Izbiranje in karakterizacija zaviralcev tirozinaze iz korenike Atractylodis Macrocephalae na podlagi razmerja spekter-aktivnost in molekularnega priklopa

Avtorske pravice © 2021 Yong-Qin Liu et al. 2is je članek z odprtim dostopom, ki se distribuira pod licenco Creative Commons Attribution License, ki dovoljuje neomejeno uporabo, distribucijo in reprodukcijo v katerem koli mediju, pod pogojem, da je izvirno delo pravilno citirano.

Cistancheima funkcijo spodbujanja proizvodnje kolagena, ki lahko poveča elastičnost in sijaj kože ter pomaga obnoviti poškodovane kožne celice.CistancheFeniletanolni glikozidi imajo pomemben uravnalni učinek na aktivnost tirozinaze, učinek na tirozinazo pa je kompetitivno in reverzibilno zaviranje, kar lahko zagotovi znanstveno osnovo za razvoj in uporabo belilnih sestavin v Cistancheju. Zato ima cistanča ključno vlogo pri beljenju kože. Lahkozavirajo proizvodnjo melaninaza zmanjšanje razbarvanja in motnosti; in spodbuja proizvodnjo kolagena za izboljšanje elastičnosti in sijaja kože. Zaradi splošnega priznanja teh učinkov cistanche so številni izdelki za beljenje kože začeli vsebovati zeliščne sestavine, kot je cistanche, da bi zadovoljili povpraševanje potrošnikov, s čimer se je povečala komercialna vrednost cistanche vbeljenje kožeizdelkov. Če povzamemo, je vloga cistanche pri beljenju kože ključna. Njegov antioksidativni učinek in učinek na proizvodnjo kolagena lahko zmanjšata razbarvanje in otopelost,izboljša elastičnost in sijaj kože, in tako dosežete učinek beljenja. Poleg tega široka uporaba Cistanche v izdelkih za beljenje kože dokazuje, da njene vloge pri komercialni vrednosti ni mogoče podcenjevati.

Kliknite na Organic Cistanche za beljenje

Vprašajte za več: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Atractylodis macrocephalus Rhizoma (AMR) je znana klasična kitajska tradicionalna medicina (CTM), ki se že tisočletja uporablja kot tonik za številne bolezni. V stari Kitajski so ga uporabljali kot dodatno hrano za lepoto v palači. V preliminarnih študijah so odkrili funkcijo beljenja kože in pomemben zaviralni učinek na tirozinazo (TYR), ki je reaktivni encim v sestavi melanina AMR, o ustreznih raziskavah pa so poročali redko. V tej študiji je bila uporabljena tekočinska kromatografija visoke ločljivosti (HPLC) skupaj z delno regresijsko analizo najmanjših kvadratov (PLS) za raziskovanje skladnosti med kemičnimi sestavinami in zaviralno aktivnostjo 11 serij AMR na aktivnost TYR. Rezultati PLS so pokazali, da sta lahko kromatografska vrhova 11 (atraktilenolid III) in 15 pomembna učinkovita sestavina za inhibicijo aktivnosti TYR, kot je bilo ugotovljeno z razmerji spekter-aktivnost. Poleg tega je bila inhibitorna aktivnost TYR atraktilenolida III potrjena s testom in vitro z -arbutinom, ki je služil kot pozitivno kontrolno zdravilo.Therezultati in vitro testa in molekularnega priklopa so pokazali, da ima atraktilenolid III visoko inhibitorno aktivnost TYR in bi se lahko povezal z ostanki v katalitskem žepu TYR.Thezato so biološki testi, molekularni docking in razmerja spekter-aktivnost primerni za povezovanje kakovosti vzorcev z učinkovinami, povezanimi s farmacevtskimi izdelki. Naše preučevanje bi postavilo teoretične temelje za uporabo vodnih izvlečkov AMR v belilni kozmetiki.

1. Uvod

Tirozinaza (TYR), imenovana tudi kot polifenol oksidaza, je polifunkcionalni glikoziliran encim, ki vsebuje baker in je široko prisoten v organizmih živali, rastlin in mikroorganizmov [1–3]. V prisotnosti molekularnega kisika tirozin najprej katalizira TYR, da oksidira v dopo, nato pa nadalje oksidira v dopakinon, ki se izomerizira in tvori pigment dopa. Pigment dopa končno tvori melanin s sodelovanjem CO2 in TRP-2, ki povzročata različne kožne bolezni, kot so hiperpigmentacija, melazma, pege in starostne pege [4, 5]. TYR igra ključno vlogo, ker je kritičen encim in restrikcijski encim pri sestavi melanina [6–8]. Pigmentni madeži in melanom so se izrazito povečali s povečanjem aktivnosti in količine TYR [9]. Dandanes so bili zaviralci TYR deležni široke pozornosti zaradi njihove latentne uporabe kot hipopigmentiranih sredstev [10].

Atractylodis macrocephalus rhizoma (AMR), suha korenika Atractylodes macrocephalaKoidz., je eno od kitajskih zeliščnih zdravil, zbranih v kitajski farmakopeji [11–15]. V starodavni Kitajski je bil AMR izbran za oblikovanje slavne klasične formule za beljenje, imenovane "sedem-belo mazilo" in uporabljene kot dopolnilna hrana za lepoto v palači [16]. Poročali so, da je AMR v glavnem vseboval seskviterpenoide in triterpenoide (vključno z atraktilenolidom I, atraktilenolidom II in atraktilenolidom III), poliacetilene, kumarine in fenilpropanoide, flavonoide in flavonoidne glikozide, polisaharide, steroide, benzokinone in druge sestavine [17, 18]. Vendar so redko poročali o njegovih učinkih na beljenje kože in aktivnih sestavinah.Theštudija razmerja spekter-aktivnost je bila uporabljena za raziskovanje njihove pomembnosti.

Raziskave o razmerju spekter-aktivnost ne morejo samo zaobiti pomanjkljivosti ločevanja med kemičnimi sestavinami in farmakodinamiko, temveč tudi zadostno povezati prstne odtise s farmakodinamiko z matematičnim modelom [19, 20].ThRazmerje spekter-aktivnost raziskuje pomen med prstnim odtisom in farmakodinamiko, da ponudi verodostojno metodo za razjasnitev materialne osnove kitajske zeliščne medicine [21].Theprstni odtisi so bili običajno določeni s HPLC, UPLC, GC, GC MS in LC-MS [19, 22–24]. "Farmakodinamični" podatki so običajno pridobljeni z modeli [25].Themetode obdelave podatkov vključujejo predvsem analizo glavnih komponent (PCA), delno regresijsko analizo najmanjših kvadratov (PLS), ortogonalno delno diskriminantno analizo najmanjših kvadratov (OPLS-DA), kanonično korelacijsko analizo (CCA) in sivo relacijsko analizo (GRA). običajno [26–29].

Za razjasnitev komponent AMR, ki prispevajo k inhibicijski aktivnosti TYR [30, 31], so bili s HPLC določeni prstni odtisi 11 serij AMR; farmakodinamiko inhibicijske aktivnosti TYR in vitro smo ovrednotili z biokemijsko encimsko metodo. 2e učinkovite spojine so bile izbrane z modelom razmerja spekter-aktivnost, ki je bil vzpostavljen s korelacijo vrhov prstnih odtisov s farmakodinamičnimi podatki. Poleg tega bi bile učinkovine potrjene s testi in vitro in poskusi molekularnega združevanja. Študija 2is bi lahko postavila teoretično osnovo za uporabo protimikrobne odpornosti kot zdravila za zdravljenje pigmentiranih kožnih bolezni in za razvoj le-tega kot dodatka belilni kozmetiki.

2. Materiali in metode

2.1. Kemikalije in materiali.Metanol (večji ali enak 99,5 odstotka) je bil kupljen pri Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd. (Šanghaj, Kitajska). Fosforna kislina (večja ali enaka 99 odstotkom) je bila kupljena pri Chengdu Jinshan Chemical Reagent Co., Ltd. (Chengdu, Kitajska). Acetonitril je bil kupljen pri Tiandi Reagent Co., Ltd. (ZDA). Atractylodes III (več kot ali enako 98 odstotkov), fosfatni pufer, tirozinaza in L-tirozin so bili kupljeni pri Beijing Soleibao Technology Co., Ltd. (Peking, Kitajska). -Arbutin (večji ali enak 99,7 odstotka) je bil kupljen pri Kitajski akademiji za identifikacijo hrane in zdravil. Tirozinazo in L-tirozin smo pred uporabo raztopili v fosfatnem pufru (pH 6,8). Atraktilozo III in -arbutin smo raztopili v 50-odstotnem metanolu (v/v).Thečista voda je bila kupljena pri Hangzhou Wahaha Baili Food Co., Ltd. (Hangzhou, Kitajska). Colona Comix C18 (250 × 4,6 mm, 5 μm) je bila kupljena pri Guangzhou Philemon Scientific Instrument Co., Ltd. (Guangzhou, Kitajska).

2.2. Rastlinski materiali.TheZbranih je bilo 11 serij vzorcev zdravil proti protimikrobni odpornosti, ki so prikazani v tabeli 1.Thezgornje vzorce je potrdil profesor Ronggui Qin (Farmacevtska fakulteta, Medicinska univerza Guizhou).

2.3. Ekstrakcija.Zeliščne koščke vsakega vzorca (približno 10 g) smo natančno stehtali in nato dali v bučko z okroglim dnom, dodali vodo in segrevali z refluksom, da je bil ekstrakt. Produkte smo sušili pod znižanim tlakom, da smo dobili vodni ekstrakt AMR. 2en so bili vodni ekstrakti AMR (približno 30.00 mg) natančno stehtani in raztopljeni s 50 odstotki metanola (v/v).

2.4. HPLC analiza.Comix C18 kolona za reverzno fazno kromatografijo (250 × 4,6 mm, 5 μm).Themobilna faza 0.1 % fosforja je bila zmes kisle vode (A)-acetonitril (B); elucijski sistem je zasnovan in je naveden v tabeli 2.Thenaslednja hitrost je bila določena na 0,6 ml/min. Temperatura kolone 2e je bila 30 stopinj.TheValovna dolžina UA je bila 210 nm.Thevolumen injekcije je bil 30 μl.

Metoda detekcije je bila preverjena s testom natančnosti, testom ponovljivosti in testom stabilnosti.

2.5. Kemometrična analiza.V tej študiji so bile skupne informacije o vrhovih prstnih odtisov 11 serij AMR uvožene v programsko opremo SIMCA14.1 za HCA, PCA in OPLS-DA.

2.6. Test inhibicije TYR in vitro. Theekstrakte AMR smo raztopili s fosfatnim (pH 6,8) pufrom, shranili pri 4 stopinjah in nato uporabili za analizo encima.

V tej študiji je bil L-tirozin uporabljen kot substrat za določanje inhibicije aktivnosti TYR.Thereakcijske raztopine smo pripravili v skladu s tabelo 3 in določili stopnjo inhibicije AMR na aktivnost TYR. Najprej smo reakcijske raztopine za 10 minut postavili v vodno kopel pri 37 stopinjah. Drugič, raztopino TYR smo takoj dodali reakcijskim raztopinam T2 in T4. 2. Tretjič, reakcijske raztopine so po popolnem mešanju reagirale pri konstantni temperaturi vodne kopeli 37 stopinj 10 minut. Končno smo reakcijskim raztopinam takoj izmerili vrednosti absorbance pri 475 nm. Stopnje inhibicije (odstotki) so bile pridobljene iz enačbe: stopnja inhibicije (odstotki) =[(AT2− AT1) − (AT4 − AT3)]/(AT2− AT1) × 100 odstotkov.

2.7. Analiza razmerja spekter-aktivnost. TheProgramska oprema "Kitajska tradicionalna medicina kromatografski sistem za ocenjevanje podobnosti prstnih odtisov 2012 A Edition" je bila uporabljena za prilagoditev retencijskih časov vsakega vrha, območje vrha (PA) pa je bilo obdelano z izravnavo.Then, pridobljeni so bili kvantitativni podatki.TheRegresijska enačba PLS je bila postavljena s programsko opremo SIMCA14.1; površina vrha je bila vzeta kot neodvisna spremenljivka (X), stopnja inhibicije TYR pa je bila nastavljena kot odvisna spremenljivka (Y).

2.8. Zaviralni učinek Atractylodes III na TYR in molekularno priklop.Da bi potrdili zaviralni učinek atraktilenolida III na TYR, so bili izvedeni testi encimske aktivnosti in vitro z -arbutinom, ki je služil kot pozitivno kontrolno zdravilo.

Pri simulacijah priklopa je bil uporabljen program AutoDock4.2. Kristalna struktura Agaricus bisporus (PDB ID: 2Y9X) je bila vzeta kot 3D struktura TYR [32]. Izvedli smo simulacije priklopa TYR na Atractylodes III. Za združitev z AutoDock Vina je bila velikost mreže zasnovana na (x, y, z) =(16, 12, 14), središče mreže pa na (x, y, z) { {10}} (−10,348, −28,279, −45,925). V vsakem simulacijskem postopku napredek s privzetimi parametri deluje iz AutoGrid in AutoDock. Lamarckov genetski algoritem (LGA) je bil sprejet za ugotavljanje najprimernejših usmeritev vezave liganda.

3. Rezultati in razprava

3.1. Validacija metodologije.Za analitično metodo so bile potrjene natančnost, ponovljivost in stabilnost. Pri testiranju natančnosti natančnost relativnih retencijskih časov (RRT) in relativnih vrhov (RPA) ni presegla {{0}}.02 odstotka oziroma 4 odstotka v RSD; podobnost je bila 1. Ponovljivost RRT in RPA je bila manjša od 0.11 odstotkov in 4 odstotke v RSD, podobnost pa je bila večja ali enaka 0.998. Stabilnost je bila ocenjena s testiranjem ene raztopine vzorca, ki je bila ohranjena pri laboratorijski temperaturi okolja po 0, 6, 8, 12 in 18 urah. Vrednosti RSD RRT in RPA skupnih vrhov so bile manj kot 0,1 odstotka oziroma 4 odstotke; podobnost je bila večja od 0,999.TheTi rezultati kažejo, da je eksperimentalni sistem AMR za analizo prstnih odtisov stabilen in zanesljiv.

3.2. HPLC določanje prstnih odtisov in analiza podobnosti.Prstni odtis referenčnih snovi Atractylodes III je prikazan na sliki 1(a). Vzorec AMR je pokazal ugodno segregacijo med svojimi vrhovi (slika 1(b)). Pod popolnimi pogoji so bili ustvarjeni prstni odtisi HPLC 11 različnih serij vzorcev AMR (slika 1(c)) in izračunane so bile podobnosti. Rezultati podobnosti so prikazani v tabeli 4, ki je pokazala, da so bile vse vrednosti podobnosti 11 vzorcev večje od 0.8, kar kaže, da so bili vsi vzorci podobni v vrstah kemičnih sestav. S primerjavo njihovega zadrževalnega časa UV-spektra smo opazili šestnajst pogostih vrhov. Vrh 11 je bil identificiran kot Atractylodes III z referenčnimi snovmi. RSD PA za 16 skupnih vrhov je bil med 1,18 odstotka in 58,68 odstotka (tabela 5). Ti rezultati so pokazali, da so bile vsebnosti kemičnih snovi v AMR iz različnih proizvodnih območij različne.

3.3. Kemometrična analiza

3.3.1. HCA. HCA je bil uporabljen za identifikacijo AMR iz različnih proizvodnih območij na podlagi različnih skupin in podobnosti prstnih odtisov. Skupna površina vrha v 11 serijah AMR je bila uporabljena kot indikator, analiza grozdov pa je bila izvedena s programsko opremo SIMCA14.1. Rezultati so prikazani na sliki 2. Vzorci 11 serij AMR so bili razdeljeni v 3 kategorije, ko so bile razdalje razredov med 20 in 30, od katerih so bili S4, S8, S9, S1 in S3 združeni v kategorije I, S7 pa je bil razvrščeni v kategorijo II, medtem ko so bili S2, S5, S10, S6 in S11 razvrščeni v kategorijo III.

3.3.2. PCA. V tej študiji je bil izračunan PCA 11 serij AMR; pri 16 glavnih komponentah je bil kumulativni prispevek variance prvih petih glavnih komponent 91,3 odstotka.Thematriko rezultatov prvih dveh komponent bi uporabili za analizo, saj je kumulativna varianca presegla 65,9 odstotka.Thezato v odsotnosti nekaterih informacij konstruirajte dvodimenzionalno ravnino glavne komponente, da je bila abscisa glavna komponenta in ordinata druga glavna komponenta. Nato je bilo 11 vzorcev projiciranih na 2D ravnino, tako da je bilo opazovano njihovo naravno zbiranje (slika 3(a)). Ugotovljeno je bilo, da imajo S4, S8, S9, S1 in S3 očitne klasifikacije, S7 je mogoče razdeliti na eno vrsto, S2, S5, S10, S6 in S11 pa na drugo vrsto.Therezultat PCA je bil skladen z rezultatom HCA.

Vsaka pika v diagramu obremenitve je predstavljala kromatografski vrh, ki predstavlja prispevek vsakega kromatografskega vrha k celovitemu učinkuglavne komponente.Theutežna vrednost spremenljivk lahkoodražajo korelacijo med kemično sestavoin vzorec v največji meri.Thedlje odizvor diagrama obremenitve, večja je spremenljivkautež.Therezultat je prikazan na sliki 3(b), ki predlagada so kromatografski vrhovi 9, 11 (atraktilenolid III),in 12 je imel večji vpliv na prvo glavno komponento. Vendar pa so kromatografski vrhovi 4, 5, 6, 15 in 16imela večji vpliv na drugo glavno komponento. Toje pokazalo, da imajo lahko zgornji kromatografski vrhovi avečji vpliv na razvrstitev.

3.3.3. OPLS-DA.The11 vzorcev je bilo razdeljenih v dve skupini, in sicer S1, S3, S4, S8 in S9 prva skupina ter S2, S5, S6, S7, S10 in S11 druga skupina.Theskupne informacije o vrhovih vseh vzorcev so bile uvožene v programsko opremo SIMCA14.1 za OPLS-DA. R2 X in R2 Y označujeta razlagalno stopnjo modela za matrike x in y, posamezno, Q2 pa označuje napovedno sposobnost modela.Therezultati so pokazali, da so bile vrednosti R2 X, R2 Y in Q2 0.939, 0.992 oziroma 0.583, pri čemer so bile vse večje od {{ 9}}.5, kar kaže, da je model lahko razlikoval med dvema skupinama vzorcev in je imel boljšo sposobnost prilagajanja in napovedovanja pri obdelavi podatkov. Lahko bi ga uporabili za razlikovanje AMR od različnih proizvodnih področij (slika 4(a)).

Theprofil spremenljivk, pomembnih za projekcijo (VIP) v modelu OPLS-DA, lahko odraža prispevek vsakega kromatografskega vrha k vzorcu.TheVIP vrednosti 16 kromatografskih vrhov so odražale moč vpliva na vsak vzorec AMR. Na podlagi izbirnega načela, da je bila vrednost VIP večja od 1.0 in vrstica napak manjša od izvora (slika 4(b)), so bili izbrani 4 pomembni kromatografski vrhovi, ki so bili razvrščeni po vrstnem redu: vrh 1 > vrh 6 > vrh 16 > vrh 5.

Therezultati analize diagrama obremenitve so prikazani na sliki 4(c), ki je pokazala, da so bili položaji zgornjih 4 pomembnih kromatografskih vrhov daleč stran od izvora. Predlagano je bilo, da so 4 kromatografski vrhovi pomembno vplivali na razvrstitev protimikrobne odpornosti in da so te komponente, predstavljene s 4 kromatografskimi vrhovi, lahko glavne komponente markerjev vsakega vzorca.

3.4. Ocena zaviralne aktivnosti AMR na TYR in vitro.Thez biokemijsko encimsko metodo so bili določeni zaviralni učinki AMR iz različnih proizvodnih območij na aktivnost TYR.Theučinki vzorcev na aktivnost TYR so navedeni v tabeli 6. Vsak vzorec s koncentracijo 10 mg/mL bi lahko zaviral aktivnost TYR in farmakološka aktivnost je bila izjemno različna, med katerimi je bila stopnja inhibicije S5 najvišja, medtem ko je bila stopnja inhibicije S6 najnižja.

3.5. Analiza razmerij spekter-učinek. V tem članku je bil PLS uporabljen za analizo razmerja spekter-aktivnost.Thedelni regresijski koeficient in VIP vrednost sta prikazana na slikah 5(a) in 5(b), ki sta pokazali, da so bili kromatografski vrhovi 1, 2, 5, 6, 7, 9, 10, 11, 15 in 16 pozitivno korelirani s inhibicijo aktivnosti TYR, vendar so bili kromatografski vrhovi 3, 4, 8, 12, 13 in 14 z njimi negativno korelirani. Med kromatografskimi vrhovi, ki so pozitivno korelirali z inhibicijo aktivnosti TYR, sta bili VIP vrednosti kromatografskih vrhov 11 (Atractylodes III) in 15 večji od 1, kar kaže, da ti dve komponenti pomembno vplivata na inhibicijo aktivnosti TYR.

3.6. Zaviralni učinek Atractylodes III na TYR in molekularno priklop.Thezaviralni učinek Atractylodes III na aktivnost TYR je bil določen z biokemijsko encimsko metodo in vitro z -arbutinom kot pozitivno kontrolo.Therezultati so pokazali, da sta bili stopnji inhibicije Atractylodes III in -arbutina na aktivnost TYR 63,68 ± 2,36 odstotka oziroma 94,85 ± 0.35 odstotka, ko je bila koncentracija vzorcev 1 mg/mL.

Molekularno združevanje je bilo uporabljeno za preučevanje vezavnega mehanizma Atractylodes III v interakciji s TYR (slike 6(a)–6(c)).Thevezavno mesto gobje tirozinaze je sestavljeno iz ozke, plitve votline z dvema bakrovim ionom (Cu2 plus), od katerih je vsak stabiliziran s tremi histidinskimi ostanki (npr. His 61) v aktivnem središču encima. V tej študiji je Atractylodes III spojina z majhno molekulo, ki se nahaja v aktivnem središču encima in sodeluje z okoliškimi ostanki (His 244, Phe 264, Ala 286, His 263, Val 283, His259, His 85, Asn 260). Zanimivo je, da je Atractylodes III tvoril stabilno vodikovo vez z Asn 260 z dolžino vezi 1,9 ˚ A.

4. Sklepi

V tej študiji je bila vzpostavljena sistematična metoda, ki povezuje prstne odtise HPLC s kemometrično analizo za razlikovanje vzorcev AMR različnih izvorov, belilni učinek AMR pa je bil dokazan z biokemijsko encimsko metodo. Razmerja med spektrom in učinkom so pokazala, da so bili kromatografski vrhovi 1, 2, 5, 6, 9, 10, 11, 15 in 16 v pozitivni korelaciji z učinkom inhibicije AMR na aktivnost TYR, med katerimi sta lahko vrhova 11 (atraktilenolid III) in 15 pomembne aktivne sestavine. Medtem ima atraktilenolid III visoko inhibitorno aktivnost TYR in vitro test, rezultat molekularnega priklopa pa je pokazal, da je njegov mehanizem lahko povezan z vezavo aminokislinskih ostankov v katalitični kapsuli TYR.Thezato so ti rezultati dokazali, da so biološki testi, molekularni priklopi in razmerja med spektrom in aktivnostjo primerni za povezovanje kakovosti vzorcev z učinkovinami, povezanimi s farmacevtskimi izdelki.

Razpoložljivost podatkov

Podatki, uporabljeni v podporo ugotovitvam te študije, so na zahtevo na voljo pri ustreznem avtorju.

Razkritje

Yong-Qin Liu in Chang-Yan Xu veljata za soprva avtorja.

Nasprotja interesov

Avtorji izjavljajo, da v tej študiji nimajo navzkrižja interesov.

Prispevki avtorjev

Yong-Qin Liu in Chang-Yan Xu sta prispevala k delu.

Zahvala

To študijo je sponzoriral Program usposabljanja za inovacije in podjetništvo za študente v provinci Guizhou (št. 20195200925).

Reference

[1] Y.-L. Wang, G. Hu, Q. Zhang, et al., "Preverjanje in karakterizacija inhibitorjev tirozinaze iz Salvia miltiorrhiza in Carthamus tinctorius z analizo razmerja spekter-učinek in molekularnim priklopom," Journal of Analytical Methods in Chemistry, vol. 2018, ID članka 2141389, 10 strani, 2018.

[2] HX Cui, FF Duan, SS Jia, FR Cheng in K. Yuan, "Antioksidativne in inhibitorne aktivnosti tirozinaze semenskih olj iz Torreya grandis fort. ex Lindl," BioMed Research International, vol. 2018, ID članka 5314320, 10 strani, 2018.

[3] Y. Tian, ​​Z. Zhang, N. Gao, P. Huang in FY Wu, "Luminescentni test brez nalepk za spremljanje aktivnosti tirozinaze in presejanje inhibitorjev z odzivnimi nanodelci lantanidnega koordinacijskega polimera," Spectrochimica Acta, del A: Molecular and Biomolecular Spectroscopy, vol. 228, 2020.

[4] H. Liu, B. Liu, P. Huang, Y. Wu, FY Wu in L. Ma, "Kolorimetrična določitev tirozinaze na podlagi metalizacije srebra in situ, ki jo katalizirajo zlati nanodelci," MikroChim Acta, vol. 187, št. 10, str. 551, 2020.

[5] DC Franco, GS de Carvalho, PR Rocha, R. da Silva Teixeira, AD da Silva in NR Raposo, "Zaviralni učinki analogov resveratrola na aktivnost gobove tirozinaze," Molecules (Basel, Švica), vol. 17, št. 10, str. 11816– 11825, 2012.

[6] HH Kim, JK Kim, J. Kim, S.-H. Jung in K. Lee, "Karakterizacija kafeoilkvinskih kislin iz episodes thunbergianus in njihova inhibitorna aktivnost melanogeneze," ACS Omega, vol. 5, št. 48, str. 30946–30955, 2020.

[7] F. Pintus, D. Span`o, A. Corona in R. Medda, "Anti tirozinazna aktivnost izvlečkov Euphorbia characia", PeerJ, vol. 3, str. e1305, 2015.

[8] M. Shi, Y. Zhang, M. Song, Y. Sun, C. Li in W. Kang, "Preverjanje komponent označevalcev v Psoralea corylifolia L. s pomočjo razmerja spekter-učinek in komponente knock- objavil UPLC-MS(2)," International Journal of Molecular Sciences, vol. 19, št. 11. 2018.

[9] G.-H. Wang, C.-Y. Chen, T.-H. Tsai et al., "Vrednotenje inhibitornih in antioksidativnih aktivnosti tirozinaze koreninskih izvlečkov Angelice dahurice za štiri različne fermentacije probiotičnih bakterij", Journal of Bioscience and Bioengineering, vol. 123, št. 6, str. 679–684, 2017.

[10] YS Lin, HJ Chen, JP Huang et al., "Kinetika inhibitorne aktivnosti tirozinaze z uporabo izvlečkov listov Viti's vinifera," BioMed Research International, vol. 2017, ID članka 5232680, 5 strani, 2017.

[11] S. Yang, J. Zhang, Y. Yan et al., "Strategija, ki temelji na mrežni farmakologiji za raziskovanje farmakoloških mehanizmov Atractylodes macrocephala Koidz. za zdravljenje kroničnega gastritisa," Frontiers in Pharmacology, vol. 10, str. 1629, 2019.

[12] H.-R. Yang, J. Yuan, L.-H. Liu, W. Zhang, F. Chen in C.-C. Dai, "Endophytic Pseudomonas fluorescentno povzročeno kopičenje seskviterpenoidov, ki ga posredujeta giberelična kislina in jasmonska kislina v rastlinah Atractylodes macrocephala Koidz," Plant Cell, Tissue and Organ Culture (PCTOC), vol. 138, št. 3, str. 445–457, 2019.

[13] L. Hu, X. Chen, J. Yang in L. Guo, "Geografska avtentikacija tradicionalne kitajske medicine Atractylodes macrocephala Koidz. (Baizhu) z uporabo stabilnih izotopov in večelementnih analiz", Rapid Communications in Mass Spectrometry, vol. . 33, št. 22, str. 1703–1710, 2019.

[14] H. Li in G. Yang, "Celoten kloroplastni genom Atractylodes macrocephala Koidz. (Asteraceae)," Mitohondrijska DNA, del B, vol. 5, št. 3, str. 2060-2061, 2020.

[15] S. Gu, L. Li, H. Huang, B. Wang in T. Zhang, "Protitumorska, protivirusna in protivnetna učinkovitost eteričnih olj iz Atractylodes macrocephala Koidz," Proizvedeno z različnimi metodami predelave, Molecule , vol. 24, št. 16. 2019.

[16] J. Wang, L. Peng, M. Shi, C. Li, Y. Zhang in W. Kang, "Spectrum effect relationship and component knockout in Angelica dahurica radix by high-performance fluid chromatography-Q izvršni hibridni masni spektrometer s kvadrupolno orbitalno pasto," Molecules, vol. 22, št. 7. 2017.

[17] B. Zhu, Q.-L. Zhang, J.-W. Hua, W.-L. Cheng in L.-P. Qin, "Thetradicionalne uporabe, fitokemija in farmakologija Atractylodes macrocephala Koidz.: pregled," Journal of Ethnopharmacology, vol. 226, str. 143–167, 2018.

[18] Y.-Y. Feng, H.-Y. Ji, X.-D. Dong in A.-J. Liu, "V alkoholu topen polisaharid iz Atractylodes macrocephala Koidz inducira apoptozo celic Eca-109", Carbohydrate Polymers, vol. 226, ID članka 115136, 2019.

[19] W. Li, Y. Zhang, S. Shi, et al., "Razmerje med spektrom in učinkom aktivnosti antioksidantov in tirozinaze s privrženci Malus pumila z UPLC-MS/MS in metodo izločitve komponent," Food and Chemical Toksikologija, letn. 133, ID članka 110754, 2019.

[20] B. Xu, J. Gao, S. Zhao, Y. Li, Y. Du in H. Pan, "TheRazmerje med spektrom in učinkom med prstnim odtisom HPLC in učinkom poživljajoče krvi in ​​raztapljanja zastoja listov gloga," Chromatographia, vol. 83, št. 3, str. 409–421, 2020.

[21] Y. Feng, Z. Jing, Y. Li et al., "Preverjanje anafilaktoidnih komponent injekcije Shuang Huang Lian z analizo razmerij spekter-učinek v povezavi z UPLC-TOF-MS," Biomedicinska kromatografija, vol. 33, št. 2, ID članka e4376, 2019.

[22] X. Jiang, L. Tao, C. Li et al., "Združevanje, razmerje spekter-učinek in antioksidativne spojine kitajskega propolisa iz različnih regij z uporabo multivariatnih analiz in off-line anti-DPPH testa," Molecules, vol. . 25, št. 14. 2020.

[23] Y. Zhao, X.-M. Vi, H. Jiang, G.-X. Zou in B. Wang, "Razmerje spektra in učinka med prstnimi odtisi tekočinske kromatografije visoke ločljivosti in protivnetnimi aktivnostmi Leontopodium leontopodioides (Willd.) Beauv," Journal of Chromatography B, vol. 1104, str. 11–17, 2019.

[24] X. Zhou, Y. Li, M. Zhang et al., "Razmerje med spektrom in učinkom med prstnimi odtisi UPLC in učinkom Si Jun Zi Tanga proti pljučnemu raku," Na dokazih temelječa komplementarna in alternativna medicina, vol. 2019, ID članka 7282681, 9 strani, 2019.

[25] X. Sun, Q. Zhao, Y. Si et al., "Bioaktivna strukturna osnova proteoglikanov iz Sarcandra glabra na podlagi razmerja spekter-učinek," Journal of Ethnopharmacology, vol. 259, ID artikla 112941, 2020.

[26] S. Gao, H. Chen in X. Zhou, "Študija o razmerju spekter-učinek ksantin-oksidazne inhibitorne aktivnosti Ligustrum lucidum," Journal of Separation Science, vol. 42, št. 21, str. 3281–3292, 2019.

[27] J. Tan, J. Liu, H. Wang, et al., "Identifikacija komponent, ki aktivirajo kri, iz tablete Xueshuan Xinmaining na podlagi razmerja spekter-učinek in mrežne farmakološke analize," RSC Advances, vol. 10, št. 16, str. 9587–9600, 2020.

[28] J. Zhang, T. Chen, K. Li et al., "Preverjanje aktivnih sestavin rožmarina na podlagi razmerja spekter-učinek med prstnim odtisom UPLC in vazorelaksantno aktivnostjo z uporabo treh kemometričnih vrednosti," Journal of Chromatography B, vol. 1134-1135, ID članka 121854, 2019.

[29] Y. Chen, G. Pan, W. Xu et al., "Študija razmerja spekter-učinek med prstnimi odtisi HPLC in antioksidativno aktivnostjo Sabia parviflflora," Journal of Chromatography B, vol. 1140, ID artikla 121970, 2020.

[30] M. Liao, P. Yan, X. Liu, et al., "Razmerje med spektrom in učinkom za protitumorsko aktivnost šikoninov in šikonofuranov v zdravilnem Zicao z UHPLC-MS/MS in kemometričnimi pristopi," Journal of Kromatografija B, zv. 1136, ID artikla 121924, 2020.

[31] JH Wu, YT Cao, HY Pan in LH Wang, "Identifikacija protitumorskih sestavin v strupu krastače z analizo razmerja spekter-učinek in preiskavo njegovega farmakološkega mehanizma," Molecules, vol. 25, št. 18. 2020.

[32] J. Tang, J. Liu in F. Wu, "Študije molekularnega priklopa in biološka ocena 1,3,4-tiadiazolnih derivatov, ki nosijo dele Schiffffove baze kot inhibitorje tirozinaze," Bioorganic Chemistry, vol. 69, str. 29–36, 2016.