Del Ⅰ: Možna pomembnost receptorja topnega luteinizirajočega hormona med razvojem in odraslostjo pri dečkih in moških
Apr 06, 2023
Preprost povzetek
Reproduktivna hormona luteinizirajoči hormon (LH) in humani horionski gonadotropin (hCG), oba agonista receptorja luteinizirajočega hormona (LHCGR), sta bistvena za moško reprodukcijo med razvojem in odraslostjo. lHCGR se izraža in stimulira proizvodnjo testosterona v testisnih Leydigovih celicah. V tej študiji dokazujemo, da je topni LHCGR prisoten v krvi, urinu in semenu zdravih dečkov in moških ter pri bolnikih z aberacijami spolnih kromosomov. Pokažemo, kako krožeče ravni sLHCGR korelirajo z razvojem v puberteti, funkcijo testisov in kakovostjo semena ter dokažemo, da se LHCGR sprošča iz fetalnega človeškega negonadnega tkiva. HCG se sprošča v serum prek testisov in drugih organov, kar kaže na možno ekstragonadalno vlogo LH ali hCG pri dečkih in moških.
Povzetek
Luteinizirajoči hormon (LH) in humani horionski gonadotropin (hCG) sta agonista receptorja luteinizirajočega hormona (LHCGR), ki uravnava moško reproduktivno funkcijo. lHCGR se lahko sprosti v telesne tekočine. Želeli smo ugotoviti, ali je topni LHCGR marker delovanja gonad. Prečne, longitudinalne in intervencijske študije so bile izvedene na 195 zdravih fantih in moških ter 396 moških z neplodnostjo, pomanjkanjem ali Klinefelterjevim sindromom (KS), da bi povezali LHCGR, izmerjen v serumu, semenu, urinu in jetrnih/ledvičnih arterijah, z delovanjem spolnih žlez. . lHCGR je bil izmerjen in vitro in in vivo na modelih človeških testisnih tkiv in celičnih linij, modelih ksenotransplantatov miši in človeški rezultati Western blota so pokazali, da so bili fragmenti LHCGR odkriti v serumu in tkivih gonad podobne velikosti z uporabo treh različnih protiteles. Celo po človeških ksenograftih LHCGR-ELISA ni pokazala medvrstne navzkrižne reaktivnosti ali nespecifičnih reakcij v mišjem serumu. V nasprotju s tem se je sLHCGR sprostil v gojišče po kulturi ledvic in nadledvične žleze človeškega ploda. Serumski sLHCGR je bil značilno nižji pri zdravih dečkih v puberteti (p=0.0001). Pri zdravih moških je bil serumski sLHCGR v negativni korelaciji z razmerjem inhibin B/FSH (-0.004, p=0.027). Pri neplodnih moških je bil sLHCGR semena v negativni korelaciji s serumskim FSH (0,006, p=0,009), koncentracijo semenčic (-3,5, p=0,003) in skupnim številom semenčic (-3.2, str=0.007). Injekcija hCG je zmanjšala sLHCGR v serumu in urinu zdravih moških (p <0,01). Skratka, sLHCGR se sprošča v telesne tekočine in je povezan z razvojem pubertete in delovanjem gonad. Krožeči sLHCGR pri samcih orhidej nakazuje, da lahko sLHCGR v serumu izvira iz negonadnih tkiv in lahko deluje v negonadnih tkivih. (Klinična preskušanja: NTC01411527, NCT01304927, NCT03418896).
Ključne besede
LH receptor; puberteta; razvoj; neplodnost;Koristi Cistanche; ekstragonadalni učinki; gonadotropini; plodova ledvica; fetalna nadledvična žleza; TCAM2; NTera2
Za nakup kliknite tukajIzvleček zeliščne cistanče
Uvod
Luteinizirajoči hormon (LH) in humani horionski gonadotropin (hCG) sta oba agonista receptorja luteinizirajočega hormona (LHCGR), ki je bistvenega pomena za moško reprodukcijo med razvojem in odraslostjo [1]. HCG je receptor, vezan na protein G, za katerega je znano, da se izraža v celicah Leydig, zrnatem luteinu in membranskih celicah ter je močan regulator proizvodnje spolnih steroidov [1]. hCG je močan in obstojen agonist, vendar je fiziološko pomemben le med razvojem ploda [2]. Razen pri nekaterih vrstah raka zarodnih celic in raka trebušne slinavke se hCG ne proizvaja v odrasli dobi, čeprav je prejšnja študija pokazala nizko utripajoče izločanje hCG iz hipofize pri odraslih moških in ženskah. hCG se uporablja za zdravljenje žensk za indukcijo ovulacije med zdravljenjem neplodnosti, za moške za spodbujanje sinteze testosterona in potencialne spermatogeneze pri hipogonadalnih moških ali kot diagnostični test za endogeno proizvodnjo testosterona [4]. Ablacija mišjega LH receptorja (LHCGR) povzroči dramatično zmanjšanje testosterona in kakovosti semena [5], več raziskovalnih skupin pa je identificiralo mutacije in SNP v LHCGR, kar dokazuje njegov pomen za človeško reproduktivno funkcijo [6-8].
Gen LHCGR se nahaja na kromosomu 2 in je sestavljen iz 11 eksonov, od katerih eksoni 1-10 kodirajo zunajcelične strukturne domene, ekson 11 pa kodira 7 transmembranskih in intracelularnih strukturnih domen [9]. Obstaja več izooblik LHCGR, ena od njih naj bi se izločala, ker nima transmembranskega sidra [10]. Druga možnost je, da je sproščanje LHCGR v telesne tekočine odvisno od encimske cepitve proteinov na celični membrani, kot so ADAM, MMP in drugi znani cepljeni transmembranski proteini. Dejansko se je pokazalo, da hCG specifično uravnava MMP-2 in MMP-9 [11,12], več študij pa je pokazalo posttranskripcijsko regulacijo LHCGR [13,14]. Topni LHCGR (LHC) je bil izmerjen v ženskem serumu in folikularni tekočini s platformo ELISA [15,16]. Specifičnost protiteles, uporabljenih v testu ELISA, je bila potrjena z izražanjem različnih fragmentov LHCGR v celicah CHO za lokalizacijo epitopa in zaznavanje izražanja v človeški placenti [15-17]. sLHCGR je bil odkrit v serumu z LC-MS/MS [18]. serumske koncentracije sLHCGR pri ženskah so bile povezane z zdravljenjem neplodnosti, preeklampsijo, prezgodnjim porodom in nosečnostjo pri otrocih z Downovim sindromom, stopnje implantacije [15,16], vendar jih druge raziskovalne skupine do danes niso potrdile. Kolikor vemo, sLHCGR ni bil nikoli opisan v telesnih tekočinah zdravih moških, mladostnikov v razvoju ali moških z aberacijami spolnih kromosomov. sLHCGR lahko deluje v moškem krvnem obtoku kot označevalec delovanja gonad s transportom vezave z visoko afiniteto ali spremembo aktivnosti LH ali hCG.
Materiali in metode
1. Kohorte
Mladi moški iz splošne populacije
Na Danskem morajo vsi zdravi mladi moški, starejši od 18 let, opraviti fizični pregled, da se ugotovi, ali so primerni za vojaško službo. Od leta 1996 je bilo vsako leto približno 300 nabornikov, ki predstavljajo splošno populacijo, pregledanih glede kakovosti semena. Vsi so dali vzorce semena, izpolnili vprašalnik, opravili ultrazvočni pregled testisov in odvzeli vzorce krvi. V trenutno študijo so bili vključeni vzorci seruma in semena iz biobanke ter ultrazvočne ocene in informacije o ITM in starosti 148 moških, anketiranih v letih 2013 in 2014 (odobritev Etičnega odbora: H-KF-289428).
Zdravi dečki pred in po puberteti
Kopenhagenska študija o mladostništvu je kombinirana presečna in longitudinalna študija zdravih danskih otrok [20]. Iz naključno izbranih javnih šol je bilo k sodelovanju povabljenih 6203 otrok. Skupno število udeležencev je bilo 2020 otrok. Longitudinalno spremljanje 209 otrok (101 deček) je bilo opravljeno vsakih 6 mesecev in je vključevalo fizični pregled, Tannerjevo oceno stopenj pubertete ter vzorce krvi in urina. V to študijo je bilo vključenih 36 dečkov z longitudinalnim spremljanjem za oceno sLHCGR med puberteto (klinično preskušanje: NTC01411527).
Neplodni moški brez resnih komorbidnosti
Copenhagen-Bone-Gonad Study je kohortna študija 307 neplodnih moških brez hudih komorbidnosti, ki so obiskovali našo moško kliniko od leta 2011 do 2015, vključno s skupno 1427 moškimi [21, 22]. Vsi moški so bili napoteni v našo ambulanto zaradi nizke kakovosti semena in želje po starševstvu. Vsi so bili podvrženi fizičnemu pregledu, vključno z ultrazvokom testisov, odvzemom krvi in vzorcem semena. Specialist je pridobil njihovo podrobno zdravstveno anamnezo. Raziskovalci so moške spremljali 150 dni in jemali vitamin D ali placebo, kot je opisano prej. Vsi podatki v tej študiji so bili iz začetnega obiska pred intervencijo in vse vključene spremenljivke so bile vnaprej določene (klinično preskušanje: NCT01304927).
Standardizirana Cistanche
Moški in fantje s Klinefelterjevim sindromom in bolniki z anorhijo
Iz naše moške klinike smo identificirali 64 dečkov in moških s Klinefelterjevim sindromom (KS), 47 v obdobju po puberteti in 16 v obdobju pred puberteto, opredeljenih po Tannerjevem stadiju. Za vse smo imeli na voljo natančne kromosomske aberacije, anamnezo, status začetka pubertete in informacije o serumu. 7 dečkov je bilo podvrženih longitudinalnemu spremljanju z redno klinično oceno in odvzemom krvi pred in med nastopom pubertete.
Vključili smo tudi 8 moških z normalnim številom kromosomov, ki so jim bila obojestransko odstranjena moda zaradi prejšnjih stanj: karcinom zarodnih celic mod (n=4), difuzni rak prostate (n=1), obojestranski kriptorhizem in pediatrična orhiektomija ( n=1), obojestranska neoplazija zarodnih celic in situ (n=1) in napredovali rak mod po odstranitvi preostalih mod zaradi travme (n=1).
Odrasli, ki opravljajo merjenje pretoka v Splanhnikusu
Vključili smo tri moške in tri ženske po menopavzi z normalnim delovanjem jeter, ki so bili sprejeti zaradi suma mezenterične ishemije in napoteni na merjenje visceralnega krvnega pretoka, vendar niso pokazali mezenterične ishemije. Vzorci krvi so bili zbrani hkrati iz jeter, ledvic, femoralne vene in ustrezne arterije (odobritev Etičnega odbora: H.18048245)
Intervencijska študija: zdravi moški, izpostavljeni človeškemu horionskemu gonadotropinu
Enajst zdravih moških je bilo izbranih za sodelovanje v klinični intervenciji z objavo danskega Rigshospitaleta. Prostovoljci so bili zdravljeni s 5000 i.e. humanega horionskega gonadotropina in njihova največja proizvodnja endogenega testosterona je bila izmerjena s primerjavo izhodiščnih vzorcev krvi in urina s kontrolnimi vzorci, zbranimi 8, 24 in 72 ur po injiciranju hCG (klinično preskušanje: NCT03418896).
2. Miši, človeško tkivo in celične linije
Dva seva človeških rakavih celic mod NTera-2 in TCam-2, ki predstavljata embrionalni karcinom oziroma seminom, sta bila uporabljena in gojena, kot je opisano prej [23].
Serumi so bili zbrani pri golih miših brez tumorja (WT) in golih miši s ksenograftom TCam-2, zdravljenih z vektorjem, LH oziroma hCG (inšpektorat za poskuse na živalih, Kopenhagen, Danska, številka licence: 2012-15-2934-00051) .
Tkiva človeškega ploda v prvem trimesečju so bila zbrana iz tkiv darovanih žensk po načrtovanih splavih. Fetalno ledvico in fetalno nadledvično tkivo smo gojili v modelih kapljic suspenzije, kot je opisano prej, in medij smo zbrali za analizo [24,25] (odobritev Etičnega odbora: H-1-2012-007).
Vzorci testisov odraslih so bili pridobljeni od ovariektomiranih moških z rakom testisov (odobritev odbora za etiko: H{{0}}). Peritumoralno tkivo, ki je vsebovalo nemaligna področja, je bilo shranjeno pri - 80◦ C ali fiksirano čez noč pri 4 ° C v formalinu ali modificiranem Stieve's-fiksatorju (200 ml 37-odstotnega formaldehida, 40 ml ocetne kisline v 1 L 0,05 M fosfata pufer, pH 7,4).
3. Biokemijske analize
Odkrivanje celotnega sLHCGR v serumu, semenu, urinu in različnih gojiščih kulture je bilo izvedeno v postopku validacije z uporabo kompletov ELISA iz New Dutch Biomarker Catalyst Laboratory (NBCL) z uporabo protitelesa LHR029 proti človeškemu LHCGR in merjenjem vseh od teh večkrat. test ELISA je imel mejo zaznavnosti 0,01 pmol/mL in najvišjo raven 15,55. Šestim moškim iz splošne populacije z ravnmi sLHCGR nad zgornjo mejo zaznavnosti so vzorce razredčili in ponovno izmerili ter pokazali ravni do 30 pmol/mL. delovanje platforme ELISA je bilo podrobno opisano prej [15-17].
Cistanche dodatki
Postavili smo tudi dva različna interna testa ELISA, ki so ju postavili naši laboratorijski tehniki, vse nadaljnje reagente pa je zagotovil Origin Biomarkers Ltd, Združeno kraljestvo, v skladu z njihovo predlagano nastavitvijo [26]. Najprej je bil odkrit sLHCGR v obtoku, vezan na hCG, s kompleti sendvič ELISA s protitelesi 5A10C9 (ProMab) in am0{{20}}904pun ( OriGene), usmerjen proti LHCGR oziroma hCG. Drugič, na podoben način smo uporabili interni test ELISA za določitev skupnih arterijskih in venskih vzorcev jeter, ledvic in spodnjih okončin pri šestih odraslih sLHCGR, kjer smo uporabili isto protitelo LHR029 (NBCL Nizozemska) proti sLHCGR. Testirana sta bila dva različna protokola. Vse meritve sLHCGR, opisane v tem dokumentu, so bile izvedene z uporabo NBCL ELISA, razen za kompleks hCG-sLHCGR in arterijske/venske vzorce iz zgoraj opisanih organov. Pri zdravih dečkih je bil testosteron analiziran s kompletom RIA, prevlečenim z DPC (Diagnostic Products, Los Angeles, CA) z mejo zaznave (LOD) 0,23 nmol/L in CV 8,6 odstotka z uporabo časovno ločljive imunofluorescence. (Delfia; Wallac, Turku, Finska), je bila meja zaznavnosti 0,20 nmol/l s CV 6,4 odstotka. Pri odraslih so testosteron in globulin, ki veže spolne hormone (SHBG), analizirali s kemiluminiscenčnim imunskim testom (Access, Beckman Coulter, ZDA) z LOD 0,35 nmol/L oziroma 0,33 nmol/L. Ravni FSH in LH v serumu in urinu so bile izmerjene s časovno ločljivo imunofluorescenco (Delfia; Wallac, Turku, Finska) z mejami detekcije 0,06 oziroma 0,05 IU/L ter CV in lt; oboje po 5 odstotkov. Test inhibina B je bil izveden s specifičnim dvostranskim encimskim imunskim testom (inhibin B genII, Beckman Coulter, ZDA) CV <11 odstotkov. Za AMH smo uporabili encimski imunski test Beckman Coulter (Immunotech, Beckman Coulter, Marseille, Francija) in CV <8 odstotkov. Končno sta bila IGF1 in IGF-BP3 določena z uporabo kemiluminescenčnega testa imunodiagnostičnega sistema IDS-iSYS s CV 10 oziroma 9 odstotkov. Prosti estradiol je bil izračunan z uporabo Mazerjeve konstante, prosti testosteron (FT) pa z uporabo Vermeulenove formule [27, 28].
Analiza semena
Zdravi mladi moški in neplodni odrasli udeleženci so zagotovili vzorce semena in pridobili podatke o trajanju ejakulacijske abstinence, o katerih so poročali sami. Analizo semena so opravili usposobljeni tehniki, kot je opisano prej [19]. Količina semena je bila ocenjena s tehtanjem. Za oceno sposobnosti preživetja sperme smo 10 μl dobro premešanih ponovitev semena dali na objektna stekelca in pregledali pod mikroskopom × 400x pri ogrevanem odseku 37 °C. Spermo smo razvrstili kot napredovalo preživetje (razred WHO a plus B), neprogresivno preživetje (razred C) ali neaktivno (razred D). Uporabljeno je bilo povprečje obeh ocen sposobnosti preživetja. Za oceno koncentracije sperme so bili vzorci razredčeni v raztopini destilirane vode 0,6 mol/L NaHCO3 in 0,4 odstotka (v/v) formaldehida in nato ovrednoteni s hemocitometrom Bürker-Türk ter uporabljeno povprečje ocen. Prešteli so samo semenčice z repki. Na koncu so pripravili brise in jih obarvali z madežem Papa in ovrednotili morfologijo sperme strogo v skladu z merili [29].
Western Blotting
Tkivo človeških testisov smo homogenizirali v pufru za lizo, razredčili v pufru za nalaganje SDS in nato segrevali pri 95 ° C 5 minut. Vzorci so bili naloženi na 4-20 odstotkov montažnih poliakrilamidnih gelov (BioRad, kat. št. 456-8096) in 1 uro delovali pri 100 V za ločevanje beljakovin. Za odkrivanje sLHCGR v serumu smo odstranili albumin in IgG s Pierceovim kompletom za odstranjevanje albumina/IgG (Thermo Scientific, Waltham, MA, ZDA, kat. št. 89875) pred nalaganjem vzorcev na gel. po gelski elektroforezi smo proteine prenesli na poliviniliden difluoridne membrane z uporabo mokrega blotterja (BioRad). Membrane smo 1 uro zaprli v tris-pufrano fiziološko raztopino in 5-odstotno posneto suho mleko, nato pa jih inkubirali čez noč pri 4 °C s primarnimi protitelesi in 1 uro pri RT s sekundarnimi protitelesi. Membrane so bile oprane z izboljšano kemiluminiscenco (Thermo Scientific Super Signal West Femto Maximum Sensitive Substrate, Cat # 34095) in fotodetektorjem s sistemom za slikanje chemiDoc MP (BioRad, Cat # 17001402). Za odkrivanje LHCGR v tkivu in serumu so bila uporabljena tri različna protitelesa: Aviva System Biology (OASG04237); NBCL Holland, enako protitelo kot v serumskem kompletu ELISA (LHR029) in Santa Cruz Biotechnology (Dallas, TX, ZDA, SC- 26341). -2 mikroglobulin je bil uporabljen kot kontrola obremenitve.
Imunohistokemija
Imunohistokemijo smo izvedli, kot je opisano prej [25]. Na kratko, odseki so bili fiksirani z modificiranim trdnim fiksativom, razvoskani in rehidrirani. Ekstrakcijo antigena smo izvedli v avtoklavu, ki je vseboval citratni ekstrakcijski pufer (10 mM, pH 6.0). Endogeno peroksidazo smo 30 minut blokirali s 3 odstotki (v/v) H2O2 v metanolu. Med vsakim korakom smo odseke sprali v TBS. Odseke smo 30 minut inkubirali z 0,5-odstotnim konjskim serumom BSA, čemur je sledila inkubacija čez noč z dvema različnima primarnima protitelesoma 1 uro pri sobni temperaturi (LHR029 za WB/ELISA, Santa Cruz Biotechnology SC- 25828). Odseke smo 30 minut inkubirali s sekundarnimi protitelesi. Slike so bile vizualizirane z aminoetil karbazolom (AEC, Invitrogen, Life Technologies/Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, ZDA). Negativne kontrole so bile brez primarnih protiteles. Nobena od negativnih kontrol ni bila obarvana. Kontrabarvanje je bilo izvedeno z Mayerjevim hematoksilinom, montaža pa z Aquatexom. Reze so bile ocenjene na mikroskopu Nikon Microphot-FXA (Nikon Corporation, Melville, NY, ZDA). Končna analiza je bila izvedena s programsko opremo NDPview različice 1.2.36 (Hamamatsu Photonics, Iwata City, Japonska).
Koristi izvlečka Cistanche za ledvice
REFERENCE
1. Dufau, ML Receptor luteinizirajočega hormona. Annu. Rev. Physiol. 1998, 60, 461–496.
2. Rao, CV Diferencialne lastnosti vezave humanega horionskega gonadotropina in humanega luteinizirajočega hormona na plazemske membrane rumenega telesca goveda. Acta Endocrinol. 1979, 90, 696–710.
3. Odell, WD; Griffin, J. Pulsativno izločanje humanega horionskega gonadotropina pri normalnih odraslih. N. angl. J. Med. 1987, 317, 1688–1691.
4. Bang, AK; Nordkap, L.; Almstrup, K.; Priskorn, L.; Petersen, JH; Rajpert-De Meyts, E.; Andersson, A.-M.; Juul, A.; Jørgensen, N. Dinamično testiranje GnRH in hCG: Vzpostavitev novih diagnostičnih referenčnih ravni. EUR. J. Endocrinol. 2017, 176, 379–391.
5. Zhang, FP; Poutanen, M.; Wilbertz, J.; Huhtaniemi, I. Normalni prenatalni, vendar aretirani postnatalni spolni razvoj miši z izločitvijo receptorjev luteinizirajočega hormona (LuRKO). Mol. Endocrinol. 2001, 15, 172–183.
6. Bruysters, M.; Christin-Maitre, S.; Verhoef-Post, M.; Sultan, C.; Auger, J.; Faugeron, I.; Larue, L.; Lumbroso, S.; Themmen, APN; Bouchard, P. Nova mutacija spoja receptorja LH je odgovorna za moški hipogonadizem s subnormalno proizvodnjo sperme v propositu in neplodnost z rednimi cikli pri prizadeti sestri. Hum. Reprod. 2008, 23, 1917–1923.
7. Latronico, AC; Arnhold, IJP Inaktiviranje mutacij receptorja človeškega luteinizirajočega hormona pri obeh spolih. Semin. Reprod. med. 2012, 30, 382–386.
8. Simoni, M.; Tüttelmann, F.; Michel, C.; Böckenfeld, Y.; Nieschlag, E.; Gromoll, J. Polimorfizmi gena receptorja luteinizirajočega hormona/horionskega gonadotropina: povezava z napačno spuščenimi testisi in moško neplodnostjo. Pharmacogenet. Genom. 2008, 18, 193–200.
9. Ascoli, M.; Fanelli, F.; Segaloff, DL Lutropin/horiogonadotropin receptor, perspektiva iz leta 2002. Endocr. Rev. 2002, 23, 141–174.
10. Tena-Sempere, M.; Zhang, FP; Huhtaniemi, I. Vztrajna ekspresija skrajšane oblike ribonukleinske kisline messenger receptorja luteinizirajočega hormona v testisih podgan po selektivnem uničenju celic Leydig z etilen metan sulfonatom. Endokrinologija 1994, 135, 1018–1024.
11. Fluhr, H.; Bischof-Islami, D.; Krenzer, S.; Licht, P.; Bischof, P.; Zygmunt, M. Človeški horionski gonadotropin stimulira matrične metaloproteinaze-2 in -9 v citotrofoblastnih celicah in zmanjša tkivne zaviralce metaloproteinaz-1, -2 in -3 v decidualiziranih stromalne celice endometrija. Fertil. Sterilno. 2008, 90, 1390–1395.
12. Licht, P.; Fluhr, H.; Neuwinger, J.; Wallwiener, D.; Wildt, L. Ali je človeški horionski gonadotropin neposredno vključen v regulacijo človeške implantacije? Mol. Celica. Endocrinol. 2007, 269, 85–92.
13. Li, Y.-X.; Guo, X.; Gulappa, T.; Menon, B.; Menon, KMJ SREBP igra regulativno vlogo pri ekspresiji mRNA receptorja LH/hCG v celicah človeškega granuloze-luteina. J. Clin. Endocrinol. Metab. 2019.
14. Menon, KMJ; Menon, B.; Wang, L.; Gulappa, T.; Harada, M. Molekularna regulacija izražanja gonadotropinskega receptorja: Povezava s presnovo sterola. Mol. Celica. Endocrinol. 2010, 329, 26–32.
15. Chambers, AE; Griffin, C.; Naif, SA; Mills, I.; Mills, WE; Syngelaki, A.; Nicolaides, KH; Banerjee, S. Kvantitativni testi ELISA za serumski topni LHCGR in kompleks hCG-LHCGR: potencialna diagnostika pri presejanju nosečnosti v prvem trimesečju za mrtvorojenost, Downov sindrom, prezgodnji porod in preeklampsijo. Reprod. Biol. Endocrinol. 2012, 10, 113.
16. Chambers, AE; Nayini, KP; Mills, WE; Lockwood, GM; Banerjee, S. Receptor LH/hCG v obtoku (LHCGR) lahko identificira bolnike pred zdravljenjem z IVF, pri katerih obstaja tveganje za OHSS in slabo implantacijo. Reprod. Biol. Endocrinol. 2011, 9, 161.
17. Chambers, AE; Stanley, PF; Randeva, H.; Banerjee, S. Sproščanje topnega receptorja LH/hCG (LHCGR), posredovano z mikrovezikli, iz transficiranih celic in eksplantatov placente. Reprod. Biol. Endocrinol. 2011, 9, 64.
18. Gao, HJ; Chen, YJ; Zuo, D.; Xiao, MM; Li, Y.; Guo, H.; Zhang, N.; Chen, RB Kvantitativna proteomska analiza za visoko zmogljivo presejanje diferencialnih glikoproteinov v serumu hepatocelularnega karcinoma. Cancer Biol. med. 2015, 12, 246–254.
19. Priskorn, L.; Nordkap, L.; Bang, AK; Krause, M.; Holmboe, SA; Egeberg Palme, DL; Winge, SB; Mørup, N.; Carlsen, E.; Joensen, ZN; et al. Povprečno število semenčic ostaja nespremenjeno kljub zmanjšanju maternega kajenja: rezultati obsežne presečne študije z letnimi preiskavami v 21 letih. Hum. Reprod. 2018, 33, 998–1008.
20. Sørensen, K.; Aksglaede, L.; Petersen, JH; Juul, A. Nedavne spremembe v času pubertete pri zdravih danskih dečkih: povezave z indeksom telesne mase. J. Clin. Endocrinol. Metab. 2010, 95, 263–270.
21. Blomberg Jensen, M.; Lawaetz, JG; Petersen, JH; Juul, A.; Jørgensen, N. Učinki dodatka vitamina D na kakovost semena, reproduktivne hormone in živo rodnost: randomizirano klinično preskušanje. J. Clin. Endocrinol. Metab. 2018, 103, 870–881.
22. Blomberg Jensen, M.; Gerner Lawaetz, J.; Andersson, A.-M.; Petersen, JH; Nordkap, L.; Bang, AK; Ekbom, P.; Joensen, ZN; Prætorius, L.; Lundstrøm, P.; et al. Pomanjkanje vitamina D in nizka vsebnost ioniziranega kalcija sta povezana s kakovostjo semena in ravnmi spolnih steroidov pri neplodnih moških. Hum. Reprod. 2016, 31, 1875–1885.
23. Lorenzen, M.; Nielsen, JE; Andreassen, CH; Juul, A.; Toft, BG; Rajpert-De Meyts, E.; Daugaard, G.; Blomberg Jensen, M. Receptor luteinizirajočega hormona je izražen v tumorjih zarodnih celic mod: možne posledice za rast in prognozo tumorja. Raki 2020, 12, 1358.
24. Eldrup, E.; Theilade, S.; Lorenzen, M.; Andreassen, CH; Poulsen, KH; Nielsen, JE; Hansen, D.; El Fassi, D.; Berg, JO; Bagi, P.; et al. Hiperkalciemija po injekcijah kozmetičnega olja: razkritje etiologije, patogeneze in resnosti. J. Kostni rudar. Res. 2020, 36, 322–333.
25. Jørgensen, A.; Macdonald, J.; Nielsen, JE; Kilcoyne, KR; Perlman, S.; Lundvall, L.; Langhoff Thuesen, L.; Juul Hare, K.; Frederiksen, H.; Andersson, A.-M.; et al. Nodalna signalizacija uravnava razvoj zarodnih celic in vzpostavitev semenskih vrvic v testisih človeškega ploda. Cell Rep. 2018, 25, 1924–1937.e4.
26. Chambers, AE; Fairbairn, C.; Gaudoin, M.; Mills, W.; Woo, I.; Pandian, R.; Stanczyk, FZ; Chung, K.; Banerjee, S. Topni receptor LH-HCG in estradiol kot napovedovalci nosečnosti in živo rojstvo pri IVF. Reprod. Biomed. Online 2019, 38, 159–168.
27. Vermeulen, A.; Verdonck, L.; Kaufman, JM. Kritična ocena preprostih metod za oceno prostega testosterona v serumu. J. Clin. Endocrinol. Metab. 1999, 84, 3666–3672.
28. Mazer, NA Nova metoda preglednic za izračun prostih serumskih koncentracij testosterona, dihidrotestosterona, estradiola, estrona in kortizola: z ilustrativnimi primeri iz moške in ženske populacije. Steroidi 2009, 74, 512–519.
29. Menkveld, R.; Stander, FS; Kotze, TJ; Kruger, TF; van Zyl, JA Vrednotenje morfoloških značilnosti človeških semenčic po strožjih kriterijih. Hum. Reprod. 1990, 5, 586–592.
Li Juel Mortensen1, Mette Lorenzen1, Anne Jørgensen2, Jakob Albrethsen2, Niels Jørgensen2,Søren Møller3,4, Anna-Maria Andersson2, Anders Juul2,4in Martin Blomberg Jensen1,5
1. Skupina za skeletno, mineralno in gonadno endokrinologijo, Univerzitetni oddelek za rast in reprodukcijo, Rigshospitalet, 2100 Kopenhagen, Danska; li.juel.mortensen@regionh.dk (LJM); mette.lorenzen.01@regionh.dk (ML)
2. Oddelek za rast in razmnoževanje ter Mednarodni center za raziskave in raziskovalno usposabljanje na področju endokrinih motenj pri moški reprodukciji in zdravju otrok (EDMaRC), Rigshospitalet, Univerza v Kopenhagnu, Blegdamsvej 9, 2100 Kopenhagen, Danska; Anne.Joergensen.02@regionh.dk (AJ); Jakob.Christian.Albrethsen@regionh.dk (JA); Niels.Joergensen@regionh.dk (NJ); Anna-Maria.Andersson@regionh.dk (A.-MA); Anders.Juul@regionh.dk (AJ)
3. Center za funkcionalno in diagnostično slikanje in raziskave, Oddelek za klinično fiziologijo in nuklearno medicino 260, bolnišnica Hvidovre, 2650 Kopenhagen, Danska; Soeren.Moeller@regionh.dk
4. Oddelek za klinično medicino, Fakulteta za zdravstvene vede, Univerza v Kopenhagnu, 2200 Kopenhagen, Danska
5. Oddelek za raziskave kosti in mineralov, Harvard School of Dental Medicine/Harvard Medical School, Boston, MA 02115, ZDA
