Farmakološke raziskave akteozida o delovanju zavirajo začetek hiperlazije prostate pri podganah

Farmakološke raziskave akteozida o delovanju zavirajo začetek hiperplazije prostate pri podganah

Za več informacij:ali.ma@wecistanche.com

POVZETEK:Vzpostavljen je bil podganji model začetne hiperplazije prostate (BPH) in tri skupine odmerkovakteoziddajali peroralno 4 tedne, da bi preučili učinek akteozida, destiliranega iz Cistanche tubulosa, na apoptozo in ultramikro strukturo prostate pri podganah z BPH. Ultrastrukturno spremembo prostate smo opazovali s transmisijsko elektronsko mikroskopijo. To so pokazali rezultatiApoptozanormalne prostate pri podganah ni bilo očitno, obstajala je nizka stopnja pro-stateapoptozav modelni skupini, pri zdravljenju z visokim odmerkom akteozida, podganje pro-stanjeapoptozaje bil znatno višji od tistega v modelni skupini.Akteozidlahko spodbuja proptozo prostate pri podganah in igra vlogo pri zaviranju benigne hiperplazije prostate

KLJUČNE BESEDE:akteozid, Cistanche, začne hiperplazija prostate

Kliknite za odmerjanje cistanche tubulosa in izdelke Cistanche

Apoptoza med hiperplazijo prostate (BPH) je eden trenutno bolj zaskrbljujočih mehanizmov, ki je genetsko kodiran in omogoča celicam nadzor celične smrti z odzivom na specifične signale. Ko se prostata razvije do velikosti odrasle osebe, se stopnja proliferacije celic prostate vzdržuje pri 1 odstotku - 2 odstotkov z uravnoteženim delovanjem povprečne stopnje apoptoze, in ko je to ravnovesje porušeno, velja, da je predispozicijski vzrok BPH. V normalnih pogojih sta ravni samic in androgenov v prostati ter njen normalni krvni obtok stanje homeostaze, ki obstaja med proliferacijo in apoptozo. Kadar proliferacija ni v ravnovesju z apoptozo, vodi do nadaljnje rasti in povečanja žleze, kar predvsem omogoča širjenje epitelijskega medceličnega predela. V tem testu smo opazovali in analizirali učinek ene od kemičnih sestavinCistanche, akteozid(kot phyllode), o apoptozi in ultrastrukturnih spremembah v prostati podgan z vzpostavitvijo podganjega modela hiperplazije prostate, za oceno uporabnosti akteozida pri zaviranju hiperplazije prostate in za zagotovitev znanstvene podlage za razvoj nove uporabeCistanche, kitajsko zdravilo.

1 material in metode

1. 1 preskusna žival

Petdeset podganjih samcev SD, starih 6-7 tednov, čiste stopnje, težkih 80-100 g, je zagotovil center za primerjalno medicino Univerze Yangzhou.

1. 2 reagentov in zdravil

Injekcijo testosteron propionata je izdelal Shanghai General Pharmaceutical Co., Ltd., specifikacija 25 mg · ML - 1, lot 060708. Raztopino barvila PI je zagotovil center za testiranje Univerze Yangzhou. vsebnost akteozida 945 g · kg - 1, pripravljeno na oddelku za analizo tradicionalne kitajske medicine Kitajske farmacevtske univerze.

1. 3 eksperimentalne naprave

Philips TECNAI 12 prenosni elektronski mikroskop Nizozemski Philips; Facsaria pretočni citometer, izdelan za Becton Dickinson.

1. 4 združevanja in modeliranje

Model hiperplazije prostate je bil vzpostavljen s subkutanim injiciranjem testosteron propionata v hrbet podgan za 4 tedne v skladu z metodo iz literature. Modelne podgane so bile naključno razdeljene v štiri skupine: modelna skupina, modelna skupina z visokim odmerkom akteozida, modelna skupina s srednjim odmerkom akteozida, modelna skupina z nizkim odmerkom akteozida, z 10 podganami v vsaki skupini; Drugih 10 normalnih podgan je bilo vzetih kot kontrolna skupina.

1. 5 načinov uporabe

En teden po modeliranju so podgane v skupinah z visokim, srednjim in nizkim odmerkom prejele 60, 30 oziroma 15 mg · (kg · d) - 1 z gavažo. Modelni in kontrolni skupini so intragastrično dajali enako količino normalne fiziološke raztopine enkrat na dan 4 tedne, telesno težo pa stehtali enkrat na teden, da bi prilagodili odmerek glede na telesno težo.

1. 6 zbiranje in obdelava vzorcev

1) Vzorci in priprava: 24 ur po zadnjem hranjenju smo stehtali telesno težo podgan na tešče in podgane žrtvovali z izpahom materničnega vratu, spodnji del trebuha smo takoj odprli in odstranili okoliško tkivo prostate ter prosto prostato. odstranili in nekaj prostat homogenizirali v tkivnem homogenizatorju v ledeni kopeli, da smo pripravili enocelične suspenzije prostat, ki smo jih v enostopenjskem postopku obarvali s propidijevim jodidom; Drugi del tkiva prostate smo fiksirali v 25 g · L - 1 glutaraldehida in pripravili ultratanke reze.

2) Priprava enoceličnih suspenzij: nepoškodovano prostato podgane smo odstranili v posodo pod sterilnimi pogoji, kri in krvni strdek na površini tkiva prostate smo splaknili s PBS, da smo odstranili okoliško kolateralno maščobo in odvečne vlaknate in citoplazmatske membrane, in sveže tkivo prostate v velikosti približno 0.5 cm3 je bilo pobrano iz iste podganje prostate, zmleto in pripravljena je bila suspenzija celic prostate.

Blok tkiva prostate smo dali v petrijevko in dodali majhno količino PBS; Tkivo smo strgali z oftalmološkimi škarjami v ledeni kopeli, homogenizator zmleli v suspenzijo, dodali 10 ml PBS, tkivni homogenat smo aspirirali s pipeto, filtrirali v epruvete s 0.074 mm porami velikosti najlonske mrežice, centrifugirali pri 1500 R · min - 1 3 minute in pelet smo še trikrat sprali s PBS, vsakič s 500 R · min - 1 kratkotrajnim centrifugiranjem pri nizki hitrosti, da odstranite ostanke celic in filtrirajte najlonsko mrežico z velikostjo por 0,037 mm, da odstranite celične grude. Celice smo prešteli in prilagodili koncentraciji celic 2 × 109 · L - 1. Barvajte z 1 ml raztopine PI barvila 10 minut pri 4 stopinjah C v temi.

3) Priprava ultratankega dela: priprava ultratankega tkiva.

2 rezultati in analiza

Iz rezultatov je znano, da ima akteozid proapoptotični učinek. Statistična analiza rezultatov celične apoptoze je pokazala, da se je stopnja apoptoze pri podganah, zdravljenih z visokimi, srednjimi in nizkimi odmerki akteozida, znatno povečala, razlika v primerjavi z normalno skupino, modelno skupino in pozitivno skupino pa je bila izjemno očitna. . Pokazalo se je, da lahko akteozid inducira celično apoptozo, učinek pa je bil znatno močnejši od učinka pozitivnega kontrolnega zdravila alprostadila.

Učinek akteozida na ultrastrukturo hiperplazijskih celic prostate je bil prikazan z elektronsko mikroskopijo: pri normalni podganji prostati so vidna jedra nedotaknjena, nukleoli so očitni in porazdelitev jedrnega kromatina je enakomerna; Grobi endoplazmatski retikulum je bil enake velikosti, urejen, brez pojava vakuolizacije, brez prstastih izboklin mikrovil na epitelijski površini, ni bilo opaziti pojava mitohondrijskega nabrekanja in bilo je malo luminalnih izločkov. V modelni skupini so bila jedra celic prostate očitno deformirana in skrčena, citoplazme pa je bilo v izobilju; Grobi endoplazmatski retikulum je bil močno razširjen in izrazito vakuoliziran, vezikli pa so bili napolnjeni z beljakovinskimi zrnci visoke gostote; Mitohondriji so bili rahlo otečeni z zmerno gostimi izločki v lumnu in v nekaterih celicah so opazili sekretorna zrnca. Pri podganah, zdravljenih z akteozidom, so bila jedra nedotaknjena v primerjavi s tistimi v modelni skupini, z rahlo zgoščenimi jedri, povečano kompaktnostjo jedra, kopičenjem heterokromatina, nekaj vakuol v citoplazmi in manj vakuol v grobem endoplazmatskem retikulumu; V skupini z nizkimi odmerki akteozida je bilo jedro rahlo skrčeno, nepravilno, citoplazma je bila večja in hrapav endoplazmatski retikulum je bil zmanjšan.

3 Razprava

Kvantitativno odkrivanje apoptotičnih celic s FCM je preprosto, hitro in objektivno ter se lahko izvede z večparametričnimi testi, kar zagotavlja globlje razumevanje sprememb apoptoze in njenih možnih regulativnih mehanizmov.

Apoptoza je programiran proces celične smrti v večceličnih organizmih za uravnavanje razvoja organizma in vzdrževanje homeostaze, ki jo določajo genske kode. Apoptotične celice imajo svoje edinstvene morfološke in biološke značilnosti: piknozo kromatina v jedru, obsežno razgradnjo zlomov DNA, celovito skrčenje celice, skrčenje celične membrane z zunanjimi procesi, ki obdajajo organele, in fragmenti jedra, ki tvorijo značilna apoptotična telesa, tako da apoptotične celice ne le ohranijo nedotaknjeno strukturo in delovanje celične membrane, temveč tudi celovitost strukture organelov, kar se razlikuje od celične nekroze. Molekularni mehanizem apoptoze do danes ni povsem pojasnjen, študije pa so pokazale, da so pri regulaciji genov, ki sodelujejo pri apoptozi, vključeni različni geni.

Apoptoza je trenutno bolj zanimiva za proces BHP, ki je genetsko kodiran in omogoča celici nadzor celične smrti z odzivom na specifične signale. Ko se prostata razvije do velikosti odrasle osebe, se stopnja proliferacije celic prostate vzdržuje pri 1 odstotku - 2 odstotkov z uravnoteženim delovanjem stopnje apoptoze, motnje tega ravnovesja pa so dolgo veljale za vzrok za BPH . V normalnih pogojih je raven estrogena v androgen v prostati in normalno kroženje stanje homeostaze, ki obstaja med proliferativnimi in apoptotičnimi procesi. Ko proliferacija ni v ravnovesju z apoptozo, vodi do nadaljnje rasti in povečanja žleze, predvsem s širjenjem med septami epitelijskih celic. Motnje v tem ravnovesju lahko izvirajo iz sprememb ravni ali delovanja androgenov; Oba odziva lahko izhajata tudi iz stimulacije DHT z AR ali iz sprememb ravni rastnega faktorja, ki jih posreduje DHT. V tej študiji je bila izvedena FCM za odkrivanje celične apoptoze in ugotovljeno je bilo, da se je stopnja apoptoze v prostati podgan, ki so prejele visok odmerek akteozida, bistveno povečala v primerjavi z modelno skupino. Elektronska mikroskopija je pokazala, da je bilo jedro celic prostate v modelni skupini deformirano, hrapavi endoplazmatski retikulum je bil močno razširjen v veziklih, vezikli so bili napolnjeni z beljakovinskimi delci visoke gostote in vakuolizacija je bila očitna; Mitohondriji so bili rahlo otečeni, kar je skladno s poročili iz povezanih študij

Stopnja hiperplazije prostate pri podganah se je po posegu z akteozidom znatno zmanjšala. Skupina z velikimi odmerki je prav tako razvila zgodnje znake apoptoze: jedra celic prostate so ostala večinoma nedotaknjena, vakuole endoplazmatskega retikuluma pa so se znatno zmanjšale. Jedra so bila kondenzirana s povečano kompaktnostjo jedra in kopičenjem heterokromatina, podobno karakterizaciji celic iz tkiva prostate po kastraciji pri podganah. Pokazalo se je, da lahko akteozid inducira apoptozo pri podganah s hiperplazijo prostate, uravnava in obnavlja ravnovesje med apoptozo in proliferacijo celic prostate ter zavira proliferacijo celic prostate. Rezultati te študije in prejšnjih študij kažejo, da je lahko inhibicija hiperplazije prostate s kemično komponento Cistanche, akteozidom, povezana s spodbujanjem apoptoze celic in zmanjšanjem prekomerne ekspresije AR in tgf-ur1, podroben mehanizem pa je treba še v celoti raziskati.