Sarmentosamid, spojina proti staranju iz morskega izvora Streptomyces Sp. APmarine042

Ključne besede:cistanche; Streptomycessp. APmarine042;proti staranju; MMP-1; UVB; TNF-

Kliknite tukaj za več informacij o Cistanche za nego starajoče se kože

1. Uvod

Staranje kožeinducirata dva glavna procesa, ki izhajata iz notranjih in zunanjih dejavnikov.Zunanje staranjeje predvsem posledica izpostavljenosti okoljskim dejavnikom, kot je onesnažen zrak [1] in ultravijolično (UV) sevanje [2]. UV svetlobo sestavljajo UVA (315–400 nm), UVB (280–315 nm),in UVC (200–280 nm), za katere je znano, da UVB žarki prodrejo skozi povrhnjico in prispevajo k kožifotostaranje [3]. Fotostaranje kože zaradi UVB povzroča poškodbe DNK [4] in reaktivne kisikove spojine(ROS) generacija [5] in moti zunajcelični matriks [6]. Intrinzično staranje povzroča naravnoposledice fizioloških sprememb, kot so genetski dejavniki, hormoni in presnovni procesi [7]. Poleg tega vnetni citokini, kot je faktor tumorske nekroze alfa (TNF) ), interlevkin 1 alfa/beta(IL-1 / ) in interlevkina 6 (IL-6), s starostjo kronično naraščajo. Zlasti tumorska nekrozafaktor- (TNF ) je znano, da pospešuje razgradnjo komponent zunajceličnega matriksa (ECM) prekuravnavanje izražanja in aktivnosti matričnih metaloproteinaz (MMP) v starajoči se koži [8]. MMP-1 jevečinoma sproščajo fibroblasti v dermisu, izločeni MMP-1 pa je odgovoren za razgradnjodermalnega kolagena, ki podpira strukturo in delovanje kože. Zato modulacija MMP-1ekspresija v dermalnih fibroblastih bi lahko bila obetavna tarča za razvoj proti staranjukozmetične sestavine.

Prejšnje študije so poročale, da sevanje UVB inducira ROS (produkcijo reaktivnih kisikovih vrst in vodi do aktivacije znotrajceličnih signalnih poti in transkripcijskih faktorjev (npr. AP-1, NF-kB) [9. Te transkripcijske faktorje uravnava mitogen -aktivirane proteinske kinaze MAPK), ki inducirajo MMP-1 in vnetne citokine. Obstajajo tri različne družine MAPK, ki sodelujejo pri dražljajih UVB/ROS: zunajcelične signalno regulirane kinaze (ERK), c-Jun N-terminal

kinaza (NK) in p38. Naša študija je identificirala Streptomyces sp. Izvleček APmarine042, ki je pokazal močan zaviralni učinek na izražanje MMP-1. Nato je bila v tem Streptomyces sp. identificirana inhibitorna spojina MMP-1. Ekstrakt APmarine042 in njegovo kemijsko strukturo smo identificirali s pomočjo analize NMR (1), spojino s heksadienamidnim delom 101. Nato nadalje raziskujemo, ali ta spojina zavira ekspresijo MMP-1 v človeški dermaliji, obsevani z UVB in povzročeni s TNFa. fibroblastov kot tudi njegovo vlogo pri regulaciji osnovnih signalnih poti. Poleg tega smo pregledali the antioksidativno delovanje cistanche(1) prek 2,2-difenil-1-pikrilhidrazila (DPPHI)test za odstranjevanje radikalov.

2. Rezultati in razprava

2.1. cistanche (1) Osamitev in identifikacija

cistanche (1) smo izolirali s kombinacijo HPLC-UV in bioaktivno vodene izolacije. Na podlagi primerjave med podatki NMR (dodatni materiali) spojine, identificirane v tej študiji (v nadaljnjem besedilu spojina 1"), s podatki o predhodno prijavljenih spojinah je bila spojina 1 identificirana kot cistanča. Vrednost optične rotacije spojine 1 je bila tudi v skladu s prejšnjimi poročili, ki so dodatno podprla to pomoč spojine 1 (slika 1).

2.2. Citotoksični učinki cistanche (1) na človeške dermalne fibroblaste

Da bi raziskali citotoksične učinke cistanhe, smo normalne človeške dermalne fibroblaste (NHD za celice fibroblastov človeške kožice (Hs68) obdelali s cistanho v različnih koncentracijah (6, 12, 25, 50, 100 ug/mL) 24 ur, nato pa celico test kompleta za štetje-8 (CCK-8) ​​je bil izveden za kvantificiranje viabilnosti celic. Vodotopna tetrazolijeva sol (WST-8) v raztopini CCK-8 je bila zmanjšana zaradi aktivnosti dehidrogenaze v celic, da dobimo rumeno obarvano barvilo formazan, katerega količina je bila sorazmerna s številom živih celic. Kot je prikazano na sliki 2, cistanča ni povzročila opaznih citotoksičnih učinkov niti v celicah NHDF niti v celicah Hs68 pri koncentracijah v razponu od {{15} } ug/ml

Slika 2. Test viabilnosti celic cistanche na fibroblastih. (ab) Viabilnost celiczdravljenih s cistankonormalne človeške dermalne fibroblaste (NHDF) (a) in celice fibroblastov človeške kožice (Hs68) (b) po 24 urah smo izmerili s testom CCK (komplet za štetje celic). * p < 0.05, ** p < 0,01vs. nezdravljena skupina).

2.3. cistanche (1) Zavira izražanje in izločanje MMP-1 v celicah NHDF, obsevanih z UVB

Nato so NHDF v odsotnosti in prisotnosti UVB sevanja (25 mJ/cm2) za kratka obdobja obdelali s cistančo (2,5 ug/mL) in kvantitativno opredelili relativne ravni ekspresije mRNA MMP-1 s kvantitativno analizo v realnem času. PCR analiza. Ugotovljeno je bilo, da cistanche zniža raven mRNA MMP-1 za do 16 odstotkov oziroma 17 odstotkov v odsotnosti (slika 3a) oziroma v prisotnosti (slika 3bo UVB). UVB sevanje, glavni zunanji dejavnik tveganja za staranje kože, lahko prodrejo v povrhnjico in dosežejo zgornji del dermisa, kar povzroči nastajanje reaktivnih kisikovih zvrsti (ROS) MMP in uravnavanje sinteze kolagena. Zato je naša študija skušala raziskati, ali cistanhe zavirajo izločanje MMP-1 pri obsevanju z UVB Celice NHDF. Ravni izločanja MMP-1 v gojiščih celične kulture so bile izmerjene z ELISA, relativne količine izločanja MMP-1 pa so bile normalizirane na otalne beljakovine v lizatih celih celic, ki so bile izmerjene z bicinhoninskim testom. test kvantifikacije beljakovin kisline (BCA). Obsevanje UVB (25 mJ/cm2) je izjemno povečalo izločanje MMP-1 (8.3-krat) v primerjavi s skupino, ki ni bila obsevana z UVB (slika 3c) in cistanche -zaviralo izločanje MMP-1 v celicah NHDF, obsevanih z UVB, na način, ki je odvisen od odmerka.

Slika 3. Učinek cistanhe na izražanje metaloproteinaze-1 (MMP-1) v NHDF, obsevanih z UVB. (a, b) Relativne ravni mRNA MMP-1 v celicah NHDF, obsevanih z UVB (25 mJ/cm2) ali obdelanih s cistančo (2,5 ug/mL) 16 ur. Gen RPLPO je bil uporabljen kot notranji nadzor. * p < {{10}}.05.*** p < 0.001 (C) Po obsevanju z UVB (25 mJ/cm2) , cistanche v mediju brez seruma je bil obdelan 48 ur, nato pa so bile relativne ravni izločanja MMP-1 v gojišča celične kulture analizirane z ELISA### p < 0,001 (v primerjavi s kontrolno skupino brez UVB); ** p < 0,01; *** p < 0,001 (kontrolna skupina, obsevana z UVB).

Vprašaj za več:

E-pošta:wallence.suen@wecistanche.com whatsapp: plus 86 15292862950