Predhodne ugotovitve povišanih vnetnih plazemskih citokinov pri otrocih z avtizmom, ki imajo sočasne gastrointestinalne simptome 1. del

Povzetek:

Motnja avtističnega spektra (AU) je prisotna pri približno 2 odstotkih populacije in je pogosto povezana s sočasnimi boleznimi, ki lahko vplivajo na kakovost življenja. Ena najpogostejših spremljajočih bolezni pri avtizmu je prisotnost gastrointestinalnih (GI) simptomov, ki jih sestavljajo neredne črevesne navade, kot so zaprtje, driska ali izmenično odvajanje blata.

V zadnjih letih je s poglabljanjem raziskav o motnjah avtističnega spektra (MAS) vse več ljudi začelo posvečati pozornost razmerju med MAS in imunostjo. Čeprav trenutni rezultati raziskav niso popolnoma skladni, je večina študij pokazala, da res obstaja povezava med ASD in imunostjo.

Prvič, veliko otrok se rodi z nizko imunostjo, kar lahko poveča tveganje za razvoj motenj motenj motenj. Drugič, vedno več študij je pokazalo, da obstajajo nepravilnosti v imunskem sistemu bolnikov z ASD. Lahko imajo na primer alergijske reakcije, avtoimunske bolezni itd. Poleg tega so nekatere študije pokazale, da imajo bolniki z ASD višje ravni oksidativnega stresa, kar lahko povzroči poškodbe celic in nevrodegeneracijo.

Vendar pa ne smemo spregledati pozitivnih vidikov življenja z motnjami motenj aduta. Ljudje z ASD imajo lahko močnejšo imuniteto. Študije so pokazale, da je njihov imunski sistem morda boljši pri soočanju z nekaterimi bakterijskimi in virusnimi vdori. Poleg tega imajo lahko bolniki z ASD tudi več imunskih celic, njihov imunski sistem pa je lahko bolj stabilen in manj nagnjen k pretiranim reakcijam.

Na splošno je razmerje med ASD in imunostjo zapleteno in ni le pozitivno ali negativno. To vprašanje je treba v prihodnosti poglobljeno raziskati s strožjimi raziskavami. Ne glede na to pa bi morali vsi biti proaktivni glede motenj motenj motenj in sodelovati z ljudmi z motnjami motenj motenj in njihovimi družinami, da se bodo lahko bolje prilagodili družbi. S tega vidika moramo izboljšati našo imuniteto. Cistanche lahko bistveno izboljša imuniteto, saj mesni pepel vsebuje različne biološko aktivne sestavine, kot so polisaharidi, gobe in Huang Li. Te komponente lahko stimulirajo različne celice imunskega sistema in povečajo njihovo imunsko aktivnost.

Koristi Click cistanche tubulosa

Dokazi o imunski infiltraciji in imunski aktivaciji so bili prikazani v ileumu in debelem črevesu otrok z AU s simptomi GI. Poleg tega je imunska disfunkcija dejavnik, ki prispeva k številnim boleznim prebavil, in domnevamo, da bi bila bolj očitna pri otrocih z AU, ki kažejo simptome prebavil, kot pri tistih, ki nimajo simptomov prebavil.

Namen te predhodne študije je bil ugotoviti, ali so spremenjene ravni citokinov v plazmi pri otrocih z AU s simptomi GI v primerjavi z otroki z AU brez simptomov GI, otroci v tipičnem razvoju (TD) s simptomi GI in otroci TD brez simptomov GI, iz istega leta. populacijska kohorta. Raven citokinov v plazmi so ocenili z multipleksnimi testi.

Pri kontrolah TD z ali brez GI simptomov niso opazili razlik v citokinih v plazmi; vendar so bili številni prirojeni (IL-1, TNF, GM-CSF, IFN) in adaptivni citokini (IL-4, IL-13, IL-12p70) povečani pri AU otroci s simptomi GI v primerjavi z otroki z AU brez simptomov GI. Citokin IL-15, pomemben za sluznico, je bil povečan pri AU s simptomi GI v primerjavi z vsemi skupinami.

V nasprotju s tem je bil regulativni citokin IL-10 zmanjšan pri AU s simptomi GI in lahko kaže na neravnovesje v provnetnih/regulacijskih signalih. Ti podatki kažejo, da imajo otroci s simptomi AU in GI neravnovesje v svojem imunskem odzivu, ki je razvidno iz njihovih ravni citokinov v plazmi. Ugotovitev, ki bi lahko pokazala na možne terapevtske in/ali strategije spremljanja težav z GI v AU.

Ključne besede:
avtizem; ASD; imunski; vnetje; prebavila; sočasne bolezni; citokini; ureditev; shizofrenija; strpnost; prirojena imunost; adaptivna imunost; imunost sluznice.

1. Uvod

Razširjenost nevrorazvojnih motenj, kot je motnja avtističnega spektra (AU), po vsem svetu hitro narašča. Njihova etiologija je večinoma neznana, vendar je v večini primerov verjetno posledica kombinacije genetskih in okoljskih dejavnikov. Diagnoza AU je trenutno omejena na vedenjske lastnosti, vključno s ponavljajočim se in stereotipnim vedenjem ter motnjami v komunikaciji in socialni interakciji.

Vendar pa veliko posameznikov z AU trpi tudi za eno ali več spremljajočimi zdravstvenimi boleznimi, vključno z disfunkcijo prebavil (GI) [1–7]. O simptomih prebavil pri avtizmu so poročali že 80 let [8], pri čemer so bili simptomi nerednega odvajanja zaprtja in driske najpogostejši [9–11].

V naši veliki kohortni študiji s 1000 udeleženci je bilo pri otrocih z AU 6- do 8-krat večja verjetnost, da bodo imeli simptome GI v primerjavi s starostno primerljivimi otroki v tipičnem razvoju; poleg tega so bili GI simptomi povezani s slabšimi vedenjskimi ocenami [12].

Kljub pogostim poročilom o disfunkciji prebavil v AU primanjkuje napotitev v specializirane klinike ali ustreznega zdravljenja simptomov prebavil. Odsotnost študij o bioloških podpisih pri sočasnih boleznih AU je prav tako ovirala strategije, ki bi lahko pomagale ublažiti težave z GI.
Imunske celice sluznice obsegajo približno 70 odstotkov imunskih celic v telesu in disfunkcija teh celic ima lahko škodljive posledice za delovanje prebavil. Spremenjena imunost sluznice lahko vpliva na funkcijo epitelijske pregrade gostitelja, raznolikost komenzalnih bakterij v črevesju in enterični živčni sistem [3].

Številna poročila so opisala imunske nenormalnosti pri AU, vključno s spremembami v imunski genetiki, izkrivljeno proizvodnjo citokinov, spremenjeno funkcijo T-celic in okrepljene prirojene imunske odzive [13–16]. Poleg tega so poročali o imunski aktivaciji pri skoraj dveh tretjinah otrok z AU in je povezana s hujšim vedenjem [13]. Endoskopske analize AU otrok s simptomi GI so pokazale prisotnost subtilnega, difuznega vnetja črevesnega trakta (pregledano v [1,4]).

Vendar pa se o natančni naravi tega vnetja razpravlja in trenutno ni jasna. Histologija, imunohistokemija in dokazi pretočne citometrije dosledno kažejo pan-enterično infiltracijo imunskih celic, kot so limfociti, monociti, celice naravne ubijalke (NK) in eozinofili, v stene prebavil pri otrocih z AU v primerjavi s tipično razvijajočimi se ( TD) otroci s simptomi GI [9,17–21].

Ta poročila so pokazala, da so pri otrocih s simptomi AU in GI povečani infiltrati imunskih celic v debelem črevesu, ileumu, dvanajstniku in želodcu. Poleg tega imajo limfociti, ki se infiltrirajo, izrazit provnetni fenotip – s povečanimi CD3 in IL-6 plus celicami, CD3 in TNF plus celicami ter zmanjšanimi regulatornimi CD3 in IL-10 plus celicami pri otrocih z AU in GI simptomi v primerjavi s kontrolami [17,18].

Primerjava intracelularne proizvodnje citokinov pred in po imunskem izzivu v perifernih celicah T je pokazala podoben profil s povečano proizvodnjo pro-vnetnih citokinov, vendar zmanjšano regulacijo pri otrocih z AU, ki so imeli GI simptome v primerjavi s kontrolami [22].

Stimulirani odzivi citokinov, opaženi pri otrocih s simptomi AU in GI, so se razlikovali od otrok z AU brez simptomov GI, kot tudi pri otrocih s kontrolno skupino TD in kažejo, da je proizvodnja citokinov po imunskem izzivu lahko edinstvena pri otrocih s simptomi AU in GI.

Imunski profili pri otrocih s simptomi AU in GI so se prav tako razlikovali od otrok z ugotovljeno vnetno črevesno boleznijo (KVČB), kot so Crohnova bolezen, celiakija in ulcerozni kolitis [9,17–19,21]. Podobne ugotovitve povečane proizvodnje vnetnih citokinov po stimulaciji, IL-1, IL-6 in TNF so bile prikazane pri otrocih, ki imajo AU in občutljivost na hrano v primerjavi s kontrolnimi skupinami [23,24].

Iskanje bioloških podpisov ali biomarkerjev pri avtizmu je bilo doslej premalo raziskano področje. Verjetno največja uporabnost bioloških podpisov v kontekstu AU ne bo pri določanju osnovnih simptomov, temveč pri povezanih sočasnih boleznih. Te sočasne bolezni imajo pogosto močan vpliv na resnost simptomov ali povezano vedenje, kot so spanje, razdražljivost, agresija ali tesnoba [3].

Nekateri plazemski citokini ali imunski mediatorji so bili raziskani zaradi njihovega potenciala kot biomarkerjev, večinoma v kontekstu resnosti AU [14, 25–27]. Manjkajo plazemski označevalci, ki bi lahko pomagali prepoznati ali slediti poteku simptomov GI pri AU. V trenutni študiji skušamo opredeliti profile citokinov v plazmi pri otrocih z AU z ali brez GI simptomov iz naključnega vzorčenja populacijske študije primera in kontrole.

2. Materiali in metode

Ta študija je vključevala 79 udeležencev, ki so bili vključeni v študijo CHARGE (Tveganje za otroški avtizem zaradi genetike in okolja), tekočo populacijsko študijo primera in kontrole [28]. Na kratko, udeleženci študije CHARGE so bili izbrani iz dveh slojev: avtističnih motenj (AU) in splošne populacije v tipičnem razvoju (TD).

Upravičeni otroci so bili stari med 24 in 60 meseci, rojeni v Kaliforniji, živeči z vsaj enim biološkim staršem, ki je govoril angleško ali špansko, in prebivali na območjih določenega seznama regionalnih središč v Kaliforniji. Otroci z AU so bili identificirani prek regionalnih centrov, ponudnikov/klinik, samonapotitev in širše javnosti.

Otroci TD so bili identificirani iz državnih rojstnih datotek, stratificiran naključni vzorec pa je bil ustvarjen s frekvenčnim ujemanjem s predvideno porazdelitvijo primerov AU glede na starost, spol in zbirno območje. Otroci z večjimi motoričnimi in senzoričnimi okvarami (npr. slepota in gluhost), ki bi onemogočale veljavno oceno razvoja, so bili izključeni.

Protokol študije CHARGE so odobrili institucionalni revizijski odbori kalifornijske univerze v Davisu in odbor zvezne države Kalifornija za zaščito oseb. Pred udeležbo je bilo pridobljeno pisno informirano soglasje.

Za to študijo je bilo 40 primerov z AU in 40 TD kontrolnih skupin naključno izbranih iz skupine udeležencev študije CHARGE, vključenih med aprilom 2003 in aprilom 2008, ki so zagotovili vzorec krvi, izpolnili vprašalnik o zgodovini GI in imeli potrjeno diagnozo AU ali TD. Primeri in kontrolne osebe so se ujemali glede na starost ob odvzemu krvi (v 3--mesečnih intervalih) in glede na to, ali so imeli pogoste GI simptome nerednega odvajanja blata (opredeljeno kot pogosta driska ali zaprtje v zadnjih 3 mesecih).

Prvotni cilj študije je bil imeti 20 primerov in 20 kontrolnih skupin s pogostimi simptomi GI ter 20 primerov in 20 kontrolnih skupin brez pogostih simptomov GI. Ker je v času študije samo 9 kontrolnih oseb v celotni študiji CHARGE imelo pogoste gastrointestinalne simptome, so se primeri in kontrole primerjali samo glede starosti ob odvzemu krvi.

Končni vzorec 80 otrok je obsegal 20 primerov (povprečna starost 41,7 ± 9,6 meseca; 16 moških) in 9 kontrolnih (povprečna starost 41,6 ± 9,1 meseca; 7 moških) s pogostimi GI simptomi in 20 primerov (povprečna starost 41,9 ± 9,3 meseca; 19) moški) in 31 kontrolnih oseb (povprečna starost 42,2 ± 9,3 meseca; 26 moških) brez pogostih GI simptomov. Ker je šlo za naključno vzorčenje, nismo izključevali na podlagi uporabe zdravil.

Nekaj ​​otrok je v času odvzema krvi jemalo zdravila: med njimi so bila protimikrobna zdravila, kot so aciklovir, ketokonazol (2 primera s simptomi GI ter 2 primera in 2 kontrolni skupini brez simptomov GI), steroidi, kot so inhalatorji za astmo, Nasonex (2 primera in 1 kontrola s simptomi GI ter 1 primer in 1 kontrola brez simptomov GI) in zdravila, povezana z GI, kot so Miralax, Nexium, magnezijevo mleko (2 primera in 3 kontrole s simptomi GI).

Nihče od udeležencev ni jemal antipsihotičnih zdravil. Pri skupni analizi (zdravljeni proti nezdravljenim, znotraj skupin) ali za posamezna zdravila nismo ugotovili učinkov zdravil na podatke.

Diagnoza avtizma je bila potrjena z ocenami zlatega standarda: Autism Diagnostic Interview-Revised (ADI-R; [29]) in Autism Diagnostic Observation Schedule (ADOS; [30]). Kontrole so bile pregledane za AU z uporabo vprašalnika socialne komunikacije (SCQ; [31]) in nobena ni dosegla točk nad mejno vrednostjo (SCQ večji ali enak 15).
Mullenove lestvice zgodnjega učenja (MSEL; [32]) in Vinelandove lestvice prilagodljivega vedenja (VABS; [33]) so bile uporabljene za primere in kontrole za določitev kognitivnega oziroma prilagodljivega razvoja. Tipičen razvoj pri kontrolah je bil opredeljen kot sestavljeni rezultat večji ali enak 70 pri obeh ocenah in brez predhodne diagnoze zaostanka v razvoju.

Vsi kliniki na Inštitutu UC Davis MIND (Medical Investigation of Neurodevelopmental Disorders) so dosegli zanesljivost raziskav na podlagi razvojnih ocen, ki so jih izvajali (ADI-R, ADOS, MSEL in VABS). Dvojezično študijsko osebje je bilo na voljo za upravljanje informirane privolitve in vseh instrumentov/vprašalnikov v španščini.

2.1. Odvzem krvi in ​​analiza citokinov
Periferna kri je bila zbrana pri vsakem subjektu v kislinsko-citratnih dekstroznih vakuumskih posodah (BD Biosciences; San Jose, CA, ZDA). Kri je bila centrifugirana pri 2100 obratih na minuto 10 minut, plazma je bila nato pobrana in shranjena pri -80 ◦C pred analizami citokinov. Koncentracije citokinov v plazmi udeležencev so bile določene z imunološkim testom z multipleksnimi kroglicami (Millipore, Billerica, MA, ZDA). Vzorci in referenčne kontrole so potekali v skladu s protokolom proizvajalca.

Na kratko, 25 µL vzorca plazme smo inkubirali s fluorescenčnimi kroglicami, vezanimi na protitelesa, nato sprali in inkubirali z biotiniliranimi detekcijskimi protitelesi, ki jim je sledil streptavidin-fikoeritrin. Kroglice so bile nato analizirane s sistemom suspenzijskih nizov Luminex™ 100, ki temelji na pretoku (Bio-Plex 200; BioRad Laboratories, Inc., Hercules, CA, ZDA). Standardne krivulje so bile ustvarjene s programsko opremo Bio-plex Manager za določitev neznane koncentracije vzorca. Vsi vzorci in referenčni citokini so bili pripravljeni v skladu s priporočili proizvajalca, ravni citokinov in kemokinov pa so bile ocenjene z Luminex™ multipleks analizo.

Vrednosti vzorcev so izražene kot pg/mL. Analizirani citokini/kemokini so bili interlevkin (IL){{0}}, IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL{ {5}}, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL{{10}} (p4{{48} }), IL-12 (p7{{50}}), IL-13, IL-15, IL-17, stimulacija kolonije granulocitov-makrofagov faktor (GM-CSF), granulocitne kolonije stimulirajoči faktor (G-CSF), interferon gama (IFN), IFN- 2, faktor tumorske nekroze alfa (TNF), TNF, eotaksin, monocitni kemotaktični protein (MCP) )-1, makrofagni vnetni protein (MIP)-1 , MIP-1 in 10 kDa interferon-gama induciran protein (IP-10), minimalne meje zaznavanja za te citokine/kemokine so bile 2,4, 0,3, 1,2, 1,3, 2,2, {{60}},2, 1,1, 2,4, 0,9, 0.3, 34,9, 0.8, 1.0, 0,8, 0,4, 5,0, 0,9, 0,5, 0,4, 1,5, 0,9, 5., 1,8, 5, 10 ,7 oziroma 3,6 pg/ml.

Dobljene koncentracije pod mejo zaznavnosti (LOD) metode so bile izračunane kot polovica meje zaznavnosti (LOD/2) za statistične primerjave. Vrednosti, dobljene z odčitavanjem vzorcev, ki so presegli zgornjo mejo metode občutljivosti, so bile dodatno razredčene in koncentracije citokinov ustrezno izračunane.

Variacije ravni citokinov znotraj in med ploščami/testom so bile z uporabo reprezentativnih vzorcev, izvedenih na vseh ploščah, manjše od 5 odstotkov. Alikvoti plazme niso bili podvrženi nobenemu prejšnjemu ciklu zamrzovanja/odmrzovanja. Analitik citokinov ni bil seznanjen s primerom ali statusom kontrole vsakega vzorca.

For more information:1950477648nn@gmail.com