Pomen različnih vsebinskih omejitev za označene komponente Cistanche Desericle in C. tubulofloris v kitajskem farmakopeji, ki temelji na diferencialnih komponentah ⅱ

Izvleček

Objekti:Preučiti diferencialne komponente in primerjati njihovo vsebino med Cistanche Tubulosa in C. desesericola ter analizirati pomen različnih vsebnosti omejitev za označevalce med obema rastlinama v kitajski farmakopeji (izdaja 2020). Metode: Diferencialne komponente smo identificirali s tekočinsko kromatografijo spektrometrijo v kombinaciji z multivariatno statistično analizo, vsebnost diferencialnih komponent pa je bila določena z visoko zmogljivo tekočinsko kromatografijo. Rezultati: Diferencialne spojine so bile cistanozid A, izoakteozid, ehinakozid in acteosid. Ehinakozid je imel najvišjo vsebnost v obeh rastlinah, sledil je acteosid. Vsebnost ehinakozida, acteosida in izoakteozida v C. tubulosa je bila višja kot v C. desesericola (P<0.01), and no cistanoside A was detected in C. tubulosa. Conclusion: There are differences in the chemical composition between C. deserticola and C. tubulosa. Cistanoside A can be taken as a maker component in C. deserticola. Echinacoside and acteoside are the common components in both plants, and they are specified in the Chinese Pharmacopoeia (2020 edition) as the marker components in both plants. The different content limits for the two components between C. deserticola and C. tubulosa reflect the objectivity in the standard.

Ključne besede: Cistanche DesertIcola;Cistanche Tubulosa; cistanosid a; izoakteosid;ehinakozid; acteosid

 

 

 

 

Cistanche DesertIcolaje posušeno mesnato steblo z luskastimi listi Cistanche Deseriche Yc Ma ali Cistanche Tubulosa (Schenk) Wight, rastlino družine Orobanchaceae [1]. Gre za tonično in zdravilno hrano, znano kot "puščavska ginseng". V glavnem je razporejen v notranji Mongoliji, Ningxia, Gansu, Xinjiang in drugih regijah [2]. Cistanche Deserickola je po naravi topla, sladka in slana po okusu ter vstopi v ledvične in debele črevesne meridiane. Ima učinke negovanja jeter in ledvic, koristi bistvu in krvi ter navlaži črevesje in olajša gibanje črevesja. Uporablja se lahko za zdravljenje pomanjkanja ledvic, nemoči in neplodnosti, bolečine v pasu in kolenih, šibkosti tetiv in kosti ter zaprtje, ki ga povzročajo suhi črevesje [1]. Sodobne raziskave kažejo, da mesnata stebla z obsežnimi listi cistanče desescicola vsebujejo v glavnem različne kemične sestavine, kot so feniletanoidni glikozidi, iridoidni eter terpeni in njihovi glikozidi, lignani in sladkorji [3]. Med njimi so feniletanoidni glikozidi najpomembnejše aktivne sestavine, ki imajo farmakološke učinke, kot so proti staranju [4], antioksidanti, proti malenkosti in odvajati [5].
Na svetu je približno 20 vrst Cistanche in v moji državi je 5 vrst: Cistanche Deserickola, Cistanche Tubulosa, C. salsa (Cavey.) G.beck, C. Sinensis G. Beck in C. salsa var. Albiflora pf tu et zclou. Izdaja leta 2020 Farmakopeje Ljudske republike Kitajske (v nadaljevanju "kitajske farmakopeje") določa, da sta prva dve vrsti prvotni vrsti Cistanche Deserickola [6].

Cistanche DesertIcola

Pred izdajo kitajske farmakopeje iz leta 2005 je bil edini izvor Cistanche Deseriche, ki izhaja iz desetine, Cistanche Deserickola. Zaradi velikega povpraševanja na domačem in mednarodnem trgu ter pomanjkanja virov je bil kot pravni izvor dodan Cistanche Tubulosa. Vendar so cene dveh izvora Cistanche Desericte na trgu zelo drugačne, cena Cistanche Tubulosa pa je bila le od 1/4 do 1/6 od Cistanche Deserickola [7]. Razlike v sestavi in ​​farmakoloških učinkih teh dveh poreklov so vredne dolgoročne poglobljene raziskave in uporabe. Glede na razlike v vrstah sestavin, Huang Xiongmei in sod. [8] ugotovili, da je bila cistančana A glavna različna sestavina z značilnim spektrom študije obeh poreklov. Glede na razliko v vsebini komponent, Gao Yan in sod. [9] so ugotovili, da so se vsebnost razmerja ehinakozida do verbaskozida in verbascozida do isivacozida v Cistanche puščavski in cistanche tubulozi precej razlikovala z ultra visoko zmogljivo tekočinsko kromatografijo; Zhu Naliang et al. [10] z analizo prstnih odtisov so ugotovili, da je bila vsebnost feniletanoidnih glikozidov v Cistanche Desericle bistveno nižja kot pri cistančah tubulosa, vsebnost feniletanoidnih glikozidov v cistanche tubulozi pa bistveno višja kot vsebnost iridoidnih glikozidov.
Naša raziskovalna skupina je uporabila spektrometrijo s tekočinsko kromatografijo in maso v kombinaciji z multivariatno statistično analizo za primerjavo razlik v vrstah kemijskih komponent med Cistanche Deserichola in Cistanche Tubulosa, identificirala diferencialne označevalce in določila njihovo vsebino, da bi zagotovila referenco za identifikacijo izvora Cistanche Desestreicola. Poleg tega smo s primerjavo razlik v vsebini komponent indeksa farmakopeje (ehinakozid in verbaskozid) obeh prvotnih cistančev pojasnili nujnost postavitve kombiniranih mej obeh komponent cistančev in cistanče tubulosa.

 

1 materiali

1.1 Instrumenti

Ultimate 3 000 Ultra-visoko zmogljivost tekoča fazno-elektrostaktna tandemska ionska masna masna spektrometer (UPLC-LTQ Orbitrap XL, Thermo Fisher Scientific, ZDA); 2695 visokozmogljivi tekoči kromatograf, 2489 ultravijolični detektor (Waters, ZDA); BT125D 1/100.000 Elektronsko ravnovesje (Sartorius Instrument Systems, Nemčija); KQ -500 de cnc ultrasonic čistilec (Kunshan Ultrasonic Instrument Co., Ltd.); PL2002 Electronic Balance [Mettler-Toledo Instrument (Shanghai) Co., Ltd.].

 

Cistanche Tubulosa

1.2 Preskusna zdravila

Referenčne snovi Echinacosid, Cistancheside A, Verbascosid in Isoverbosaside (čistost večja od 98%, Številke serije PS000867, PS010950, PS000683 in PS001059) so bili kupljeni od Chengdu Pusi Biotechnology Co.; Metanol stopnje masne spektrometrije (Fisher); Masna spektrometrijska mračna kislina (čistost: 99%, Sigma Aldrich); Voda je bila Watsonova destilirana voda.

 

1,3 Vzorci

Profesor Li Xiangri Univerze v kitajski medicini je identificiral 10 serij rezin Cistanche Desereche in 10 serij rezin Cistanche Tubulosa, saj je bila posušena mesnata stebla z lestvico cistanche deseshela ycma in cistanche tubulosa (schenk). Podrobne informacije so prikazane v tabeli 1.

 

2 metode

2.1 Študija o različnih komponentah Cistanche Desericle iz različnih izvora

2.1.1 Priprava testne raztopine

Vzemite približno 0. 2 g suhega vzorca v prahu (prepeljan skozi sito št. 4), natančno tehta in postavite v 50 ml rjave volumetrične bučke, dodate 25 ml 50% metanola, tehtamo maso, hladno namakanje za 30 min, ultrazvočno obdelavo in shemarate, in shemo, in SHAKE (Power 250 W, Freaction 35KHZ) filtrat za pridobitev.

 

2.1.2 Kromatografski pogoji

Waters ACQUITY UPLCTM BEH C18 chromatographic column (100 mm×2.1 mm, 1.7 µm), column temperature of 35 degree , sample chamber temperature of 10 degree , sample injection volume of 3 μL, gradient elution with methanol (A)-0.1% formic acid aqueous solution (B) kot mobilna faza (0 min, 10%A; 0 ~ 4 min, 10%~ 26%A; 4 ~ 18 min, 26%~ 40%A; 18 ~ 24 min, 40%~ 100%A; 24 ~ 28min, 100%a), valovna dolžina zaznavanja 330 nm, pretok 0,3 ml · min - 1.

 

2.1.3 Pogoji masne spektrometrije

Uporabljen je bil elektrospray ionski vir (ESI), skeniranje z negativnim ionskim načinom, kapilarna temperatura je bila 350 stopinj, pretok volumna ovoja je bil 30 ARB, pretok pomožne plina je bila 10 ARB, napetost razpršila 3 kV, kapilarna napetost je bila –35 V, je bil sistem za skeniranje m/z100 ~ 1000.

Cistanche Tubulosa

2.1.4 Analiza glavnih komponent (PCA)

Po pridobitvi dvodimenzionalne matrice natančnih podatkov o dnevu zadrževanja masnega zadrževanja bo instrumentna plošča prikazana vse samodejno uvožene natančne informacije o zadrževanju, za analizo pa bo uporabljena metoda PCA razširjenega statističnega modula.

 

2.1.5 Ortogonalna delna analiza z najmanjšimi kvadratki (OPLS-DA)

Z izvedbo dvodimenzionalne analize podatkov z OPLS-DA smo dobili veliko število ortogonaliziranih spektrov, kar lahko jasno kaže razlike med obema skupinama vzorcev. V obliki S-Plot podatki o masnem zadrževanju časa na obeh koncih krivulje v obliki črke S predstavljajo najbolj zanesljive značilne ione iz vsake vzorčne skupine.

 

2.2 Določitev diferencialnih komponent

 

2.2.1 Priprava mešane referenčne raztopine

 

Vzemite ustrezne količine ehinakozida, cistancheside A, verbascosid in izoveascoside v 1 0 ml rjave volumetrične bučke, raztopimo in razredčimo na oznako s 5 {{4}% metanola in pripravite mešane referenčne zaloge z maso koncentracije 0. 0,384 in 0,312 mg · ml - 1.

 

2.2.2 Priprava testne raztopine

 

Metoda je enaka kot v 2.1.1.

 

2.2.3 Kromatografski pogoji

Agilent Eclipse XDB-C18 stolpec (25 0 mm × 4,6 mm, 5 μm) z metanolom (a) -0. 15 ~ 20 min, 21%~ 25%a; izvedeno je bilo 25%~ 40%a), pretok je bil 1,0 ml ∙ min - 1, valovna dolžina zaznavanja je bila 330 nm, temperatura stolpca 35 stopinj, volumen vbrizgavanja pa 10 μl.

 

2.2.4 Metodološka preiskava

2.2.4.1 Preiskava linearnih odnosov

Natančno pipeta {0}}. 1, 0. 5, 1. 0, 2. 0 in 5,0 ml mešane referenčne raztopine v različne 10 ml koncentracije, dodajte 50% metanola v lestvico. Za določitev vbrizgate vzorec, uporabite kromatografsko območje vrha kot ordinata (y) in koncentracijo kot abscisa (x), narišite razpršeno ploskvo in izvedite regresijsko analizo, da dobite linearne regresijske enačbe različnih referenčnih snovi.

 

2.2.4.2 Natančni eksperiment

Vzemite mešano referenčno raztopino ehinakozida, cistanchesida A, verbascosida in izoverbaccosida, vbrizgajte jo 6 -krat neprekinjeno, zabeležite najvišjo površino ehinakozida, cistantezida A, verbascosida in Isoverbaccosid Reference in izračunajte vrednost RSD vsake komponente.

 

2.2.4.3 Eksperiment stabilnosti

Vzemite isto Cistanche Desericte (Številka serije: 16 0 901) testna rešitev, jo vbrizgate na 0, 2, 4, 8, 12, 24 h, določite vsebnost ehinakozida, cistanchesid A, verbascosid in izoverbakozid v preskusni rešitvi in ​​izračunate vrednost RSD.

 

2.2.4.4 Eksperiment ponovljivosti

Vzemite isti vzorec (številka serije: 160901) v prahu, pripravite 6 testnih raztopin v skladu z metodo pod 2.1.1, vbrizgajte in izmerite, izračunajte vsebnost ehinakozida, cistanchesida A, verbascosida in izoverbaskozida v vsaki preskusni raztopini in izračunajte vrednost RSD vsake komponente.

 

2.2.4.5 Eksperiment obnovitve vzorca

Natančno tehtamo 6 vzorcev cistanche puščave (številka serije: 160901) z znano vsebino, dodajte referenčno raztopino, enakovredno znani vsebnosti ehinakozida, cistanchesida A, verbascosida in izoverbascosida, pripravite preskusne rešitve v skladu z metodo pod 2.1.1, injicirajte in izračunajte in izračunajte povprečno obnovitev.