Študija o izboljšanju učinkov izvlečka feniletanoidnih glikozidov iz Rouchongrong (Cistanche Deserticola) na presnovo lipidov v jetrih ApoE - / - miši z visoko vsebnostjo maščob na dieti, ki temelji na uravnavanju izražanja ACOX1 - CPT2

POVZETEK Cilj:Za raziskovanjeučinki ekstrakta feniletanoidnih glikozidovodCistanche deserticola(PGCD) o metabolizmu lipidov v jetrih miši ApoE-/-, ki ga povzroča dieta z visoko vsebnostjo maščob. Metode: 70 miši samcev ApoE-/-, hranjenih z dieto z visoko vsebnostjo maščob, je bilo razdeljenih v 5 skupin, modelna (MOD) skupina, skupina pozitivne kontrole miši so prejele atorvastatin [20 mg/(kg·d)] + ezetimib [20 mg/(kg) ·d)](A + E), podane so bile skupine z nizkimi, srednjimi in visokimi odmerki PGCDPGCD[250, 500, 1000 mg/(kg·d)]; drugih 14 samcev miši C57BL/6J z achow dieto je bilo določenih kot običajna kontrolna (CON) skupina. 12. vikend smo v skladu z navodili za uporabo določili vsebnost TG ter aktivnosti ALT in AST v serumu in jetrnem tkivu. Sveže jetrno tkivo smo homogenizirali in določili vsebnost sintaze maščobnih kislin (FAS), dolgoverižne acil-CoA dehidrogenaze (LCAD) in glutation peroksidaze (GSH - Px),superoksid dismutaza (SOD)aktivnosti smo testirali z metodo ELISA, medtem ko smo vsebnosti malondialdehida (MDA) in lipidnega peroksida (LPO) detektirali z metodo kid. Ekspresije mRNA acil-koencim A oksidaze 1 (ACOX1) in karnitin palmitoiltransferaze 2 (CPT2) so odkrili s poskusi RT-PCR.

KLIKNITE TUKAJ, če želite izvedeti 80%FENILETANOIDNI GLIKOZIDINARAVNI ORGANSKI IZVLEČEK CISTANCHE

Podporna storitev Wecistanche-največjega izvoznika cistanche na Kitajskem:

E-pošta:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/telefon:+86 15292862950

Nakupujte za več podrobnosti o specifikacijah:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

Rezultati:V nasprotju z modelno skupino,vsi trije odmerki PGCD so zmanjšali ravni TGv jetrih in serumu na način, ki je odvisen od odmerka, in znižal aktivnosti ALT in AST v serumu. Vsi trije odmerki PGCD so zmanjšali vsebnost FAS v odvisnosti od odmerka in znatno povečali vsebnost LCAD v jetrih.PGCD promoviranaktivnosti GSH - Px in SOD ter znatno zmanjšali vsebnost MDA in LPO v jetrih. Poskusi RT-PCR so pokazali, da je PGCD zvišal ravni mRNA ACOX1 in CPT2 v jetrnem tkivu.

Zaključek:PGCD lahko izboljša metabolizem lipidov in odziv na oksidativni stres ter zmanjša odlaganje lipidov v jetrnem tkivu z uravnavanjem izražanja mRNA ACOX1 in CPT2.

Ključne besede:Izvleček feniletanoidnih glikozidov iz Cistanche deserticola; ACOX1; CPT2;metabolizem lipidov;oksidativni stres; ApoE-/- miši

Brezalkoholna maščobna bolezen jeter(NAFLD) je ena najbolj razširjenih bolezni jeter na svetu, s prevalenco skoraj 30% v splošni populaciji. Maščobna bolezen jeter na Kitajskem raste z letno stopnjo 0,594 % [1]. Pojav in razvoj NAFLD sta tesno povezana s prekomernim vnosom kalorij v telo. Prehrana z visoko vsebnostjo maščob vodi do prekomernega kopičenja maščob v jetrih in inducira NAFLD[2], začetni korak v njeni patogenezi pa je odlaganje triacilglicerola (TG) v jetrnih celicah[2] 3]. Do danes ni specifičnih terapevtskih zdravil, ki bi vplivala na patogenezo NAFLD. Iskanje varnih, učinkovitih zdravil z jasnimi mehanizmi za preprečevanje in zdravljenje NAFLD je postalo pomembna naloga raziskovalcev. Cistanche deserticola YC Ma je ​​parazitska rastlina iz rodu Cistanche iz družine Orobanchaceae. Njegova glavna sestavina, feniletanoidni glikozidi, ima funkcije krepitve imunske funkcije telesa, preprečuje staranje, deluje proti sevanju, ima antioksidativne in hepatoprotektivne učinke ter druge učinke [4-5]. Ta študija namerava izvesti predhodno študijo o mehanizmuFeniletanoidni glikozidi iz Cistanche deserticola(PGCD) pri izboljšanju metabolizma lipidov.

1 Eksperimentalni materiali

1.1 Eksperimentalna zdravila

Mesnata stebla Cistanche deserticola (vsebnost vlage 8,5 %) so bila kupljena pri Hotan Dichen Pharmaceutical Co., Ltd.; referenčne snovi feniletanoidni glikozidi (glavni komponenti verbaskozid in ehinaceazid) (čistost obeh > 98 %) so bile kupljene pri Manster, Chengdu, Sichuan Biotechnology Co., Ltd.; Atorvastatin: Pfizer Shanghai; Ezetimib: Merck Pharmaceuticals Co., Ltd.

1.2 Poskusne živali

6 do 8 tednov stari samci miši C57BL/6J in miši ApoE-/-, telesna teža (20 ± 2) g, kupljeni pri Changzhou Cavins Experimental Animal Co., Ltd., številka licence: SCXK (Su) 2016-0010 , 12 h / 12 h svetlobnega cikla, temperatura (22 ± 1) stopinja, vlažnost 50 % ~ 60 %, prost vnos hrane in vode. Pred poskusom so miši 1 teden hranili s standardno dieto, da so se prilagodile. Vsa oskrba živali in poskusi sledijo predpisom Odbora za etiko eksperimentalnih živali Prve medicinske univerze Shandong (Etična št.: W202107080303).

1.3 Eksperimentalni rezastopniki

Krma z visoko vsebnostjo maščob: Harlan Teklad; TG, ALT, AST kompleti: Beijing Solebao Biotechnology Co., Ltd.; FAS, kompleti LCAD: Shanghai Langton Biotechnology Co., Ltd.; Komplet GSH-Px: Shanghai Jining Biotechnology Co., Ltd.; SOD, MDA, LPO, BCA kompleti: Nanjing Jiancheng Biotechnology Co., Ltd.; Trizol komplet: Invitrogen, Carlsbad, CA; Primerja ACOX1 in CPT2: zasnoval Sangon Bioengineering (Shanghai) Co., Ltd.

1. 4 eksperimentalni instrumenti Hei - VAP Expert Rotacijski uparjalnik: Nemčija

Heidolph; Multifunkcijski čitalec mikroplošč Varioskan LUX: ThermoFisher; FD8508 vakuumski zamrzovalni sušilnik: Ilshin, Južna Koreja; F6/10 homogenizator: Shanghai Fluoroco; Tekočinski kromatograf visoke ločljivosti Agilent1260, spektrofotometer Cary 3500 UV: Agilent Technologies Ltd.; Quant studio5RT - PCR instrument: Thermo Fisher Biochemicals, Inc.

2.3.1 Indeks telesne mase in jeter

Ob koncu 12. tedna smo miši postili in stehtali. Miši smo anestezirali z natrijevim pentobarbitalom in žrtvovali. Jetra so bila pobrana za izračun jetrnega indeksa.

2.3.2 Zaznavanje serumskega indikatorja

Vzemite serum in zaznajte serumski aktivnosti aspartat aminotransferaze (AST) in alanin aminotransferaze (ALT) v zaporedju glede na delovanje kompleta; BCA določa vsebnost beljakovin v serumu in zaznava vsebnost TG.

2.3.3 Odkrivanje dejavnikov, povezanih s presnovo lipidov v jetrnem tkivu

V pogojih 4 stopinj stehtajte ustrezno količino svežih jeter in jih homogenizirajte v PBS, centrifugirajte (polmer centrifuge 7,5 cm, 3 000 vrt/min) homogenat 1 minuto, vzemite supernatant in izmerite vsebnost beljakovin v jetrnega tkiva z BCA. Vsebnost TG v tkivu, metoda ELISA za odkrivanje vsebnosti sintaze maščobnih kislin (FAS) in dolgoverižne acil-CoA dehidrogenaze (LCAD) v jetrnem tkivu.

2.3.4 Odkrivanje oksidativnih dejavnikov, povezanih z jetrnim tkivom

Pod pogoji 4 stopinj stehtajte ustrezno količino svežih jeter in jih homogenizirajte v PBS, centrifugirajte homogenat (centrifugalni polmer 7,5 cm, 3 000 vrt/min) 15 minut, vzemite supernatant in izmerite vsebnost beljakovin v jetrnega tkiva z BCA. Sledite reagentom Navodila v škatli zaznajo aktivnosti superoksid dismutaze (SOD) in glutation peroksidaze (GSH-Px) ter istočasno zaznajo ravni malondialdehida (MDA) in lipidnega peroksida (LPO).

2. 3. 5 RT-PCR detekcija

Ekspresija mRNA ACOX1/CPT2 v jetrnem tkivu: vzemite ustrezno količino svežega jetrnega tkiva, uporabite komplet Trizol za ekstrahiranje celotne mRNA jetrnega tkiva, uporabite reverzno transkriptazo MuLV za sintezo cDNA in uporabite cDNA kot predlogo za izvedbo kvantitativne fluorescence v realnem času PCR (Qpcr) detekcija. , so bili reakcijski pogoji: preddenaturacija pri 95 stopinjah 2 minuti; denaturacija pri 95 stopinjah za 10 s, žarjenje: 60 stopinjah za 30 sekund, podaljšanje pri 72 stopinjah za 35 sekund, 34 ciklov in končno podaljšanje pri 72 stopinjah za 5 minut in kvantifikacija v realnem času z avtomatskim analizatorjem. Ekspresija mRNA ACOX1 in CPT2. Programska oprema Rotor-gene Q. 1.7 (Qiagen) je bil uporabljen za analizo podatkov, metoda 2-△△Ct pa je bila uporabljena za štetje relativnih ravni mRNA in GAPDH. Vsaka skupina poskusov je bila izvedena vzporedno > 3-krat. Zaporedja primerjev so naslednja: GAPDH, navzgor: 5' - GCCACCC AGAAGACTGTG - 3', navzdol: 5' - ATGTAGGCCATGAGGTCCAC - 3'; ACOX1, navzgor: 5' -CGCCACCTT CAATCC AGAGT - 3' navzdol: 5' -TCTGCGATGCCAAATTCCCT - 3'; CPT2, navzgor: 5'- TCCTCCTACTC AGGACGCAA - 3' navzdol: TTGGGATCTTCCGCTCACAC.

2.4 Statistične metode

Za analizo podatkov je bila uporabljena statistična programska oprema SPSS 20.0. Merilni podatki so bili izraženi kot (x ± s). Za primerjavo med skupinami smo uporabili enosmerno analizo variance. P <0,05 je veljal za statistično pomembno razliko.