Funkcije čiščenja različnih ekstrakcijskih delov C. Deserticola proti zaprtju Podganji model

POVZETEK: CILJ Raziskati odvajalne učinke različnih ekstrahiranih delov C. deserticola. METODE Imodium model zaprtja podgane je bil vzpostavljen za opazovanje defekacije in določanje gastrointestinalnih hormonov in nevrotransmiterjev itd. REZULTATI Različni ekstrahirani deli C. deserticola so morali spodbujati učinke na izločanje zaprtja pri podganah. V primerjavi z modelno skupino so se SS, AchE, SP in MTL oligosaharidnega dela povečali, 5-HT, VIP in NT oligosaharidnega dela so se znatno povečali (P<0. 05 or P<0. 01), AQP3 significantly reduced (P<0. 01), which suggested that the oligosaccharide part had obvious therapeutic effects. The remaining parts showed no significant difference. Oligosaccharide was an ef-the festive working part of C. deserticola. CONCLUSION The oligosaccharide of C. deserticola has good purging effects, and can effectively treat constipation, which provides the scientific basis for pharmaceutical development.

KLJUČNE BESEDE:C. deserticola; čiščenje; gastrointestinalni hormoni; nevrotransmiterji; oligosaharidi

Cistanche deserticola je suho, luskasto, mesnato steblo rastline Orobaceae Cistanche deserticola ali cevastega cveta Cistanche deserticola. Znan je kot "puščavski ginseng" in ima funkcije, kot so vlaženje črevesja, pospeševanje gibanja črevesja, toniziranje ledvic in krepitev janga. Cistanche deserticola deluje pomirjevalno in odvajalno ter je primerna za zdravljenje zaprtja pri ljudeh s šibkim telesom.. Trenutno obstaja veliko poročil o učinku defekacije Cistanche deserticola, vendar obstaja majhna primerjava razlik v učinkih defekacije različnih delov ekstrakcije. Naša raziskovalna skupina je predhodno raziskovala učinek defekacije Cistanche deserticola na podgane z zaprtjem in normalne podgane. Da bi identificirali njegove učinkovite dele, je naša raziskovalna skupina nadalje raziskala razlike v učinku defekacije različnih izvlečkov Cistanche deserticola na podgane z zaprtjem, kar je zagotovilo znanstveno podlago za razvoj novih zdravil.

Puščavski ginseng

Kliknite tukaj za ogled izdelkov Cistanche

【Vprašajte za več】 E-pošta:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

1 Material

1.1 Preskusno zdravilo

Cistanche deserticola je bila kupljena pri Inner Mongolia Wangyedi Co., Ltd. in identificirana s strani profesorja Zhai Yanjuna z Univerze tradicionalne kitajske medicine Liaoning kot suho, luskasto, mesnato steblo rastline Cistanche deserticola YCMa iz družine kitajske medicine; Loperamidijev klorid kapsule (trgovsko ime: Yimengting, številka serije: 150413966, Xi'an Janssen Pharmaceutical Co., Ltd.); Tongbianling kapsule (številka serije 12090202, Jinan Limeng Pharmaceutical Co., Ltd.); Aktivno oglje (številka serije 20040602, Liyang Zhuxi Activated Carbon Co., Ltd.); Komplet za snov P (SP) (številka serije: BPE30328), komplet za somatostatin (SS) (številka serije: BPE30378), komplet za motilin (MTL) (številka serije: BPE30376), komplet za acetilholinesterazo (AchE) (številka serije: BPE30063), vazoaktivni komplet za testiranje intestinalnih peptidov (VIP) (številka serije BPE31682), komplet za testiranje 5-hidroksitriptamina (5-HT) (številka serije BPE30326), komplet za testiranje akvaporina 3 (AQP3) (številka serije BPE30361), nevrotenzin ( NT) testni komplet (številka serije BPE30823), vse zagotavlja Shanghai Langton Biotechnology Co., Ltd; Preostali reagenti so analitično čisti.

Superman zelišča cistanche

1.2 Instrument 

Instrument za označevanje encimov (Thermo Fisher Scientific, ZDA); TGL-16C namizna centrifuga (Shanghai Anting Scientific Instrument Factory); Elektronska tehtnica (Shanghai Yousheng Weighing Instrument Co., Ltd.); Vortex mešalnik (Shanghai Qingpu Huxi Instrument Factory); Škatla s konstantno temperaturo in vlažnostjo (Shanghai Yiheng Scientific Instrument Co., Ltd.).

1.3 Žival

Podgane SD s telesno težo 180-220g, stopnja SPF, ki jih je zagotovil Liaoning Changsheng Biotechnology Co., Ltd., številka licence SCXK (Liao) 2015-0001.

2 Metode

2.1 Priprava različnih ekstrahiranih delov Cistanche deserticola

Rezina Cistanche deserticola

Vzemite ustrezno količino decoction decoction Cistanche deserticola, dodajte 8-kratno količino vode, segrejte in refluktirajte, da ekstrahirate 3-krat, vsakič 1 uro. Filtrat združimo, zmanjšamo pritisk in koncentriramo na relativno gostoto 1,15 (merjeno pri 50 stopinjah), dodamo 95 odstotkov etanola do 60 odstotkov vsebnosti alkohola, oborimo pri nizki temperaturi 12 ur, filtriramo in oborimo do celotnega mesta ekstrakcije polisaharida ; Vzemite tekočino, dobljeno z vakuumsko koncentracijo, jo očistite z makroporozno smolo, jo sperite z vodo, zberite raztopino za pranje vode in jo uparite do suhega, da dobite skupno frakcijo oligosaharidov; Nato eluirajte s 40-odstotnim etanolom, zberite 40-odstotni eluent etanola, koncentrirajte pod znižanim tlakom in posušite, da dobite skupne glikozide. Vsak ekstrahirani del raztopite v vodi in odstavite.

Poskus Cistanche deserticola

2.2 Združevanje

Po enem tednu prilagojenega hranjenja so bile podgane SD naključno razdeljene v 6 skupin z 8 podganami v vsaki skupini, vključno z normalno kontrolno skupino, modelno skupino, skupino za pozitivno kontrolo zdravila, skupino skupnih polisaharidov, skupino skupnih oligosaharidov in skupino skupnih saponinov. Vzeli so normalne podgane. Razen običajne kontrolne skupine je vsaka skupina podgan tri zaporedne dni dobila 3.0mg · kg-1 kapsul loperamidijevega klorida (trgovsko ime: Yimengting) z gavažo za ponovitev modela zaprtja. Po uspešnem modeliranju, razen za normalno kontrolno skupino in modelno skupino, so podgane v vseh drugih skupinah neprekinjeno dajali z odmerkom 1 ml/100 g 9 dni s koncentracijo 2,74 g · kg-1, ki ustreza testnemu vzorcu . Normalni kontrolni skupini in modelni skupini so dali enako količino fiziološke raztopine.

Rezina Cistanche deserticola

2.3 Kazalniki opazovanja

2.3.1 Stanje defekacije podgan

Po zadnjem dajanju so se podgane postile 12 ur in si niso mogle pomagati, da ne bi imele vode. Vsaka skupina je dobila 20 odstotkov aktivnega oglja z gavažo v odmerku 25 ml · kg-1. Podgane so postavili v presnovno kletko in opazovali število delcev in težo črnega blata, izločenega v 6 urah.

2.3.2 Stopnje izražanja različnih indikatorjev v serumu, plazmi in tkivu debelega črevesa podgan

Po zaključku opazovanja so se vse podgane še 6 ur postile in si niso mogle pomagati, da ne bi pile. Približno 5 ml krvi je bilo odvzetih iz vse trebušne aorte in postavljeno v dve EP epruveti, od katerih je bila ena vnaprej dodana heparina 50 μL. Za zbiranje plazme in druga za zbiranje seruma. Ko stojite 30 minut, centrifugirajte pri 2500 r · min-1 5 minut, ločeno zberite serum in plazmo, vzemite supernatant za testiranje in shranite pri -70 stopinjah pri nizki temperaturi. Tkivo kolona 2 cm po odstranitvi slepe zaklopke je bilo razrezano. Vsebino smo sprali s fiziološko raztopino, posušili s filtrirnim papirjem in dodali ustrezno količino PBS (pH 7,4). Centrifugirajte pri 4 stopinjah 3500 r · min-1 15 minut in supernatant smo vzeli za testiranje. Supernatant je bil shranjen pri -70 stopinjah pri nizki temperaturi. Vzemite supernatant seruma, plazme in tkiva debelega črevesa v skladu z navodili kompleta in uporabite SS, AchE, SP, MTL, 5-HT, VIP, NT in AQP3.

2.4 Obdelava podatkov

Za analizo variance je bila uporabljena statistična programska oprema SPSS 17.{1}}, vsi podatki pa so bili izraženi v 珚 x ± s. t-test je bil izveden za razlike med skupinami in P<0.05 was considered significant and statistically significant.

3 Rezultati

3.1 Vpliv na iztrebljanje pri podganah z zaprtjem

V primerjavi z normalno kontrolno skupino so fekalni delci in teža podgan modelne skupine pokazali trend zmanjševanja. V primerjavi z modelno skupino so skupine Cistanche deserticola pokazale trend spodbujanja števila fekalnih delcev in fekalne teže pri podganah. Skupina skupnih oligosaharidov Cistanche deserticola je pokazala višji trend kot druge skupine zdravljenja, vendar ni bilo statistične pomembnosti, kar kaže, da je imela skupna skupina oligosaharidov pomemben terapevtski učinek in je bila učinkovito mesto delovanja. Rezultati so prikazani v tabeli 1.

Zavihek 1 Učinki testnih vzorcev na število odpadnih zrn in težo iztrebkov zaprtih podgan (士s,n=8)

3.2 Učinki na serumske ravni SS, NT in AchE pri podganah z modelom zaprtja

Iz rezultatov v tabeli 2 je razvidno, da sta bila SS in NT podgan modelne skupine v primerjavi z normalno kontrolno skupino znatno zmanjšana (P<0.01), and AchE showed a downward trend, indicating that the constipation model was successfully established. Compared with the model group, the NT of rats in each treatment group was significantly increased (P<0.05), while SS and AchE showed an increasing trend. Among them, the total oligosaccharide group showed a significant increase, indicating that the total oligosaccharide had a significant therapeutic effect and was an effective site of action for Cistanche deserticola.

3.3 Učinki na ravni SP in MTL v plazmi pri podganah z modelom zaprtja

Iz rezultatov v tabeli 3 je razvidno, da sta bila SP in MTL podgan modelne skupine v primerjavi z normalno kontrolno skupino znatno zmanjšana (P<0.05 or P<0.01), indicating that the constipation model was successfully established. Compared with the model group, the SP and MTL of rats in each treatment group showed an increasing trend. Among them, the SP of rats in the total oligosaccharide group was significantly increased compared to the other treatment groups (P<0.05 or P<0.01), and the MTL showed an increasing trend, but there was no statistical difference, indicating that the total oligosaccharide group had a significant therapeutic effect and was an effective part of Cistanche deserticola.

Zavihek 2 Učinek testnih vzorcev na SS, NT in AchE v serumu podgan z zaprtjem (士s,n=8)

Opomba: V primerjavi z običajno kontrolno skupino, aP<0.05, bP<0.01; Compared with the model group, cP<0.05, dP<0.01; Compared with the total oligosaccharide group, eP<0.05, fP<0.01 (the same in the following table)

3.4 Vpliv na vsebnost AQP3, 5-HT, VIP v tkivu debelega črevesa podgan modela zaprtja

V primerjavi z običajno kontrolno skupino sta bila 5-HT in VIP podgan modelne skupine znatno zmanjšana (P<0.05 or P<0.01), and AQP3 showed an upward trend, indicating that the constipation model was successfully established. Compared with the model group, the 5-HT, and VIP of the total oligosaccharide group rats were significantly increased (P<0.05 or P<0.01), while AQP3 was significantly reduced (P<0.01). The AQP3 and 5-HT of the total oligosaccharide group rats showed significant differences compared to the other treatment groups (P<0.05 or P<0.01), and VIP showed an upward trend, but there was no statistical difference, It indicates that the total oligosaccharide group has significant therapeutic effects and is the effective site of action for Cistanche deserticola (Table 4).

Zavihek 3 Učinek testnih vzorcev na SP in MTL v plazmi podgan z zaprtjem (士s,n=8)

4 Razprava

Zaprtje je pogosta klinična bolezen, tesno povezana z motiliteto prebavil. MTL in SP sta ekscitatorna peptida z regulativnimi funkcijami v gibljivosti prebavil, ki lahko spodbujata gibljivost prebavil. NT se nahaja v živčnem tkivu, distalnem ileumu in jejunumu in ima funkcijo izboljšanja gibljivosti debelega črevesa. SS obstaja v črevesnem živčnem pleksusu in celicah D trebušne slinavke in želodca, ki lahko zavirajo peristaltiko prebavil, podaljšajo prehodni čas debelega in tankega črevesa [6] ter zavirajo izločanje VIP in drugih gastrointestinalnih hormonov. 5-HT je pomemben nevrotransmiter v enteričnem živčnem sistemu, ki lahko spodbuja izločanje in črevesno peristaltiko. AQP3 se nahaja v epitelijskih celicah prebavnega trakta in ima pomembno vlogo pri absorpciji vode. Ta poskus ima terapevtski učinek na zaprtje z uravnavanjem teh gastrointestinalnih hormonov in črevesnih nevrotransmiterjev.

Mesto ekstrakcije ima pospeševalni učinek na izločanje zaprtih podgan. V primerjavi z modelno skupino je skupina skupnih oligosaharidov pokazala naraščajoči trend v SS, AchE, SP in MTL s pomembnim povečanjem 5-HT, VIP in NT (P<0.05 or P<0.01), and a significant decrease in AQP3 (P<0.01), indicating that the total oligosaccharide group has a significant therapeutic effect, There was no significant difference between the other groups, and total oligosaccharides were the effective active sites of Cistanche deserticola. The total oligosaccharides of Cistanche deserticola have good moisturizing and defecating effects, which can effectively treat constipation. It is hoped that this result will provide a scientific basis for the development of new drugs.

Zavihek 4 Učinek AQP3, 5-HT in VIP v tkivih debelega črevesa podgan (士s,n=8)

referenca:

[1] Kitajska farmakopeja. 1. del [S]. 2010: 126

[2] Zhong Ping. Puščavski ginseng in Cistanche [J]. Gozd in človek, 2004, 24 (11): 25

[3] Tu Pengfei, Jiang Yong, Guo Yuhai et al. Raziskave o Cistanche deserticola in njenem industrijskem razvoju [J]. Chinese Journal of Pharmacy, 2011, 46 (12): 882-886

[4] Wu Feng, Zhao Xi, Xue Hua et al. Učinek kapsul aloe vera Lingzhi na vlaženje črevesja in lajšanje zaprtja [J]. Journal of Transportation Medicine, 2008, 22 (4): 338

[5] Foxx OA, Camilleri M, Ste PD, et al. Vpliv analoga somatostatin-kositra na motorične in senzorične funkcije želodca pri zdravih ljudeh [J]. Gut, 2003, 52: 1555-1561.

[6] Park JH, Rhee PL, Kim G, et al. Število enteroendokrinih celic je v korelaciji z visceralno preobčutljivostjo pri bolnikih s sindromom razdražljivega črevesa, ki prevladuje pri driski [J]. Neurogastro-enterol Motil, 2006, 18(7): 539-546.

[7] Brancati SB, Zadori ZS, Nemeth J, et al. Snov P inducira zaščito želodčne sluznice na supraspinalni ravni s povečanjem ravni endomorfina-2 pri podganah[J]. Brain Res Bull, 2013,91(2):38-45.

[8] Fukuda A, Goto T, Kuroishi KN et al. Hemokinin-1kompetitivno zavira stimulacijo tvorbe in delovanja os-teoklastov, ki jo povzroča snov P [J]. Neuropeptides, 2013, 47 (4): 251-259.

[9] Layer PK, Laczinski J, Salfelder A, et al. Holinesteraze v razvoju: požarni zid AChEasa za zaviranje celične proliferacije in podporo diferenciacije [J]. Chem Biol Interact, 2013, 203(1): 227-269.