Študija o analizi komponent in antioksidativnem delovanju polisaharidov iz Cistanche Deserticola Deserticola

Povzetek: V tem članku sta bila nevtralni sladkor CLP1 in kislinski sladkor CLP2 Cistanche deserticola pridobljena z ekstrakcijo polisaharida iz Cistanche deserticola deserticola in čiščenjem surovega polisaharida CLP Cistanche deserticola deserticola s celulozno kolonsko kromatografijo DEAE. Z ultravijoličnim spektralnim skeniranjem smo določili vsebnost celotnega sladkorja, uronske kisline in beljakovin v surovem polisaharidu CLP Cistanche deserticola, nevtralnem sladkorju CLP1 Cistanche deserticola in kislinskem sladkorju Cistanche deserticola CLP2 ter določili molekulsko maso in monosaharidno sestavo polisaharida. Istočasno smo eksperimentalno analizirali vsebnost surovega polisaharida Cistanche deserticola CLP. Sposobnost ločevanja radikalov DPPH in skupno antioksidativno zmogljivost nevtralnega sladkorja CLP1 Cistanche deserticola deserticola in kislega sladkorja CLP2 Cistanche deserticola deserticola. Izmerjeni podatki so pokazali, da je bila sestava surovega polisaharida CLP Cistanche deserticola deserticola, nevtralnega sladkorja CLP1 Cistanche deserticola deserticola in kislega sladkorja CLP2 Cistanche deserticola deserticola podobna, vsebnost pa se bistveno razlikuje; Nevtralni sladkor CLP1 Cistanche deserticola deserticola in kisli sladkor CLP2 Cistanche deserticola deserticola lahko dosežeta več elucijskih vrhov, ko sta ločena in prečiščena s celulozno kromatografsko kolono DEAE, molekulska masa pa je med 0 in 10000 Da, kar kaže na da je glavna sestavina polisaharida Cistanche deserticola deserticola malomolekularni sladkor. Monosaharidi nevtralnega sladkorja CLP1 v Cistanche deserticola deserticola so pokazali, da so bili monosaharidi v nevtralnem sladkorju CLP1 v Cistanche deserticola deserticola deserticola predvsem manoza, galaktoza uronska kislina, glukoza, galaktoza in arabinoza; Rezultati določanja monosaharidov kislinskega sladkorja Cistanche deserticola CLP2 so pokazali, da so bili monosaharidi v kislinskem sladkorju Cistanche deserticola CLP2 predvsem ramnoza, galaktoza uronska kislina, glukoza in galaktoza. Eksperiment DPPH z lovljenjem prostih radikalov in eksperiment skupne antioksidativne zmogljivosti polisaharidov pri Cistanche deserticola je pokazal, da je bila antioksidativna zmogljivost nevtralnega sladkorja CLP1 pri Cistanche deserticola višja kot pri surovem polisaharidu CLP pri Cistanche deserticola in kislem sladkorju CLP2 pri Cistanche deserticola.

Ključne besede: Cistanche deserticola; polisaharidi; analiza komponent; Antioksidativno delovanje; absorbanca

Poskus Cistanche deserticola

Cistanche deserticola deserticola je nekakšna zelnata parazitska rastlina, ki vsebuje veliko število fenolnih glikozidov, alkaloidov, glikozidov fenetilnega alkohola, sladkorjev in alkoholov. Med njimi so sladkorji predvsem v obliki polisaharidov. Polisaharidi Cistanche deserticola imajo močno funkcijo uravnavanja imunske aktivnosti [1-2]. Kot vmesni metabolit v človeških življenjskih aktivnostih so prosti radikali v nestabilnem stanju in imajo visoko intenzivnost oksidacijske aktivnosti, kar bo povzročilo poškodbe tkiv in organov biomakromolekul v človeškem telesu. Zato je uporaba naravnih antioksidantov za odstranjevanje prostih radikalov postala glavna usmeritev trenutnih študij hrane. Polisaharidne komponente v Cistanche deserticola imajo močno antioksidativno sposobnost, ki lahko spodbuja izločanje prostih radikalov v človeškem telesu [3].

Prednosti cistanche tubulosa - antioksidant

V tem prispevku je bila kot raziskovalni objekt vzeta Cistanche deserticola deserticola, polisaharidne snovi pa so bile ekstrahirane in razvrščene. Molekulsko maso polisaharidnih substanc Cistanche deserticola deserticola smo izmerili z gelsko permeacijsko kromatografijo visoke ločljivosti. Hkrati smo poglobljeno analizirali sestavo polisaharidnih snovi. Antioksidativno delovanje polisaharida Cistanche deserticola deserticola deserticola je bilo analizirano z merjenjem sposobnosti lovljenja prostih radikalov in skupne antioksidativne zmogljivosti komponent polisaharida Cistanche deserticola deserticola. Zagotavlja teoretično osnovo za razvoj in uporabo Cistanche deserticola deserticola ter spodbujanje dodane vrednosti.

Puščavska živa cistanča

Kliknite tukaj za ogled izdelkov Cistanche

【Vprašajte za več】 E-pošta:cindy.xue@wecistanche.com/Whats App: 0086 18599088692/Wechat: 18599088692

1 Priprava vzorca Cistanche deserticola

Odtehtajte 2,5 kg Cistanche deserticola, jo narežite, dodajte 12,5 L destilirane vode in kuhajte 3 ure. Po vrenju filtriramo in zberemo filtrat. Dodajte 75-odstotni etanol in pustite stati 24 ur. Centrifugirajte ga pri 4000 vrt/min 30 minut, zberite usedlino ter zamrznite in posušite usedlino, da dobite surovi polisaharid CLP Cistanche deserticola [4]. Vzemite DEAE celulozo, jo namočite in nabreknite pred razplinjevanjem, jo ​​naložite v DEAE celulozno anionsko izmenjevalno kromatografsko kolono in jo uravnotežite z destilirano vodo in raztopino NaCl. Odtehtajte 100 mg surovega polisaharida CLP iz Cistanche deserticola deserticola in ga raztopite v 10 ml destilirane vode. Po izpiranju z destilirano vodo zberite eluent in ga koncentrirajte za liofilizacijo, da dobite nevtralni sladkor CLP1 iz Cistanche deserticola deserticola; Po eluiranju z raztopino NaCl smo eluent zbrali, koncentrirali in po dializi posušili z zamrzovanjem, da smo dobili kislinski sladkor CLP2 Cistanche deserticola [5].

Pripravite nevtralni sladkor CLP1 in kisli sladkor CLP2 Cistanche deserticola v raztopine polisaharidov s koncentracijo 1 mg/mL. Za UV spektroskopsko skeniranje uporabite 210-600nm spektrofotometer. Ko se pojavi vrh pri 260-280nm, je potrjeno, da raztopina vsebuje beljakovine in nukleinsko kislino [6].

Glavne kemične sestavine Cistanche deserticola

2 Določanje polisaharidnih komponent Cistanche deserticola

Vsebnost skupnega sladkorja v Cistanche deserticola smo določili z metodo fenol žveplove kisline. Izmerite {{0}}, 0.2, 0.4, 0.6, {{10}}.8 in 1 ml raztopine glukoze s koncentracijo 0,1 mg/mL in jih dajte v steklene epruvete. Dodajte destilirano vodo do konstantne prostornine 1 mL, nato pa v epruvete dodajte 0,5 mL fenolnega reagenta s koncentracijo 6 odstotkov in 2,5 mL koncentrirane žveplove kisline. Dobro pretresite in ohladite na sobno temperaturo. S spektrofotometrom izmerite absorbanco pri 490 nm, z vsebnostjo sladkorja kot osjo x in absorbanco kot osjo y, narišite standardno krivuljo in izračunajte regresijsko enačbo [7-8].

Za določanje vsebnosti beljakovin v vzorcih Cistanche deserticola smo uporabili metodo Coomassie brilliant blue. V vsako epruveto vzemite 1 ml standardnih vzorcev z različnimi koncentracijami in raztopine vzorcev s koncentracijami 0.1 mg/mL, dodajte 4 ml raztopine Coomassie briljantno modre barve, dobro pretresite in nato pustite pri miru. S spektrofotometrom izmerite absorbanco pri 495 nm in izračunajte vsebnost beljakovin v vzorcu v skladu z enačbo standardne krivulje [9].

Vsebnost uronske kisline v Cistanche deserticola je bila določena z m-hidroksifenilno metodo. Vzemite 0.4mL standardne raztopine z različnimi koncentracijami in raztopino vzorca s koncentracijo 0.1mg/mL, dodajte 2.5mL koncentrirane žveplove kisline v epruveto, jo dobro pretresite in nato izvedite 25-minutni vreli vodni kopeli, vzemite ven in ohladite na sobno temperaturo, dodajte m-hidroksifenil s koncentracijo 0.3 odstotkov in raztopino natrijevega hidroksida s koncentracijo 0.5 odstotkov v epruveto, jo dobro pretresite in jo nato postavite za 30 minut. S spektrofotometrom izmerite absorbanco pri 525 n in izračunajte vsebnost uronske kisline v vzorcu v skladu z enačbo standardne krivulje [10-11]. Relativno molekulsko maso polisaharida Cistanche deserticola smo določili z gelsko kromatografijo visoke ločljivosti, sestavo monosaharida Cistanche deserticola deserticola pa s tekočinsko kromatografijo visoke ločljivosti [12].

3 Rezultati določanja in analize polisaharidnih komponent Cistanche deserticola

Krivulja skeniranja UV spektra fotometra pri 210-600nm je prikazana na sliki 1

Slika 1 UV spektralna krivulja skeniranja (210-600nm)

Na sliki 1 je razvidno, da ima nevtralni sladkor CLP1 Cistanche deserticola deserticola očiten absorpcijski vrh pri 280 nm, kislinski sladkor CLP2 Cistanche deserticola deserticola deserticola pa nima očitnega absorpcijskega vrha pri 260-280 nm, vendar UV absorpcijski spekter je visok. Ker imata triptofan in tirozin, ki ju vsebuje beljakovina, veliko absorpcijsko vrednost za ultravijolično svetlobo pri 280 nm, je mogoče ugotoviti, da nevtralni sladkor CLP1 Cistanche deserticola vsebuje glikoprotein, in je nemogoče ugotoviti, ali kislinski sladkor CLP2 Cistanche deserticola vsebuje nukleinske kisline. kisline in beljakovin.

DEAE celulozna anionsko izmenjevalna kromatografska kolonska kromatografija lahko adsorbira ionske snovi in ​​nečistoče na kromatografski koloni, da se izvede ločevanje polisaharidnih snovi. Po koncentriranju in sušenju raztopine za izpiranje z destilirano vodo je bilo pridobljenih skupno 34,68 mg nevtralnega sladkorja CLP1 iz Cistanche deserticola, po eluiranju, koncentriranju in sušenju z raztopino NaCl pa je bilo pridobljenih skupno 16,52 mg kislega sladkorja CLP2 iz Cistanche deserticola. Med poskusom so bile pridobljene enačbe standardne krivulje vsebnosti celotnega sladkorja, vsebnosti beljakovin in uronske kisline Cistanche deserticola. Vsebnost celotnega sladkorja, beljakovin in uronske kisline v Cistanche deserticola je bila izmerjena, kot je prikazano v tabeli 1.

Tabela 1 Skupna vsebnost sladkorja, beljakovin in uronske kisline v Cistanche deserticola

Regresijsko enačbo lahko dobimo z določitvijo molekulske mase in površine vrha standardnega vzorca. Molekulsko maso vzorca, ki ga je treba testirati, lahko dobimo tako, da vrednost signala fotoemisije vzorca, ki ga testiramo, nadomestimo z regresijsko enačbo. Z nadaljnjo analizo in izračunom je mogoče pridobiti številčno povprečno molekulsko maso, povprečno molekulsko maso in disperzijski koeficient nevtralnega sladkorja CLP1 in kislega sladkorja CLP2 Cistanche deserticola. Rezultati izračuna retenzijskega časa in molekulske mase gelsko permeacijskega kromatograma visoke ločljivosti nevtralnega sladkorja Cistanche deserticola CLP1 in kislinskega sladkorja Cistanche deserticola CLP2 so prikazani v tabeli 2. Številčna povprečna molekulska masa se uporablja za predstavitev velikosti izmerjene molekule, in razmerje med masno povprečno molekulsko maso in številčno povprečno molekulsko maso se uporablja za predstavitev širine molekulske porazdelitve.

Tabela 2 Čas določanja retenzijskega vrha in rezultati izračuna molekulske mase

Iz tabele 2 je razvidno, da je razpon porazdelitve molekulske mase nevtralnega sladkorja CLP1 Cistanche deserticola in kislega sladkorja CLP2 Cistanche deserticola 0~10000 Da, kar kaže, da je polisaharid v Cistanche deserticola majhen molekulski polisaharid z različnimi molekulami, molekulska masa pa kaže heterogenost. Lahko sklepamo, da sta nevtralni sladkor CLP1 Cistanche deserticola in kislinski sladkor CLP2 Cistanche deserticola mešanici več polisaharidov.

Glej tabelo 3 za vrhove HPLC in največje retenzijske čase devetih standardnih vzorcev monosaharida, nevtralnega sladkorja CLP1 Cistanche deserticola deserticola in kislega sladkorja CLP2 Cistanche deserticola deserticola. S primerjavo največjega časa lahko sklepamo, da je pet očitnih monosaharidov v nevtralnem sladkorju CLP1 Cistanche deserticola in štirje očitni monosaharidi v kislem sladkorju CLP2 Cistanche deserticola. Delež monosaharidov v nevtralnem sladkorju CLP1 Cistanche deserticola deserticola in kislem sladkorju CLP2 Cistanche deserticola deserticola je prikazan v tabeli 4.

Tabela 3 Retencijski čas vrhov monosaharidne tekočinske kromatografije visoke ločljivosti

Tabela 4 Delež monosaharidov v Cistanche deserticola

Vsebnost monosaharidov v nevtralnem sladkorju CLP1 Cistanche deserticola se po hidrolizi bistveno razlikuje od vsebnosti kislega sladkorja CLP2 Cistanche deserticola. Vsebnost glukoze v nevtralnem sladkorju CLP1 Cistanche deserticola je kar 88,62 odstotka, vsebnost glukoze v kislem sladkorju CLP2 Cistanche deserticola je le 9,99 odstotka, vsebnost galaktozne aldehidne kisline, galaktoze in ramnoze v kislem sladkorju CLP2 iz Cistanche deserticola je vseh več kot 5 odstotkov.

4 Analiza antioksidativne aktivnosti polisaharida Cistanche deserticola

Med analizo antioksidativnega poskusa polisaharida Cistanche deserticola deserticola je bil polisaharid Cistanche deserticola deserticola pripravljen v raztopino polisaharida Cistanche deserticola deserticola s koncentracijo {{0}}, 0.25, 0 .5, 1.0, 2.0, 4,0 mg/mL, izmerjena pa je bila stopnja lovljenja prostih radikalov DPPH in skupna antioksidativna kapaciteta raztopine. Med določanjem stopnje lovljenja prostih radikalov DPPH raztopini polisaharida Cistanche deserticola deserticola dodajte 2 × Skupno 2 ml 10-4mol/L DPPH smo enakomerno premešali in postavili v temne pogoje za 15 minut. Raztopino smo centrifugirali pri hitrosti centrifuge 4000r/min in času centrifugiranja 15 minut. S spektrofotometrom izmerite vrednost absorbance raztopine pri valovni dolžini 517 nm, iz katere lahko dobite stopnjo odstranjevanja radikalov DPPH raztopine polisaharida Cistanche deserticola deserticola, kot je prikazano v tabeli 5.

Tabela 5 Stopnja odstranjevanja radikalov DPPH raztopine polisaharida Cistanche deserticola

Iz tabele 5 je razvidno, da je stopnja čiščenja surovega polisaharida CLP Cistanche deserticola in nevtralnega sladkorja CLP1 Cistanche deserticola na proste radikale DPPH znatno višja kot stopnja kislega sladkorja CLP2 Cistanche deserticola na proste radikale DPPH. Ko je koncentracija raztopine manjša od 2.0mg/mL, stopnja ločevanja radikalov DPPH surovega polisaharida CLP Cistanche deserticola deserticola in nevtralnega sladkorja CLP1 Cistanche deserticola deserticola postopoma narašča s povečanjem koncentracije in končno postane stabilen.

Med določanjem skupne antioksidativne kapacitete polisaharida Cistanche deserticola deserticola smo za hitro detekcijo uporabili komplet za testiranje antioksidativne kapacitete. Vzemite standardno detekcijsko raztopino Trolox in jo razredčite z destilirano vodo na {{0}}, 0.25, 0.5, 1.0, 2.{ {10}} in 4,0 mg/ml. Delovno raztopino peroksidaze dodajte na ploščo z jamicami za odkrivanje, nato dodajte vzorec ali standardno raztopino za odkrivanje, ki jo želite testirati, in na koncu dodajte delovno raztopino kompleta za hitro odkrivanje. Dobro premešajte in pustite stati 6 minut. Skupno antioksidativno zmogljivost polisaharida Cistanche deserticola smo določili z bralnikom mikroplošč pri valovni dolžini 405 nm in 734 nm [14-15]. Glej tabelo 6 za rezultate preskusa skupnega antioksidativnega dosežka raztopine polisaharida Cistanche deserticola deserticola.

Tabela 6 Skupna antioksidativna zmogljivost raztopine polisaharida Cistanche deserticola

Iz tabele 6 je razvidno, da je skupna antioksidativna zmogljivost surovega polisaharida CLP Cistanche deserticola, nevtralnega sladkorja CLP1 Cistanche deserticola in kislega sladkorja, kadar je koncentracija raztopine Cistanche deserticola manjša od 4.0mg/mL. CLP2 Cistanche deserticola narašča s povečanjem koncentracije raztopine; Antioksidativna zmogljivost nevtralnega sladkorja CLP1 Cistanche deserticola deserticola je bistveno višja od zmogljivosti surovega polisaharida CLP Cistanche deserticola deserticola deserticola in kislega sladkorja CLP2 Cistanche deserticola deserticola deserticola.

Čistančev čaj

5 Zaključek

Rezultati analize polisaharida Cistanche deserticola deserticola z gelsko permeacijsko kromatografijo visoke ločljivosti so pokazali, da molekulska masa polisaharida, ki ga vsebuje, ni večja od 10000 Da in je vseboval več elucijskih vrhov. Polisaharid Cistanche deserticola deserticola je imel določene antioksidativne lastnosti. Rezultati te študije postavljajo temelje za nadaljnji razvoj in uporabo Cistanche deserticola.

Reference:

 [1] Bi Cuicui, Liu Yinlu, Wei Fenfen et al. Napredek raziskav o glavnih kemičnih sestavinah in bioloških aktivnostih Cistanche deserticola [J]. Drug Evaluation Research, 2019, 42 (9): 1896-1900

[2] Dong Yuwei, Miao Jingzhi, Li Yong. Optimizacija postopka dvojne encimske ekstrakcije česnovih polisaharidov in njegove antioksidativne aktivnosti in vitro ［ J ］. Kitajske začimbe, 2020, 45 (10): 30-35, 48

[3] Yang Ting, Eladan McIntyre, Tao Yichun et al. Določanje vsebnosti polisaharidov in antioksidativne aktivnosti usedlin Cistanche tubulosa ［ J ］. Journal of Xinjiang Medical University, 2019, 42 (2): 234-236241

[4] Liu Lisa, Zhang Qing, You Lin, et al. Študija o tehnologiji ekstrakcije s topilom glikozidov fenetilnega alkohola iz Cistanche tubulosa [J]. Živilska znanost in tehnologija, 2019, 44 (4): 225-229

[5] Liu Yaowei, Su Zihao. Študija o procesu hitre ekstrakcije glikozidov ehinaceje in verbascum thapsus v Cistanche deserticola ［ J ］. Medicinska prehrana in zdravje, 2020, 18 (23): 27-28

[6] Tian Wenjing, Zhou Xuan, Huang Qunhui et al. Vpliv ultrazvočne obdelave na reološke lastnosti polisaharida Cistanche deserticola deserticola ［ J ］. Bilten za biologijo, 2021, 56 (2): 48-53

[7] Feng Jie, Guo Yehong, Zhu Wenjuan et al. Učinki različnih gostiteljev, habitatov in datumov nabiranja na vsebnost aktivnih sestavin v Cistanche deserticola ［ J ］. Viri divjih rastlin na Kitajskem, 2021, 40 (5): 18-23

[8] Lv Mingshuai, Zhao Bo, Sun Wenyu et al. Študija o fizikalno-kemijskih lastnostih in antioksidativnem delovanju s selenom bogatega polisaharida Auricularia auricula-judge ［ J ］. Kitajska aroma, 2021, 46 (6): 54-59

[9] Chen Yuebai. Preverjanje postopka ekstrakcije lentinana in analiza trenutnega stanja raziskav o njegovih učinkih na zdravje [J]. Kitajska aroma, 2021, 46 (8): 189-191

[10] Guo Qiaoli, Wu Zhibo, Zhou Yubi, et al. Analiza sestave in antioksidativna aktivnost polisaharidov iz Cistanche deserticola v Lanzhouju ［ J ］. Živilska industrija, znanost in tehnologija, 2021, 42 (15): 96-103

[11] Cao Libo, Gong Xingcheng, Jia Jinru et al. Hitra kvalitativna analiza kemičnih sestavin Cistanche salsa z metodo polnega skeniranja večstopenjske masne spektrometrije z neposrednim vbrizgavanjem ［ J ］. Chinese Journal of Traditional Chinese Medicine, 2021, 46 (16): 4150-4156

[12] Hu Dongbao, Du Wei, Yang Meng. Optimizacija postopka ekstrakcije in antioksidativne aktivnosti polisaharida iz Macrocybe gigantea z metodologijo odzivne površine ［ J ］. Kitajske začimbe, 2021, 46 (10): 78-82

[13] Xu Sheng, Chai Shasha. Metoda hitre detekcije glavnih učinkovin v Cistanche deserticola [J]. Journal of Wuhan Vocational and Technical College, 2021, 20 (4): 116-120

[14] Zhang Hongchi, Liu Rui, Jiao Lele et al. Optimizacija procesa ekstrakcije Lentinana na podlagi ortogonalne metode rotacije kvadratne regresije ［ J ］. Kitajska aroma, 2021, 46 (11): 88-93

[15] Song Qingqing, Zhang Ke, Li Ting et al. Hkratno določanje večkomponentne vsebnosti Cistanche deserticola s hidrofilno interakcijsko kromatografijo z reverzno fazo, prilagojeno metodo spremljanja več reakcij [J]. Analitična kemija, 2020, 48 (11): 1573-1593