Fenolne sestavine z antioksidativnim delovanjem, zaviranjem tirozinaze in delovanjem proti staranju iz Dendrobium Loddigesii Rolfe

Povzetek

Vodni etanolni ekstrakti stebel Dendrobium loddigesii v prahu so dali tri nove fenole, vključno s tremi-7-O-etil-9-O-(4-hidroksifenil)propionil-diacilglicerolom (1), (R){{ 7}},5,4′-trihidroksi-3,3′, -trimetoksibibenzil (2) in (S)-5,5′,7-trihidroksi-3′,4′ -dimetoksifavanon (3), skupaj z enajstimi znanimi analogi. Njihove strukture so bile določene z obsežno spektroskopsko analizo. Za identifikacijo naravnih antioksidantov, belilnih sredstev in sredstev proti staranju so ocenili sposobnost teh fenolov za lovljenje radikala 1,2-difenil-2-pikrilhidrazil (DPPH), njihovo sposobnost zaviranja proizvodnje tirozinaze in njihove sposobnosti za spodbujanje proizvodnje kolagena s testom človeških dermalnih fibroblastov za odrasle (HDFa). Ugotovljeno je bilo, da so spojine 1, 4–8, 13 in 14 pokazale pomembno aktivnost lovljenja radikalov DPPH, spojina 10 je pokazala inhibitorno aktivnost tirozinaze (IC50 37.904 ug/mL), spojina 9 pa je pokazala znatno proizvodnjo kolagena z vrednost EC50 3,182 ug/mL. Ti rezultati kažejo, da so fenolne sestavine iz D. loddigesii lahko kandidati za antioksidante, sredstva za beljenje kože in/ali sredstva proti staranju.

Glede na ustrezne študije,cistancheje pogostazeliščeki je znana kot "čudežna rastlina, ki podaljšuje življenje". Njegova glavna sestavina jecistanozid, ki ima različne učinke kot nprantioksidant, protivnetno, inspodbujanje imunske funkcije. Mehanizem med cistančo inbeljenje kožese skriva v antioksidativnem učinkucistanski glikozidi. Melanin v človeški koži nastaja z oksidacijotirozinkatalizira tirozinaza, oksidacijska reakcija pa zahteva sodelovanje kisika, zato radikali brez kisika v telesu postanejo pomemben dejavnik, ki vpliva na proizvodnjo melanina. Cistanche vsebuje cistanozid, ki je antioksidant in lahko zmanjša nastajanje prostih radikalov v telesu.zaviranje proizvodnje melanina.

cistanche supplement review

Kliknite na dodatek Cistanche Tubulosa

Za več informacij:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Grafični povzetek

cistanche nedir

Ključne besedeDendrobium loddigesii · Fenolne sestavine · Antioksidativno · Zavira tirozinazo · Zavira staranje

1. Uvod

Rod Dendrobium (Orchidaceae) obsega približno 1500 vrst po vsem svetu, od tega približno 80 vrst raste na Kitajskem [1]. Stebla več rastlin iz tega rodu so znana kot "Shi-Hu", ki se že tisočletja uporabljajo kot tradicionalna kitajska medicina in ljudska zdravila za zdravljenje kroničnega atrofičnega gastritisa, staranja kože, vročine, bolezni srca in ožilja ter tonik za pospeševanje proizvodnje telesnih tekočin [2]. Prejšnje študije tega rodu so privedle do izolacije vrste polisaharidov, fenolnih spojin, alkaloidov in seskviterpenoidov [1, 3–5], od katerih imajo nekateri različne biološke aktivnosti, vključno s protivnetnimi [6], protimikrobnimi [2] in antioksidativnimi [7], protitumorsko [8], proti agregaciji trombocitov [9], imunomodulatorno [10] in proti gripi A [11].

Dendrobium loddigesii, trajna epifitska zel, je široko razširjena na jugozahodnem območju Kitajske, kot so province Guangxi, Guizhou in Yunnan [12]. Njegovo steblo se v ljudski medicini uporablja za zdravljenje gastritisa, vročine in omotice [13]. V nadaljevanju iskanja strukturno raznolikih in biološko aktivnih naravnih produktov iz tega rodu [1, 5, 14–17] smo tukaj izvedli poglobljeno raziskavo farmakološko aktivnih sestavin te rastlinske vrste. Posledično so iz 80-odstotnega etanolnega ekstrakta stebla D. loddigesii izolirali tri nove fenolne spojine (1–3) in enajst znanih (slika 1). Tu so predstavljeni izolacija, pojasnitev strukture in biološka ocena teh spojin.

does cistanche work

2 Rezultati in razprava

Spojina 1, dobljena kot bela trdna snov, je dala molekulsko formulo C21H26O7, kot je določeno z (-)-HRESIMS ionom pri m/z 389,1602 [M−H]− (izračunano za C21H25O7, 389,16{{ 28}}6) z devetimi stopnjami nenasičenosti. 1H NMR spekter 1 vsebuje sedem aromatskih protonov pri δH 6,85 (1H, d, J=1,7 Hz), 6,75 (1H, d, J=8,0 Hz), 6,68 (1H , dd, J = 8.0, 1.7 Hz), 7.01 (2H, d, J = 8.5 Hz) in 6.68 (2H, d, J = 8.5 Hz), kar kaže na prisotnost 1,3,4-trisubstituiranega benzenovega obroča in 1,4-disubstituiranega benzenovega obroča. Njegov 13C NMR spekter je pokazal 21 ogljikovih resonanc, vključno z dvema metiloma (enim metoksi), štirimi alifatskimi metileni, devetimi metini (dva sp3, sedem sp2) in šestimi kvarternimi ogljikovimi atomi (enim karbonilnim, petimi olefinskimi, vključno s tremi oksigeniranimi). Korelacije HMBC (slika 2) H-7/C-1 (δC 131,6), C-2 (δC 111,7), C-6 (δC 121,4), C -8 (δC 74,2) in C-10 (δC 65,3); H-9/C-7 (δC 83,8) in C-8 (δC 74,2); H-10/C-11 (δC 15,6); 3-OMe (δH 3,81)/C-3 (δC 149,1), skupaj s korelacijami H-7/H-8/H2-9 in H{{ 87}}/H3-11 iz 1 H–1 H COSY spektra (slika 2) je pokazal prisotnost 7-O-etilgvajacilglicerola [18]. Poročalo se je, da je bil J7,8 približno 5 Hz za eritro izomer in 7 Hz za tri izomere v primerih injekcijskih glicerolov in diacilglicerolnih derivatov. Tako je bila spojina 1 obravnavana kot trije izomeri z J7,8 (6,5 Hz) [18]. Korelacije HMBC za H-7' (δH 2,79, t, J = 7,5 Hz)/C-8' (δC 37,1), C-1' (δC 132,7), C-2', 6' (δC 130,2) in C-9' (δC 174,6), H-8' (δH 2,59, t, J = 7,5 Hz)/C-7' (δC 31,0), C-1' in C-9', skupaj z navedenimi navzkrižnimi vrhovi COSY H-8'/H-7' prisotnost p-hidroksikumarne kisline [19]. Na podlagi zgoraj opisanih dokazov je bilo predlagano, da ima 1 7-O-etilgvajacilglicerolni del in p-hidroksi-kumarno kislino preko estrske povezave. Korelacija HMBC od H-9 do C-9' je pokazala, da je estrska povezava med C-9 in C-9'. Tako je bila struktura 1 določena, kot je prikazano.

(R){{0}},5,4'-trihidroksi-3,3',-trimetoksibibenzil (2) smo dobili kot belo trdno snov. Spekter HRESIMS 2 je pokazal kvazimolekularni ionski vrh pri m/z 319,1180 [M−H]− (izračunano za C17H19O6, 319,1187) z 8 stopnjami nenasičenosti. 1H NMR spekter 2 je pokazal tri metoksilne skupine pri δH 3,75 (3H, s), 3,70 (3H, s) in 3,17 (3H, s); en proton oksigeniranega metina pri δH 4,13 (1H, t, J=6,8 Hz, H-); dva metilenska signala pri δH 2,73 (1H, dd, J=13,5, 6,9 Hz) in 2,96 (1H, dd, J=13,5, 6,9 Hz); in pet aromatskih protonov, ki se pojavljajo kot 1,3,4,5-tetrasubstituiran aromatski obroč pri δH 6,28 (1H, d, J=1.8 Hz) in 6,34 (1H, d, J{{ 60}},8 Hz) in 1,3,4-trisubstituiran aromatski obroč pri δH 6,49 (1H, d, J=2,0 Hz), 6,62 (1H, d, J =8.0 Hz) in 6,52 (1H, dd, J = 8.0, 2.0 Hz). Spektra 13CNMR in DEPT 2 sta pokazala tri oksimetilene, en metilen, en oksigeniran metin in 12 aromatskih ogljikov (pet oksigeniranih). Primerjava njegovih podatkov NMR (tabela 1) s tistimi za dendrokandin C [20] je pokazala velike podobnosti, razen prisotnosti še ene metoksilne skupine, ki je bila locirana pri C-3' s korelacijami HMBC od 3'-OMe in H-5' do C-3ʹ (δC 148,4). Poleg tega večkratne interakcije HMBC (slika 2) 3-OMe in H-2/C-3 (δC 149,5); -OMe/C- (δC 86,9) je predlagal druge metoksilne skupine pri C-3 oziroma C-. Absolutna konfiguracija pri C- je bila določena kot R na podlagi negativne optične rotacije ([훼] 26 D –12,46), podobno kot afilni D [훼] 20 D –20,3, MeOH) [15]. V skladu s tem je bila struktura 2 določena, kot je prikazano.

desert cistanche benefits

(S){{0}},7,5'-trihidroksi-3',4'-dimetoksifavanon (3) je bil pridobljen kot rumen amorfen prah in je imel molekularno C17H16O7 (1{{69} } indeksi pomanjkanja vodika) glede na (−)-HRESIMS ion pri m/z 331,0819 [M – H]− (izč. 331,0823). Maksimum UV absorpcije pri 206 in 294 nm kaže na prisotnost flavanona [21]. 1 H NMR spekter (tabela 1) je pokazal tri signale v nearomatskem območju, postavljenem pri δH 5,29 (1H, dd, J=12.7, 3,1, H-2), 3,04 (1H, dd, J=17.1, 12,7, H-3ax) in 2,71 (1H, dd, J=17.1, 3,1, H-3 eq), štiri aromatski protoni δH 5,87 (1H, d, J=2.2, H-6), 5,91 (1H, d, J=2.2, H-8), 6,62 (1H, d, J=2.0, H-2ʹ) in 6,61 (1H, d, J=2.0, H-6ʹ), dve metoksilni skupini δH 3,83 (3H, s) in 3,77 (3H, s). 13C NMR in DEPT spektra (tabela 1) vsebujeta resonance za 17 ogljikov, vključno z dvema metoksima, enim metilenom, enim metinom, enim karbonilnim ogljikom in 12 aromatskimi ogljiki. Obsežna analiza njegovih podatkov NMR je pokazala, da je njegova planarna struktura tesno povezana s strukturo dihidrotricina [22], razen da sta bili resonanci OH-4' in OCH3-5' v dihidrotricinu preneseni v 3. To je potrdil navzkrižni HMBC vrhovi (slika 2) od H-2', H-6' in OCH3-4' do C-4' (δC 137,7), od H-6' do C-5' (δC 151,8). Absolutna konfiguracija pri C-2 je bila domnevno v S-obliki na podlagi negativne vrednosti specifične rotacije (– 46,64, MeOH) v njegovi optični rotaciji [23]. Zato je bila struktura spojine 3 tako nedvoumno dodeljena, kot je prikazano.

Za enajst znanih spojin je bilo ugotovljeno, da so trepidacija 4 [24], meskalin 5 [25], 4,5,4'-trihidroksi- 3,3'-dimetoksibibenzil 6 [26], 4',5- dihidroksi-3,3′-dimetoksibibenzil 7 [27], Tristin 8 [28], batata v III 9 [27], 3,5,3′-hidroksibibenzil 10 [29], afilni C 11 [15], dentiform A 12 [30], dihidrokoniferil dihidro-p-kumarat 13 [31], p-hidroksifenil trans-ferulat 14 [32] s spektroskopsko analizo in primerjavo njihovih spektralnih podatkov z literaturo.

cistanche and tongkat ali reddit

Fenolne spojine so bistveni del človeške prehrane in so znane kot močni antioksidanti zaradi močnega delovanja na prekinitev verige in lahko neposredno prispevajo k antioksidativni aktivnosti [33]. Preizkus ločevanja radikalov DPPH je ena najpogostejših in relativno hitrih metod, ki se uporabljajo za ocenjevanje antioksidativne aktivnosti. Spojine, ki lahko oddajo vodikov atom radikalu DPPH in nato povzročijo reducirano obliko DPPH, bodo obravnavane kot potencialni antioksidanti. Vse spojine so bile ovrednotene glede na njihovo aktivnost odstranjevanja radikalov DPPH. Sedanji rezultati (tabela 2) so pokazali, da je večina fenolnih spojin (1, 4–8, 13 in 14) pokazala pomembne aktivnosti z zmogljivostjo čiščenja v razponu od 89,411 do 94,278 odstotka pri 100 ug/mL.

Po drugi strani pa je tirozinaza encim, ki vsebuje baker in ima ključno vlogo pri nadzoru poti biosinteze melanina v melanocitih [34]. Zato so zaviralci tirozinaze postali pomembna sestavina kozmetičnih izdelkov ali zdravil za hiperpigmentacijo in pripravkov za beljenje kože. V tej študiji je bilo pri vseh izolatih ovrednoteno njihovo inhibitorno delovanje na tirozinazo (tabela 2). Kojična kislina, domnevno sredstvo za posvetlitev kože, je bila uporabljena kot pozitivna kontrola. 3,5,3'-hidroksibibenzil (10) je pokazal pomembno inhibitorno aktivnost z vrednostjo IC50 37,904 ug/mL. Aphyllals C (11) je pokazal zmerno inhibicijo (IC50, 152,56 ug/mL). Vse preostale spojine so bile neaktivne pri koncentracijah do 200 ug/mL. V tej študiji je mogoče sklepati, da sta spojini 10 in 11 lahko potencialna kandidata za zdravljenje kožnih bolezni, povezanih z biosintezo melanina.

cistanche gnc

Glede na to, da se ta vrsta uporablja v medicini za staranje kože, saj je kolagen ključnega pomena za moč in elastičnost kože, njegova razgradnja pa vodi do gub, ki spremljajo staranje [35]. Zato so bile vse spojine tudi namenoma ovrednotene glede njihovih učinkov na proizvodnjo kolagena v HDFa. Rezultati (tabela 2) so pokazali, da spojina 9 znatno stimulira aktivnost proizvodnje kolagena HDFa (EC50 3.182 ug/mL). Spojini 6 in 7 sta pokazali šibkejšo aktivnost, s proizvodnjo kolagena 33,062 odstotka oziroma 29,157 odstotka pri 10 ug/mL. Sedanji rezultati niso samo podprli etnofarmakološke uporabe D. loddigesii, ampak so zagotovili tudi zanesljivo strukturno predlogo za razvoj bolezni, povezanih s pomanjkanjem kolagena, kot so opekline in razjede.

3 Eksperimentalno

3.1 Splošni eksperimentalni postopki

Optična rotacija je bila pridobljena na digitalnem polarimetru JASCO P-1020 (Horiba, Tokio, Japonska). UV-spektre smo izmerili s spektrofotometrom Shimadzu UV-2401 PC (Shimadzu, Kyoto, Japonska). IR spektri so bili pridobljeni na infrardečem spektrofotometru Bruker Tensor 27 (Bruker Optics GmbH, Ettlingen, Nemčija) s peleti KBr. Masni spektri so bili izvedeni na API QSTAR spektrometru za merjenje časa boja (MDS Sciqaszex, Concord, Ontario, Kanada) in spektrometru LCMSIT-TOF (Shimadzu, Kyoto, Japonska). NMR spektri so bili posneti na instrumentih DRX-500 in Av III-600 s TMS kot internim standardom (Bruker, Bremerhaven, Nemčija). Kemični premiki so bili podani v δ (ppm) glede na signal topila. Kolonska kromatografija je bila izvedena na silikagelu (200–300 in 300–400 mesh, Qingdao Marine Chemical Inc., Qingdao, Kitajska), gelu Lichroprep RP-18 (40–63 μm, Merck, Darmstadt, Nemčija), MCI gel CHP-20P (75–150 μm, Mitsubishi Chemical Corp., Tokio, Japonska), Sephadex LH-20 (20–150 μm, Amersham Biosciences, Uppsala, Švedska) in YMC*GEL ODS -AHG (50 μm, YMC Co. Ltd. Japonska). Frakcije smo spremljali s TLC, lise pa vizualizirali z UV svetlobo in poškropili z 10 odstotki H2SO4 v EtOH, čemur je sledilo segrevanje. 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil (DPPH), Trolox, gobja tirozinaza, L-Dopa in Kojična kislina so bili kupljeni pri Sigmi (ZDA); Transformacijski rastni faktor beta (TGF-) je bil pridobljen od Peprotech (ZDA); Gojišča za rast DMEM (visoka glukoza z L-glutom), Hankova uravnotežena raztopina soli, fetalni goveji serum so bili kupljeni pri HyClone (ZDA); Prokolagenski peptidni ELISA komplet je bil pridobljen pri TaKaRa (Japonska). Vse druge kemikalije in topila so bile analitske kakovosti.

cistanche bienfaits

3.2 Rastlinski material

Stebla D. loddigesii so bila zbrana septembra 2014 v mestu Wenshan, provinca Yunnan, Ljudska republika Kitajska, identificiral pa jih je profesor Hong Yu (Univerza Yunnan, Kunming, Ljudska republika Kitajska). Vzorec vavčerja (št. 20.140.829) je bil deponiran v Državnem ključnem laboratoriju za fitokemijo in rastlinske vire v Zahodni Kitajski, Inštitut za botaniko Kunming, Kitajska akademija znanosti.

3.3 Ekstrakcija in izolacija

Posušena in v prah zmleta stebla (10.2 kg) D. loddigesii smo trikrat ekstrahirali z 80 odstotnim etanolom pri sobni temperaturi in koncentrirali pri znižanem tlaku. Nato smo ostanek suspendirali v H2O in porazdelili z EtOAc, da smo dobili frakcijo EtOAc (220 g), ki smo jo podvrgli kolonski kromatografiji s silikagelom, eluirano z gradientom petrol etra/acetona (15:1 do { {110}}:1), da dobimo 22 ulomkov (Fr.1–22). Fr.11 (6 g) smo izpostavili CC na silikagelu, eluiranem s CHCl3/MeOH (300:1), čemur je sledila kolona MCI (gradient MeOH/H2O, 60:40–95:5) in CC na silikagelu (CHCl3/ MeOH, 200:1), da dobimo 12 (4 mg). Fr.13 (850 mg) smo ločili preko kolone MCI (MeOH/H2O, 60:40 do 95:5), da smo dobili pet frakcij (Fr.13.1–Fr.13.5). Fr.13.4 (150 mg) je dal spojini 4 (3 mg) in 5 (5 mg) s HPLC pripravo (MeOH/H20, 60:40). Fr.16 (19 g) smo kromatografirali na koloni silikagela z eluacijo s CHCl3/MeOH (100:1 do 20:1), da smo dobili 6 podfrakcij (Fr.16.1–Fr.16.6). Fr.16.4 (2,3 g) smo nanesli MCI kolono, eluirano z MeOH/H2O (50:50–100:0) in nato nadalje frakcionirali preko kolone Sephadex LH-20 (MeOH/H2O, 90:10) do dobitek 7 (716 mg) in 13 (39 mg). Z uporabo istih pogojev Fr.16.4 je Fr.16.6 (240 mg) dalo spojino 9 (7 mg). Fr.18 (10 g) smo ločili s silikagelom CC (CHCl3/MeOH, 100:1–20:1), nato prepustili MCI (MeOH/H2O gradient, 50:50–100:0) in Sephadex LH{{ 96}} (MeOH/H2O, 90:10) kolone, da dobimo 3 (25 mg) in 11 (4 mg). Fr.19 (20 g) smo izpostavili MCI koloni, eluirano z MeOH/H2O (30:70–100:0), da smo dobili sedem frakcij (Fr.19.1–Fr.19.7). Fr.19.5 (2,3 g) smo ločili s ponavljajočo se kolono s silikagelom (CHCl3/MeOH, 30:1), da smo dobili 8 (15 mg) in 10 (7 mg). Fr.19.6 (4,3 g) smo frakcionirali na koloni silikagela (CHCl3/MeOH, 30:1), da smo dobili 5 frakcij (Fr.19.6.1– Fr.19.6.5). Fr.19.6.1 (1,2 g) izpostavimo koloni s silikagelom (CHCl3/MeOH, 30:1) in po čiščenju s HPLC (MeOH/H20, 45:55), da dobimo 1 (15 mg). Fr.19.6.3 (540 mg) smo nanesli na kolono Sephadex LH-20 kolone, eluirano z MeOH/H2O (90:10), in nato dodatno očistili s semipreparativno HPLC (MeOH/H2O, 45:55) za pripravo 2 (6 mg) in 6 (5 mg). Fr.20 (12 g) smo nanesli na MCI gel (MeOH/H2O, 30:70–100:0) kromatografsko stopnjo in nato izpostavili silikagelu CC (CHCl3/MeOH, 30:1), da smo dobili 14 (21 mg).tri{{0}}O-etil-9-O-(4-hidroksifenil) propionil-diacilglicerol (1): bela trdna snov; []D 26 – 3,72 (c 0,51, MeOH); UV (MeOH) λmax (log ε) 203 (4,53), 225 (4,17), 280 (3,66) nm; IR (KBr) νmax 3426, 1727, 1516, 829 cm-1; 1H in 13C NMR (CD3OD), glej tabelo 1; ESIMS m/z 389 [M-H]-, HRESIMS m/z 389,1602 [M-H]- (izrač. za C21H25O7, 389,1606).

(R)-4,5,4′-trihidroksi-3,3′,-trimetoksibibenzil (2): bel amorfen prah; []D 26 –12,46 (c 1,07, MeOH); UV (MeOH) λmax (log ε) 204 (4,59), 286 (3,75) nm; IR (KBr) νmax 3418, 1607, 1517, 1455, 1434, 796 cm-1; 1H in 13C NMR (CD3OD), glej tabelo 1; ESIMS m/z 319 [M-H]-, HRESIMS m/z 319,1180 [M-H]- (izrač. za C17H19O6, 319,1187).

(2S)-5,7,3ʹ-trihidroksi-6,4,5-trimetoksifavon (3): rumen amorfen prah; []D 26 – 46,64 (c 0,46, MeOH); UV (MeOH) λmax (log ε) 206 (4,70), 294 (4,17) nm; IR (KBr) νmax 3335, 2940, 1641, 1514, 1462, 1345, 1434, 1182, 1091, 998, 833 cm-1; 1H in 13C NMR (CD3OD), glej tabelo 1; ESIMS m/z 331 [M-H]-, HRESIMS m/z 331,0819 [M-H]- (izrač. za C17H15O7, 331,0823).

3.4 DPPH analiza aktivnosti lovljenja radikalov

Test aktivnosti lovljenja prostih radikalov je bil izveden po prejšnji metodi [36] z nekaterimi modifikacijami. Na kratko, 30 μL vzorcev (1000 ug/mL, raztopljenih v etanolu) in Trolox (1 mM) smo dodali 270 μL raztopine DPPH (100 μM, raztopljene v metanol). Reakcija je potekala 1 uro pri 37 stopinjah na 96- mikroplošči z vdolbinicami. Absorpcijo smo nato odčitali pri 515 nm in izračunali odstotek skupne aktivnosti lovljenja radikalov z naslednjo formulo: odstotek inhibicije =[(A0− A1)/A0]×100 odstotkov, kjer je A0 absorbanca DPPH brez vzorcev (kontrolna reakcija) in A1 je absorbanca DPPH, inkubiranega z vzorci. Vsi testi so bili izvedeni v treh izvodih, Trolox pa je bil uporabljen kot sredstvo za pozitivno kontrolo.

maca ginseng cistanche

3.5 Test zaviranja gobove tirozinaze

Zaviranje aktivnosti tirozinaze je bilo določeno spektrofotometrično po prej opisani metodi [36] z nekaterimi modifikacijami. Na kratko, različne koncentracije testnih spojin smo pripravili v 10 odstotkih DMSO. Vsako raztopino vzorca (20 μM) smo zmešali z L-Dopo (1,25 mM) in razredčili s 970 μL 0.05 mM natrijevega fosfatnega pufra (PBS, pH 6,8) v epruvete. Reakcijo smo sprožili z dodajanjem gobje tirozinaze (25 U/mL). Reakcijsko zmes smo inkubirali 5 minut pri sobni temperaturi. Količino dopakroma v zmesi smo določili z meritvijo absorbance vsake vdolbinice pri 490 nm. Kojična kislina je bila uporabljena kot pozitivna kontrola. Inhibicijski odstotek tirozinaze je bil izračunan po naslednji enačbi: Odstotek inhibicije=[(A0− A1)/A0] × 100 odstotkov, kjer je A0 absorbanca dopakroma brez preskusnih spojin (kontrolna reakcija) in A1 je absorbanca dopakroma, inkubiranega s preskusnimi spojinami.

3.6 Proizvodnja kolagena s testom HDFa

Celična linija HDFa je bila pridobljena pri Cascade Biologics. Celice HDFa so bile posejane v {{0}}plošče z vdolbinicami, ki vsebujejo DMEM z 10 odstotki FBS pod vlažno atmosfero s 5 odstotki CO2 pri 37 stopinjah. Po 24 urah inkubacije smo celice obdelali s testnimi vzorci 72 ur (37 stopinj, 5 odstotkov CO2). TGF- je bil uporabljen kot pozitivna kontrola. Medij (50 µL) je bil zbran iz vsake vdolbinice in zamrznjen pri -80 stopinjah, dokler ni bil testiran s kompletom ELISA za prokolagenski peptid. Koncentracijo pro-kolagena smo dobili z merjenjem absorbance pri 450 nm na čitalniku mikroplošč. Odstranite vse medije iz celic in dodajte 100 µL razredčenega MTS reagenta v vsako vdolbinico. Reakcijo smo inkubirali 40 minut pri 37 stopinjah. Absorbanco smo izmerili pri 490 nm z čitalcem mikroplošč. Povečan odstotek proizvodnje kolagena I je bil izračunan v skladu z naslednjo enačbo: viabilnost celic (v odstotkih) =(povprečna OD490 vzorec/srednja OD490 kontrola); povečanje proizvodnje kolagena v odstotkih=(A1/B/A0 − 1) × 100 odstotkov. Kjer je A1 absorbanca z vzorci, A0 absorbanca brez vzorcev (kontrolna reakcija), B pa viabilnost celic.

Zahvala Ta projekt je finančno podprl oddelek za znanost in tehnologijo province Yunnan (št. 2017ZF003-04, 2015HB093 in 2019HA001). Avtorji so hvaležni osebju analitske skupine Državnega ključnega laboratorija za fitokemijo in rastlinske vire na Zahodni Kitajski, Inštitut za botaniko Kunming, Kitajska akademija znanosti, za meritve vseh spektrov.

cistanche portugal

Skladnost z etičnimi standardi

Konflikt interesovAvtorji v tem rokopisu niso poročali o morebitnem navzkrižju interesov.

Odprti dostopTa članek se distribuira pod pogoji mednarodne licence Creative Commons Attribution 4.0, ki dovoljuje neomejeno uporabo, distribucijo in reprodukcijo v katerem koli mediju, pod pogojem, da ustrezno navedete izvirnega avtorja(-e) in vir , navedite povezavo do licence Creative Commons in navedite, ali so bile narejene spremembe.

Reference

1. D. Yang, ZQ Cheng, L. Yang, B. Hou, J. Yang, XN Li, CT Zi, FW Dong, ZH Liu, J. Zhou, ZT Ding, JM Hu, J. Nat. Prod. 81, 227–235 (2018)

2. XM Zhou, CJ Zheng, LS Gan, GY Chen, XP Zhang, XP Song, GN Li, CG Sun, J. Nat. Prod. 79, 1791–1797 (2016)

3. TB He, YP Huang, L. Yang, TT Liu, WY Gong, XJ Wang, J. Sheng, JM Hu, Int. J. Biol. Macromol. 83, 34–41 (2016)

4. Y. Hu, C. Zhang, X. Zhao, Y. Wang, D. Feng, M. Zhang, H. Xie, J. Nat. Prod. 79, 252–256 (2016)

5. WW Fan, FQ Xu, FW Dong, XN Li, Y. Li, YQ Liu, J. Zhou, JM Hu, Nat. Prod. Bioprospect. 3, 89–92 (2013)

6. Y. Lin, F. Wang, LJ Yang, Z. Chun, JK Bao, GL Zhang, Phytochemistry 95, 242–251 (2013)

7. M. Moretti, L. Cossignani, F. Messina, L. Dominici, M. Villarini, M. Curini, MC Marcotullio, Food Chem. 140, 660–665 (2013)

8. S. Charoenrungruang, P. Chanvorachote, B. Sritularak, V. Pongrakhananon, J. Nat. Prod. 77, 1359–1366 (2014)

9. CC Chen, LG Wu, FN Ko, CM Teng, J. Nat. Prod. 57, 1271–1274 (1994)

10. Y. Deng, M. Li, LX Chen, XQ Chen, JH Lu, J. Zhao, SP Li, Carbohyd. Polym. 180, 238–245 (2018)

11. R. Li, T. Liu, M. Liu, F. Chen, S. Liu, J. Yang, J. Agric. Food Chem. 65, 3665–3674 (2017)

12. Uredniški odbor Flora Republicae Popularis Sinicae, (Academic Press. Peking 19, 104 (1999)

13. Y. Lu, M. Kuang, GP Hu, RB Wu, J. Wang, L. Liu, YC Lin, Molecules 19, 8544–8555 (2014)

14. C. Zhang, SJ Liu, L. Yang, MY Yuan, JY Li, B. Hou, HM Li, XZ Yang, CC Ding, JM Hu, Fitoterapia 122, 76–79 (2017)

15. D. Yang, LY Liu, ZQ Cheng, FQ Xu, WW Fan, CT Zi, FW Dong, J. Zhou, ZT Ding, JM Hu, Fitoterapia 100, 11–18 (2015)

16. WW Fan, FQ Xu, FW Dong, XN Li, XY Wei, J. Zhou, JM Hu, Tetrahedron Lett. 54, 1928–1930 (2013)

17. FQ Xu, FC Xu, B. Hou, WW Fan, CT Zi, Y. Li, FW Dong, YQ Liu, J. Sheng, ZL Zuo, JM Hu, Bioorg. Med. Chem. Lett. 24, 5268–5273 (2014)

18. CL Chang, LJ Zhang, RY Chen, CC Wu, HC Huang, MC Roy, JP Huang, YC Wu, YH Kuo, Bioorg. Med. Chem. 18, 518–525 (2010)

19. J. Cai, C. Yang, T. Chen, L. Zhao, Nat. Prod. Res. Nat. Prod. Res. 32, 1600–1604 (2018)

20. Y. Li, CL Wang, YJ Wang, SX Guo, JS Yang, XM Chen, PG Xiao, Chem. Pharm. Bik. 57, 218–219 (2009)

21. CL Chang, GJ Wang, LJ Zhang, WJ Tsai, RY Chen, YC Wu, YH Kuo, Phytochemistry 71, 271–279 (2010)

22. K. Šmejkal, L. Grycová, R. Marek, F. Lemière, D. Jankovská, H. Forejtniková, J. Vančo, V. Suchý, J. Nat. Prod. 70, 1244–1248 (2007)

23. D. Slade, D. Ferreira, JPJ Marais, Phytochemistry 66, 2177–2215 (2005)

24. PL Majumder, S. Chatterjee, Phytochemistry 28, 1986–1988 (1989)

25. PL Majumder, RC Sen, Phytochemistry 26, 2121–2124 (1987)

26. B. Sritularak, N. Duangrak, K. Likhitwitayawuid, Z. Naturforsch. C 66, 205–208 (2011)

27. YW Leong, CC Kang, LJ Harrison, AD Powell, Phytochemistry 44, 157–165 (1996)

28. PL Majumder, S. Pal, Phytochemistry 32, 1561–1565 (1993)

29. CF Xie, HQ Yuan, JB Qu, J. Xing, BB Lue, XN Wang, M. Ji, HX Lou, Chem. Biodiverziteta 6, 1193–1201 (2009)

30. CQ Fan, WM Zhao, GW Qin, Chin. Chem. Lett. 11, 705–706 (2000)

31. Y. Tezuka, Y. Yoshida, T. Kikuchi, GJ Xu, Chem. Pharm. Bik. 41, 1346–1349 (1993)

32. FMM Darwish, MG Reinecke, Phytochemistry 62, 1179–1184 (2003)

33. O. Demirkiran, T. Sabudak, M. Ozturk, G. Topcu, J. Agric. Food Chem. 61, 12598–12603 (2013)

34. KH Lee, FHA Aziz, A. Syahida, F. Abas, K. Shaari, DA Israf, NH Lajis, Eur. J. Med. Chem. 44, 3195–3200 (2009)

35. HI Choi, HJ Kim, JI Park, EH Shin, DW Kim, SS Kim, Bioorg. Med. Chem. Lett. 19, 2079–2082 (2009)

36. T. Sabudak, O. Demirkiran, M. Ozturk, G. Topcu, Phytochemistry 96, 305–311 (2013)

Za več informacij: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501