SINERGISTIJSKI PIGMENCIJSKI UČINKI KISTENCHE Pheniletanoid Glikozide in glabridin
Jan 14, 2025
Izvleček za raziskovanje sinergističnegaVpliv cistančeStran fenil etanola (PHG) in glabridin (GLA) proti pigmentaciji kože, masno razmerje PHG in GLA je bilo prikazano z in vitro poskusom inhibicije tirozinaze, 1, 1- diphenil -2- in trinitrofenilhdrazin (DPPH) in DPPH) in DPPH) 2, 2- Diazo-bis (3- etil-benzothiazole -6- diammonium kation sulfonske kisline (ABTS+) Prosti radikalni odstranjevanje poskusov, ki jih je pridelala model hipopigmentacije, ki ga je povzročila UVB, in inhibicija B16F1 vsebnost melanina kot indeksi.
TvnetnoVzpostavljen je bil model HACAT celic, ki jih povzroča lipopolisaharid (LPS), protivnetni učinek zdravila pa je bil ovrednoten z zaviranjem sproščanja interlevkina -6 (IL -6) in faktorja tumorja nekroze (TNF-). Nadalje je bil vzpostavljen oksidativni stresni model celic HACAT, ki ga povzroča azodiizobuamidin hidroklorid (AAPH), izboljšana aktivnost superoksidne dismutaze (SOD) in katalaze (CAT) pa je bila uporabljena kot indeksi za oceno antioksidativnega učinka zdravila. Optimalno masno razmerje PHG in GLA je bilo določeno z zgornjimi tremi celičnimi modeli. Rezultati so pokazali, da vodne raztopine PHG/GLA (1∶1), PHG/GLA (5∶1) in PHG/GLA (10∶1), pripravljene z M (PHG) ∶M (GLA) =1 ∶1, 5∶1, 10∶1 kažejo dobre inhibicijske aktivnosti. Stopnja inhibicije PHG/GLA (1∶1),
PHGS/GLA (5∶1) in PHGS/GLA (1 0 ∶1) Vodne raztopine z masno koncentracijo 0,4 g/L so bile 94,37%, 92,93%in 88,06%. Stopnje čiščenja prostih radikalov DPPH so bile 89,44%, 88,72,%oziroma 88,10%.
Stopnje čiščenja ABTS+ prostih radikalov so bile 1 0 0,13%, 100,0,1%in 99,87%. Ko je bila koncentracija mase PHG/GLA 25 ug/ml, PHG/GLA (1∶1), PHG/GLA (5∶1) in PHG/GLA (10∶1) vodne raztopine niso pokazale citotoksičnosti na celice B16F10 in HACAT. Inhibicija aktivnosti tirozinaze v vodni raztopini PHGS/GLA (1 ∶1) je bila močnejša (aktivnost tirozinaze 23,80%), vsebnost melanina (30,90%) pa se je znatno zmanjšala. Vodna raztopina PHGS/GLA (1∶1) je pokazala najboljši inhibicijski učinek na IL -6 in TNF-sproščanje ter sposobnost izboljšanja aktivnosti SOD in CAT. Kombinacija PHG in GLA je pokazala dobro sinergistično zmogljivost, nadrejena A do posameznega zdravila in višja od vodne raztopine PHGS/ GLA (5∶1) in PHG/ GLA (10∶1). Kombinacija PHG in GLA je imela sinergistično vlogo pri izboljšanju pigmentacije kože z zaviranjem proizvodnje melanina ter protivnetnih in antioksidativnih učinkov.
Ključne besede Cistanche Phenylethanoid Glikozidi; Glabridin; sinergistični učinki; PIGmentacija proti koži; antioksidacija; protivnetno; droge
Cistanche fenil etanol za beljenje
Podporna služba Wecistanche-največji Cistanche izvoznik na Kitajskem:
E -pošta: wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/tel: +86 15292862950
Če želite več informacij o morebitnih popustih, ne oklevajte in se obrnite na našo skupino za pomoč strankam. Z veseljem vam bodo pomagali!
Kožna pigmentacija je kožna bolezen, ki jo povzročajo dejavniki, kot so poškodbe, vnetje kože in ultravijolično sevanje [1-2]. Ti dejavniki lahko privedejo do nenormalnega povečanja melanina, kar posledično povzroča težave, kot so kloasma, pege in postflamacijska hiperpigmentacija (PIH) [3-4], kar vpliva na duševno stanje in kakovost življenja ljudi. Trenutno se zdravljenje s kožno pigmentacijo osredotoča predvsem na zaviranje tirozinaze, ključnega encima pri tvorbi melanina [5-6].
Najnovejša raziskava [7-8] kaže, da je pigmentacija kože odvisna od tesne povezave med keratinociti in melanociti v povrhnjici. Ko bodo prosti radikali in vnetni dejavniki, ki jih sprostijo keratinociti, v stik z melanociti, bodo povzročili povečanje aktivnosti tirozinaze, kar bo povzročilo povečanje vsebnosti melanina. Prav tako bodo pospešili transport melanina in povzročili, da se melanin odlaga na površini kože. Zato je za zdravljenje pigmentacije kože potrebna različne ukrepe, kot so zaviranje proizvodnje melanina, protivnetna in antioksidacija.
Čeprav imajo tradicionalni pripravki z zdravili, kot sta hidrokinon in hidrokinon, določene učinke pri zdravljenju kožne pigmentacije, so njihovi načini delovanja relativno enojni in lahko povzročijo neželene učinke [9-10]. Za primerjavo so naravna zdravila naravna in blaga v veljavi in jih potrošniki vedno bolj prepoznajo in hvalijo [11-12]. Zlasti kombinacija več rastlinskih izvlečkov [13-14] ne more samo zavirati proizvodnje melanina, ampak ima tudi več učinkov, kot so protivnetni in antioksidativni učinki, kar zagotavlja nove ideje in metode za zdravljenje kožne pigmentacije.
Cistanche Deserichola Ma ima edinstveno zdravilno vrednost in je znan kot "puščavski ginseng". Študije so pokazale, da ima značilna sestavina feniletanoidnega glikozida, ki jo vsebuje cistanča, dobro aktivnost antioksidantov [15] in protivnetne učinke [16], poleg tega pa ima tudi določen zaviralni učinek tirozinaze [17]. Glycyrrhizin je flavonoidna komponenta v Glycyrrhiza Glabra L., ki ima močan učinek beljenja in je znana kot "belilo zlato" [18]. Tradicionalno kitajsko medicino Zdravljenje kožne pigmentacije se običajno začne s hitrostjo vranice in ledvic, odstranjevanje toplote in razstrupljanja ter obnavljanje Qi in krvi [19].
Feniletanolni glikozidi cistanche puščave lahko napolnijo ledvične jang in koristijo bistvu in krvi, medtem ko Glycyrrhiza glabra lahko napolni vranico in Qi, očisti toploto in razstrupljajo. Oba lahko skupaj sodelujeta, da se upirata pigmentaciji. Kombinacija iz feniletanoida glikozide cistanke deseshecole in glabridina se lahko upira pigmentaciji kože iz več dimenzij in tarč, ščiti pred ultravijoličnimi žarki v celotnem pasu, sinergistično zavirajo aktivnost tirozinaze in zmanjšajo proizvodnjo melanina ter zmanjšajo rabice in lahko zmanjšajo proste radikalne proizvodnje. Vendar pa je v literaturi malo poročil o sinergistični inhibiciji kožne pigmentacije s fenyletanoidnimi glikozidi cistanche puščave in glabridina.
Ta članek namerava raziskati, ali obstaja sinergistični učinek med pfeniletanoidnimi točkami cistanche lesemicole (PHG) in glabridinom (GLA) z in vitro biokemičnimi poskusi in vzpostavitvijo 3 celičnih modelov, ND pa dobi optimalno razmerij mase za sinergistični učinek. Pričakuje se, da bo zagotovil teoretično podporo in praktične napotke za razvoj naravnih rastlinskih izdelkov za nego kože in pomagal spodbujati industrijo kože, da se razvija v bolj naravni, zdravi in učinkoviti smeri.
Kjer: reakcija je absorbanca raztopine vzorca, L-tirozin raztopine, PBS in raztopine tirozinaze; Reakcijska kontrola je absorbanca raztopine vzorca, L-tirozin raztopine, raztopine N in PBS; Prazna je absorbanca raztopine L-tirozina, raztopine PBS in raztopine tirozinaze; Prazna kontrola je absorbanca raztopin L-tirozina in PBS.
'
1.3.2 Določitev sposobnosti čiščenja prostih radikalov DPPH
Najprej natančno tehtamo {0}}. 0 197 g (0. 0 5 mmol) dpph in ga raztopi v 25 0 ml, da bi pripravili delovno rešitev DPPH, da bi pripravili delovno rešitev DPPH. mmol/l. Nato smo PHG in GLA pripravili v raztopino phgs etanola in raztopino GLA etanola z masno koncentracijo 0. {{22} 01, 0,01, 0,1, 0,4, 0,8, 1,2, 1,6, 2,0 mg/ml, ki je bila uporabljena z uporabo 50% etanola. Nato smo raztopino PHGS etanola in raztopino GLA etanola enakomerno mešali pri M (PHGS raztopina) ∶ m (raztopina GLA)=40 ∶1, 20∶1, 10∶1, 5∶1, 1∶1, 1∶5, 1∶5, 1∶10, 1∶20, 1∶40, da so bili zapisani 9 vrst phgs ethanol, ki so bile zabeležene 9 vrst phgs ethanol, da bi dobili 9 vrst phgs ethanol, ki so bile zabeležene 9 vrst phgs ethanol ethanol, da bi dobili 9 vrst phgs ethanol, ki so bile pridobljene 9 vrst phgs ethanol ethanola PHGS/GLA (40∶1) ~ PHGS/GLA (1∶40) etanolske raztopine. Končno dodajte 100 μl različnih vzorčnih raztopin in 100 μl delovne raztopine DPPH na ploščo 96-, dobro premešajte in se 30 minut držite stran od svetlobe pri sobni temperaturi. Izmerite absorbanco pri 517 nm z encimskim označevalcem. VC je bil uporabljen kot pozitiven nadzor in vsak poskus je bil ponovljen 3 -krat. Izračunajte stopnjo čiščenja prostega radikala DPPH (%) v skladu s formulo (2).
DPPH hitrost odstranjevanja radikalov/%=(1 −𝐴1 - 𝐴3𝐴2) × 100 (2), kjer: A1 je absorbanca vzorčne raztopine + delovna raztopina DPPH; A2 je absorbanca 50% etanola z delovno rešitev za volumen + DPPH; A3 je absorbanca vzorčne raztopine + 50% etanola glede na glasnost.
1.3.3 Določitev ABTS+ sposobnost čiščenja prostih radikalov
Najprej tehtamo 1 g (1,82 mmol) ABT in ga raztopimo v deionizirani vodi, da pripravite delovno raztopino ABTS s končno koncentracijo 7,4 mmol/L; tehtamo 0. Zmešajte delovno raztopino ABTS in delovno raztopino kalijevega persulfata v enakih količinah in reagirajte 12 ur v temi, da pripravite delovno raztopino ABTS+. Nato v skladu z metodo v oddelku 1.3.2 pripravite raztopino etanola PHG, raztopino Etanola GLA, raztopino N in VC etanola, pa tudi PHG/GLA (40∶1) ~ ~ PHGS/GLA (1∶40) raztopine etanola.
Na koncu dodajte 40 μl različnih vzorčnih raztopin in 160 μl delovne raztopine ABTS+ na ploščo 96-, dobro premešajte, reagirate pri sobni temperaturi v temi 6 minut in izmerite absorbanco raztopine pri 734 nm z bralnikom ELISA. Izračunajte ABTS+ hitrost čiščenja prostega radikala (%) v skladu s formulo (3).
Kje: A1 je absorbanca vzorčne raztopine + ABTS + delovna rešitev; A2 je absorbanca deionizirane vode + ABTS + delovna rešitev; A3 je absorbanca vzorčne raztopine + deionizirana voda.
1.4 Celični eksperiment
1.4.1 Celična kultura
Po oživitvi celic B16F10 in HACAT se inokulirajo v DMEM z visoko glukoznim medijem (ki vsebuje mešanico 10% fetalnega govejega seruma in 1% penicilin-streptomicin z masnim deležem) in gojene v inkubatorju pri 37 stopinjah, 5% volumna frakcije CO2 in 70% vlage. Status rasti celic opazimo pod mikroskopom, medij pa se nadomesti ali subkultira glede na status rasti celic.
1.4.2 Eksperimentalno združevanje
Celice B16F10 in HACAT v fazi logaritmične rasti so inokulirane v 96- vodnjaki z ustreznimi številkami celic in gojene 24 ur, da se celice oprimejo na steno. Vzorčne raztopine različnih masnih koncentracij so pripravljene z uporabo DMEM gojišča. The normal group, model group, low-dose PhGs (125 ug/mL) group, medium-dose PhGs (250 ug/mL) group, high-dose PhGs (500 ug/mL) group, low-dose Gla (6.25 ug/mL) group, medium-dose Gla (12.5 ug/mL) group, high-dose Gla (25 ug/mL) group, and PhGs/Gla (1∶1) group, Skupina PHGS/GLA (5∶1) in PHGS/GLA (10∶1) Srednja skupina je bila postavljena.
V modelu pigmentacije B16F10, ki ga povzroča UVB, smo dodali celice modelov skupine s 30 μl PBS (pH =7. 4) in jih postavili 3 cm neposredno pod UVB obsevanjem za 110 s; Eksperimentalno skupino smo predhodno obdelali s 100 μl vzorčnih raztopin različnih masnih koncentracij 1 uro, nato dodali s 30 μl PBS in postavili 3 cm neposredno pod UVB obsevator za 110 s; Običajna skupina je vedno uporabljala visoko-glukozni DMEM kulturni medij; Prazna skupina ni bila inokulirana s celicami, ampak z enako količino gojišča.
V modelu vnetja HACAT celic, ki ga povzroča LPS, smo modelno skupino gojili s PBS raztopino LPS v koncentraciji 20 ug/ml 24 ur; Eksperimentalno skupino smo 24 ur predhodno obdelali s 100 μl raztopin vzorcev različnih masnih koncentracij in nato dodali z 20 ug/ml LPS raztopino 24 ur; Običajna skupina je vedno uporabljala medij z visoko glukozo DMEM; Prazna skupina ni bila inokulirana s celicami, ampak z enako količino kulturnega medija.
V modelu oksidativnega stresnega stresa, ki ga povzroča HACAT, smo modelno skupino gojili s 100 ml raztopino AAPH (2,5 mmol) pri koncentraciji 25 mmol/L 24 ur; Eksperimentalno skupino smo 24 ur predhodno obdelali s 100 μl raztopin vzorcev različnih masnih koncentracij in nato dodali z raztopino AAPH pri koncentraciji 25mmol/L 24 ur; Običajna skupina je vedno uporabljala medij z visoko glukozo DMEM; Prazna skupina ni bila inokulirana s celicami, ampak z enako količino kulturnega medija.
Vsaka skupina je bila postavljena s 3 ponovljivimi vrtinami in gojena v inkubatorju pri 37 stopinj, 5% volumske frakcije CO2 in 70% vlažnostjo.
1.4.3 Analiza citotoksičnosti
Za določitev citotoksičnosti je bila uporabljena metoda CCK8. B16F1 0 in HACAT celice v fazi logaritmične rasti smo prebavili z 0,25% tripsina 3 minute. Po prenehanju prebave smo kulturni medij večkrat razstrelili, da smo naredili celično suspenzijo z gostoto 1 × 104 celic/ml. Celice smo enakomerno inokulirali v plošči 96-, 100 μl na vrtino in PBS dodali v vrtine okoli celic. Po celicah, ki so bile pritrjene na steno, smo dodali različne masne koncentracije raztopine vzorca, 3 ponovitve vrtine na skupino in gojili v inkubatorju pri 37 stopinj, 5% volumske frakcije CO2 in 70% vlažnosti za 24, 48 in 72 h, nato pa smo raztopino zavrgli. Vse skupine smo dodali s 100 μl celotnega gojišča, ki vsebuje 10% volumske frakcije CCK8 in inkubiramo 60 minut. Absorbanca raztopine pri 450 nm smo merili z bralnikom ELISA. Celična sposobnost preživetja (%) je bila izračunana po formuli (4).
Kje: eksperimentalna skupina je absorbanca vrtin, ki vsebujejo celice in raztopino vzorca pri UVB obsevanju; Običajna skupina je absorbanca vrtin, ki vsebujejo celice, in raztopine vzorca brez UVB obsevanja; Prazna skupina je absorbanca vrtin, ki vsebujejo kulturni medij, vendar brez celic.
1.4.5 Določitev vsebnosti melanina
Vsebnost melanina je bila določena po metodi lize NaOH. Po obdelavi celic 72 ur po metodi v oddelku 1.4.2 smo supernatant zavrgli in dvakrat sprali s PBS, dodali smo 100 μl vodne raztopine NaOH, ki vsebuje 10% DMSO po volumnu (koncentracija 1 mol/L). Potem ko smo 1 uro postavili v 90 -stopinjsko pečico, smo absorbanco raztopine pri 490 nm določili z encimskim markerjem. Poskus smo ponovili 3 -krat. Vsebnost melanina (%) je bila izračunana po formuli (5).
1.5 Določitev vsebnosti vnetnih faktorjev in indeksa oksidativnega stresa
Po obdelavi celic 48 ur po metodi v oddelku 1.4.2 smo zbrali celice HACAT v vsaki skupini s celičnim strgalom, centrifugirali in zbrali supernatant. Vsebina IL -6 in TNF- je bila določena v skladu z navodili kompleta ELISA.
Po obdelavi celic 48 ur po metodi v oddelku 1.4.2 so bile celice HACAT v vsaki skupini zbrane s celičnim strgalom in celice porušili s ponavljajočim zamrzovanjem in odtajanjem. Celice smo centrifugirali pri 12000 R/min pri 4 stopinj 10 minut in zbrali supernatant. Aktivnost SOD in vsebnost mačk sta bila določena v skladu z navodili kompleta ELISA.
1.6 Določitev kombiniranega indeksa
Metoda kombiniranega indeksa (CI) [20] je bila uporabljena za določitev, ali ima PHG in GLA v različnih masnih razmerjih sinergističen učinek pri zaviranju aktivnosti tirozinaze in antioksidacije. Kombinacijski indeks je bil izračunan po formuli (6):
Wherein: D1 and D2 are the mass concentrations (mg/mL) of the two drugs when the activity reaches x% in the combined treatment; DX is the mass concentration (mg/mL) required for the activity to reach x% when the two substances are used alone. Compusyn software was used for calculation. CI>1 označuje antagonistični učinek, CI =1 kaže na aditivni učinek in CI<1 indicates a synergistic effect.
1.7 Analiza podatkov
Vsi podatki so izraženi kot "aritmetična srednja vrednost ± standardni odklon (𝑥̅ ± 𝑠)". Graph Prism 9.5. 0 programska oprema je bila uporabljena za statistično analizo. Za primerjavo med več skupinami je bila uporabljena enosmerna analiza variance. Str<0.05 was considered statistically significant.
