

3 O'Neal JB, Shaw AD, Billings FT. Akutna okvara ledvic po srčni operaciji: trenutno razumevanje in prihodnje usmeritve. Crit Care. 2016; 20 (1): 187.

4 Ishimoto Y, Inagi R. Mitohondriji: terapevtski cilj pri akutni ledvični poškodbi. Presaditev Nephrol Dial. 2016; 31 (7): 1062–1069. uradna publikacija Evropskega združenja za dializo in transplantacijo – European Renal Association.

5 Linkermann A, Chen G, Dong G, Kunzendorf U, Krautwald S, Dong Z. Regulirana celična smrt pri AKI. J Am Soc Nephrol. 2014; 25 (12): 2689–2701.

6 Agarwal A, Dong Z, Harris R, et al. Celični in molekularni mehanizmi AKI. J Am Soc Nephrol. 2016; 27 (5): 1288–1299.

7 Morigi M, Perico L, Rota C, et al. Od sirtuina 3-odvisne mitohondrijske dinamične izboljšave ščitijo pred akutno poškodbo ledvic. J Clin Investig. 2015; 125 (2): 715–726.

8 Yu X, Xu M, Meng X, et al. Jedrski receptor PXR cilja na AKR1B7 za zaščito mitohondrijske presnove in delovanja ledvic pri AKI. Sci Transl Med. 2020; 12 (543): 7591–7605.

9 Stoppe C, Averdunk L, Goetzenich A, et al. Zaščitna vloga faktorja zaviranja migracije makrofagov pri akutni poškodbi ledvic po operaciji srca. Sci Transl Med. 2018; 10 (441): 4886–4898.

10 Wei Q, Sun H, Song S et al. MikroRNA-668 zavira MTP18, da ohrani mitohondrijsko dinamiko pri ishemični akutni poškodbi ledvic. J Clin Investig. 2018; 128 (12): 5448–5464.

11 Tran M, Tam D, Bardia A, et al. PGC-1alfa spodbuja okrevanje po akutni poškodbi ledvic med sistemskim vnetjem pri miših. J Clin Investig. 2011; 121 (10): 4003–4014.

12 Lan R, Geng H, Singha PK, et al. Mitohondrijska patologija in glikolitični premik med atrofijo proksimalnih tubulov po ishemični AKI. J Am Soc Nephrol. 2016; 27 (11): 3356–3367.

13 Harris JM, Meyer DJ, Coles B, Ketterer B. Nova glutation transferaza (13-13), izolirana iz matriksa mitohondrijev jeter podgane, je strukturno podobna encimom theta razreda. Biochem J. 1991; 278 (Pt 1): 137–141.

14 Bai J, Cervantes C, Liu J, et al. DsbA-L preprečuje z debelostjo povzročeno vnetje in insulinsko rezistenco z zaviranjem poti cGAS-cGAMP-STING, ki se aktivira s sproščanjem mtDNA. Proc Natl Acad Sci USA. 2017; 114 (46): 12196–12201.

15 Chen H, Bai J, Dong F, et al. Jetrni DsbA-L ščiti miši pred hepatosteatozo, ki jo povzroča prehrana, in odpornostjo na inzulin. FASEB J. 2017; 31 (6): 2314–2326.

16 Liu M, Xiang R, Wilk SA, et al. Prekomerna ekspresija DsbA-L, specifična za maščobe, spodbuja multimerizacijo adiponektina in ščiti miši pred debelostjo, ki jo povzroča prehrana, in insulinsko rezistenco. Sladkorna bolezen. 2012; 61 (11): 2776–2786.

17 Chen X, Han Y, Gao P, et al. Disulfidna vez Protein, podoben oksidoreduktazi, ščiti pred ektopičnim odlaganjem maščobe in z lipidi povezano poškodbo ledvic pri diabetični nefropatiji. Kidney Int. 2019;95(4):880–895.

18 Dai XG, Xu W, Li T, et al. Vpletenost domnevne kinaze, ki jo povzroča homolog fosfataze in tenzina 1-Mitofagija, posredovana s Parkinom, pri septični akutni poškodbi ledvic. Chin Med J (angl.). 2019; 132 (19): 2340–2347.

19 Shoshan-Barmatz V, Nahon-Crystal E, Shteinfer-Kuzmine A, Gupta R. VDAC1, mitohondrijska disfunkcija in Alzheimerjeva bolezen. Pharmacol Res. 2018; 131: 87–101.

20 Geisler S, Holmstrom KM, Skujat D, et al. PINK1/Parkin-posredovana mitofagija je odvisna od VDAC1 in p62/SQSTM1. Nat Cell Biol. 2010;12(2):119–131.

21 Lipper CH, Stofleth JT, Bai F, et al. Redoks odvisno odpiranje VDAC z mitoNEET. Proc Natl Acad Sci USA. 2019; 116 (40): 19924–19929.

22 Li X, Pan J, Li H, et al. DsbA-L posredovana ledvična tubulointersticijska fibroza pri miših UUO. Nat Commun. 2020;11(1):4467.

23 Zhang D, Liu Y, Wei Q, et al. Tubularni p53 uravnava več genov za posredovanje AKI. J Am Soc Nephrol. 2014; 25 (10): 2278–2289.

24 Xu X, Wang J, Yang R, Dong Z, Zhang D. Genetska ali farmakološka inhibicija EGFR izboljša s sepso povzročeno AKI. Oncotarget. 2017; 8 (53): 91577–91592.

25 Wang J, Li H, Qiu S, Dong Z, Xiang X, Zhang D. MBD2 uravnava miR-301a-5p, da inducira apoptozo ledvičnih celic med AKI, ki jo povzroči vankomicin. Cell Death Dis. 2017;8(10):e3120.

26 Xu L, Li X, Zhang F, Wu L, Dong Z, Zhang D. EGFR poganja napredovanje AKI v kronično ledvično boleznijo prek prekomerne ekspresije HIPK2. Teranostika. 2019; 9 (9): 2712–2726.

27 Zhang P, Yi L, Qu S, et al. Biomarker TCONS_00016233 poganja septično AKI tako, da cilja na signalno os miR-22-3p/AIFM1. Mol Ther Nukleinske kisline. 2020; 19: 1027–1042.

28 Chen J, Wang J, Li H, Wang S, Xiang X, Zhang D. p53 aktivira miR-192-5p za posredovanje z vankomicinom povzročene AKI. Sci Rep. 2016; 6: 38868.

29 Xu X, Pan J, Li H, et al. Atg7 posreduje apoptozo ledvičnih tubularnih celic pri nefrotoksičnosti vankomicina z aktivacijo PKC-delta. FASEB J. 2019; 33 (3): 4513–4524.

30 Lee HT, Emala CW. Predkondicioniranje in adenozin ščitita človeške celice proksimalnih tubulov v in vitro modelu ishemične poškodbe. J Am Soc Nephrol. 2002; 13 (11): 2753–2761.

31 Ge Y, Wang J, Wu D, et al. lncRNA NR_038323 Zavira ledvično fibrozo pri diabetični nefropatiji z usmerjanjem na os miR-324-3p/DUSP1. Mol Ther Nukleinske kisline. 2019; 17: 741–753.

32 Wang J, Pan J, Li H, et al. lncRNA ZEB1-AS1 je zaviral p53 za ledvično fibrozo pri diabetični nefropatiji. Mol Ther Nukleinske kisline. 2018; 12: 741–750.

33 Song YX, Sun JX, Zhao JH et al. Nekodirajoče RNA sodelujejo v regulativnem omrežju CLDN4 prek utaje miRNA, ki jo posreduje ceRNA. Nat Commun. 2017; 8 (1): 289.

34 Zhu M, Liu J, Xiao J, et al. Lnc-mg je dolga nekodirajoča RNA, ki spodbuja miogenezo. Nat Commun. 2017; 8: 14718.

35 Kishi S, Brooks CR, Taguchi K, et al. ATR proksimalnega tubula uravnava popravljanje DNK, da prepreči neprilagojene odzive na poškodbo ledvic. J Clin Investig. 2019; 129 (11): 4797–4816.

Xiaozhou Li,a,b,1 Jian Pan,a,b,1 Huiling Li,c Guangdi Li,g Bohao Liu,a,b Xianming Tang,a,b Xiangfeng Liu,f Zhibiao He,a,b Zhenyu Peng,a ,b Hongliang Zhang,a,b Luxiang Wang,a,b Yijian Li,d Xudong Xiang,a,b Xiangping Chai,a,b Yunchang Yuan,e Peilin Zheng,h in Dongshan Zhang a,b *

Oddelek za nujno medicino, Ljudska republika Kitajska

b Inštitut za nujno medicino in težke bolezni, Druga bolnišnica Xiangya, Central South University, Changsha, Hunan 410011, Ljudska republika Kitajska

c Oddelek za oftalmologijo, Ljudska republika Kitajska

d Oddelek za urinsko kirurgijo, Ljudska republika Kitajska

e Oddelek za prsno kirurgijo, Ljudska republika Kitajska

f Oddelek za splošno kirurgijo, druga bolnišnica Xiangya, Ljudska republika Kitajska

g Oddelek za javno zdravje, Central South University, Changsha, Hunan, Ljudska republika Kitajska

h Oddelek za endokrinologijo, Ljudska bolnišnica Shenzhen, Druga klinična medicinska fakulteta Univerze Jinan, Prva pridružena bolnišnica Južne univerze za znanost in tehnologijo, Shenzhen, Ljudska republika Kitajska

1 Xiaozhou Li in Jian Pan sta enako prispevala k tej študiji