Študija o feniletanolnih glikozidih v Cistanche Tubulosa

Povzetek: Cilj: Potrditi feniletanoidne glikozide v zdravilnem zelišču Cistanche deserticola (Xinjiang) in vzpostaviti metodo tekočinske kromatografije visoke ločljivosti (HPLC) za sočasno določanje feniletanoidnih glikozidov. Metoda: Uporabljena je bila kromatografska kolona ThermoSyncronis C18 (250mm) × ４．６ｍｍ,５ μ ｍ）; Acetonitril kot mobilna faza A, 0.1-odstotna raztopina fosforne kisline kot mobilna faza B, gradientna elucija (0-10min, 10 odstotkov A{{10}} odstotek A; 10-20min, 15 odstotkov A-18 odstotek A; 20-45min, 18 odstotkov A-27 odstotek A); Hitrost pretoka 1,0 ml/min; Temperatura kolone 30 stopinj; Valovna dolžina zaznavanja je 330 nm; Injekcijski volumen 10 μ Ｌ. Rezultat: Cistanche deserticola vsebuje šest feniletanolnih glikozidov, vključno z ehinazidom, antocianinom A, pilozidom, izopilozidom, 2'-acetilpilozidom in antocianinom B, brez drugih feniletanolnih glikozidov; Uveljavljena metoda tekočinske kromatografije visoke ločljivosti za ločevanje šestih feniletanolnih glikozidov je pokazala dobre rezultate v razponu od 80,438 do 1287.000 mg/L, 7,552 do 120,834 mg/L, 28,144 do 450,305 mg/L, 18. 865 do 301,840 mg/L oziroma 1,100 do 17,593 mg/L. Linearno razmerje je dobro v razponu 0,382~6,113 mg/L (R2 Večji ali enak 0,9998); RSD natančnosti, stabilnosti in ponovljivosti je manj kot 3,2 odstotka; Povprečna stopnja okrevanja je med 97,19 odstotka in 102,51 odstotka, metoda pa je natančna in zanesljiva. Zaključek: Cistanche deserticola (Xinjiang) vsebuje šest feniletanolamin glikozidov, vključno z ehinakozidom, antocianinom A, bazenom, izopilozidom, 2'-acetilpilozidom in antocianinom B. Uveljavljena metoda tekočinske kromatografije visoke ločljivosti je preprosta, hitra, natančna in ponovljiva ter lahko hkrati določi vsebnost šestih feniletanolamin glikozidov v Cistanche deserticola, To lahko zagotovi znanstveno podlago za raziskave in nadzor kakovosti Cistanche deserticola.

Ključne besede: cevasta cistanča; feniletanolni glikozidi; ＨＰＬＣ

Ta izdelek je suho mesnato steblo z luskastimi listi iz Cistanchetu hulosa (Schenk) Wish, rastline iz družine Orobaceae. Ima učinke tonificiranja ledvičnega janga, negovalne esence in krvi ter vlaženja črevesja za lajšanje zaprtja. Uporablja se za zdravljenje pomanjkanja janga v ledvicah, pomanjkanja esence in krvi, impotence in neplodnosti, šibkega pasu in kolen, šibkih mišic in kosti ter suhosti črevesja in zaprtja. Sodobne raziskave so pokazale, da so glavne kemične sestavine zdravilnih zelišč iz rodu Cistanche feniletanolaminski glikozidi, iridoidi, lignani, polisaharidi, alkaloidi, hlapna olja in druge sestavine [2]. Med njimi so feniletanoidni glikozidi glavne aktivne sestavine Cistanche deserticola zaradi njegovih učinkov proti staranju, proti utrujenosti, tonificiranju ledvic in janga, proti senilni demenci in drugih farmakoloških učinkov. Cistanche deserticola v glavnem vsebuje ehinacejo, gangliozid A, bazenski, izopilozid, krizotil, 2'- acetil glikozid, 2' - acetil bazenski, cistančni glikozid A, cistančni glikozid C Feniletanol glikozide, kot je antocianin B [3-7]. Ta študija je uporabila HPLC za identifikacijo feniletanolamin glikozidov v Cistanche deserticola (Xinjiang) in vzpostavila metodo sočasnega določanja, ki se lahko uporablja za razlikovanje pristnosti in kakovosti Cistanche deserticola, kar zagotavlja znanstveno podlago za raziskave kakovosti in nadzor Cistanche deserticola.

Glavne kemične sestavine Cistanche deserticola

1 Instrumenti, testna zdravila in vzorci

Kromatograf: tekočinska kromatografija visoke ločljivosti serije Ultramate3000 (kvaterna gradientna črpalka LPG 3400SDN, samodejni vzorčevalnik WPS-3000SL, temperaturna škatla kolone TCC 3000RS, detektor VWD 3100); Kromatografska kolona: ThermoSyncronisC18 kolona (4,6 mm × ２５０ｍｍ, ５ μ ｍ）; Elektronska tehtnica: model elektronske tehtnice 1/100000 je Sedoris SQP; Model elektronske tehtnice 1/10000 je Sedoris SQP Integrirani sistem čista voda/ultra čista voda: PURELABClassicUV, sistem ultra čiste vode.

Ehinozid, glavna kemična sestavina Cistanche deserticola

Ehinozid: Lemaitian Pharmaceutical, številka serije: DST191008-038, vsebnost 99,9 odstotka; Guanhua glikozid A: ChemFace, številka serije: CFN90669, vsebnost 98 odstotkov; Maorui cvetni glikozid: POZOR, številka serije PS011530, vsebnost: 94,6 odstotka ; Isopiloside: ChemFace, številka serije CFN97049, vsebnost 98 odstotkov; 2 '- Acetilpilozid: ChemFace, številka serije: CFN92452, vsebnost: 98 odstotkov. Guanhua glikozid B: Greep, številka serije: 20120903, vsebnost 98,57 odstotka; Acetonitril: Fisher kromatografsko čist; Fosforjeva kislina: Fisher, kromatografsko čista; Metanol: kitajska medicina, analitično čist.

Zdravilna rastlina Guanhua Cistanche je bila kupljena pri Xinjiang Heji Traditional Chinese Medicine Slice Co., Ltd., s poreklom iz Xinjianga. Kot Guanhua Cistanche sta ga identificirala Xinjiang Heji Traditional Chinese Medicine Slice Co., Ltd. in Jinpai Zhengtang Pharmaceutical Co., Ltd.

2 Metode in rezultati

2.1 Kromatografski pogoji

Uporaba silikagela, vezanega na oktadecilsilanu, kot polnilo (ThermoSyncronisC18); Z uporabo acetonitrila (A) -0.1-odstotna raztopina fosforne kisline (B), gradientna elucija (0-10min, 15 odstotkov A → 18 odstotkov A; 10-20min, 18 odstotkov A → 2 0 odstotkov A; 20-45min, 20 odstotkov A → 27 odstotkov A); Hitrost pretoka 1,0 ml/min; Temperatura kolone 30 stopinj; Valovna dolžina zaznavanja je 330 nm; Injekcijski volumen 10 μ Ｌ. Kromatogram preskusne raztopine pod tem kromatografskim pogojem je prikazan na sliki 1.

Slika 1 Kromatografska analiza preskusne raztopine Cistanche deserticola

2.2 Priprava raztopine

2.2.1 Priprava preskusne raztopine

Vzemite vzorec s približno 0,1 g (presejan skozi 3. sito), ga natančno stehtajte, dodajte 20 ml 50-odstotnega metanola, stehtajte maso, namakajte 30 minut, sonikirajte (500 W, 53 kHz) 40 minut, pustite, da se ohladi, ponovno stehtajte maso, uporabite 50-odstotni metanol, da nadomestite izgubljeno maso, dobro pretresite in pridobite vzorec.

2.2.2 Priprava referenčne raztopine

Natančno stehtajte kontrolne vzorce ehinacetina, antocianina A, pilozida, izopilozida, 2'-acetilpilozida in antocianina B ter dodajte 50 odstotkov metanola, da dobite koncentracije 1287.000mg/L, 120,834 mg/L, 450,305 mg /L, 301,840 mg/L in 17,593 mg/L, oziroma dobimo 6,113 mg/L mešane referenčne raztopine. Kromatogram referenčne raztopine je prikazan na sliki 2

Slika 2  6 Kromatogram referenčnih raztopin za 26 feniletanoidnih glikozidov

2.3 Določanje feniletanoidnih glikozidov v Cistanche deserticola (Xinjiang)

Pripravite referenčno raztopino za feniletanolaminske glikozide, kot so ehinakozid, antocianin A, antocianin A, is antocianin, antocianin, 2'- acetil antocianin, 2' - acetil antocianin A, antocianin C in antocianin B, in zberite tri serije kupljenih vzorcev antocianina iz Heji, Xinjiang (izvor Xinjiang) od leta 2017, Pripravite testno raztopino v skladu s pripravo metode "2.2.1" in analizirajte standardno raztopino in preskusno raztopino pod kromatografskimi pogoji "2.1". Rezultati so pokazali, da je bila porazdelitev kromatografskih vrhov v treh serijah vzorcev Cistanche deserticola skladna. S kombiniranjem retenzijskega časa s krivuljo absorpcije polne valovne dolžine vsake spojine feniletanolamin glikozida so bili identificirani kromatografski vrhovi vzorcev. Rezultati so pokazali, da so vse tri serije vzorcev Cistanche deserticola imele šest feniletanolamin glikozidov: ehinakozid, antocianin A, antocianin, is antocianin, 2'- acetil antocianin in antocianin B. Drugih kromatografskih vrhov feniletanoidnih glikozidov ni. Identifikacija kromatografskih vrhov je prikazana na sliki 3.

Glavne kemične sestavine Cistanche deserticola

Kliknite tukaj za ogled izdelkov Cistanche

【Vprašajte za več】 E-pošta:cindy.xue@wecistanche.com/Whats App: 0086 18599088692/Wechat: 18599088692

2.4 Pregled metodologije

2.4.1 Pregled linearnega razmerja

Razredčite mešano referenčno raztopino (1 #) pod "2.2.2" za 2-krat, 4-krat, 8-krat in 16-krat, da dobite referenčno raztopino 2 # -5 #. Vzemite vsako raven referenčne raztopine in jo analizirajte v skladu s kromatografskimi pogoji pod "2.1". Za linearno regresijo uporabite koncentracijo vsake ravni referenčne raztopine kot os x in površino vrha vsake ravni kot os y. Rezultati so prikazani v tabeli 1, kar kaže na dobro linearno razmerje med komponentami znotraj ustreznega linearnega območja.

Tabela 1  6 Linearna razmerja feniletanoidnih glikozidov

Slika 3 Identifikacija kromatografskih vrhov glikozidov fenil etanola v Cistanche deserticola

2.4.2 Preskus natančnosti

V skladu z metodo priprave preskusne raztopine v "2.2.1" pripravite en del preskusne raztopine in jo šestkrat neprekinjeno analizirajte pod kromatografskimi pogoji iz "2.1". Vsebnost ehinakozida, antocianina A, antocianina, antocianina, 2'- acetil antocianina in antocianina B v vsaki analizi je bila pridobljena z vrednostmi RSD 0,3 odstotka, 0,3 odstotka in 0.2 odstotka, 0.1 odstotka, 1.0 odstotka, 3,1 odstotka, kar kaže na dobro natančnost instrumenta.

2.4.3 Preskus stabilnosti

V skladu z metodo priprave preskusne raztopine "2.2.1" pripravite en del preskusne raztopine in 6-krat analizirajte pod kromatografskimi pogoji "2.1" pri 0, 2, 4.5, 1{{16 }}, 13,5 oziroma 20 ure, da dobimo vsebnost ehinakozida, antocianina A, antocianina, je antocianina, 2'- acetil antocianina in antocianina B v vsaki analizi, RSD vrednosti vsebnosti so {{20}},6 odstotka, 0,4 odstotka, 0,5 odstotka, 0,4 odstotka, 1,3 odstotka oziroma 3,1 odstotka, kar kaže, da ima preskusna raztopina dobro stabilnost v 20 urah.

2.4.4 Preskus ponovljivosti

V skladu z metodo priprave preskusne raztopine "2.2.1" pripravite 6 vzorcev preskusne raztopine in jih analizirajte pod kromatografskimi pogoji "2.1", da dobite vsebnost vsake analize ehinakozida, antocianina A, antocianina A, je antocianin, 2 '- acetil antocianin B in antocianin B z vrednostmi RSD 0.6 odstotkov, {{10}}.6 odstotkov, 0,6 odstotkov, 1,5 odstotkov oziroma 1,5 odstotkov kaže na dobro ponovljivost te metode.

2.4.5 Preskus obnovitve označevanja

Vzemite približno {{0}}.05g znane vsebnosti zdravilnega praška, ga natančno stehtajte in vzporedno stehtajte 9 obrokov. Dodajte referenčne raztopine, ki ustrezajo 50-odstotnemu, 100-odstotnemu in 150-odstotnemu kratniku vsebnosti 6 komponent, ki jih želite testirati v zdravilnem materialu, in pripravite 3 porcije vzporedno. Pripravite preskusno raztopino po metodi "2.2.1", analizirajte jo pod kromatografskimi pogoji "2.1" in izračunajte stopnjo izkoristka vsake komponente. Rezultati so prikazani v tabeli 2, kar kaže, da je natančnost te metode dobra . 2.5 Določanje vsebnosti vzorca: stehtajte približno 0,1 g različnih serij medicinskega praška (presejanega skozi sito št. 3), natančno stehtajte, pripravite preskusno raztopino v skladu z metodo, opisano v "2.2.1", merite v skladu z opisanimi kromatografskimi pogoji v "2.1" zabeležite površino vrha in izračunajte vsebnost šestih feniletanoidnih glikozidov z uporabo regresijske enačbe. Rezultati so prikazani v tabeli 3.

3 Razprava

3.1 Določanje feniletanoidnih glikozidov

Vse tri testirane serije Cistanche deserticola (Xinjiang) vsebujejo šest feniletanoidnih glikozidov, in sicer ehinakozid, antocianin A, ob bazenu, izopilozid, 2'-acetilpilozid in antocianin B, in nobena od njih ne vsebuje drugih sestavin fenil etanola. To kaže, da so vrste feniletanolnih glikozidov v Cistanche deserticola (Xinjiang) relativno dosledne, vključno z ehinazidom in pilozidom. Vsebnost glikozidov v cvetu Isomeria je višja od 1 odstotka.

Feniletanol glikozid je glavna aktivna sestavina Cistanche deserticola

3.2 Optimizacija pogojev ekstrakcije

Ta poskus je izvedel enofaktorsko študijo o ekstrakcijskem topilu (10 odstotkov ~90 odstotkov metanola) in na koncu določil 50 odstotkov metanola kot optimalno topilo; Opravljena je bila enofaktorska preiskava časa ultrazvočne ekstrakcije (20-60 minut) in ugotovljeno je bilo, da je 2'-acetil ob bazenu dosegel vrh znotraj časovnega območja ultrazvočne ekstrakcije 30-40 minut. Vsebnost pa se je zmanjšala po 60 minutah ultrazvoka in ta komponenta se lahko poškoduje zaradi podaljšanega časa ultrazvoka. Ob upoštevanju ekstrakcijskih učinkov drugih komponent je ultrazvok 40 minut optimalen čas ekstrakcije.

3.3 Optimizacija kromatografskih pogojev

Skeniranje celotne valovne dolžine (190-400nm) je bilo izvedeno z detektorjem diodnega niza, kar kaže, da so bile absorpcijske krivulje polne valovne dolžine šestih feniletanoidnih glikozidov skladne, z absorpcijskimi vrhovi pri 195 nm in 330 nm. Na nizke valovne dolžine je močno vplivala absorpcijska interferenca mobilne faze in ozadja nečistoč, zato je bila optimalna valovna dolžina absorpcije 330 nm. Raziskovali so učinke ločevanja različnih kromatografskih kolon in ugotovili, da so kromatografske kolone DiamonsilC18, AgilentZORBAXSB-AqC18 in ThermoSyncronis C18 uspele ločiti teh šest feniletanoidnih glikozidov iz testnega vzorca Cistanche deserticola, med katerimi je kromatografska kolona ThermoSyn cronies C18. imela najboljši učinek ločevanja.

Tabela 2. Rezultati testa okrevanja z dodatki

Tabela 3 Vsebnost 6 feniletanolnih glikozidov v Cistanche deserticola (odstotki)

4 Zaključek

Ta poskus je identificiral feniletanolaminske glikozide v Cistanche deserticola (Xinjiang) in vzpostavil sočasno metodo določanja vsebnosti šestih feniletanolaminskih glikozidov v Cistanche deserticola, vključno z ehinazidom, antocianinom A, antocianinom, izoantocianinom, 2'-acetil antocianinom in antocianinom B. Metoda je preprosta, hitra, natančna in ima dvojno vlogo pri kvalitativni in kvantitativni analizi. To zagotavlja analitične metode in znanstveno podlago za učinkovito kontrolo kakovosti Cistanche deserticola.

Cistanche ekstrakt v prahu

referenca:

[1] Nacionalna komisija za farmakopejo. Farmakopeja Ljudske republike Kitajske [M]. Peking: China Medical Science and Technology Press, 2020:140-141

[2] Wang Jia, Yang Wen, Wang Dong et al. Primerjalna študija štirih vrst Cistanche deserticola na podlagi karakterističnih spektrov HPLC [J]. Journal of Pharmaceutical Analysis, 2021, 41 (3): 384-393

[3] Ding Yanxia, ​​Wang Xiaoqin, Zhang Ying. Določanje vsebnosti šestih glavnih feniletanolaminskih glikozidov v zdravilnih zeliščih iz rodu Cistanche s tekočinsko kromatografijo visoke ločljivosti [J]. Shi Zhen Guoyi Guoyao, 2020, 31 (4): 813-816

Xiong Hui, Liu Yuqi, Qu Wenjia, et al. HPLC karakteristični spekter Cistanche deserticola in določanje petih feniletanolaminskih glikozidov ［ J ］. Journal of Pharmaceutical Analysis, 2019, 39 (2): 233-239

[5] Ma Zhiguo, Tan Yongxin. Spremembe šestih feniletanoidnih glikozidov v Cistanche deserticola pri različnih časih parjenja [J]. tradicionalna kitajska patentirana zdravila in enostavni pripravki, 2011, 33 (11): 1951-1954

［ 6 ］ Ma Xueqin, Dong Yanhong, Guo Qi, et al. Določanje šestih feniletanolaminskih glikozidov v zeliščih Cistanche deserticola z metodo večkratnega vrednotenja z enim testom ［ J ］. Shi Zhen Guoyi Guoyao, 2018, 29 (10): 2309-2312

[7] Liang Jiansong, Xue Cuili, Wu Menghua, et al. Določanje šestih feniletanolnih glikozidov v Cistanche deserticola in Cistanche deserticola z UPLC in kemometričnim vrednotenjem [J]. Journal of Pharmaceutical Analysis, 2021, 41 (2): 226-235