Napredek raziskav pri klasifikaciji difuznega velikoceličnega B-limfoma

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Difuzni velikocelični limfom B (DLBCL) predstavlja 25 do 35 odstotkov vseh ne-Hodgkinovih limfomov in je heterogena in agresivna skupina z različnimi kliničnimi, patološkimi in biološkimi značilnostmi. limfom. Prejšnje klinične študije so opredelile rituksimab, ciklofosfamid, doksorubicin, vinkristin in prednizon (R-CHOP) kot standardno zdravljenje prve izbire za bolnike z DLBCL, od katerih jih lahko 50 do 70 odstotkov bolnikov, vendar pa veliko število bolnikov kaže neodzivna ali popolna remisija in nato ponovitev, medtem ko je le 10 odstotkov neodzivnih bolnikov in bolnikov, pri katerih se je bolezen ponovila, mogoče pozdraviti s tradicionalno rešilno imunokemoterapijo v kombinaciji z avtologno presaditvijo hematopoetskih matičnih celic, preostalih 90 odstotkov bolnikov pa ima slabe rezultate zdravljenja. Zato je postalo velik izziv, kako izboljšati prognozo teh bolnikov. Trenutno potekajo tudi klinične študije, ki razpravljajo o kombinaciji drugih zdravil (kot so lenalidomid, ibrutinib itd.) na osnovi R-CHOP za nadaljnje izboljšanje učinkovitosti, vendar do bistvenega napredka ni prišlo. DLBCL ima precejšnjo heterogenost, zato je tudi eno od trenutnih raziskovalnih žarišč, kako postaviti natančne stratificirane diagnoze in voditi individualizirano zdravljenje. Ta članek povzema napredek klasifikacije DLBCL.

cistamchePovečajte celično proliferacijo

1. COO tipizacija DLBCL z uporabo čipa za profiliranje genske ekspresije

DLBCL ima očitno heterogenost v celični morfologiji in prognozi. Leta 2000 so ALIZADEH in drugi uporabili tehnologijo genskega čipa za pregledovanje in odkrivanje genov 3 186, ki igrajo pomembno vlogo pri razvoju, diferenciaciji in karcinogenezi limfocitov, ter preslikali gensko izražanje DLBCL. Profil genske ekspresije (GEP) je pokazal, da DLBCL izvira iz limfocitov B na različnih stopnjah diferenciacije. Glede na GEP lahko DLBCL razdelimo na dva podtipa: tip B celicam podoben zarodnemu središču (GCB) in tip aktiviranim celicam B (ABC). Poznejše študije ROSENWALD et al. tudi potrdil ta rezultat. Kasnejše študije so vključevale več primerov in več vrst genetskega presejanja in ugotovile, da nekateri bolniki niso mogli določiti izvora celic, ki so bile označene med dvema podtipoma, imenovanim tip 3, znan tudi kot nerazvrščen. Za DLBCL različnega izvora je študija pokazala, da je pokazala različne prognoze, med katerimi bi lahko DLBCL, pridobljen iz GCB, dosegel daljši čas preživetja. Tipizacija celičnega izvora (COO) je razkrila heterogenost DLBCL in pri zdravljenju z R-CHOP so bile pomembne razlike v preživetju med podtipi, kar je zagotovilo teoretično osnovo za oceno prognoze in izbiro režima. Rezultati testa GEP, ki temeljijo na tehnologiji genskega čipa, so trenutno priznani kot zlati standard za presojo izvora celic DLBCL. Rezultati testa so najbolj zanesljivi, vendar so dragi in zahtevajo visoke vzorce, običajno sveže zamrznjene vzorce živega tkiva, zato operabilnost ni dobra. V klinični praksi se ne uporablja široko.

2. Uporaba tehnologije NanoString za COO tipkanje DLBCL

NanoString (Fluorescent Barcode Labeled Single-Molecule Detection) je nova tehnologija profiliranja ekspresije genov z visoko zmogljivostjo zaznavanja, ki temelji na neposrednem merjenju fluorescentnih molekularnih črtnih kod na sondah, potem ko se molekule nukleinske kisline hibridizirajo v sonde. Vsaka oznaka črtne kode ustreza določenemu zaporedju mRNA in v istem vzorcu je mogoče izmeriti do 800 črtnih kod, medtem ko je zahtevana količina vzorca lahko le 100 ng RNA. Tehnologija digitalne kvantitacije NanoString odpravlja potrebo po prepisovanju, pomnoževanju ali gradnji knjižnice, odpravlja dolgotrajne eksperimentalne postopke in človeške vire ter zmanjšuje morebitno pristranskost, ki jo povzročajo encimske reakcije. Za klinične vzorce z redkimi vzorci lahko tehnologija NanoString neposredno uporabi vzorce, vgrajene v parafin, za kvantifikacijo RNK brez ekstrakcije RNK. Zaradi te tehnične prednosti je bolj praktičen v klinični praksi. SCOTT et al. pregledali 20 genov na podlagi podatkov tipizacije GEP in uporabili tehnologijo NanoString za izvedbo tipizacije COO na 119 vzorcih DLBCL. Skladnost med rezultati raziskave in »zlatim standardom« je dosegla 95 odstotkov, bolnike pa lahko razdelimo tudi na tip GCB, tip ABC in neklasificirani tip, zadnja dva skupaj imenujemo ne-GCB tip, kar tudi kaže, da je prognoza tipa GCB je boljša kot pri ne-GCB tipu. Druge študije, ki temeljijo na tehnologiji NanoString, so dodatno potrdile vrednost te tehnologije pri COO tipkanju DLBCL.

Zelišče tradicionalne kitajske medicinecistamche, znan tudi kot "puščavski ginseng"

3. COO tipizacija DLBCL s kvantitativno PCR tehnologijo

Tako tipkanje genskega čipa kot tipkanje NanoString zahtevata drago posebno opremo, ki jo je težko široko uporabljati v klinični praksi. Kvantitativna PCR je pogosto uporabljena metoda za preverjanje izražanja genov. Ima značilnosti enostavnega delovanja, visoke občutljivosti in natančnosti ter se lahko pridobi iz vzorcev, vdelanih v parafin. Ekipa Li Xiaoqiuja je prvič uporabila kvantitativno PCR za izvedbo obsežne klinične validacije pri kitajskih populacijah bolnikov in razvila izdelek, primeren za klinično genetsko testiranje, in sicer DLBCL-COO Assay. V tej študiji je bilo v javni zbirki podatkov pregledanih 32 genov, pomembno povezanih s tipizacijo DLBCL-COO, in vključenih je bilo 160 bolnikov, nato pa so bile uporabljene metode imunohistokemije, kvantitativnega PCR in genskega čipa za odkrivanje njihovih vzorcev, vdelanih v parafin, in ustreznih svežih vzorcev. Vzorci tkiv so rezultati pokazali, da so bili rezultati tipizacije DLBCL-COO Assay 92 odstotkov skladni z "zlatim standardom"; analiza preživetja je pokazala, da so bili rezultati tipizacije testa DLBCL-COO pomembno povezani s celotnim preživetjem, napoved tipa GCB pa je bila bistveno boljša od prognoze tipa ABC (P =0.023), kar je zelo skladno z domačimi in rezultati tujih raziskav. Relativno gledano je platforma metod za tipizacijo s kvantitativno PCR tehnologijo bolj odprta, delovanje enostavnejše in primerno za rutinski razvoj v večini laboratorijev za molekularno patologijo.

4. COO tipizacija DLBCL z imunohistokemijo

Za nekatera področja, kjer je sredstev in tehnologij malo, je tehnologijo tipizacije na podlagi GEP težko široko uporabljati, zato je klinično še vedno najbolj razširjena metoda tipizacije, ki temelji na imunohistokemiji (IHC). Leta 2005 so HANS in drugi uporabili tehnologijo tkivnih mikromrež za tipizacijo in vzpostavili model tipizacije IHC z odkrivanjem CD10, BCL6 in MUM-1. DLBCL lahko razdelimo na tip GCB in tip ne-GCB. Prognoza prvega je bistveno boljša kot drugega. (P<0.001), the="" agreement="" of="" this="" typing="" method="" with="" the="" gold="" standard="" was="" 84%.="" in="" order="" to="" further="" improve="" the="" accuracy="" of="" prognostic="" judgment,="" new="" typing="" systems,="" such="" as="" choi="" and="" tally,="" have="" been="" proposed="">

Tipizacija Choi temelji na petih biomarkerjih, vključno s CD10, BCL6, MUM-1, FOXP1 in GCET1, dva markerja, FOXP1 in GCET1, pa sta dodana Hansovi metodi tipizacije, kar je 93 odstotkov skladno z "zlato" standard". Prejšnje študije so pokazale, da je FOXP1 močno izražen v tipu ABC, visoka izraženost pa je povezana s slabo prognozo. Ko je kritična vrednost FOXP1 80 odstotkov, je mogoče posebej razlikovati DLBCL tipa ABC. Vendar je GCET1 močno izražen v celicah B, pridobljenih iz zarodnega središča, zato je dodajanje GCET1 Hansovemu tipkanju koristno za razlikovanje DLBCL tipa GCB in tipa ABC. Kar zadeva napovedovanje prognoze, je bila klasifikacija Choi uporabljena za napoved 3-letne stopnje preživetja bolnikov, od katerih je bil tip GCB 88 odstotkov, tip ABC 44 odstotkov, rezultati napovedi "zlatega standarda" klasifikacije GEP (tip GCB je bil 92 odstotkov, tip ABC je bil 44 odstotkov) 44 odstotkov) je precej blizu. Li Min et al. primerjali napovedno sposobnost klasifikacije Choi in Hans in tudi pokazali, da je prva natančnejša. Celotno preživetje skupine GCB in skupine brez GCB po klasifikaciji Hans ni pokazalo pomembne razlike (P=0.102), medtem ko klasifikacija Choi ni pokazala pomembne razlike v celotnem preživetju (P=0 .102). Napoved skupine GCB je bila znatno boljša kot v skupini brez GCB (3-letna stopnja preživetja je bila 61,8 odstotka oziroma 42,5 odstotka, P<0.05). however,="" it="" is="" worth="" noting="" that="" in="" recent="" years,="" with="" the="" high="" inconsistency="" of="" bcl6="" found="" by="" different="" research="" centers,="" the="" inclusion="" of="" bcl6="" in="" the="" improved="" classification="" of="" choi="" and="" hans="" has="" been="" canceled.="" operation="" and="" result="">

Kot je omenjeno zgoraj, imata Hansova tipizacija na podlagi IHC in Choijeva tipizacija podobni funkciji, rezultati več protiteles pa se ocenjujejo v določenem vrstnem redu, zaradi česar imajo nekatera protitelesa višjo prednost kot druga. Tipska metoda omogoča izključitev poznejših rezultatov protiteles, če so izpolnjeni prejšnji pogoji. Vendar tipkanje GEP ne sledi določenemu vrstnemu redu ali izključuje določenih rezultatov. Da bi zmanjšali takšne razlike, so MEYER et al. razvil metodo tipiziranja, ki ne ocenjuje rezultatov protiteles v določenem vrstnem redu, in sicer metodo tipizacije Tally. Največja skladnost z "zlatim standardom" je bila 93-odstotna, medtem ko sta bila tipkanja Hans in Choi 87-odstotna. Metoda tipa tally vključuje enake količine protiteles GCB (GCET1 in CD10) in ABC (FOXP1 in MUM-1), razvrstitev pa določa imunofenotipski par, ki je bolj antigensko pozitiven. Za vsako vrsto se uporabljata dve protitelesi, tako da je v primeru enakega pozitivnega rezultata za vsako vrsto, LMO2 potreben za določitev imunofenotipa (LMO2 Večji ali enak 30 odstotkov je mejna vrednost). Študije so potrdile, da je LMO2 specifično izražen v limfocitih B ali limfomih, ki izvirajo iz GCB, njegova visoka izraženost pa je pomembno povezana z dobro prognozo pri DLBCL.

Skratka, čeprav metoda tipizacije COO DLBCL, ki temelji na IHC, ni tako dobra kot tipizacija NanoString in kvantitativna tipizacija PCR, je skladnost z "zlatim standardom" prav tako 74 odstotkov -93 odstotkov. Ima prednosti nizkih zahtev in druge prednosti, ki so primerne za rutinski razvoj različnih bolnišnic. Med njimi so metode tipizacije Choi in Tally bolj skladne z "zlatim standardom", vendar GCET1, FOXP1 in LMO2 niso stoječa protitelesa, kar do neke mere omejuje njihovo široko uporabo.

cistamche rezine za vsakodnevno uživanje za izboljšanje celične proliferacije in zmanjšanje celične apoptoze

5. Raziskovanje tipizacije DLBCL na podlagi genske mutacije

Skoraj vsi bolniki z DLBCL imajo genske mutacije in bolniki z določenimi mutacijami lahko vplivajo na učinkovitost specifičnih tarčnih zdravil in tako vplivajo na prognozo. Zato ima podtip DLBCL na podlagi mutacijskih podpisov klinično uporabno. SCHMITZ et al. izbrali sveže zamrznjene vzorce 574 bolnikov z DLBCL in uporabili sekvenciranje eksoma in transkriptoma za analizo števila kopij DNK genskega čipa. Med njimi je bilo izbranih 372 genov za ciljno pomnoževanje in ponovno sekvenciranje, da bi identificirali tiste z ponovljivimi geni. Spolno mutirani geni. Rezultati študije so DLBCL razdelili na 4 genotipe: tip MCD (predvsem ko-mutacija MYD88L265P in CD79B), tip BN2 (predvsem fuzija BCL6 in mutacija NOTCH2), tip N1 (predvsem mutacija NOTCH1) in tip EZB (predvsem mutacija EZH2) Mutacija in BCL2 translokacija), med katerimi tipa MCD in N1 v glavnem izhajata iz ABC, tip EZB v glavnem izhaja iz GCB, tip BN2 pa predstavlja določen delež ABC, GCB oziroma nerazvrščenih bolnikov (tip GCB je predstavljal 19 odstotkov, ABC tip je predstavljal 41 odstotkov, nerazvrščeni tip pa 40 odstotkov). Študija je tudi ugotovila, da lahko novi genotipi bolje določijo prognozo, med katerimi imata tipa BN2 in EZB boljšo prognozo kot tipa MCD in N1. Tipi MCD, N1, BN2 in EZB napovedujejo 5-letno stopnjo preživetja 26 odstotkov, 36 odstotkov, 65 odstotkov, 68 odstotkov, multivariatna analiza je tudi pokazala, da je bil novi genotip neodvisen dejavnik, ki je vplival na prognozo, in ni bil prizadet po oceni IPI. Raziskovalna skupina je ustvarila algoritem LymphGen za razvrstitev DLBCL v 7 genotipov na podlagi predhodnih raziskav, pri čemer je dodala A53 (z inaktivacijo TP53), ST2 (z mutacijami SGK1 in TET2) in druge, ki jih ni mogoče razvrstiti. Ta metoda genotipizacije bi lahko identificirala 63,1 odstotka genotipov DLBCL . Med njimi ima podtip BN2 najboljšo prognozo pri tipu ABC, podtip ST2 pri tipu GCB pa boljšo prognozo kot podtip EZB. Zato se domneva, da novo genotipiziranje nadalje razkriva patogenezo DLBCL, z različno patogenezo med podtipi in različni genotipi se različno odzivajo na imunokemoterapijo, kar lahko vpliva na izbiro ciljne terapije, vendar Največja omejitev te metode razvrščanja je, da nekateri bolnikov ni mogoče razvrstiti v noben podtip, kar si zasluži nadaljnjo študijo.

S sekvenciranjem celotnega eksoma 3{{30}}4 bolnikov z DLBCL so CHAPUY et al. pridobili podatke o nizkofrekvenčnih mutacijah, ponavljajočih se mutacijah, spremembah števila somatskih kopij in strukturnih variantah ter opredelili bolnike kot pet genotipov: tip C1 (predvsem BCL10, TNFAIP3, UBE2A, mutacija CD70 in translokacija BCL6, večinoma izvora ABC), tip C2 (obstaja bialelna inaktivacija TP53, ki vpliva na kromosomsko stabilnost in celični cikel in nima nobene zveze z izvorom ABC/GCB), tip C3 (predvsem mutacije BCL2, CREBBP2, EZH2, KMT2D, TNFRSF14, predvsem izvor GCB), Tip C4 (predvsem mutacije SGK1, HIST1H1E, NFKBIE, BRAF in CD83, večinoma izvora GCB), tip C5 (predvsem CD79B, MYD88L265P, ETV6), mutacije PIM1 in TBL1XR1, večinoma izvora ABC, pogoste v primarnem centralnem živčnem sistemu in DLBCL v modih) in tipa C0 (pomanjkanje jasnih genetskih gonil). Študija je dodatno analizirala tudi razmerje med novimi genotipi in prognozo. Rezultati so pokazali, da imajo C0, C1 in C4 boljšo prognozo, C3 in C5 pa slabo prognozo. Med bolniki, ki izvirajo iz ABC, je bila prognoza tipa C1 bistveno boljša kot pri tipu C5. , medtem ko je bil tip C4 bistveno boljši od tipa C3 pri bolnikih, ki izvirajo iz GCB. Nova genotipizacija opredeljuje tudi DLBCL nizkega tveganja tipa ABC (tip C1), katerega celice lahko izvirajo iz ekstrafolikularne marginalne cone; in visokorizičen DLBCL tipa GCB s strukturnimi različicami BCL2 ter PETN in epigenetskimi encimi. Spremembe (tip C3), medtem ko je DLBCL tipa GCB z nizkim tveganjem povezan s spremembami v kinazah in več rekombinantnih proteinih več poti (BCR/PI3K, JAK/STAT, BRAF) (tip C4); tipizacija, ki ni povezana z izvorom ABC/GCB Z bialelno inaktivacijo TP53, nestabilnostjo 9p21.3/CDKN2A in sorodnih genov (tip C2). Ključne genetske značilnosti teh DLBCL vključujejo mutacije, spremembe števila somatskih kopij in strukturne variacije ter spremembe v teh treh razredih genetskih informacij, ki jih je mogoče uporabiti za razlago razlik v bolezni in rezultatih zdravljenja.

Na podlagi ciljanega sekvenciranja 293 genov so LACY et al. analiziral značilnosti genske mutacije 928 bolnikov z DLBCL in razdelil bolnike v 5 podtipov: tip MYD88 (predvsem mutacije MYD88L265P, PIM1, CD79B, predvsem izvora ABC, večina prvotnih bolnikov z DLBCL s centralnim živčnim sistemom, modi in dojkami pripada temu podtipu ); Vrsta BCL2 (z EZH2, BCL2, CREBBP, T

Mutacije NFRSF14, KMT2D in MEF2B so večinoma, predvsem iz GCB, nekateri bolniki z visoko stopnjo limfoma in DLBCL, transformirani iz folikularnega limfoma, pripadajo tej vrsti); tip SOCS1/SGK1 (večinoma vključno z mutacijami SOCS1, CD83, SGK1, NFKBIA, HIST1H1E in STAT3, ki v glavnem izhajajo iz GCB, in večina primarnega mediastinalnega DLBCL pripada temu tipu); tip TET2/SGK1 (vključno z mutacijami TET2, SGK1, KLHL6, ZFP36L1, BRAF, MAP2K1 in KRAS, predvsem izvora GCB); tip NOTCH2 (večinoma vključuje mutacije NOTCH2, BCL10, TNFAIP3, CCND3, SPEN, TMEM30A FAS in CD70, sestavljene iz ABC, GCB in neklasificiranega izvora, s podobnimi lastnostmi kot limfom marginalne cone); neklasificiran podtip (ni drugje razvrščen, NEC). Študija je analizirala razmerje med različnimi genotipi in prognozo, rezultati pa so pokazali, da ima MYD88 najslabšo prognozo, z 5-letno stopnjo preživetja 42 odstotkov; BCL2, SOCS1/SGK1 in TET2/SGK1 so imeli dobro prognozo, z 5-letno stopnjo preživetja 64,9 odstotka oziroma 62,5 odstotka oziroma 60,1 odstotka; medtem ko je bila napoved tipov NOTCH2 in NEC med obema, stopnje 5-letnega preživetja pa so bile 48,1 odstotka oziroma 53,6 odstotka.

Če povzamemo, je razvidno, da se trije klasifikacijski sistemi ne le razlikujejo, ampak imajo tudi nekatere vsebine, ki se prekrivajo. Med njimi so vrste MYD88, C5 in MCD povezane z virom ABC. Primarni limfomi osrednjega živčevja in testisov se večinoma pojavljajo pri teh treh vrstah, prognoza pa je slaba. Za tip C2 je značilna mutacija/delecija TP53 in večina ima slabo prognozo, A53 pa ustreza C2. Tipi BCL2, C3 in EZB so povezani z virom GCB, imajo enak mutacijski podpis kot folikularni limfom, in čeprav so dvojni udarci in limfomi visoke stopnje pogostejši pri tem tipu, je splošna prognoza dobra. Tipa SOCS1/SGK1 in C4 sta večinoma iz GCB pridobljena DLBCL, ki imata podobne genetske značilnosti kot primarni mediastinalni velikocelični limfom B in najboljšo prognozo. Vendar je trenutno tipiziranje mutacij zapleteno, metode in rezultati različnih študij pa so različni. Zato je treba postopek analize v prihodnosti še poenostaviti, da bi dodatno pojasnili vpliv genov jedrnih mutacij na prognozo in zdravljenje.

cistamchevsebuje bogat ehinakozid in akteozid, ki lahko nahranita telo in ga zaščitita pred virusi in boleznimi

Povzetek

COO tipizacija na podlagi GEP je "zlati standard", vendar zahteva visoke vzorce, je draga in je ni enostavno izvajati rutinsko v klinični praksi. Kot alternativa je bila tipizacija COO, ki temelji na NanoString, kvantitativni PCR in imunohistokemičnih tehnikah, dodatno optimizirana glede na zahteve po vzorcu, tehnične težave in eksperimentalne stroške, vendar je natančnost prognostične presoje in vloga usmerjanja zdravljenja še vedno višja od zlati standard. Obstaja določena vrzel. Sedanje študije so tudi pokazale, da imajo skoraj vsi bolniki z DLBCL genetske mutacije in da lahko neugodne genetske mutacije pomembno vplivajo na prognozo. Ciljno zdravljenje nekaterih specifičnih mutacij lahko tudi izboljša prognozo, zato ima nova klasifikacija na podlagi genskih mutacij pomemben klinični pomen. Tipizacija genske mutacije je komplementarna tipizaciji COO, kar pojasnjuje, da obstaja tudi pomembna heterogenost znotraj istega podtipa COO. Vendar pa tipizacija genskih mutacij ne more vključevati vseh bolnikov in potrebne so nadaljnje raziskave, da se potrdi vodilni pomen klinične prognoze in ali lahko tradicionalna in nova tarčna zdravila, ki se trenutno uporabljajo, vodijo zdravljenje s to tipizacijo.