S polifenoli bogat izvleček listov Ocimum Gratissimum je preprečil toksične učinke ciklofosfamida na delovanje ledvic podgan Wistar

Za več se obrnite na:oscar.xiao@wecistanche.com

Povzetek

Ozadje:Ciklofosfamid (CP) je ena izmed močnih in poceni kemoterapij, ki se v kliničnih okoljih uporablja proti različnim tumorjem. Vendar pa njegova povezanost z nefrotoksičnostjo omejuje njegovo terapevtsko uporabo. Ocimum gratis simum leaf je zdravilna rastlina s številnimi farmakološkimi in terapevtskimi učinki, kot so antioksidativne, protivnetne in anti-apoptotične lastnosti.

Metode: Ta študija je bila zasnovana za oceno zaščitnega učinka Ocimum gratissimum (OG) proti ledvični disfunkciji, ki jo povzroča CP pri podganah. Podgane so bile 4 dni predhodno zdravljene s 400 mg/kg telesne mase izvlečka listov Ocimum gratissimum (Ocimum G.), nato pa so od 5. do 7. dne sočasno dajali 50 mg/kg telesne mase CP skupaj z zdravilom Ocimum G. Označevalci delovanja ledvic ovrednotili so oksidativni stres, vnos hrane in vode, elektrolite, aldosteron, inflacijo levkocitov, vnetje in histopatološke spremembe.

Rezultati:V skupinah, zdravljenih s CP, so opazili očitno vnetje ledvic in poškodbe ledvic. Vendar pa je dajanje ekstrakta listov Ocimum G. preprečilo oksidativni stres, poškodbe ledvic, zmanjšalo vnetje, povečalo proizvodnjo aldosterona in zmanjšalo izgubo natrijevih ionov in vode pri podganah. Po dajanju izvlečka Ocimum G. pri podganah, zdravljenih s CP, so se koncentracije kreatinina v plazmi, sečnine in albumina v urinu normalizirale. Ocimum G. je pri podganah, zdravljenih s CP, zmanjšal tudi plazemske koncentracije interlevkina-(IL)-6, C-reaktivnega proteina ter aktivnost mieloperoksidaze in malondialdehida.

Zaključek: Ocimum G. je preprečil poškodbo ledvic in izboljšal delovanje ledvic z zaviranjem vnetja in toksičnosti CP, ki jo povzročajo oksidanti. Učinkovitost Ocimuma G. je povezana s prisotnostjo različnih fitokemikalij v rastlini.

Ključne besede:Antioksidant, kreatinin, ciklofosfamid, list Ocimum gratissimum, ledvice, natrij.

Ozadje

Ciklofosfamid (CP) je antineoplastična spojina, ki je povezana z dušikovim ipritom. Uporablja se v kliničnem okolju za zdravljenje najrazličnejših rakavih bolezni in pri imunosupresivni terapiji po presaditvi organov, zdravljenju avtoimunskih bolezni, kot so revmatoidni artritis, Wegenerjeva granulomatoza in nefritični sindrom pri otrocih [1]. Ne glede na širok spekter klinične uporabe zdravila je znano, da CP povzroča številne od odmerka odvisne poškodbe organov, ki zato omejujejo njegovo terapevtsko uporabo v kliničnem okolju. Ker je znano, da je koristen pri zdravljenju nefrotskega sindroma pri otrocih [1], so v nekaterih prejšnjih študijah nasprotno poročali, da povzroča poškodbe sečnega mehurja [2, 3] in povzroča toksičnost za ledvice, kadar se uporablja neustrezno zaradi uporabe CP. prevelik odmerek [4–6]. Aktivni presnovek CP, 4-hidroksiciklofosfamid, se delno tavtomerizira v aldosfosfamid, ki ga fosfataza razgradi v obtoku in živih celicah ter povzroči nastanek dveh citotoksičnih presnovkov, fosforamidne gorčice in akroleina [6]. Prej so poročali, da je terapevtsko delovanje fosforamidne gorčice odgovorno za protitumorske učinke [6], medtem ko je akrolein odgovoren za citotoksične učinke CP, kot je hemoragični cistitis med dajanjem zdravila [2, 7]. Toksični presnovek CP poškoduje živa tkiva z zmanjšanjem tkivnega endogenega antioksidantnega sistema z ustvarjanjem reaktivnih prostih kisikovih radikalov, ki so mutageni za žive celice. Poročali so, da dajanje visokih odmerkov CP poveča peroksidacijo lipidov in povzroči zmanjšanje endogenih encimskih in neencimskih antioksidantov [7, 8]. Prejšnje študije so opisale koristne uporabe antioksidantov skupaj s kemoterapijo pri preprečevanju neželenih učinkov zdravila na telesna tkiva [7, 9, 10]. Antioksidanti, kot je kolaviron, so se izkazali za učinkovite pri preprečevanju kardiotoksičnosti CP pri podganah [11]. Tako je kombinacijaantioksidativno sredstvoskupaj s kemoterapevtskimi zdravili je lahko potencialni terapevtski pristop za preprečevanje ali zaustavitev citotoksičnega razvoja CP. Ocimum gratissimum (Ocimum G.) je družina ustničevk (Lamiaceae), ki spada med zelnate rastlinske vrste. V številnih tropskih državah (Azija, Indija, Brazilija in Zahodna Afrika itd.) je znana kot nageljnove žbice ali afriška bazilika. Najdemo ga v veliki meri v Nigeriji [12]. Številne države te države (Nigerija) so uporabljale Ocimum G. kot omako in zelenjavno juho. Ugotovljeno je bilo, da listi in cvetovi Ocimum G. vsebujejo polifenole in druge bioaktivne spojine [13, 14]. Rastline Ocimum gratissimum se uporabljajo za zdravljenje različnih bolezni, kot so driska, ulcerozni kolitis, vročina in katar [14–17]. Rastlina ima številne farmakološke prednosti zaradi svojih protivnetnih, antioksidativnih, antibakterijskih, antidiabetičnih in antimalaričnih sposobnosti [14, 18–20]. Protimikrobno delovanje izvlečka Ocimum G. je bilo testirano in vitro proti različnim človeškim patogenom, kot so Klebsiella pneumonia, Staphylococcus aureus, Escherichia, Vibro spp, Enterobacter spp, Enterococcus faecalis itd. Protiglivično delovanje eteričnega olja Ocimum G. izvlečki so bili opaženi in vitro [19, 21, 22], Ocimum G. pa je bil uporabljen kot sredstvo proti komarjem [23]. Nedavna študija na živalih je nakazala pomen zaščitnega učinka izvlečkov Ocimum G. pri preprečevanju nepravilnosti krvnega tlaka pred toksičnostjo kobaltovega klorida [24] ter zmanjšanju srčnih nepravilnosti, povezanih z jetrno fibrozo, z znižanjem regulacije interlevkina-6 signalne poti [25] ali z indukcijo antioksidativnih učinkov [26]. Vodni izvleček listov Ocimum G. je pokazal antioksidativne učinke proti kardiorenalni poškodbi, ki jo povzroča kobaltov klorid [24], in preprečil želodčne razjede z zmanjšanjem izločanja želodčne kisline in razjed [27]. Poleg tega je ursolna kislina iz izvlečkov Ocimum G. pokazala delovanje proti srbenju [28] in proti raku [29, 30]. Poleg tega se je izkazalo, da eterična olja Ocimum G. pri podganah kažejo od endotelija odvisne vazorelaksantne lastnosti [31]. Študije in vivo in in vitro so ocenile, da evgenol, medicinska sestavina zdravila Ocimum G., znižuje raven glukoze v krvi z zaviranjem alfa-glukozidaze [32]. Poleg tega je klinična študija ugotovila farmakološko ustreznost zdravila Ocimum G., da izkazuje podobno aktivnost kot klorheksidin proti zobnim oblogam in gingivitisu [33]. Z vsemi temi značilnostmi zdravila Ocimum G. smo domnevali, da bi bil Ocimum G. možno terapevtsko sredstvo, kadar ga uporabljamo skupaj s CP za preprečevanje ali zaustavitev neželenih učinkov CP. Ta študija je bila zato zasnovana za preučevanje koristnih učinkov s polifenoli bogatega izvlečka listov Ocimum gratissimum na nefrotoksičnost, ki jo povzroča CP pri samcih podgan Wistar.

Za več informacij kliknite tukaj

Materiali in metode

Injekcija ciklofosfamida (200 mg/10 ml) je bila nabavljena pri Celon Laboratory (Hyderabad, Indija); injekcija ketamin hidroklorida (50 mg/10 ml) je bila kupljena pri Popular Pharmaceuticals Ltd. (Gazipur, Bangladeš); Kompleti za analizo biokemičnih parametrov so bili pridobljeni od Randox Laboratories Limited (Crumlin, Združeno kraljestvo) itd. Kupljeni so bili 1-difenil-2-pikrilhidrazil (DPPH), metanol, natrijev karbonat, Trolox in reagent Folin–Ciocâlteu iz Merck & Co., Kenilworth, NJ, ZDA. Uporabljeni instrumenti vključujejo plinsko kromatografsko-masni spektrometer (GCMS-QP2010 SE, Shimadzu Corporation, Kyoto, Japonska) in ultravijolično-vidni spektrofotometer (Beckman, DU 7400, ZDA), aparat Soxhlet, rotacijski uparjalnik, mikroskop (Olympus CH; Olympus , Tokio, Japonska); fotoaparat (Leica DM 750).

Priprava polifenolnega ekstrakta listov Ocimum gratissimum

Listi Ocimum gratissimum so bili zbrani na vrtu v Usiju, zvezna država Ekiti, Nigerija. Pridobljena so bila ustrezna institucionalna dovoljenja za nabiranje Ocimum gratissimum. Ta študija je v skladu z mednarodnimi, nacionalnimi in/ali institucionalnimi smernicami za uporabo različnih delov rastline. Vzorce rastline je potrdil g. Omole, kustos v herbariju oddelka za botaniko Univerze Obafemi Awolowo, Ile-Ife, kjer je bil primerek vavčerja (1945) deponiran v herbariju univerze. Ekstrakt, bogat s polifenoli, je bil pridobljen iz listov Ocimum G. (900g) v skladu z našimi prejšnjimi metodami ekstrakcije rastline [14]. Metanol je bil uporabljen za pridobitev končnega ekstrakcijskega produkta, s polifenoli bogatega ekstrakta listov Ocimum gratissimum (PREOG) pod znižanim tlakom pri 40 stopinjah z uporabo rotacijskega uparjalnika. Nastali koncentrat ekstrakta smo liofilizirali s pomočjo liofilizatorja. Ostanek (8{{40}},85 g) smo hranili v petrijevkah s tesno prilegajočim pokrovom in shranili pri -20 stopinjah, dokler ni bil potreben za študijo. Dobljeni ekstrakt OG smo raztopili v vodi (0,2 ml/dajanje) in dali podganam v skladu z načrtovanim odmerkom. Analiza (GC-MS) ekstraktov OG s plinsko kromatografijo in masno spektrometrijo. Kemično sestavo pridobljenega ekstrakta smo preverili s pomočjo plinske kromatografije z masno spektrometrijo (GC-MS). Chavez et al. [34] metoda je bila sprejeta z rahlo spremembo. Za določanje spojin je bila uporabljena kapilarna kolona iz staljenega silicijevega dioksida (debelina filma 30 × 0,25 HP-5Ms, 0,25 μm), ki je vsebovala helij kot nosilni plin (stopnja pretoka 1/mL). Temperatura pečice je bila nastavljena na 40 stopinj in vztrajana 5 minut, nato pa se je postopoma povečevala za 3 stopinje/min do 270 stopinj. Kot razmerje delitve je bilo nastavljeno 60:1. Za priključne dele in vire ionov je bila nastavljena temperatura 180 stopinj, za masni spektrometer pa temperatura vmesnika 240 stopinj. Za količino ionizacijske energije je bilo uporabljenih 70 eV, medtem ko je bil način elektronskega udara (EI) izbran za izdelavo stabilnih in ponovljivih masnih spektrov, za izvajanje vzorcev pa je bilo uporabljeno območje vrednosti 50–650 m/z. Čas zakasnitve MS pred skeniranjem je bil 5 minut. Dobljene spojine so bile prikazane v tabeli 2. Določanje celotne vsebnosti fenolov Vsebnost skupnih fenolov (TPC) v ekstraktih je bila ovrednotena s tehniko Folin–Ciocâlteu, kot so opisali Gulcin et al. [35], z nekaj spremembami. Na kratko, 100 μL (0,5 mg/mL) s polifenoli bogatih izvlečkov Ocimum G. smo dali v ločene navadne epruvete. Približno 500 μL (1 odstotek v/v) fenolnega reagenta Folin–Ciocâlteu smo dodali v vsako epruveto, ki je vsebovala ekstrakt Ocimum G., in epruvete pustili stati 5 minut. in nato vrtinčeno. Po tem, ko smo pustili stati 5 minut, smo alikvotom dodali približno 400 μl (20 odstotkov m/m) natrijevega karbonata, ki smo jih nato inkubirali v temi pri sobni temperaturi 90 minut. Za razvoj barve. Absorbanco vsake mešanice smo ovrednotili z ultravijolično vidnim spektrofotometrom (Beckman, DU 7400, ZDA) pri 765 nm. Kot slepo smo uporabili raztopino natrijevega karbonata brez dodatka fenolnega reagenta Folin–Ciocâlteu. Za umeritveno krivuljo so bili uporabljeni standardi galne kisline. TPC vzorcev so določili z linearno regresijo standardov galne kisline. Rezultati so bili predstavljeni kot ekvivalent galne kisline (GAE) na gram suhe teže ekstrakta Ocimum gratissimum (mg GAE/g). Postopek je bil izveden v treh izvodih (n=3). DPPH test lovljenja prostih radikalov Aktivnost ekstrakta na lovljenje prostih radikalov je bila določena v skladu z metodo, ki so jo opisali RakMai et al. [36], z manjšimi spremembami. Dodali smo približno 2 ml raztopine DPPH–metanola (180 μmol/L) in zmešali z ekstraktom pri 0,1 mg/mL. Alikvote smo inkubirali v temi pri 25 stopinjah. Absorbanco vzorca smo določili s spektrofotometrom pri 517 nm v različnih časovnih intervalih med 0 in 60 min. Alikvote ekstraktov brez dodatka raztopine DPPH–metanol smo uporabili kot slepe vzorce. Trolox, sintetični analogvitaminE, je bil uporabljen kot pozitivna kontrola. Spodnja enačba je bila uporabljena za oceno čistilnih lastnosti ekstraktov. Postopek je bil izveden v treh izvodih (n=3). Kjer je vzorec izvleček plus DPPH, prazno je samo izvleček, kontrola je absorbanca kontrolne raztopine (ki vsebuje samo DPPH). Oskrba živali Za študijo so uporabili osemindvajset (28) podganjih samcev Wistar, težkih 120-180 g. Tey je bil nabavljen pri Animal Holding of College of Health Sciences, Univerza Obafemi Awolowo, Ile-Ife. Vse podgane so bile 1 teden v običajnih kletkah, da so se prilagodile na okoljske razmere pri 28-32 stopinjah, in jim je bil dovoljen prost dostop do prehrane in čiste pitne vode. Poskus je odobril Odbor za etiko zdravstvenih raziskav (HREC) Univerze Obafemi Awolowo, študija pa je bila opisana v skladu s smernicami ARRIVE (živali v raziskavah: poročanje o poskusu in vivo) [37].

Cistanche proti utrujenosti

Histopatološke študije

Tkiva so bila z mikrotomom razrezana na {{0}} μm debele dele, pritrjena na stekelca in obarvana s PAS. Diapozitive smo opazovali pod svetlobnim mikroskopom (Olympus CH; Olympus, Tokio, Japonska) in fotomikrografije posneli s kamero Leica DM 750 pri ×400 mag. Oddelek ledvičnega tkiva je ocenil pooblaščeni patolog, ki ni vedel za eksperimentalni protokol. Glomerularna poškodba je bila ocenjena med 0. in 4. stopnjo z oceno mezangialne proliferacije, debeline bazalne membrane in fibrinoidnih sprememb. Tubularna poškodba je bila ocenjena med 0. in 4. stopnjo z oceno vakuolarne degeneracije, deskvamacije, tubularne degeneracije, proksimalne tubularne nekroze in tvorbe odlitka. Tubulointersticijski vnetni infiltrati so bili ocenjeni med stopnjo 0 in 2 z oceno raznolikosti vnetnih celic v mediju in prisotnosti infiltratov znotraj epitelija tubulov (tabela 1) [44]. Skupna ocena ledvične poškodbe 0–2 je predstavljala nič/blago nefrotoksičnost, 3–6 zmerno nefrotoksičnost in 7–10 hudo nefrotoksičnost [44].

Rezultati

Analiza s plinsko kromatografijo in masno spektrometrijo, vsebnost fenolov in sposobnost odstranjevanja DPPH ekstrakta listov Ocimum gratissimum GC-MS analiza je razkrila nekatere bioaktivne spojine ekstrakta listov Ocimum gratissimum (tabela 2). Vsebnost polifenola v ekstraktu je bila prepoznana z uporabo metode Folin–Ciocâlteu (tabela 2). Skupna vsebnost fenolov (TPC) (80.36±0.50mg GAE/100g), dobljena v izvlečku Ocimum G., je pokazala, da je izvleček Ocimum gratissimum bogat z vsebnostjo fenolov. Zmogljivost ekstrakta za odstranjevanje DPPH je bila ocenjena tudi z izračunom vrednosti IC50, ki se nanaša na količino ekstrakta, ki je sposobna odstraniti 50 odstotkov prostih radikalov, ki jih vsebuje reakcijska mešanica. Vrednost IC50 (22,12±0,43 mg/ml) ekstrakta je bila visoka, kar je pomenilo visokoantioksidantaktivnost listov Ocimum gratissimum. Tako se je delovanje visoke vsebnosti fenolov v rastlini pokazalo v njeni sposobnosti lovljenja prostih radikalov (tabela 2).

Vpliv PREOG in ciklofosfamida na očistek kreatinina

V skupini, ki je prejemala samo CP, so v primerjavi s kontrolno skupino opazili znatno zmanjšanje ledvičnega očistka kreatinina (p<0.05). however,="" the="" preog-treated="" groups="" revealed="" a="" significant="" increase="" in="" the="" creatinine="" clearance="" when="" compared="" with="" cp="" alone="" treated="" group=""><0.05)>

Diskusija

V trenutni študiji obstajajo znaki povišanih ravni parametrov oksidativnega stresa, kot so peroksidacija lipidov, vodikov peroksid (H2O2) in dušikov oksid (NO), kar kaže na to, da so membranski lipidi in beljakovine ledvic podgan, zdravljenih z Poškodovani so bili samo CP. Tudi aktivnosti antioksidativnih encimov, kot sta superoksid dismutaza in katalaza, ter raven neencimskega antioksidanta, reduciranega glutationa, so se zmanjšale v skupini, zdravljeni samo s CP. Zmanjšanje antioksidantov v ledvičnih celicah podgan, zdravljenih samo s CP, je bil znak neravnovesja redoks-homeostaze. Prej je bilo dokazano, da CP povzroči oksidativno poškodbo, vnetje in celično nekrozo ali apoptozo po aktivaciji in spodbujanju reaktivnih kisikovih vrst (ROS) prek svojega metabolita, akroleina [7, 11, 14], ki nato sproži deaktivacijo in zmanjšanjeantioksidativna obrambazmogljivosti prizadetih organizmov [10, 11, 45]. V tej študiji prekomerna proizvodnja ROS odtehta endogenoantioksidativna sposobnost, sproži oksidativni stres in posledično poškoduje ledvične celice podgan, zdravljenih s CP, kar se odraža v povečanih ravneh markerjev oksidativnega stresa in znižanih ravnehantioksidativni parametri. Poleg tega je histološki pregled teh podgan pokazal poškodbe glomerulov in tubularno nekrozo ledvičnih celic. Poleg tega redoks neravnovesje izzove prekomerno proizvodnjo vnetnih citokinov [3, 14]. Opažena prekomerna proizvodnja ROS je sprožila peroksidacijo lipidov in mobilizacijo vnetnih citokinov ter hkrati povzročila vnetno poškodbo ledvičnih celic. Ocena IL-6 v tej študiji je bila znatno povišana pri podganah, zdravljenih s CP, kar kaže na napad oksidativnega stresa in vnetje ledvičnih celic. Ugotovljeno je bilo, da zvišanje IL-6 sproži in/ali stimulira jetra, da začnejo odziv akutne faze, ki povzroči povečanje proizvodnje C-reaktivnega proteina (CRP) v obtoku in drugih bioaktivnih mediatorjev [46]. CRP se je znatno povečal pri podganah, zdravljenih s CP, in povišana raven tega biomarkerja je bila znak zgodnjega obrambnega sistema pred okužbami, informacijami in poškodbami tkiva [47, 48]. Zvišanje ravni CRP v tej študiji je nadalje potrdilo vnetje pri podganah, zdravljenih samo s CP. Opazili so, da CP sproži zmanjšanje ledvičnih endogenih antioksidantov, kot je prekomerna uporaba GSH v ledvicah zaradi kopičenja produktov metabolita ciklofosfamida v celicah ledvičnih tubulov [9]. Kot rezultat tega procesa so lahko ledvice podgan, zdravljenih samo s CP, povečale imunski odziv proti svojim celicam, kar je nato povzročilo vnetje, kot je prikazano v zvišanju plazemskega CRP. Strinjamo se, da lahko CP povzroči vnetje in verjetno imunološko škodo v ledvicah podgan, zdravljenih s CP.

Zaključek

Za zaključek so rezultati sedanjih ugotovitev pokazali, da je s polifenoli bogat izvleček Ocimum gratissimum preprečil neželene stranske učinke CP na ledvično delovanje z zmanjšanjem oksidativnega stresa, preprečil prekomerno produkcijo vnetnih citokinov in inflacijo levkocitov ter izboljšal antioksidativno encimsko delovanje. aktivnost ledvičnih tkiv. Poleg tega je bilo potrjeno, da je CP povzročil zmanjšanje izločanja aldosterona in olajšal prekomerno izgubo natrija in vode z urinom pri podganah. Vendar je izvleček Ocimum G. izboljšal delovanje ledvic, povečal proizvodnjo aldosterona in preprečil prekomerno izgubo natrija in vode pri podganah, zdravljenih s CP. Zaradi prisotnosti polifenola in antioksidantov v listih Ocimum gratissimum je popoln kandidat za zdravljenje in/ali preprečevanje nefrotoksičnega učinka ciklofosfamida.

Reference

1. Chabner BA, Ryand DP, Pax-Ares L, Garcis-Carbonero, Calaresi P. Anti-neoplastična sredstva. V: Harnam JG, Libmirde LE, uredniki. Goodman in Gilman sta farmakološka osnova terapevtike. 10. izd. New York: McGraw Hill; 2001. str. 1389–459.

2. Chabner BA, et al. Antineoplastična sredstva. V: Brunton LL, Lazo JS, Parker KL, uredniki. Goodman in Gilman sta farmakološka osnova terapevtike. 11. izd. New York: McGraw Hill; 2006. str. 1322–8. 1694.
3. Ge B, Yang D, Wu X, Zhu J, Wei W, Yang B. Citoprotektivni učinki liposoma gliciretinske kisline proti cistitisu, ki ga povzroča ciklofosfamid, z zaviranjem vnetnega stresa. Int Immunopharmacol. 2018; 54: 139–44.
4. Sinanoglu O, Yener AN, Ekici S, Midi A, Aksungar FB. Zaščitni učinki spiruline pri nefrotoksičnosti in urotoksičnosti pri podganah, ki jih povzroča ciklofosfamid. Basic Transl Sci. 2012.
5. Caglayan C, Temel Y, Kandemir FM, Yildirim S, Kucukler S. Naringin ščiti pred hepatotoksičnostjo in nefrotoksičnostjo, ki jo povzroča ciklofosfamid, z modulacijo oksidativnega stresa, vnetja, apoptoze, avtofagije in poškodbe DNA. Environ Sci Pollut Res Int. 2018; 25 (21): 20968–84.
6. Zhang J, Tian Q, Yung S, Chuen S, Zhou S, Duan W, et al. Presnova in transport oksazafosforinov ter klinične posledice. Drug Metab Rev. 2005; 37: 611–703.
7. Famurewa AC, Edeogu CO, Ofor FI, Besong EE, Akunna GG, Maduagwuna EK. Znižanje redoks neravnovesja in signaliziranja iNOS/NF-ĸB/kaspaze-3 z dodatkom cinka preprečuje urotoksičnost hemoragičnega cistitisa, ki ga povzroča ciklofosfamid, pri podganah. Life Sci. 2021;266:118913.
8. Oyagbemi AA, Omobowale TO, Saba AB, Olowu ER, Dada RO, Akinrinde AS. Galna kislina izboljša s ciklofosfamidom povzročeno nevrotoksičnost pri podganah Wistar z aktivnostjo lovljenja prostih radikalov in izboljšanjem antioksidativnega obrambnega sistema. J Diet Suppl. 2016; 13: 402–19.
9. Abraham P, Isaac B. Učinki peroralnega glutamina na nefrotoksičnost, ki jo povzroča ciklofosfamid pri podganah. Hum Exp Toxicol. 2010; 30 (7): 616–23.
10. Šerif IO. Nevroprotektivni mehanizemkvercetinproti urotoksičnosti, povzročeni s ciklofosfamiko: učinek na oksidativni stres in vnetne markerje. J Cell Biochem. 2018; 119 (9): 7441–8. 11. Omole JG, et al. Zaščitni učinek kolavirona na srčno toksičnost, ki jo povzroča ciklofosfamid pri podganah. J Evid Based Integr Med. 2018;23:1
11. Efraim KD, Jacks TW, Sodipo OA. Histopatološke študije o toksičnosti izvlečka listov Ocimum gratissimum na nekaterih organih kuncev. Afr J Biomed Res. 2003; 6: 21–5.
12. Akinmoladun AC, Ibukun EO, Emmanuel A, Obuotor EM, Farombi EO. Fitokemična sestavina in antioksidativna aktivnost izvlečka iz listov Ocimum gratissimum. Sci Res Eseji. 2007; 2: 163–6.
13. Alabi QK, Akomolafe RO, Omole JG, Adefsayo MA, Ogundipe OL, Aturamu A, et al. Izvleček listov Ocimum gratissimum, bogat s polifenoli, blaži kolitis z zmanjšanjem poškodbe sluznice debelega črevesa in uravnavanjem proizvodnje vnetnih citokinov in oksidativnega stresa pri podganah. Biomed Pharmacother. 2018; 103: 812–22.
14. Ofah VN, Chikwendu UA. Antidiaroični učinki ekstrakta listov Ocimum gratissimum pri poskusnih živalih. J Etnofarmakol. 1999; 68: 327–30.