Napovedni pomen izražanja proteina 8, povezanega z ledvičnim mieloidom, pri bolnikih z ledvičnimi boleznimi, povezanimi z debelostjo ali sladkorno boleznijo tipa 2

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-pošta:audrey.hu@wecistanche.com

Takashige Kuwabara¹, Kiyoshi Mori1,^2*, Masato Kasahara^1,3, Hideki Yokoi¹, Hirotaka Imamaki¹,Akira Ishii¹, Kenichi Koga¹, Akira Sugawara⁴, Shinji Yasuno³, Kenji Ueshima³, Takashi Morikawa⁵, Yoshio Konishi⁵, Masahito Imanishi⁵, Akira Nishiyama⁶, Kazuwa Nakao^1,2, Masashi Mukoyama¹

¹Oddelek za medicino in klinične znanosti, Medicinska fakulteta Univerze v Kjotu, Kjoto, Japonska,

²Center za medicinske inovacije, Medicinska fakulteta Univerze v Kjotu, Kjoto, Japonska,

³Department of EBM Research, Institute for Advancement of Clinical and Translational Science, Kyoto University Hospital, Kyoto, Japonska,

⁴Oddelek za nefrologijo, Bolnišnica Rdečega križa Osaka, Osaka, Japonska,

5 Oddelek za nefrologijo in hipertenzijo, Splošna bolnišnica mesta Osaka, Osaka, Japonska,

6 Oddelek za farmakologijo, Medicinska fakulteta Univerze Kagawa, Kagawa, Japonska

Povzetek

Ozadje in cilj: Poročali smo, da imata toll-like receptor 4 (TLR4) in eden od njegovih endogenih ligandov, mieloično povezan protein 8 (MRP8 ali S100A8), pomembno vlogo pri napredovanju diabetične nefropatije pri miših. Namen te študije je bil oceniti pomenledvicaEkspresija MRP8 pri bolnikih zdebelost- ali povezana s sladkorno boleznijo tipa 2bolezni ledvic. Metode: Pri diabetičnih, debelih ali kontrolnih preiskovancih so bile ravni ekspresije mRNA in beljakovin MRP8 v vzorcih biopsije ledvic določene z RT-PCR in imunohistokemijo v realnem času (n=28 oziroma 65) in njihove povezave z izhodiščem in analizirani so bili prognostični parametri. Učinke MRP8 na izražanje pro-vnetnih genov so pregledali z uporabo makrofagov. Rezultati:LedvicaRavni ekspresije gena MRP8 in beljakovin so bile povišane pri debelih ali diabetičnih skupinah v primerjavi s kontrolno skupino. Z univariatno linearno regresijsko analizo sta bili glomerularno MRP8-pozitivno število celic in tubulointersticijsko MRP8-pozitivno območje na izhodišču povezani ne le z različnimi znanimi dejavniki tveganja za diabetično nefropatijo (npr. sistolični krvni tlak, proteinurija in serumski kreatinin), ampak tudi z obsegom glomeruloskleroze in tubulointersticijske fibroze. Neodvisne dejavnike, ki napovedujejo ravni beljakovin v urinu leto kasneje, so pregledali z multivariatno analizo in so vključevali glomerularno MRP8-pozitivno število celic (b=0.59, P,0.001), proteinurijo (b=0.37, P=0.002) in sistolični krvni tlak (b=0.21, P=0.04) na začetku, po prilagoditvi za znano tveganje dejavniki. Ekspresijo proteina MRP8 so opazili v CD68-pozitivnih makrofagih in atrofičnih tubulih. V kultiviranih mišjih makrofagih so ekspresije proinflamatornih citokinov, ki jih povzroči protein MRP8, prav tako sprožile samodejno indukcijo MRP8 na način, ki je odvisen od TLR4-.

Zaključki: Zdi se, da je glomerularna ekspresija MRP8 povezana z napredovanjem proteinurije pri debelih bolnikih ali bolnikih s sladkorno boleznijo tipa 2, po možnosti z induciranjem vnetnih sprememb v makrofagih prek signalizacije TLR4.

Učinki cistanhe: zdravljenje bolezni ledvic

Uvod

Kronično vnetje igra pomembno vlogo v patogenezi sladkorne ozdebelostin njegovimi srčno-žilnimi zapleti [1]. Vpletena je bila vpletenost prirojenih imunskih receptorjev in endogenih ligandov v proces kroničnega vnetja. Z mieloidom soroden protein 8 (MRP8, znan tudi kot S100A8 ali kalgranulin A) je bil prvotno opredeljen kot citoplazmatski protein, ki veže kalcij v nevtrofilcih in monocitih [2] in je postal splošno priznan kot močan endogeni ligand za toll-like receptor 4 (TLR4). ) pri različnih boleznih, vključno s septičnim šokom, žilnimi in avtoimunskimi motnjami [3,4,5]. Nedavno smo predlagali, da ima signalizacija MRP8/TLR4 pomembno vlogo pri napredovanju diabetične nefropatije, ki ga povzroči hiperlipidemija [6]. Glomerularni makrofagi in celice zbiralnega kanala so glavni viri MRP8 v mišjih modelih diabetične nefropatije [6] oziroma ledvične fibroze [7]. Plazemske ravni MRP8, ki običajno tvori heterodimerni kompleks z veznim partnerjem MRP14 v krvnem obtoku, so povečane pri debelih osebah [8, 9]. Vendar pa ni bilo poročil o raziskovanju ledvične ekspresije MRP8 pri bolnikih z debelostjo ozvrsto2 sladkorna bolezenin njegova povezava z ledvično prognozo.

Namen te študije je bil določiti ravni ekspresije mRNA in beljakovin MRP8 vledvicajaponskih bolnikov z diabetično nefropatijo (DN),debelost-povezana glomerulopatija (ORG), nefrotski sindrom minimalnih sprememb (MCNS) ali manjša glomerularna nenormalnost (MGA), ki so bile vse diagnosticirane z ledvično biopsijo, in oceniti, ali lahko izražanje MRP8 v ledvicah napoveduje ledvične izide.

Cistanche lahko izboljša delovanje ledvic

Materiali in metode

Etična izjava

Študija na ljudeh je bila izvedena v skladu z načeli, izraženimi v Helsinški deklaraciji, odobrila pa sta jo etična odbora za raziskave na ljudeh Medicinske fakultete Kjotske univerze oziroma Splošne bolnišnice mesta Osaka. Vsi udeleženci so dali pisno informirano soglasje. Protokol študije na živalih je odobril Odbor za raziskave na živalih Medicinske fakultete Kjotske univerze (številka dovoljenja: Med Kyo 13318). Vsi kirurški posegi na živalih so bili izvedeni pod anestezijo z natrijevim pentobarbitalom in vsi so bili vloženi v prizadevanja za zmanjšanje trpljenja.

Študijski predmeti

Proteinurični bolniki zdebelostali sladkorno boleznijo tipa 2, pri katerih je bila opravljena biopsija ledvic, so bili vključeni v to študijo. Bolniki z nalezljivo boleznijo, rakom, boleznijo jeter ali kolagensko boleznijo so bili izključeni. Proteinurija je bila opredeljena kot beljakovina v urinu, večja od 0,5 g/g kreatinina, ali albumin v urinu, večji od 300 mg/g kreatinina v vsaj dveh zaporednih meritvah.debelostje bil opredeljen kot indeks telesne mase (ITM), večji od 25.0 (kg/m²). Sladkorna bolezen tipa 2 je bila diagnosticirana v skladu z merili Svetovne zdravstvene organizacije. Biokemične meritve ob sprejemu za ledvično biopsijo so bile uporabljene kot osnovne značilnosti za presečno analizo. Ocenjena hitrost glomerulne filtracije (eGFR) je bila izračunana z uporabo poenostavljene enačbe za napovedovanje, ki jo je predlagalo Japonsko združenje za nefrologijo: eGFR (ml/min/1,73 m²)=1946 [starost (leta)]20.287 6 [serumski kreatinin (mg perdl)]21.094 60.739 (za ženske), kar je potrjena lokalna modifikacija MDRD [ 10]. Serumske koncentracije kreatinina smo izmerili z encimsko metodo.

Za imunohistokemijo je bilo analiziranih 65 japonskih bolnikov, ki so med letoma 2000 in 2011 opravili ledvično biopsijo na Oddelku za medicino in klinično znanost Univerzitetne bolnišnice v Kjotu. Z biopsijo dokazane diagnoze vseh bolnikov v tem obdobju so navedene v tabeli S1 v datoteki S1. Predmeti, pregledani v tem delu, so vključevali DN (n=19), ORG (n=10) in nedebele, nediabetične kontrolne subjekte, ki jim je bila diagnosticirana MGA (n=19) ali MCNS (n=17). Nekateri primeri v teh kategorijah so bili izključeni, ker so preostali vzorci, ki so bili na voljo, vsebovali manj kot 10 glomerulov. Opredelitev DN je bila sestavljena iz (1) več kot 5 let trajanja po pojavu sladkorne bolezni, (2) obstoja mikro- ali makroalbuminurije, (3) združljivih histopatoloških sprememb z DN, kot so zadebelitev glomerulne bazalne membrane, mezangialna ekspanzija, nodularni sklerozo (Kimmelstiel-Wilsonovi noduli) in/ali arteriolno hialinozo ter (4) izključitev drugih vzrokov za ledvične motnje [11]. ORG je bil morfološko opredeljen kot žariščna segmentna glomeruloskleroza in/ali glomerulomegalija pri osebah, ki so imele obojedebelostin proteinurija, katere definicije so bile opisane zgoraj [12,13].

Za analizo ekspresije mRNA so bili izključeni vzorci nizke kakovosti, v katerih so bile ravni 18S ribosomske RNA (rRNA) nižje od meje občutljivosti zaznavanja z RT-PCR v realnem času. Vključeni subjekti so bili 22 bolnikov s sladkorno boleznijo tipa 2, ki so med letoma 2000 in 2010 opravili biopsijo ledvic v splošni bolnišnici Osaka City General Hospital, in 6 kontrolnih oseb brez sladkorne bolezni, ki so imeli z biopsijo dokazano MGA.

Preglednici 1 in 2 povzemata izhodiščne klinične značilnosti bolnikov, ki so bili pregledani z imunohistokemijsko analizo ali analizo izražanja genov. Za svetlobno mikroskopijo smo vzorce tkiv obdelali po standardnih postopkih. Odseki so bili obarvani s hematoksilin-eozinom, periodično kislino-Schiff, metenamin srebrom s periodično kislino ali Massonovim trikromom (slika S1). Dva patologa, ki nista poznala diagnoze in kliničnih podatkov, sta neodvisno ocenila razmerje med številom glomerulov z globalno sklerozo med celotnimi glomerulami in relativnimi območji tubulointersticijske fibroze.

Učinki cistanhe: zdravljenje bolezni ledvic

Opredelitev ledvičnih rezultatov

Naslednja dva prognostična kazalca sta bila preučena z analizo linearne regresije oziroma logistične regresije: (1) obseg proteinurije, izmerjen eno leto po biopsiji, in (2) ledvični dogodek, opredeljen kot letno povečanje serumskega kreatinina za ,50 odstotka. od izhodišča ali začetka kronične dialize.

Imunohistokemija

Imunohistokemijo MRP8 in CD68 smo izvedli z uporaboledvicarezine (debeline 4 mm), fiksirane s 4-odstotnim pufranim paraformaldehidom. Po pridobitvi antigena s citratnim pufrom smo odseke ledvic inkubirali z 10-odstotnim kozjim serumom, čemur so sledila mišja protičloveška protitelesa MRP8 (1:100; BMA biomedicals, Augst, Švica)[14] ali mišja protičloveška protitelesa CD68 (1:50). ; DAKO, Ely, Združeno kraljestvo). Primarna protitelesa smo vizualizirali s sekundarnim protitelesom, konjugiranim s hrenovo peroksidazo, in 3,3-diaminobenzidin tetrahidrokloridom (Dako USA, Carpinteria, CA). Jedra smo kontrastno obarvali s hematoksilinom. MRP8-pozitivne celice so bile preštete v več kot 10 glomerulih in MRP8-pozitivna površina v tubulointersticiju je bila kvantitativno izmerjena, da bi dobili povprečje za vsakega subjekta s programsko opremo MetaMorph 7.5 (Molecular Devices, Downingtown, PA, ZDA). ). Kolokalizacija CD68- in MRP8-pozitivnih celic je bila ocenjena s serijskimi odseki. V negativnih kontrolah, obarvanih brez prvega protitelesa, ni bilo niti signala MRP8 niti CD68 (slika S2). S predinkubacijo protitelesa proti MRP8 z 20-molarnim presežkom rekombinantnega humanega proteina MRP8 (Life Technologies, Carlsbad, CA, ZDA) pri 4 °C preko noči se je obarvanje izrazito zmanjšalo, če ne popolnoma, kar dodatno podpira specifičnost protitelesa (slika S3) .

Cistanche za zdravljenje ledvic

Vrednotenje ekspresije mRNA

Zamrznjenoledvicaodseki so bili ločeni na glomerulna in neglomerulna tkiva z mikrodisekcijo z laserskim zajemanjem (LM200; Olympus, Tokio, Japonska), kot je opisano prej [15]. Celotno RNK smo ekstrahirali z mini kompletom RNeasy (Qiagen, Tokio, Japonska). Ravni ekspresije mRNA so bile določene s TaqMan PCR v realnem času (Applied Biosystems, Foster City, CA, ZDA) [16,17]. Stopnje ekspresije vseh genov so bile normalizirane z ravnmi 18S rRNA (notranja kontrola). Glej tabelo S2 v datoteki S1 za zaporedja primerjev in sond. Evkariontsko 18S rRNA smo odkrili z vnaprej razvitimi reagenti za testiranje TaqMan (Applied Biosystems).

Tabela 1. Izhodiščne klinične značilnosti bolnikov pri biopsiji ledvic, pri katerih je bila imunohistokemijsko analizirana ekspresija proteina MRP8.

MGA: manjša glomerularna nenormalnost, MCNS: nefrotski sindrom minimalne spremembe, ORG:debelost-povezana glomerulopatija, DN: diabetična nefropatija, BMI: indeks telesne mase, BUN: dušik sečnine v krvi, CRP: C-reaktivni protein. Podatki so srednja vrednost 6 SD. * Splošne razlike med skupinami MGA, MCNS, ORG in DN je primerjal ANOVA.doi:10.1371/journal.pone.0088942.t001

MRP8 zdravljenje makrofagov

Makrofagi, pridobljeni iz kostnega mozga, so bili pridobljeni iz miši divjega tipa ali TLR4 knockout (KO) miši [18] na genetskem ozadju C57BL/6J (Oriental BioService, Kyoto, Japonska), kot je opisano prej [6]. Na kratko, po lizi rdečih krvnih celic smo celice kostnega mozga resuspendirali v mediju, ki je vseboval 20 odstotkov fetalnega telečjega seruma in 50 ng/ml rekombinantnega faktorja, stimulirajočega kolonije človeških makrofagov (Peprotech, Rocky Hill, NJ, ZDA), in gojili pri 37uC v atmosferi 5 odstotkov CO2. 7. dan smo makrofage inkubirali z rekombinantno mišjo MRP8 (Abnova, Taipei, Tajvan) ali vehiklom 4 ure. V vsako vdolbinico smo dodali polimiksin B (25 mg/ml, NacalaiTesque, Kyoto, Japonska), da bi zmanjšali kontaminacijo endotoksina, kot je opisano prej [3,19]. Noendotoksin je bil odkrit pri kateri koli koncentraciji MRP8, ki je bila testirana v nadaljevanju inkubacije s 25 mg/ml polimiksina B s kompletom za testiranje endotoksina ToxinSensorChromogenic LAL (GenScript, Piscataway, NJ, ZDA). Celotno RNK iz celic smo ekstrahirali z RNeasy MiniKit, ravni ekspresije mRNA interlevkina-1 beta (IL-1b), faktorja tumorske nekroze alfa (TNFa) in MRP8 pa je določil TaqMan v realnem času RT-PCR. Stopnje izražanja vseh genov so bile normalizirane z ravnmi GAPDH glodalcev (notranji nadzor, vnaprej razviti reagenti za analizo TaqMan). Zaporedja primerja in sonde za PCR v realnem času so navedena v tabeli S2 v datoteki S1.

Statistična analiza

Podatki so izraženi kot povprečje 6 SD ali pomeni 695-odstotni interval zaupanja (CI), kadar je primerno. Za primerjavo med štirimi skupinami je bila uporabljena enosmerna ali dvosmerna ANOVA z Bonferronijevo post-hoc analizo, kategorične spremenljivke pa smo primerjali s testom x2. Študentov neparni t-test je bil uporabljen za primerjavo med dvema skupinama, kot je bilo primerno. Spearmanovi korelacijski koeficienti so bili ocenjeni za določitev povezav med dvema spremenljivkama. Da bi preučili učinke osnovnih kospremenljivk, ki določajo obseg glomerularne ali tubulointersticijske ekspresije MRP8 ali ravni beljakovin v urinu eno leto po biopsiji, so bile izvedene univariatne in multivariatne linearne regresijske analize. Logistična regresijska analiza je bila uporabljena za analizo pojasnjevalnih spremenljivk, ki napovedujejo pojav ledvičnih dogodkov. Vsi podatki so bili analizirani s programsko opremo StatView 5.0 (SAS InstituteInc., Cary, NC, ZDA). Vrednosti P,0.05 so veljale za statistično pomembne.

Učinki cistanhe: zdravljenje bolezni ledvic

Rezultati

Primerjali smo ravni ekspresije beljakovin MRP8 vledvicamed skupinami DN, ORG in skupinami brez debelosti, brez sladkorne bolezni (MGA in CNS). Imunohistokemična analiza je pokazala, da sta bila tako glomerularno MRP8-pozitivno število celic (slika 1A) kot tubulointersticijsko MRP8-pozitivno območje (slika 1B) v DN bistveno večja od tistih v drugih skupinah, vključno z MGA, MCNS, in ORG (P<0.01). org="" subjects="" also="" showed="" a="" tendency="" of="" elevated="" mrp8expression="" compared="" to="" mga="" and="" mcns="" (fig.="" 1a,="" 1b).="" furthermore,="" glomerular="" mrp8="" mrna="" expression="" levels="" in="" dn="" subjects="" were="" significantly="" higher="" compared="" to="" non-dm="" control="" subjects="" (p,0.01,="" fig.="" 1c).="" in="" non-glomerulus="" tissues,="" mrp8mrna="" expression="" levels="" were="" much="" lower="" than="" those="" in="" glomeruli,="" both="" in="" non-dm="" and="" dm="" groups.="" abundant="" mrp8="" protein="" expression="" in="" the="" tubulointerstitium="" of="" dn="" cases="" was="" not="" clearly="" reflected="" into="" increased="" mrna="" expression,="" which="" may="" be="" partly="" caused="" by="" deposition="" of="" blood-derived="" proteins="" in="" the="" tubulointerstitium="" as="" discussed="" in="" the="" next="" section.="" as="" shown="" in="" representative="" photos="" (fig.="" 1d–g,="" see="" fig.="" s4="" in="" detail),="" renal="" biopsy="" samples="" from="" mga="" and="" mcns="" subjects="" showed="" few="" mrp8-positive="" cells="" in="" glomeruli="" (fig.="" 1d,="" 1e="" and="" fig.="" s4).="" in="" org="" subjects,="" somemrp8-positive="" cells="" appeared="" in="" glomeruli="" and="" tubulointerstitium(fig.="" 1f="" and="" fig.="" s4).="" in="" dn="" subjects,="" a="" marked="" increase="" of="" mrp8-expressing="" cells="" in="" glomeruli="" and="" significant="" expansion="" of="" mrp8-positive="" areas="" in="" the="" tubulointerstitium="" were="" observed="" in="" a="" focal="" manner="" (fig.="" 1g="" and="" fig.="" s4).="" of="" note,="" mrp8-positive="" cells="" were="" absent="" in="" nodular="" sclerosing="" lesions="" of="" diabetic="" glomeruli="" (fig.="" s4:dn="" case="" 2,="" 3)="" as="" described="" previously="" for="" sclerotic="" lesions="" in="" anca-associated="" glomerulonephritis="" [20].="" paired="" immunohistochemistry="" for="" cd68="" and="" mrp8="" in="" serial="" sections="" suggested="" thatmrp8="" signals="" were,="" at="" least="" in="" part,="" observed="" in="" macrophages="" expressing="" cd68="" (fig.="" 2),="" as="" we="" reported="" in="" a="" mouse="" model="" of="" diabetic="" nephropathy="" [6].="" besides,="" focally="" injured="" atrophic="" tubular="" epithelial="" cells="" also="" strongly="" expressed="" mrp8,="" which="" were="" surrounded="" by="" mrp8(+)-,="" cd68(+)-positive="" macrophages="" (fig.="" 2,="" fig="" s4:="" dn="" case="" 3-5).="" in="" the="" cases="" with="" nephrotic="" range="" proteinuria,="" mrp8="" staining="" was="" also="" observed="" along="" brush="" borders="" of="" proximal="" tubules="" both="" in="" mcns="" and="" dn="" cases="" (fig.="" s4).="" since="" the="" sample="" number="" of="" mrna="" expression="" was="" too="" small="" for="" multivariate="" analysis,="" the="" following="" analyses="" were="" performed="" using="" data="" from="" patients="" studied="" by="">

Tabela 2. Izhodiščne klinične značilnosti bolnikov pri biopsiji ledvic, pri katerih je bila analizirana ekspresija mRNA MRP8 z RT-PCR v realnem času.

Asociacije medledvicaSignale MRP8 in izhodiščne klinične parametre v času biopsije ledvic smo analizirali presečno (tabela 3). Z univariatno analizo je bila ekspresija glomerulnega in/ali tubulointersticijskega proteina MRP8 pomembno povezana s starostjo, sistoličnim in diastoličnim krvnim tlakom, beljakovinami v urinu, serumskimi ravnmi kreatinina, BUN in HDL holesterola, eGFR ter obsegom globalne glomeruloskleroze in tubulointersticijske fibroze. Ti parametri so bili nadalje preučeni z multivariatno analizo po izključitvi diastoličnega krvnega tlaka, eGFR in BUN zaradi kolinearnosti. Odstotek tubulointersticijske fibroze je bil neodvisno povezan s signali glomerularnega MRP8 (b=0.62, prilagojeni P=0.02) in tubulointersticijskimi signali MRP8 (b=0.85, prilagojeni P ,0,001). Poleg tega so bili tubulointersticijski signali MRP8 tudi neodvisno povezani z izhodiščno proteinurijo (b=0.20, prilagojeni P=0.01). Analize razpršenih grafov med signali MRP8 v glomerulih ali tubulointersticiju in klinični parametri so pokazale, da je imela skupina MCNS razločen vzorec porazdelitve od drugih skupin, zlasti glede ravni beljakovin v urinu in serumskega holesterola LDL (slika S5A–D, S6A–D). Izključitev skupine MCNS je izboljšala korelacijo med signali MRP8 in ravnmi beljakovin v urinu ali serumskega LDL-holesterola (slika S5E–F, S6E–F). Zato smo izvedli podanalizo, pri kateri smo izključili bolnike z MCNS, in ugotovili, da so beljakovine v urinu neodvisen dejavnik, ki je bil povezan s signali glomerularnega MRP8 z multivariatno analizo (tabela 4; b=0.36, prilagojen P=0.03 ).

Nato smo izvedli linearno regresijsko ali logistično regresijsko analizo, da bi identificirali razlagalne dejavnike, ki napovedujejo ledvične izide, ki so bili obseg proteinurije leto kasneje in ledvični dogodek v enem letu. Ker je obstajala dobra povezava med glomerularnimi in tubulointersticijskimi signali MRP8 (slika S7; R=0.67,P, 0.001), so bili ti parametri alternativno vključeni v nadaljnje analize . Ocenili smo povezavo med izhodiščnimi parametri in beljakovinami v urinu 1 leto po biopsiji ledvic z multiplo regresijsko analizo. Kot je prikazano v tabeli 5, je bil glomerularni signal MRP8 (b=0,59, prilagojeni P, 0,001) napovedni dejavnik za obseg proteinurije leto kasneje, kot tudi izhodiščni sistolični krvni tlak (b {{13} }.21, prilagojeni P=0.04) in izhodiščna proteinurija (b=0.37, prilagojeni P=0.002) sta bili. Ti parametri so bili neodvisni od drugih znanih dejavnikov tveganja za diabetično nefropatijo, vključno z ledvično disfunkcijo (serumski kreatinin) ter obsegom globalne skleroze in tubulointersticijske fibroze [11, 21–24]. Po drugi strani tubulointersticijski signal MRP8 (b=0.34, prilagojeni P=0.09) leto kasneje ni bil neodvisen napovedni dejavnik za ravni beljakovin v urinu. Ledvični dogodki so se pojavili pri 7 bolnikih (6 v primerih DN in 1 v primerih ORG) v enem letu po biopsiji ledvic. Z univariatno analizo so bili ne le obseg glomeruloskleroze in tubulointersticijske fibroze ter glomerularni in tubulointersticijski signali MRP8, ampak tudi krvni tlaki, ledvična disfunkcija in ravni beljakovin v urinu na začetku pomembni napovedni dejavniki za pojav ledvičnih dogodkov. Vendar pa so bile z multivariatno analizo njihove kospremenljivke med seboj izničene (tabela S3 v datoteki S1), verjetno zaradi visokih korelacij med temi parametri.

Končno smo preučili moč MRP8 kot endogenega liganda za TLR4 z uporabo gojenih makrofagov. V makrofagih, pridobljenih iz kostnega mozga iz miši divjega tipa, je protein MRP8 povzročil povečano regulacijo provnetnih citokinskih genov, kot sta IL-1b in TNFa, ter sprožil tudi avtoindukcijo MRP8, na način, ki je odvisen od odmerka med 1{{ 15}}–1000 ng/ml. Ti učinki MRP8 so bili potlačeni za približno dve tretjini v makrofagih, pridobljenih iz miši TLR4 KO (P, 0,01) (slika 3).

Slika 1. Imunohistokemične analize in analize mRNA za MRP8 vledvicavzorci biopsije. Kvantifikacija glomerularnega MRP{{0}}števila pozitivnih celic (A) in tubulointersticijskega MRP8-pozitivnega območja (B). Ekspresija mRNA MRP8 v glomerularnih in neglomerularnih frakcijah (C). Odprte vrstice: kontrole brez debelosti, nediabetike, ki so MGA ali MCNS, zaprte vrstice: ORG ali DN (A–C). Reprezentativne slike skupin MGA, MCNS, ORG in DN (D–G). MGA: manjša glomerulna nenormalnost, MCNS: nefrotski sindrom minimalnih sprememb, ORG: glomerulopatija, povezana z debelostjo, DN: diabetična nefropatija. *P,0.01.doi:10.1371/journal.pone.0088942.g001

Diskusija

Ta študija je pokazala, da je MRP8 obilno izražen v glomerulih in tubulointersticiju bolnikov z DNA v primerjavi z ORG in nadzorom brez debelosti in nediabetika (MGA in MCNS). Poleg tega so bile pri subjektih ORG ravni izražanja MRP8 običajno višje kot pri subjektih MGA ali MCNS. V izhodiščni presečni preiskavi, ki je vključevala vse preiskovance, z univariatno linearno regresijsko analizo sta bila glomerularno MRP8-pozitivno število celic in tubulointersticijsko MRP8-pozitivno območje v korelaciji ne le z različnimi znanimi dejavniki tveganja za diabetične nefropatije (kot so sistolični krvni tlak, proteinurija in serumski kreatinin), ampak tudi z obsegom glomeruloskleroze in tubulointersticijske fibroze. Z multivariatno analizo je bilo tubulointersticijsko MRP8-pozitivno območje pomembno povezano s proteinurijo in tubulointersticijsko fibrozo. Število pozitivnih celic v glomerulu MRP8- je bilo pomembno povezano s tubulointersticijsko fibrozo v primarni analizi in s proteinurijo v podanalizi, ki je izključevala skupino MCNS. Imunohistokemija je pokazala, da so MRP8 vsaj delno izražali makrofagi in atrofični tubuli, ki izražajo CD68(plus). Te ugotovitve povečujejo možnost, daledvicaSignali MRP8 v glomerulih ali tubulointersticiju lahko služijo kot novi označevalci diabetične nefropatije.

Slika 2. Lokalizacija izražanja proteinov CD68 in MRP8 v serijskih odsekih primerov diabetične nefropatije. Ekspresija CD68(A, B) in ekspresija MRP8 (C, D) v parnih ledvičnih vzorcih (A in C ali B in D). Puščice označujejo kolokalizacijo signalov CD68 in MRP8.doi:10.1371/journal.pone.0088942.g002

V prognostični študiji je multivariatna analiza pokazala, da so bile ravni beljakovin v urinu eno leto po ledvični biopsiji neodvisno povezane s številom pozitivnih celic glomerularnega MRP8-, beljakovinami v urinu in sistoličnim krvnim tlakom na začetku. Opozoriti je treba, da je glomerularna ekspresija MRP8 pokazala najmočnejšo korelacijo z beljakovinami v urinu leto kasneje (b= 0.87), celo močnejšo od izhodiščne beljakovine v urinu (b=0.78), z univariatno analizo. Delno zato, ker glomerularna ekspresija MRP8 ni močno povečana pri "benignih" oblikah proteinurije, kot so tiste, opažene pri bolnikih z MCNS, katerih ravni proteinurije so izjemno visoke ob diagnozi z biopsijo ledvic, vendar običajno izzvenijo v enem letu po začetku imunosupresivnega zdravljenja. Te ugotovitve kažejo, da ima glomerularna ekspresija MRP8 lahko edinstveno napovedno naravo kot marker bolezni, ki je ni mogoče nadomestiti z izhodiščno proteinurijo ali rutinsko patološko analizo, ki ocenjuje globalno glomerulosklerozo in tubulointersticijsko fibrozo. Poleg tega špekuliramo, da ekspresija glomerularnega MRP8 ni preprost marker ali opazovalec, ampak aktiven akter pri glomerularni poškodbi, kot je razloženo spodaj.

Koeficient determinacije (R2), izračunan z razlagalnimi parametri, vključenimi v multiplo regresijsko analizo, je bil 0.52* oziroma 0.74#. y, leta; krvni tlak, krvni tlak; gCr, g kreatinina; T-hol, skupni holesterol; HDL-Chol, HDL holesterol; LDL-hol, LDL holesterol; GS, glomeruloskleroza; TI, tubulointerstitial.doi:10.1371/journal.pone.0088942.t003

Tabela 4. Podanaliza razmerja med osnovnimi kliničnimi parametri in signali MRP8 po izključitvi skupine MCNS.

Tabela 5. Multipla regresijska analiza za identifikacijo dejavnikov, ki napovedujejo ravni beljakovin v urinu 1 leto po biopsiji ledvic

Slika 3. Učinki MRP8 na makrofage, pridobljene iz kostnega mozga. Makrofage, pridobljene iz kostnega mozga (BMDM), smo 4 ure stimulirali z rekombinantnim mišjim MRP8. Vrstice napak kažejo 95-odstotni IZ, statistične analize pa so bile izvedene z logaritmično transformiranimi vrednostmi. Dvosmerna ANOVA je pokazala pomembne učinke genotipov, koncentracij MRP8 in njihovih interakcij za izražanje vseh 3 genov (P, 0.001 za vse primerjave). n=4. WT, divji tip; KO, knockout; IL-1b, interlevkin 1 beta; TNFa, faktor tumorske nekroze alfa. *P,0,01 med različnimi koncentracijami, #P,0,01 med genotipi.doi:10.1371/journal.pone.0088942.g003

V drugem poskusu longitudinalne študije logistična regresijska analiza ni uspela odkriti nobenih neodvisnih napovednikov za pojav ledvičnega dogodka v enem letu. Špekuliramo, da je to delno zato, ker sta bili tubulointersticijska ekspresija MRP8 in tubulointersticijska fibroza dva močna napovedovalca ledvičnega dogodka v univariatni analizi, vendar sta bila njuna pomena drug drugemu preklicana v multivariatni analizi. Ta dva parametra sta pokazala močno korelacijo (R=0.68, P, 0.001) (slika S8), kar nakazuje, da bi bila ta parametra lahko enakovredna napovedovanju ledvičnih dogodkov. Dejansko je intersticijska ekspresija MRP8 pokazala precej podoben vzorec kot intersticijska fibroza, ocenjena z Massonovim trikromnim obarvanjem. Količina intersticijskega MRP8 je v veliki meri odvisna od pozitivnih signalov v atrofičnih tubulih in ne od tistih v makrofagih, katerih značilnost se razlikuje od lastnosti glomerularnega MRP8 v točkasti porazdelitvi. Poleg tega so lahko majhna velikost vzorca, kratko obdobje opazovanja in malo preiskovancev, pri katerih so se razvili ledvični dogodki, zmanjšali moč zaznavanja. Ker ima ekspresija MRP8 v tubularnih epitelijskih celicah vzročno vlogo pri napredovanju tubulointersticijskega vnetja pri mišjem modelu ledvične fibroze [7], bo potrebna nadaljnja analiza za razjasnitev vloge tubulointersticijskega MRP8 pri DN.

V skladu z našo prejšnjo študijo [6] je bila mRNA MRP8 povečana predvsem v glomerularni frakciji preiskovancev z DN v primerjavi s kontrolnimi preiskovanci z MGA. Po drugi strani pa ekspresijo proteina MRP8 niso opazili le v glomerulu, ampak tudi v tubulointersticiju. V zvezi s tem je treba opozoriti, da obstajata dva različna vzorca obarvanja MRP8 v tubulointersticiju DN. Ena je bila intenzivno in žariščno obarvanje v močno atrofičnih tubulih. Drugo je bilo blago obarvanje, porazdeljeno vzdolž krtačaste meje proksimalnih tubulov, ki so ga našli tudi pri ORG in MCNS. Slednji signali verjetno predstavljajo protein MRP8, pridobljen iz krvi in ​​ponovno absorbiran v proksimalnih tubulih, ki ga ne bi smelo spremljati povečano izražanje mRNA MRP8. V zvezi z beljakovinami, ki niso MRP8, smo mi in drugi pred kratkim poročali o podobnih pojavih imunoreaktivne detekcije beljakovin v proksimalnih tubulih, ki jih povzroča reabsorpcija, ne pa ledvična sinteza [25, 26]. Po drugi strani, ker je pri testu absorpcije protiteles ostalo malo obarvanja MRP8, zlasti pri glomerularnih eksudativnih lezijah in močno zabrazgotinjenih, fibrotičnih lezijah okoli atrofičnih tubulov, prisotnosti nespecifičnih signalov ni mogoče popolnoma zanikati (slika S3).

Glomerularni signali MRP8 so v glavnem pokazali pikčaste vzorce pri subjektih DN (slika 1, slika S4). Ker so tako CD68 kot MRP8 zaznali mišja monoklonska protitelesa, je bila lokalizacija teh molekul ovrednotena s serijskimi odseki, ne z dvojnim imunskim barvanjem. Vzorci obarvanja MRP8 so bili združljivi s tistimi pri drugih vnetnih ledvičnih boleznih, vključno z IgAnephritisom [27], membranoproliferativnim glomerulonefritisom [14] in glomerulonefritisom, povezanim z ANCA [20], pri katerih so bili makrofagi predlagani kot glavni vir MRP8, kot smo poročali v model glodalca [6]. Poleg tega bi lahko nevtrofilce obravnavali kot drug vir MRP8, ki vpliva na vaskularne zaplete [28]. Trenutno raziskujemo molekularni mehanizem, zakaj je MRP8 pretežno reguliran navzgor v celicah mieloidne linije, ki infiltrirajo glomerule. Študija in vitro je pokazala, da MRP8 inducira ekspresijo vnetnih citokinov in tudi potencira ekspresijo samega MRP8 v makrofagih na način, ki je odvisen od TLR4-. Poleg tega v nodularnih sklerozirajočih lezijah ni bilo MRP8-pozitivnih celic, kar nakazuje, da bi glomerularni MRP8 morda odražal nadaljnjo glomerularno poškodbo [20]. Pomembno je, da je največja študija na ljudeh poročala, da je ekspresija gena MRP8 v krvnih mononuklearnih celicah bolnikov s sladkorno boleznijo tipa 1 znatno povečana pri osebah z diabetičnimi zapleti, vključno z nefropatijo [29].

Ker je zaviranje sistema renin-angiotenzin (RAS) pomembna determinanta ledvičnih izidov, smo preučili učinke blokade RAS naledvicaizraz MRP8. Nismo našli pomembne razlike v izražanju mRNA MRP8 v ledvicah med bolniki z DN, zdravljenimi z blokado RAS ali brez nje (slika S9), verjetno zato, ker so imeli primeri, zdravljeni z blokado RAS, hujšo hipertenzijo in proteinurijo kot primeri brez blokade RAS

Pri debelih ljudeh in miših lahko zvišan plazemski kompleks MRP8/14 odraža določeno stopnjodebelostin izvirajo iz adipocitov in levkocitov [8,9]. Naši primeri ORG so imeli blago obarvanje MRP8 v proksimalnih tubulih, kar kaže na povečane ravni MRP8 v plazmi. V nasprotju s tem ni bilo pomembne korelacije med tubulointersticijskim izražanjem MRP8 in indeksom telesne mase (slika S6G). Zato lokalni izraz MRP8 vledvicalahko bolje služi kot marker za ledvično poškodbo kot zadebelost[8,9].

Cistanche za izboljšanje ledvične disfunkcije

Naša študija ima več omejitev. Število vzorcev vsake proučevane skupine je bilo majhno. Neidentični subjekti so bili vključeni v mRNA in imunohistokemične analize. Ker smo analizirali samo bolnike, pri katerih je bila opravljena ledvična biopsija, sestava bolnikov, ki smo jih preiskali tukaj, morda ne odraža tiste pri splošnih bolnikih s sladkorno boleznijo tipa 2 ali splošnim kroničnimledvicasubjekti bolezni. Čeprav starost v naših podatkih ni bila ohranjena kot neodvisen dejavnik, povezan s signali MRP8 (tabela 3), je znano, da je staranje povezano s kroničnim vnetjem [30]. Učinkov starosti ne gre povsem zanemariti. Čeprav je bila večina signalov MRP8 izgubljena pri testu absorpcije protiteles, je ostalo nekaj pozitivnih signalov, ki bi jih lahko povzročila nespecifična vezava prvega protitelesa. Kot je razloženo zgoraj, nam preiskava ledvične ekspresije MRP8 z biopsijo ledvic pomaga razumeti patofiziologijo in prognozo kroničnih ledvičnih bolezni, zlasti povezanih zdebelostin sladkorno boleznijo, vendar ima pomanjkljivost pri rutinski in ponavljajoči se uporabi v ambulantah

Če povzamemo, ta študija kaže, da izražanje MRP8 vledvicaodraža trenutno patološko stanje in tudi napoveduje ledvične izide pri bolnikih zdebelostozsladkorna bolezen tipa 2. Nadaljnje raziskave, ki preučujejo ravni MRP8 v urinu pri debelih ali sladkornih bolnikih v velikem obsegu, so lahko upravičene

Podporne informacije

Slika S1 Reprezentativne fotografije, ki prikazujejo odseke ledvične biopsije bolnika z DN, obarvane z (A) periodično kislino Schiff, (B) periodično kislino metenamin srebrom ali (C) Massonovim trikromom. Razmerje med številom glomerulov z globalno sklerozo (puščice) med številom vseh glomerulov in relativno površino tubulointersticijske fibroze je bilo pri tem bolniku 33 odstotkov oziroma 65 odstotkov. (TIFF)

Slika S2 Imunohistokemija za proteine ​​MRP8 in CD68 pri bolnikih z DN. Fotografije v desnem stolpcu prikazujejo poskuse negativne kontrole brez prvega protitelesa. (TIF)

Slika S3 Preskus absorpcije protiteles za barvanje z MRP8. PBS: fiziološka raztopina s fosfatnim pufrom, rhMRP8: rekombinantni humani MRP8. (TIF)

Slika S4 Reprezentativne fotografije izražanja MRP8 v skupinah MGA, MCNS, ORG in DN. (TIF)

Slika S5 Korelacija med pozitivnim številom celic MRP8-glomerula in kliničnimi parametri. Uporabljene so bile log-transformirane vrednosti signalov MRP8. Korelacije so bile analizirane z uporabo vseh 4 skupin (A–D, G) ali 3 skupin brez skupine MCNS (E, F). Prazni krogi: manjša glomerularna nenormalnost (MGA), zaprti krogi: nefrotski sindrom minimalne spremembe (MCNS), odprti trikotniki:debelost-povezana glomerulopatija (ORG), zaprti trikotniki: diabetična nefropatija (DN).(TIF)

Slika S6 Korelacija med tubulointersticijskim MRP8-pozitivnim območjem in kliničnimi parametri. Uporabljene so bile log-transformirane vrednosti signalov MRP8. Te korelacije so bile analizirane z uporabo vseh 4 skupin (A–D, G) ali 3 skupin brez skupine MCNS (E, F). (TIF)

Slika S7 Korelacija med glomerularno in tubulointersticijsko ekspresijo MRP8. Uporabljene so bile log-transformirane vrednosti signalov MRP8. (TIF)

Slika S8 Korelacija med tubulointersticijskim MRP8-pozitivnim območjem in tubulointersticijsko fibrozo. Uporabljene so bile log-transformirane vrednosti signalov MRP8. (TIF)

Slika S9 Ledvična ekspresija mRNA MRP8 pri bolnikih z DN z ali brez blokade renin-angiotenzina. NS: ni pomembno. n=15 (Da), 6 (Ne). Med 22 primeri DN podatki o zdravilu niso bili na voljo pri enem bolniku. (TIF)

Podporne tabele datoteke S1.

Tabela S1, Patološke diagnoze vseh primerov, pri katerih je bila med letoma 2000 in 2011 na Oddelku za medicino in klinične znanosti Univerzitetne bolnišnice Kyoto opravljena ledvična biopsija. Tabela S2, Primer in zaporedja sonde za TaqMan RT-PCR v realnem času. Tabela S3, Logistična regresijska analiza za pojav ledvičnega dogodka v enem letu. (DOC) Zahvale Hvaležni smo S. Tanaka za statistične nasvete, Y. Ogawa, N. Igarashi in C. Kimura za tehnično pomoč ter A. Yamamoto in SOgino za pomoč tajniku. Prispevki avtorja Zasnoval in oblikoval poskuse: TK KM MK HY MI AN KNMM. Izvedel poskuse: TK HI AI KK TM YK MI AN. Analizirali podatke: TK KM MK HY AS SY KU KN MM. Prispevani reagenti/materiali/orodja za analizo: TK KM. Napisal prispevek: TK KMMM.

Učinki cistanhe: zdravljenje bolezni ledvic

Reference

1. Donath MY, Shoelson SE (2011) Sladkorna bolezen tipa 2 kot vnetna bolezen. Nat Rev Immunol 11: 98–107.

2. Odink K, Cerletti N, Bruggen J, Clerc RG, Tarcsay L, et al. (1987) Dva proteina, ki vežeta kalcij, v infiltriranih makrofagih revmatoidnega artritisa. Nature 330: 80–82.

3. Vogl T, Tenbrock K, Ludwig S, Leukert N, Ehrhardt C, et al. (2007) Mrp8 in Mrp14 sta endogena aktivatorja Tollu podobnega receptorja 4, ki spodbujata smrtni, z endotoksinom povzročen šok. Nat Med 13: 1042–1049.

4. Croce K, Gao H, Wang Y, Mooroka T, Sakuma M, et al. (2009) Protein, povezan z mieloidom-8/14, je kritičen za biološki odziv na vaskularno poškodbo. Circulation 120: 427–436.

5. Loser K, Vogl T, Voskort M, Lueken A, Kupas V, et al. (2010) Tollu podobna receptorja 4 liganda Mrp8 in Mrp14 sta ključna pri razvoju avtoreaktivnih celic CD8 plus T. Nat Med 16: 713–717.

6. Kuwabara T, Mori K, Mukoyama M, Kasahara M, Yokoi H, et al. (2012) Poslabšanje diabetične nefropatije s hiperlipidemijo posreduje Tollu podoben receptor 4 pri miših. Diabetologia 55: 2256–2266.

7. Fujiu K, Manabe I, Nagai R (2011) Epitelijske celice ledvičnih zbiralnih kanalov uravnavajo vnetje pri tubulointersticijski poškodbi pri miših. J Clin Invest 121: 3425–3441.

8. Sekimoto R, Kishida K, Nakatsuji H, Nakagawa T, Funahashi T, et al. (2012) Visoke ravni kompleksa S100A8/A9 (kalprotektin) v obtoku pri japonskih samcih z abdominalno maščobo in neregulirano ekspresijo S100A8 in S100A9 v maščobnih tkivih debelih miši. Biochem Biophys Res Commun 419: 782–789.

9. Mortensen OH, Nielsen AR, Erikstrup C, Plomgaard P, Fischer CP, et al. (2009) Kalprotektin – nov označevalecdebelost. PLoS One 4: e7419.

10. Matsuo S, Imai E, Horio M, Yasuda Y, Tomita K, et al. (2009) Revidirane enačbe za ocenjeno GFR iz serumskega kreatinina na Japonskem. Sem JLedvicaDis53: 982–992.

11. Gross JL, de Azevedo MJ, Silveiro SP, Canani LH, Caramori ML, et al. (2005) Diabetična nefropatija: diagnoza, preprečevanje in zdravljenje. Diabetes Care 28: 164–176.

12. Kambham N, Markowitz GS, Valeri AM, Lin J, D'Agati VD (2001)debelost-povezana glomerulopatija: nastajajoča epidemija.LedvicaInt 59: 1498–1509.

13. Praga M, Morales E (2006)debelost, proteinurija in napredovanje odpovedi ledvic. Curr Opin Nephrol Hypertens 15: 481–486.

14. Kawasaki Y, Hosoya M, Takahashi A, Isome M, Tanji M, et al. (2005) Ekspresija proteina 8, povezanega z mieloidom, na makrofagih je koristen prognostični marker za ledvično disfunkcijo pri otrocih z MPGN tipa 1. Am JLedvicaDis 45: 510–518.

15. Nishiyama A, Konishi Y, Ohashi N, Morikawa T, Urushihara M, et al. (2011) Angiotenzinogen v urinu odraža aktivnost intrarenalnega sistema renin-angiotenzin pri bolnikih z nefropatijo IgA. Nephrol Dial Transplant 26: 170–177.

16. Ogawa Y, Mukoyama M, Yokoi H, Kasahara M, Mori K, et al. (2012) Natriuretični peptidni receptor gvanilil ciklaza-A ščiti podocite pred glomerularno poškodbo, ki jo povzroči aldosteron. J Am Soc Nephrol 23: 1198–1209.

17. Yokoi H, Mukoyama M, Mori K, Kasahara M, Suganami T, et al. (2008) Prekomerna ekspresija rastnega faktorja vezivnega tkiva v podocitih poslabša diabetično nefropatijo pri miših.LedvicaInt 73: 446–455.

18. Hoshino K, Takeuchi O, Kawai T, Sanjo H, Ogawa T, et al. (1999) Vrhunec: Miši s pomanjkanjem Toll-like receptorja 4 (TLR4) so ​​slabo odzivne na lipopolisaharid: dokazi za TLR4 kot genski produkt Lps. J Immunol 162: 3749–3752.

19. Suganami T, Tanimoto-Koyama K, Nishida J, Itoh M, Yuan X, et al. (2007) Vloga poti Tollu podobnega receptorja 4/NF-kappaB pri vnetnih spremembah, ki jih povzročajo nasičene maščobne kisline, v interakciji med adipociti in makrofagi. Arterioscler Thromb Vasc Biol 27: 84–91.

20. Pepper RJ, Hamour S, Chavele KM, Todd SK, Rasmussen N, et al. (2013) Izražanje levkocitov in seruma S100A8/S100A9 odraža aktivnost bolezni pri vaskulitisu in glomerulonefritisu, povezanem z ANCA.LedvicaInt 83: 1150–1158.

21. Ravid M, Brosh D, Ravid-Safran D, Levy Z, Rachmani R (1998) Glavni dejavniki tveganja za nefropatijo pri sladkorni bolezni tipa 2 so ravni holesterola v plazmi, srednji krvni tlak in hiperglikemija. Arch Intern Med 158: 998–1004.

22. Adler AI, Stratton IM, Neil HA, Yudkin JS, Matthews DR, et al. (2000) Povezava sistoličnega krvnega tlaka z makrovaskularnimi in mikrovaskularnimi zapleti sladkorne bolezni tipa 2 (UKPDS 36): prospektivna opazovalna študija. BMJ 321: 412–419.

23. Ruggenenti P, Remuzzi G (1998) Nefropatija sladkorne bolezni tipa -2. J Assoc Nephrol 9: 2157–2169.

24. Taft JL, Nolan CJ, Yeung SP, Hewitson TD, Martin FI (1994) Klinične in histološke korelacije zmanjšanja ledvične funkcije pri diabetičnih bolnikih s proteinurijo. Diabetes 43: 1046–1051.

25. Matsusaka T, Niimura F, Shimizu A, Pastan I, Saito A, et al. (2012) Liverangiotenzinogen je primarni vir ledvičnega angiotenzina II. J Am Soc Nephrol 23: 1181–1189.

26. Kuwabara T, Mori K, Mukoyama M, Kasahara M, Yokoi H, et al. (2009) Ravni lipokalina, povezane z nevtrofilno želatinazo v urinu, odražajo poškodbe glomerulov, proksimalnih tubulov in distalnih nefronov.LedvicaInt 75: 285–294.

27. Kawasaki Y, Suyama K, Go H, Imamura T, Ushijima Y, et al. (2009) Kopičenje makrofagov, ki izražajo z mieloidom povezane beljakovine 8, povezane z napredovanjem sklerotičnih sprememb pri otrocih z nefropatijo IgA. Tohoku J Exp Med 218: 49–55.

28. Nagareddy PR, Murphy AJ, Stirzaker RA, Hu Y, Yu S, et al. (2013) Hiperglikemija spodbuja mielopoezo in ovira razrešitev ateroskleroze. Cell Metab 17: 695–708.

29. Jin Y, Sharma A, Carey C, Hopkins D, Wang X, et al. (2013) Izražanje vnetnih genov je povečano v periferni krvi bolnikov s sladkorno boleznijo tipa 1. Diabetes Care.

30. Longo VD, Finch CE (2003) Evolucijska medicina: od sistemov pritlikavih modelov do zdravih stoletnikov? Znanost 299: 1342–1346.

Citiranje: Kuwabara T, Mori K, Kasahara M, Yokoi H, Imamaki H, et al. (2014) Napovedni pomenLedvicaEkspresija proteina 8, povezanega z mieloidom, pri bolnikih zdebelost- ali bolezni ledvic, povezane s sladkorno boleznijo tipa 2. PLoS ONE 9(2): e88942. doi:10.1371/journal.pone.0088942

Urednik: Utpal Sen, Univerza v Louisvillu, Združene države Amerike

Prejeto 11. septembra 2013; Sprejeto 14. januarja 2014; Objavljeno 18. februarja 2014

Avtorske pravice: 2014 Kuwabara et al. To je članek z odprtim dostopom, ki se distribuira pod pogoji licence Creative Commons Attribution License, ki dovoljuje neomejeno uporabo, distribucijo in reprodukcijo v katerem koli mediju, če sta navedena izvirni avtor in vir.

Financiranje: To delo je bilo delno podprto s štipendijo za raziskave diabetične nefropatije in nefroskleroze japonskega ministrstva za zdravje, delo in socialno skrbstvo (za KM), raziskovalnimi štipendijami japonskega ministrstva za izobraževanje, kulturo, šport in znanost , in tehnologijo (za TK, KM in MM), od Japonske fundacije za uporabno encimologijo (za TK) in od Fundacije za raziskovanje kajenja (za MM). Financerji niso imeli nobene vloge pri načrtovanju študije, zbiranju in analizi podatkov, odločitvi o objavi ali pripravi rokopisa.

Konkurenčni interesi: Avtorji so izjavili, da ne obstajajo konkurenčni interesi.

* E-pošta: keyem@kuhp.kyoto-u.ac.jp